分离丁酸钠诱导人大肠癌新分化相关基因的mRNA差异显示技术的一些改进

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为行之有效的改进方法。结果 :获得的差异片段经克隆测序并与 Gene Bank比较 ,其中的一个可能是新的基因 ,另一个与鼠 SOCS家族同源。结论 :经改进的方法 ,具有工作量小、实验周期短、操作简单、重复性好、成本低的优点。     

mRNA差异显示法筛选大肠癌相关基因

目的：分离并克隆大肠癌相关基因。方法：分别提取大肠癌与正常大肠粘膜的组织总RNA,用mRNA差异显示法（Differential display polymerase chain reaction,DD-PCR)筛选大肠癌特异性表达产物的cDNA片段,对其进行克隆、测序、序列分析以及斑点杂交初步鉴定。结果：获得了2个在大肠癌高表达而在正常大肠粘膜组织低表达的新基因片段。结论：这2条差异显示新基因片段很可能是与大肠癌相关的致癌基因。     

丁酸钠诱导的人大肠癌细胞成熟分化中的表型变化

目的：探索食物纤维成分之一丁酸钠对人大肠癌细胞生长,分化的影响。方法：应用MTT、流式细胞仪、光镜及电镜技术、观察经丁酸钠诱导后低分化大肠癌细胞系Clone-A细胞生长及形态学变化。结果：经丁酸钠诱导后,Clone-A细胞生长受到明显抑制：G0／G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比减少,细胞增殖指数下降,诱导后Clone-A细胞变长,出现胞浆突起,由圆形、不规则形变为扁平的成纤维细胞样形态,同时,丁酸钠作用2d后,细胞表面伸出丝状伪足,4d后明显变长,胞浆内质网、高尔基体数量及密度增加,内质网集核周围并铺展于胞质内,形态趋于正常。结论：丁酸钠能够抑制低分化人大肠癌细胞生长,诱导其成熟分化,使其一些恶性表型逆转。     

荧光标记mRNA差异显示技术分离肝纤维化相关基因

肝纤维化是各种慢性肝病共同的病理基础,是发展至肝硬化的关键环节。多种原因,如酒精、药物、某些化学物质和病毒,都可引起肝纤维化。目前研究发现,多种基因都参与肝纤维化的发生,随着研究的不断深入,参与肝纤维化发生的新基因在不断发现。本研究应用荧光mRNA差异显示技术查找肝纤维化发生的相关基因,从基因水平上阐明肝纤维化的发生机制。     

mRNA差异显示筛选卵巢癌相关基因

目的：利用ｍＲＮＡ差异显示技术研究正常卵巢上皮和卵巢上皮癌之间的基因表达差异状况,筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：通过ＤＤ－ＰＣＲ分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌总ＲＮＡ将差异片段分离并显示出来,将其回收,利用基因克隆技术将其筛选和克隆出来作为探针进行斑点杂交鉴定、ＤＮＡ序列测定、通过国际互联网络检索ＧｅｎＢａｎｋ进行同源性分析。结果：共筛选克隆鉴定６个差异显示片段。其中４个为未知基因片段,已收录     

荧光标记mRNA差异显示技术在分离食管癌相关基因片段中的应用

目的：以荧光标记的mRNA差异显示技术分离食管癌及其正常食管粘膜组织相关的差异基因片段。方法：结合Genbomyx LR^TM DNA测序／差异显示系统及Genomyx SC^TM荧光图像扫描系统,以及配套的FluoroDD和HIEROGLYPH mRNA Profile Kit,采用荧光标记的mRNA差异显示技术进行检测。结果：从人食管癌及正常食管粘膜组织间,同时直接分离出了相关的癌基因或抑癌基因片段74条。结论：该技术方便、快捷,值得推广应用。     

荧光标记mRNA差异显示技术在分离食管癌相关基因片段中的应用

目的 :以荧光标记的mRNA差异显示技术分离食管癌及其正常食管粘膜组织相关的差异基因片段。方法 :结合GenomyxLRTM DNA测序 /差异显示系统及GenomyxSCTM 荧光图象扫描系统 ,以及配套的FluoroDD和HI EROGLYPHmRNAProfileKit,采用荧光标记的mRNA差异显示技术进行检测。结果 :从人食管癌及正常食管粘膜组织间 ,同时直接分离出了相关的癌基因或抑癌基因片段 74条。结论 :该技术方便、快捷 ,值得推广应用     

