Nell-1基因转染骨髓基质干细胞复合可吸收纤维蛋白胶修复犬下颌骨缺损

目的 探讨利用Nell-1基因转染骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell, BMSC)复合可吸收纤维蛋白胶(fibrin glue, FG)构建组织工程化骨组织并修复犬下颌骨缺损的可行性.方法 制备含Nell-1真核细胞表达载体的逆转录病毒液PT-PLNCX2-Nell-1并转染BMSC,使用免疫组织化学的方法检测Nell-1在BMSC中的表达.犬下颌骨缺损修复实验分为4组:转染组、未转染组、单纯FG组和对照组,每组4个样本.分别于术后8、16周采用大体观察、X线、组织学检测等方法对骨缺损修复情况进行对比.结果 免疫组织化学检测显示经Nell-1病毒液转染的BMSC中有较强的阳性结果出现.定量检测分析结果证实经转染的BMSC修复骨缺损的成骨速度和成骨量均优于未转染组,单纯FG组和对照组中均未见骨缺损得到修复.结论 Nell-1基因转染能够提高BMSC形成组织工程化骨组织和修复骨缺损的能力,可用于以BMSC为种子细胞的组织工程化骨组织的构建.     

体内转染基因在帕金森病治疗中的应用前景

<正>近年来,帕金森病(Parkinson's Disease,PD)的基因治疗动物实验已经取得可喜成果,尽管尚无被认可的临床资料,但灵长类动物的实验成果已开始逼近临床应用。尤其是基因治疗所获得的神经支持和神经再生效果,具有不可低估的应用前景。PD的基因治疗主要通过两种途径实现:一是体外转染细胞的脑内移植(exvi-vo)。另一种是通过脑内注射在体转染靶细胞(invivo);两种途径的转染过程不同,而分子生物学基础基本一致。本文就体内转染途径和方法作一简要综述。     

小鼠Ehrlich实体瘤局部DNA直接转染TGF—β1基因的研究

研究Ｅｈｒｌｉｃｈ实体瘤局部ＤＮＡ直接转染ＴＧＦ－β１基因的治疗效果,将真核表达载体ｐＳＶＴＧＦ－β１直接瘤周转染Ｅｈｒｌｉｃｈ实体瘤,用原位杂交方法检测靶基因的表达,ＭＴＴ法检测脾脏细胞免疫功能,并观察小鼠生存期及肿瘤生长速度。治疗组肿瘤细胞及瘤周组织有靶基因ｍＲＮＡ表达,脾脏细胞免疫功能高于对照组,肝瘤生长受到抑制,治疗组小鼠生存期较对照组明显延长,ＴＧＦ－β１基因ＤＮＡ直接转染法可以明显抑制     

小鼠Ehrlich实体瘤局部DNA直接转染TGF-β1基因的研究

研究Ｅｈｒｌｉｃｈ 实体瘤局部ＤＮＡ 直接转染ＴＧＦ－β１ 基因的治疗效果。将真核表达载体ｐＳＶＴＧＦ－ β１ 直接瘤周转染Ｅｈｒｌｉｃｈ 实体瘤, 用原位杂交方法检测靶基因的表达, ＭＴＴ法检测脾脏细胞免疫功能, 并观察小鼠生存期及肿瘤生长速度。治疗组肿瘤细胞及瘤周组织有靶基因ｍ ＲＮＡ表达, 脾脏细胞免疫功能高于对照组, 肿瘤生长受到抑制, 治疗组小鼠生存期较对照组明显延长。ＴＧＦ－β１ 基因ＤＮＡ直接转染法可以明显抑制肿瘤生长,不影响全身细胞免疫功能,具有较大的潜在临床应用价值。     

