粘液样/圆细胞型脂肪肉瘤石蜡包埋组织中FUS-CHOP融合基因的检测

目的:探讨逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法用于检测甲醛固定、石蜡包埋组织中FUS-CHOP融合基因的可行性及其对粘液样/圆细胞型脂肪肉瘤诊断的价值.方法:收集粘液样/圆细胞型脂肪肉瘤石蜡包埋组织标本25例,以其它类型脂肪肉瘤(包括分化良好型、去分化型、多形型),滑膜肉瘤,低度恶性纤维肉瘤,恶性纤维组织细胞瘤,粘液脂肪瘤,脂肪母细胞瘤,神经鞘瘤伴粘液变性和粘液软骨肉瘤作为阴性对照,共18例.所有标本均经过甲醛固定、石蜡包埋.用嵌套式RT-PCR的方法检测FUS-CHOP融合基因mRNA并经测序证实,以β-actin基因作为内对照检测mRNA质量.结果:43例标本中,30例可检出β-actin,阳性率为69.8%,其中粘液样/圆细胞型脂肪肉瘤标本β-actin阳性18例(72%),对照组β-actin阳性12例(66.7%).25例粘液/圆细胞型脂肪肉瘤中15例检出Ⅱ型FUS-CHOP融合基因表达,阳性率60%(15/25),去除β-actin阴性病例的阳性率为77.8%(14/18).其中1例β-actin阴性表达而检出FUS-CHOP融合基因.对照组18例标本均未检出FUS-CHOP融合基因.结论:FUS-CHOP融合基因在粘液样/圆细胞型脂肪肉中呈特异性表达,可作为该肿瘤的特异性标志物用于诊断.嵌套式RT-PCR的方法可用于甲醛固定、石蜡包埋组织中FUS-CHOPmRNA的检测.     

黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤中FUS-CHOP mRNA和MDM_2、p53蛋白的表达

 目的探讨FUS-CHOP mRNA及MDM2、p53蛋白在黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤(MRCLs)组织中的表达。方法收集经甲醛固定、石蜡包埋的MRCLs组织标本25例。以非MRCLs的脂肪肉瘤及其他软组织肉瘤共18例作对照组。用嵌套式RT-PCR的方法检测FUS-CHOP融合基因mRNA并做DNA测序证实,以β-actin基因作为内对照。用免疫组化SP法检测25例MRCLs中MDM2、p53蛋白表达情况。结果MRCLs组和阴性对照组β-actin阳性率分别为72%(18/25)和66.7%(12/18)。25例MRCLs中15例检出Ⅱ型FUS-CHOP融合基因表达,去除β-actin阴性病例后阳性率为83.3%(14/18)。对照组18例标本均未检出FUS-CHOP融合基因。MRCLs中MDM2、p53蛋白阳性表达率分别为56%(14/25)和44%(11/25),以圆细胞为主的病例组阳性表达率最高,差异有统计学意义。FUS-CHOP融合基因与MDM2及p53蛋白表达无相关性;而MDM2与p53蛋白表达呈正相关,有统计学意义。结论(1)FUS-CHOP融合基因是MRCLs的特异性分子遗传标志物,可用于该肿瘤的诊断与鉴别诊断。(2) MRCLs 中MDM2 、p53 蛋白表达与其预后相关。(3) MRCLs 中FUS2CHOP 融合基因与MDM2 、p53 蛋白的表达无相关性。     