应用mRNA差异显示技术进行肝癌相关基因的筛选

目的采用mRNA差异显示技术寻找肝癌及非肝癌组织的差异表达基因，筛选肝癌相关基因，为进一步研究创造条件。方法提取手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA，逆转录获得eDNA片段，以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因。对所获得的差异表达基因进行序列分析，并通过CenBank／BLAST数据库进行序列的同源性比较，并以Northern杂交方法对有意义片段予以来源确认。结果自720余条扩增条带中选出28条差异条带，其中“上调”者16条，“下调”者12条。对其中5条差异最为明显的片段进一步分析，其中2条为可能的新基因片段，其中一条经Northern印迹杂交证实确来自源标本组织，且在肝癌组织中有明显高表达趋势。结论mRNA差异显示技术是一种快速、灵敏、高效的差异表达基因的克隆技术，已采用这种技术获得了1条可能的肝癌相关新基因片段，有必要进一步研究。     

用mRNA差异显示法分离大鼠吗啡依赖相关基因

目的：分离并克隆大鼠吗啡信赖相关基因。方法：ＳＤ大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射,形成吗啡依赖的动物模型。分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团,提取总ＲＮＡ,用ｍＲＮＡ差异显示（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｄｉｓｐｌａｙ,ＰＣＲ,ＤＤＰＣＲ）的方法,筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的ｃＤＮＡ片段。用３组锚定引物（Ｔ１２ＭＮ,Ｍ＝Ａ,Ｇ,Ｔ或Ｃ,Ｎ＝Ａ,Ｃ或Ｇ）和６组随机引物（ＡＰ１￣ＡＰ６）作     

mRNA差异显示法在分离肿瘤转移相关基因中的初步应用

用mRNA差异显示技术（mRNAdifferentialdisplay）对分别用200U／ml重组人IFN－a和IFN－Υ处理的MA891肿瘤细胞系总mRNA进行分析，分离出10个差异表达的片段，并进行了克隆。因IFN－a抑制MA891细胞系的肺转移能力，而IFN－Υ则增强其肺转移能力，故认为该10个片段所代表的基因中可能有某个或几个基因与肿瘤转移有关。     

银染mRNA差异显示法克隆肝癌相关基因

目的 建立银染mRNA差异显示方法,筛选并克隆肝癌相关基因,方法 以建系的人肝癌细胞HepG2和正常的肝细胞L02的总RNA为模板,用5′-dT11G锚定引物和8条随机引物（AP1-AP8）组合进行RT-PCR扩增,PCR产物经60g.L^-1尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,凝胶银盐染色显示差异的DNA片段。结果 建立了快速敏感的银染mRNA差异显示方法,分离并克隆了一些肝癌相关基因,结论 建立的银染mRNA差异显示法简单、有效,在差异表达基因的筛选中有较高的实用价值。     

用mRNA差异显示PCR技术筛查慢性砷中毒相关基因片段

目的：对慢性砷中毒组织的表达差异基因进行分析。方法：采用mRNA差异显示PCR技术(mRNA differential display PCR)，以慢性砷中毒病人具有皮损表现的手掌部皮肤组织为标本，正常人体手掌部皮肤组织为对照，提取组织mRNA，对砷中毒组织的表达差异基因进行分析，选择高表达和低表达的基因片段各一条进行了克隆和序列分析，经RNA印迹法确证，并在基因数据库中进行了同源性比较。结果：获得25条差异表达明显的cDNA片段，分别在砷中毒病人组织中呈高表达和低表达，已测序的两个序列均为未知基因序列。结论：慢性砷中毒病人病变皮肤组织与正常人体皮肤组织相比在mRNA水平有基因表达差异，差异表达的片段可能为砷中毒相关基因片段。     

用mRNA差异显示技术初步筛选食管癌相关基因

用ｍＲＮＡ差异显示技术初步筛选食管癌相关基因王尧河１）张云汉１）高冬玲１）付淑莉１）王宏２）夏贞彪２）李春海２）罗庆良２）１）河南医科大学第一附属医院病理科，河南省肿瘤病理学重点实验室郑州４５００５２２）军事医学科学院北京１００８５０关键词食管肿瘤...     