TMSG-1基因转染对肿瘤转移表型的影响

目的：研究肿瘤转移抑制基因TMSG-1对肿瘤转移表型的影响。方法：将含TMSG-1全长开放阅读框架的1.5kb cDNA克隆于pcDNA3，构建正义及反义TMSG-1 cDNA真核表达载体，以脂质体转染人肺巨细胞癌PG的高转移亚系BE1，挑选G418抗性克隆，RT-PCR检测正义或反义TMSG-1cDNA在转染细胞中的表达，进行转染细胞体外肿瘤生物学行为检测。结果：RT-PCR显示正义TMSG-1cDNA转染的BE1细胞（BE1-S）中TMSG-1表达明显高于BE1及空载体对照细胞，反义TMSG-1cDNA转染细胞（BE1-AS）中TMSG-1表达低于空载体对照细胞。与BE1及空载体对照细胞（BE1-V）相比，BE1-AS细胞体外生长较快，软琼脂克隆形成能力明显增强；而BE1-S细胞体外生长能力没有显著改变，但其穿越Matrigel的能力及软琼脂克隆形成能力明显减弱。流式细胞仪分析结果显示BE1-S的G0、G1期的细胞较BE1-V细胞比例增多，并且BE1-S出现了细胞凋亡峰。结论：实验结果表明反义TMSG-1基因转染可增强BE1细胞的体外生长、体外侵袭能力及克隆形成能力。而正义TMSG-1基因转染则使BE1细胞的侵袭能力及软琼脂克隆形成能力减弱，而对细胞体外生长能力无明显影响。结论支持TMSG-1是一个肿瘤转移抑制基因。     

p16基因转染对肺癌细胞SPC-A1的抑制作用

目的　探讨抑癌基因p16对肺癌细胞SPC A1的抑制作用。方法　以Escort脂质体介导p16基因转染肺癌SPC A1细胞 ,MTS法测定OD值 ,计算细胞生长抑制率 ,描绘p16基因转染后SPC A1细胞增殖曲线。结果　p16基因转染对SPC A1细胞具有明显抑制作用 (P <0 0 5 ) ,细胞抑制率为 2 3 18% ,细胞增殖曲线较SPC A1细胞明显降低。紫杉醇对SPC A1细胞亦有明显抑制作用 ,抑制率为对 3 7 12 %。结论　p16基因转染对肺癌SPC A1细胞具有明显抑制作用     

内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达

目的探讨转染内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因后内皮细胞(EC)的功能变化.方法采用脂质体法转染eNOS基因于实验犬EC;RT-PCR和免疫组化法检测转染效果;分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)和vWF的浓度;并观察转染细胞生长增殖情况.结果 RT-PCR产物电泳和测序及免疫组化法检测证实转染效果满意;转染后EC培养液NOS和NO浓度在不同时间明显升高(120 h分别为33.53和32.99),与正常组对比差异显著(P<0.05).转染后细胞生长增殖和vWF含量无显著差异.结论通过脂质体法成功地将eNOS基因转染于实验犬EC;转染后eNOS基因在mRNA和蛋白质水平均高效表达;内皮细胞eNOS活性显著增强;转染后细胞生物学功能稳定.     

内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达

目的探讨转染内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因后内皮细胞(EC)的功能变化。方法采用脂质体法转染eNOS基因于实验犬EC;RT-PCR和免疫组化法检测转染效果;分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)和vWF的浓度;并观察转染细胞生长增殖情况。结果RT-PCR产物电泳和测序及免疫组化法检测证实转染效果满意;转染后EC培养液NOS和NO浓度在不同时间明显升高(120h分别为33.53和32.99),与正常组对比差异显著(P<0.05)。转染后细胞生长增殖和vWF含量无显著差异。结论通过脂质体法成功地将eNOS基因转染于实验犬EC;转染后eNOS基因在mRNA和蛋白质水平均高效表达;内皮细胞eNOS活性显著增强;转染后细胞生物学功能稳定。     

白细胞介素1受体拮抗剂基因转染对脑缺血后细胞粘附分子1表达的 …

白细胞介素 1β(ＩＬ 1β)是一种强烈致炎细胞因子。ＩＬ 1受体拮抗剂 (ＩＬ 1ｒａ)是相对分子质量为 170 0 0多肽 ,在体内外实验中都能抑制ＩＬ 1的作用[1] 。我们在前期实验中 ,利用腺病毒载体编码人ＩＬ 1ｒａ基因 ,通过脑室内微量注射 ,使ＩＬ 1ｒａ在大鼠和小鼠的室管膜细胞中过度表达 ,能减少脑缺血后的梗死面积。同时也证实过度表达的ＩＬ 1ｒａ蛋白能减轻脑缺血后的脑水肿和炎症反应[2 4 ] 。因ＩＬ 1ｒａ的神经保护和抗炎作用的机制尚不明确。为此 ,我们采用基因转染的方法 ,研究过度表达的ＩＬ 1ｒａ蛋白对小鼠脑缺血后脑内细胞…     