EWS-ATF1融合基因在透明细胞肉瘤中的表达及其诊断意义

目的：探讨在透明细胞肉瘤（CCS）石蜡包埋组织中检测EWS-ATF1融合基因的可行性及EWS-ATF1融合基因表达在透明细胞肉瘤诊断中的意义。方法：收集1992年～2006年期间确诊的26例CCS石蜡包埋组织标本,20例非CCS石蜡包埋组织标本为对照组,β-肌动蛋白和β2微球蛋白作为内参照,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和巢式PCR检测EWS-ATF1融合基因的表达;过氧化物酶染色（SP）方法对26例CCS石蜡组织标本进行免疫组化染色,检测S-100、HMB-45蛋白的表达。结果：26例标本中,有22例β-肌动蛋白阳性;24例β2微球蛋白阳性,其中20例EWS-ATF1融合基因阳性（16例EWS-ATF1Ⅰ型,4为EWS-ATF1Ⅲ型）,余4例EWS-ATF1融合基因阴性。对照组均未检测到EWS-ATF1融合基因的表达。26例CCS石蜡组织标本中S-100及HMB-45的总阳性率分别为79.2%和70.8%。结论：在CCS石蜡包埋组织中运用RT-PCR检测EWS-ATF1融合基因是可行的,可作为辅助诊断和鉴别诊断的有力工具。     

黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤中FUS-CHOP融合基因和MDM2蛋白的表达及意义

目的 探讨FUS-CHOP融合基因与M DM2蛋白在黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤(MRCLs)组织中的表达及意义.方法 收集MRCLs标本25例.以非MRCLs的脂肪肉瘤及其它软组织肿瘤共18 例作对照组.用嵌套式RT-PCR的方法检测FUS-CHOP融合基因mRNA并经和DNA测序证实 ,以β-actin基因作为内对照.用免疫组化S-P法检测25例MRCLs中MDM2蛋白表达情况.结果 MRCLs组和对照组β-actin阳性率分别为72.0%(18/25) 和66.7%(12/18).25例MRCLs中15例检出Ⅱ型FUS-CHOP融合基因表达,阳性率为(60 .0%),去除β-actin阴性病例的阳性率为83.3%(15/18).对照组18例标本未检出FUS-C HOP融合基因.MRCLs中MDM2蛋白阳性表达率为56.0%(14/25),在圆细胞为主的病例组阳性表达率最高,差异有显著性.FUS-CHOP融合基因与MDM2蛋白表达无相关性.结论 (1)MRCLs中FUS-CHOP融合基因与MDM2蛋白的表达无相关性.(2)FUS-CHOP融合基因在MRCLs中呈特异性表达,可作为该肿瘤的特异性标志物用于诊断.(3)MDM2蛋白过表达与MRCLs的进展相关.     

尤文肉瘤与滑膜肉瘤的基因诊断

目的 检测中国人尤文肉瘤中融合基因EWS-FLI1/ERG和滑膜肉瘤中融合基因SYTSSX1/SSX2在mRNA水平的表达,在基因组DNA水平检测尤文肉瘤中EWS基因重排,为建立骨与软组织肉瘤分子诊断方法打下基础。方法 对4例尤文肉瘤、1例小圆细胞肉瘤和4例滑膜肉瘤的标本,应用RT-PCR方法检测其各自的融合基因表达;对3例尤文肉瘤和1例小圆细胞肉瘤应用Southem blot方法检测EWS基因的重排。结果 4例尤文肉瘤中,3例表达EWS-FLI1基因融合,1例未检测到融合基因表达;1例小圆细胞肉瘤检测到EWS-FLI1基因融合;4例滑膜肉瘤中,1例表达SYT-SSX1基因融合,2例表达SYT-SSX2融合基因,1例未发现融合基因表达。2例尤文肉瘤和1例小圆细胞肉瘤有EWS基因重排。结论 在mRNA水平,中国人尤文肉瘤有特异性融合基因EWS-FLI1表达,滑膜肉瘤有特异融合基因SYT-SSX1/SSX2表达;在基因组DNA水平,尤文肉瘤有EWS基因重排。RT-PCR是一项相对简单、快速、准确、成功率高的分子诊断方法,可应用于肿瘤的诊断与鉴别诊断。     