应用mRNA差异显示技术筛选卵巢癌耐药相关基因

目的 筛选卵巢癌泰素耐药相关基因。方法 采用间歇诱导法建立了卵巢癌泰素耐药细胞株Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｌ－２５;采用ｍＲＮＡ ＤＤ比较Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５对泰素耐药增加４４倍,同时对顺铂也产生了耐药。比较Ｓｋｏｖ３和Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５的ｍＲＮＡ,获得２２个差异条带。对其中５个差异条带进行了ＤＮＡ序列测定,有３个与已知的基因高度同源,分别为ｔＰＡ、Ｋｉａａ０３７２和ＬＤＬＣ。２个为未知     

mRNA差异显示法筛选黄花石蒜中加兰他敏合成相关基因

目的筛选和克隆黄花石蒜加兰他敏相关基因。方法采用mRNA差异显示法(mRNA differential displayPCR,DD-PCR),对7月份黄花石蒜产加兰他敏含量最高的部位花蕊和含量最低的部位花葶进行基因表达差异的研究,筛选其差异片段,再对差异片段进行回收、克隆、测序及序列分析和同源性比较。结果黄花石蒜花蕊和花葶中存在明显的基因表达差异,发现差异条带44条,经序列分析和同源性比较,确认其中2个条带与黄花石蒜加兰他敏合成相关,另一条可能与加兰他敏运输代谢调控有关。结论通过DD-PCR得到的3个同源序列为研究黄花石蒜中加兰他敏的合成途径提供了有力依据。     

mRNA差异显示技术筛选何首乌中二苯乙烯苷合成相关基因

【目的】筛选和克隆何首乌中二苯乙烯苷代谢相关酶基因。【方法】采用mRNA差异显示技术,对何首乌中二苯乙烯苷含量差异悬殊的不同组织(根、茎、叶)进行差异表达基因的筛选,将得到的差异基因连接pMD19-T载体进行测序后,通过数据库比对预测其基因功能。【结果】发现差异片段51条,选取其中9条进行半定量PCR验证,获得3条阳性差异片段。其中1条阳性片段为何首乌茎和叶特异表达,与甘氨酸脱氢酶高度同源,另外2条阳性片段为何首乌块根特异表达,分别与烯酰辅酶A水合酶、氨基肽酶N高度同源。【结论】通过mRNA差异显示技术得到的3个同源序列可为进一步研究何首乌中二苯乙烯苷生物合成途径提供帮助。     

银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆

目的：建立非同位素银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离吗啡相关基因。方法：以吗啡处理的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，用５’ｄＴ１２ＭＧ锚定经物和两条随机引物合进行ＤＤＲＴ－ＰＣＴ扩增，经测序凝胶电泳分离后，用银染方法显示差异ＤＮＡ条带，在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增，扩增产物克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。结果建立了非同位素的银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因     

mRNA差异显示技术在紫杉醇诱导的表达基因克隆中的应用

作者应用ｍＲＮＡ差异显著，ＤＮＡ序列分析和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对紫杉醇处理人乳癌细胞诱导的表达基因进行ｃＤＮＡ克隆研究，１２个克隆有明确的ｍＲＮＡ水平表达改变，其中６个ｃＤＮＡ克隆核苷酸序列与已知的ｃＤＮＡ序列有较高的同源性，其余６个尚无同源性基因。克隆重Ｃ３Ｐ３与人腺苷基蛋氨酸合成酶基因序列同源性达９９％，紫杉醇诱导该酶基因转录活动和基因产物活性增高，提示ｍＲＮＡ差异显著技术筛选ｍＲＮＡ水     

应用mRNA差异显示技术克隆人成骨肉瘤转移相关基因

目的：筛选与成骨肉瘤转移抑制相关的基因,探讨成骨肉瘤转移的分子机制。方法：应用改良的mＲＮＡ差异显示,比较成骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７及其高转移亚系统ＳＯＳＰ－Ｍ的mＲＮＡ表达差异。克隆差异片断,进行测序。根据测序结果设计牧民性引物,ＲＴ－ＰＣＲ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证实其表达特异性。结果：从低转移细胞ＳＯＳＰ－９６０７中分离出２条特异性表达的片断ＭＳＰ２和ＭＳＰ３,经ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒ     

利用mRNA差异显示法分离鼻咽癌中的表达差异cDNA片段

为了分离与鼻咽癌癌变有关的抑制基因，应用ｍＲＮＡ差异显示法从中国人鼻咽癌细胞株ＨＯＮＥ１及正常表皮细胞Ｒｈｅｋ中分离有达差异的ｃＤＮＡ片段。对所分离的两个ｃＤＮＡ片段进一步人季Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析，未能获得预期的信号差异。本文就改善实验提出了建议和设想，为进一步分离鼻咽癌中的抑瘤基因提供了经验。