人胶质瘤U251细胞异柠檬酸脱氢酶1基因转染条件的建立和验证

目的 建立适用于U251细胞异柠檬酸脱氢酶1基因（IDH1）过表达的最佳转染方案,并通过筛选获得稳定转染的IDH1过表达人胶质瘤U251细胞系。方法 利用jetPRIME试剂将IDH1 Human Mutant ORF Clone和pCMV6-Entry Tagged Cloning Vector转染至U251细胞内。通过增殖实验获得筛选所用抗生素G418浓度,用该浓度筛选稳定的IDH1过表达和空白质粒转染成功的U251细胞。采用RT-PCR和Western blot实验验证转染实验和IDH1基因和蛋白的表达情况。结果 IDH1转染U251细胞株成功表达IDH1基因及IDH1蛋白,筛选及培养所需G418浓度为300 mg/L。IDH1转染组细胞表达IDH1基因及蛋白均高于空白质粒组（VCT组）,差异有统计学意义（P<0.05）,转染实验成功。结论 成功建立适用于U251细胞IDH1过表达的最佳转染方案,可通过筛选获得稳定转染的IDH1过表达和空白质粒对照的人胶质瘤U251细胞系。     

钛网植骨修复四肢长骨干骨缺损的实验研究

目的：探讨钛网包裹游离骨移植治疗四肢骨缺损的效果。方法：选用40只新西兰实验大白兔,分成二组,制成骨缺损模型。分别予以单纯游离植骨和钛网植骨移植,术后4,8,12,16周取材,通过X线检查、组织学检查等手段进行对比研究。结果：单纯骨移植,可在16周基本完成骨缺损修复,但有较高的骨不愈合率;钛网植骨移植,在12周即可基本完成骨缺损的修复,其成骨速度及成骨质量均优于单纯骨移植。结论：钛网包裹游离骨移植利于骨的紧密接触,并且有一定的固定支持作用,且不影响周围血管经网孔的长人,利于骨缺损的修复,且其相溶性较好,可任意塑形。     

复合羟固醇无机小牛骨块修复犬下颌骨临界骨缺损的组织学研究

目的比较复合羟固醇无机小牛骨块（羟固醇骨块）和无机小牛骨粉在比格犬下颌骨临界骨缺损动物模型早期愈合阶段的成骨效应。方法选取健康雄性比格犬4 只,拔除双侧下颌第3 和第4 前磨牙以及第1磨牙（P3-M1）后,双侧下颌骨各复制2个5 mm×10 mm×10 mm标准化箱型临界骨缺损。4 周愈合期后,按半口对照设计,随机将羟固醇骨块和无机小牛骨粉植入骨缺损。术后4 周处死,切取标本制作石蜡和硬组织切片,行组织学观察及组织形态学测量。结果实验动物愈合良好,羟固醇骨块组及无机小牛骨粉组均见临界骨缺损边缘及骨材料-宿主骨交界处明显的成骨细胞及新骨形成。HE 染色组织形态学测量结果显示羟固醇骨块组和无机小牛骨粉组新生骨面积比分别为（37.22±2.16）%和（34.70±2.66）%,两者比较差异无统计学意义（P >0.05）;羟固醇骨块组成骨细胞数[（31.13±2.85）]与无机小牛骨粉组[（24.88±2.95）]比较,差异有统计学意义（P <0.05）。硬组织切片亚甲基蓝-酸性品红染色组织形态学测量结果显示羟固醇骨块及无机小牛骨粉骨材料新生骨面积相对百分比分别为（20.13±1.32）%和（19.28±0.82）%,骨材料相对存留率分别为（30.80±1.16）%和（29.69±1.12）%,两者比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论羟固醇骨块在犬下颌骨临界骨缺损早期骨愈合阶段具有类似于小牛骨粉的成骨效果。由于羟固醇骨块具有良好的空间维持能力,更适合于临床大面积骨缺损的修复。     