滑膜肉瘤临床病理分析

目的：探讨滑膜肉瘤的临床病理诊断和鉴别诊断。方法：收集滑膜肉瘤石蜡包埋标本41例,采用组织化学染色,免疫组织化学标记和逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）等方法对肿瘤进行临床病理分析,为肿瘤的诊断和鉴别诊断提供科学依据。结果：12例（29%）双相分化型,22例（54%）单相纤维型,7例（17%）低分化型。36例（88%）上皮性标记[CK和（或）EMA]和间叶性标记（Vim）均阳性,5例（12%）仅间叶性标记阳性。RT-PCR检测20例标本,其中18例（90%）有融合基因SYT-SSX表达。结论：通过常规染色组织形态观察,结合免疫组织化学标记及特异性融合基因SYT-SSX检测,能够对滑膜肉瘤做出临床病理诊断。     

从石蜡包埋肺癌组织提取RNA检测PML基因转录的研究

背景与目的 甲醛同定石蜡包埋组织(FPE)包含大量临床病理信息,同时还含有大量的基因和蛋白物质可用来研究临床意义.本研究的目的是探讨从FPE中提取RNA的可能性,检测急性早幼粒细胞白血病基因(PML)在肺癌FPE中的转录表达.方法选取前期经免疫组织化学染色证实无PML蛋白表达的40例肺癌FPE,存档时间在60-85个月,5例新鲜冰冻肺腺癌组织作为对照;利用Trizol一步法提取RNA,经OD值检测验证RNA质量;RT-PCR检测PML的基因转录表达.结果 自肺癌FPE和新鲜冰冻组织提取的RNA的OD比值在1.7-2.1.RT-PCR显示,40例FPE以及5例新鲜冰冻组织中,PML(295 bp)以及β-actin(318 bp)mRNA均有表达.结论 利用Trizol一步法自FPE提取RNA进行RT-PCR,可有效扩增出300bp左右的产物;肺癌组织中PML蛋白存在转录后缺失.     

转化生长因子-β1在人横纹肌肉瘤肌源性分化中的作用

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在横纹肌肉瘤肌源性分化中的作用.方法:采用细胞培养、逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)及免疫荧光染色观察TGF-β1对横纹肌肉瘤细胞系RD肌源性分化相关指标的影响,并用免疫组化SP法,检测49例横纹肌肉瘤组织中TGF-β1表达与肌球蛋白重链(MyHC)之间的相关性.结果:TGF-β1可明显抑制RD细胞肌球蛋白重链mRNA和蛋白的表达.用TGF-β1处理RD细胞后,肌球蛋白重链和肌节肌动蛋白(Sarcomeric-Actin)阳性着色细胞数明显下降(P<0.05).MyoD1的表达在处理前后未见明显差异.横纹肌肉瘤组织中TGF-β1表达与肌球蛋白重链呈明显负相关(P<0.05).结论:TGF-β1可抑制RD细胞的肌源性分化,这一作用可能不依赖于MyoD1的调节.TGF-β1信号传导通路可能与横纹肌肉瘤的肌源性分化受阻有关.     

人肺癌组织端粒酶活性与p16基因二者相关性探讨

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中端粒酶活性与p16基因的相关性及二者与肺癌发生发展的关系.方法:肺癌标本48例,12例癌旁组织,7例非肿瘤病例的正常肺组织.以Telomerase PCR ELISA检测标本端粒酶活性,以RT-PCR的方法检测p16基因mRNA转录情况,以免疫组化方法检测组织标本p16蛋白表达.结果:1)肺癌组织标本36/48(75.00%)和1例癌旁组织检出端粒酶活性.2)48例NSCLC组织中32例进行了p16 mRNA及蛋白表达检测.16/32(50.00%)检测到p16mRNA转录,7例正常组织中均检测到p16 mRNA转录.NSCLC组织标本中17/32(53.13%)未检测到p16蛋白表达,7例正常肺组织中均检测到p16蛋白表达.3)24例端粒酶阳性NSCLC组织中15例p16 mRNA表达缺失,8例端粒酶阴性的NSCLC组织中仅1例p16mRNA表达缺失.相关系数为-0.433,P=0.013,具有显著负相关.结论:端粒酶、p16基因在NSCLC的发生发展中起重要作用,端粒酶活性有望成为预测肿瘤发生、肿瘤诊断的良好指标.端粒、端粒酶与p16基因可能成为抗肿瘤治疗的新靶点.