可生物降解共聚膜修复兔桡骨节段性缺损

目的：探讨在引导性骨再生中生物降解材料聚已内酯（ｐｏｌｙ ε ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ, Ｐ Ｃ Ｌ）和聚乳酸（ｐｏｌｙ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ, Ｐ Ｌ Ａ）共聚物的作用及其生物相容性和生物降解性。方法：采用兔桡骨中段１２ ｃｍ节段性骨缺损（保留骨膜）动物模型,共２４只分两组进行对照研究,每组１２只,双侧处理方法相同, Ａ组骨缺损区用膜包绕骨缺损区, Ｂ 组为空白对照。分别于３、６、１２周后处死,进行 Ｘ 线、大体、组织学及电镜观察,检测生化及免疫指标。结果：实验组（ Ａ）骨生长明显优于对照组（ Ｂ）;材料呈明显的降解趋势;血清中 Ｃａ、 Ｐ、 Ｉｇ Ｇ、 Ｉｇ Ｍ 、 Ｃ４值与正常及空白对照均无明显差异。结论：生物降解材料（ Ｐ Ｃ Ｌ／ Ｐ Ｌ Ａ）在引导骨性组织再生中有良好的屏障作用,促进骨缺损的愈合。证明新型骨生物降解材料有良好的生物降解性和生物相容性。     

异种脱蛋白骨修复长骨大段骨缺损实验研究

目的研究改良法制备的异种脱蛋白骨（deproteinated bone,DPB）作为组织工程支架材料修复大动物长骨大段缺损24周后新生骨的生物力学变化。方法山羊18只,采用完全随机设计法分为正常骨对照组、自体骨组和实验组,每组6只,在自体骨组和实验组每只山羊右侧胫骨中下段造成胫骨总长度20％骨膜和骨缺损,正常骨对照组不截骨,其余2组分别在缺损处植入自体骨、DPB＋自体MSCs＋rhBMP2,采用半环槽外固定,术后24周取手术侧胫骨进行生物力学检测。结果术后24周,正常骨对照组、自体骨组和实验组新骨生物力学相比无统计学差异（P〉0．05）。结论改良法制备的异种DPB复合物作为组织工程支架材料修复大动物长骨大段缺损形成的新骨,其生物力学与正常骨对照组、自体骨组相当,可作为骨移植材料试应用于临床。     

Repair of sheep metatarsus defects by using tissue-engineering technique

Tissue-engineering bone with porous β-tricalcium phosphate (β-TCP) ceramic and autologous bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) was constructed and the effect of this composite on healing of segmental bone defects was investigated. 10-15 ml bone marrow aspirates were harvested from the iliac crest of sheep, and enriched for MSC by density gradient centrifugation over a Percoll cushion (1.073g/ml). After cultured and proliferated, tissue-engineering bones were constructed with these cells seeded onto porous β-TCP, and then the constructs were implanted in 8 sheep left metatarsus defect (25 mm in length) as experimental group. Porous β-TCP only were implanted to bridge same size and position defects in 8 sheep as control group, and 25 mm segmental bone defects of left metatarsus were left empty in 4 sheep as blank group. Sheep were sacrificed on the 6th, 12th, and 24th week postoperatively and the implants samples were examined by radiograph, histology, and biomechanical test. The 4 sheep in blank group were sacrificed on the 24th week postoperatively. The results showed that new bone tissues were observed either radiographic or histologically at the defects of experimental group as early as 6th week postoperatively, but not in control group, and osteoid tissue, woven bone and lamellar bone occurred earlier than in control group in which the bone defects were repaired in “creep substitution” way, because of the new bone formed in direct manner without progression through a cartilaginous intermediate. At the 24th week, radiographs and biomechanical test revealed an almost complete repair of the defect of experimental group, only partly in control group. The bone defects in blank group were non-healing at the 24th week. It was concluded that engineering bones constructed with porous β-TCP and autologous MSC were capable of repairing segmental bone defects in sheep metatarsus beyond “creep substitution” way and making it healed earlier. Porous β-TCP being constituted with autologous MSC may be a good option in healing critical segmental bone defects in clinical practice and provide insight for future clinical repair of segmental defect.     

深冻异体骨复合自体骨髓修复兔桡骨节段性骨缺损

目的：研究兔深冻异体骨复合自体骨髓对节段性骨缺损的修复及其机制。方法：36只新西兰大白兔采用桡骨15mm节段性骨缺损模型，随机分为3组．A组植人深冻异体骨复合自体骨髓．B组植入深冻异体骨，C组植入自体骨。术后不同阶段分别行大体、组织学及x线检测。结果：(1)3组骨缺损均有成骨现象发生；(2)A、C组骨生成、骨连接情况明显优于B组；(3)A、C组骨缺损愈合时间较B组明显缩短，A、C组骨缺损均于术后8周愈合．B组骨缺损在术后10周仍未愈合。结论：提示兔深冻异体骨复合自体骨髓具有良好的组织相容性及成骨作用，其取代自体骨植骨修复骨缺损具有可能性。     

异体脱钙骨基质复合bBMP修复兔桡骨骨缺损

目的：探讨异体脱钙骨基质复合BMP修复节段性骨缺损的能力。方法：64只新西兰大白兔采用桡骨15mm节段性骨缺损模型，随机分为4组，A组植入异体脱钙骨基质(Demineralized Bone Matrix,DBM)与牛骨形态发生蛋白(Bovine Bone Morphogentic Protein,bBMP)复合材料，B组植入异体DBIM，C组植入异体骨粒，D组为空白对照组。术后4、8、12、16w，进行放射学检查、病理组织学检查和计算机图像分析新生骨面积。结果：异体DBM与bBMP复合材料组骨生成、新骨面积和骨连接情况明显优于异体DBM组、异体骨粒组和空白对照组。结论：异体DBM复合BMP材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损，是一种较为理想、具有高效成骨活性的植骨材料。     

Reconstruction of segmental bone defects in the rabbit ulna using periosteum encapsulated mesenchymal stem cells-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) scaffolds

Background  Repair of large bone defects remains a challenge for clinicians. The present study investigated the ability of mesenchymal stem cells (MSCs) and/or periosteum-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) to promote new bone formation within rabbit ulnar segmental bone defects.

Methods  Rabbit bone marrow-derived MSCs (passage 3) were seeded onto porous PLGA scaffolds. Forty segmental bone defects, each 15 mm in length, were created in the rabbit ulna, from which periosteum was obtained. Bone defects were treated with either PLGA alone (group A), PLGA + MSCs (group B), periosteum-wrapped PLGA (group C) or periosteum-wrapped PLGA/MSCs (group D). At 6 and 12 weeks post-surgery, samples were detected by gross observation, radiological examination (X-ray and micro-CT) and histological analyses.

Results  Group D, comprising both periosteum and MSCs, showed better bone quality, higher X-ray scores and a greater amount of bone volume compared with the other three groups at each time point (P <0.05). No significant differences in radiological scores and amount of bone volume were found between groups B and C (P >0.05), both of which were significantly higher than group A (P <0.05). 

Conclusions  Implanted MSCs combined with periosteum have a synergistic effect on segmental bone regeneration and that periosteum plays a critical role in the process. Fabrication of angiogenic and osteogenic cellular constructs or tissue-engineered periosteum will have broad applications in bone tissue engineering.

     

医用硫酸钙Osteoset在修复犬下颌骨骨缺损中的作用

目的 探讨医用硫酸钙Osteoset在犬下颌骨骨缺损中促进骨缺损的修复作用.方法 随机将4只犬的左右下颌骨分为实验组和对照组.实验侧下颌骨骨缺损时植入医用硫酸钙Osteoset颗粒,对照组植入羟基磷灰石(HA)颗粒,分别于术后4、8周处死2只犬,取下颌骨作为标本,术后大体观察、术后X片、环境扫描电镜及组织学观察成骨情况...