抗伊氐锥虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其在检测循环抗源(CA)中的应用

本文利用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了三株抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb杂交瘤细胞系(1C_2、2A_3、5B_7)。鉴定结果:①诱生的腹水效价为1C_2 2×10~(-4)、2A_3 4×10~(-4)、5B_764×10~(-4),培养上清效价为1C_2 1/512、2A_3 1/512、5B_7 1/1024。②三株细胞所产生的McAb均为IgM类免疫球蛋白。③染色体数为1C_2 82、2A_3 96、5B_7 106条。④McAb在伊氏锥虫作抗原定位,均结合于虫体表面。⑤与伊氏锥虫表膜以外的抗原成分反应较弱,与锥虫     

分泌抗人C_(1q)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以人C_(19)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用固相C_(19)-ELISA筛选和有限稀释法克隆化以后,获得三株(A_4、B_6及D_5)分泌抗人C_(19)单克隆抗体的杂交瘤细胞系。培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价分别为10~(-3)、10~(-5)及10~(-7)。单克隆抗体与人IgG无交叉反应,与灭活C_(19)呈阴性反应,经人C_(19)吸收后,OD值明显下降,能阻断补体经典途径的活化,从而抑制溶血活性。根据上述结果表明,三株细胞所分泌的单克隆抗体是针对人C_(19)特异性的。经鉴定单克隆抗体A_4属小鼠IgG_(2b)、B_6及D_5属IgG_1亚类。杂交瘤细胞系核型分析表明,染色体数为87～91条。 三株杂交瘤细胞系贮存液氦6个月,体外培养传20代,仍保存分泌特异性单克隆抗体的能力。     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选,以有限稀释法克隆化,阳性率达100％,建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株杂交瘤细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生的腹水的效价。培养上清效价为1D_8 1∶1280~×、5D_7 1∶640~×、4B_1 1∶320~×、2B_8 1∶320~×、1A_4 1∶640~×,腹水效价为1D_8 10~(-7)、5D_7 10~(-7)、4B_110~(-7)、2B_8 10~(-5)、1A_4 10~(-4)。用免疫双扩散试验结果,五株单抗中有一株属IgG类,四株属IgG类。将单抗提纯后用ELISA夹心间接法及间接免疫荧光试验(IFA)对6种冠状病毒进行了特异性鉴定,除猪流行腹泻病毒外,不与其它冠状病毒发生交叉反应。取效价高而稳定的1D_8、5D_7、4B_1细胞系单克隆抗体做IFA及直接ELISA试验初步证明该McAb具有敏感性高,特异性强的优点,可作为猪流行性腹泻病毒检测的一种新试剂。     

抗鸡巴氐杆菌荚膜抗原及菌体表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用美国标准菌株×75(5:A)、P1059(8:A)制备荚膜A型抗原及×75和P1059菌体抗原,分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞分别与Sp 2/O、NS-1、NS-0骨髓瘤细胞融合,用ELISA检测建立了抗荚膜A型杂交瘤细胞系2株(1B_1、2B_7),抗×75菌体表面抗原的杂交瘤细胞株13株(1A_7、1A_6、1D_4、1D_(10)、2B_5、2A_3、3C_1、5C_3、2C_2、1B_5、1A_4、3D_6、4A_7),抗P1059菌体表面抗原的杂交瘤细胞株1株(3B_7)。     

抗人C_1~—-INH单克隆抗体的制备及其在分离人血清中C_1~—-INH的应用

本文以C_1~—抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP 2/0骨髓瘤细胞在50％PEG的作用下融合,获得三株分泌抗人C_1~—抑制物单克隆抗体的杂交瘤细胞系(A8、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些单抗是C1~—抑制物特异的。杂交瘤细胞液氮冻存半年以上,复苏后仍稳定分泌特异性抗体。经鉴定三株单抗均属IgG1。以F7制成亲和层析柱,分离纯化血清中的C_1~—抑制物,经SDS-PAGE及免疫印迹试验证明,有较高的纯度和良好的活性。本文为今后开展C_1~—抑制物的基础理论及临床应用研究,提供了方便条件。     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用(简报)

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得4A_8、4C_2、5C_9,6B_5四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA),测知培养上清抗体滴度为1∶16～1     

血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备

用人γ球蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的单抗杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_4)。鉴定表明,1B_(11)能识别人IgG、猪γ球蛋白和兔γ球蛋白;2A_4所识别的抗原存在于人IsG和猪γ球蛋白上,但未测出对兔γ球蛋白的结合活性。     

用抑制性单克隆抗体对恶性疟原虫裂殖体和裂殖子表面抗原的鉴定

根据体外抑制试验证明,94D_1,94C_3,92D:,9_3A_3,9 B和9_3D_4等6株McAb对恶性疟原虫的增殖有明显的抑制活性,为了分析这些McAb相应的靶抗原以及进一步的提取和纯化。我们首先对上述靶抗原的理化特性作了初步鉴定。用葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫吸附柱自小鼠杂交瘤腹水中提取纯化抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。纯化后的单克隆抗体与溴氰活化的琼脂糖珠(Sepharose 4B)制备免疫吸附柱。将~(125)I—标记的恶性疟原虫tritonX—100提取物通过上述亲和层析柱,洗脱物经透析浓缩后,用SDS—PAGE—放射自显影鉴定与保护性McAb对应的靶抗原的分子量。同时用提纯后的McAb与恶性疟原     

用单克隆抗体作Q热立克次体保护性抗原的分析

从研制成功的Ⅰ相及Ⅱ相Q热立克次体单克隆抗体(McAbⅠ及McAbⅡ)中,选择1-4B_5(Ⅰ相)及2-2E_5(Ⅱ相)单抗作中和试验和被动保护试验证明,McAbⅠ具有明显的抗Q热立克次体感染的作用。1-4B_5与10~3MID_(50)纯化活立克次体在体外作用后,接种BALB/c小鼠能完全保护小鼠不发生感染。在小鼠腹腔接种10~3MID_(50)Q热立克次体前一小时及以后隔日     

产毒性大肠杆菌菌毛抗原F_(41)单克隆抗体的制备及其特异性研究

本文报道以纯化的产毒性大肠杆菌菌毛F_(41)抗原,利用杂交瘤技术获得5株抗F_(41)抗原的单克隆抗体(1F6,2C5,3B6为IgG 1。1 H 5,4E11为IgM)。腹水抗体效价达10~(-6)培养上清抗体效价10~(-3)。通过免疫扩散、免疲印迹法及固相菌体ELISA试验证实,5株单克隆抗体均为针对ETEC菌毛F_(41)抗原的特异性抗体;红血球凝集抑制及肠上皮细胞粘附阻断试验证明1F6、2C5、3B6具有生物学活性,1H5与4E11无生物学活性,这可能(1)建立ELISA捕捉法,从粪便中直接检测F_(41)抗原以及用玻板凝集试验鉴定临床分离菌株。(2)用于F_(41)抗原性的分析及ETEC基因工程疫苗的监控手段。(3)为ETEC·F_(41)菌的致病性研究及被动免疫预防急性腹泻提供依据。     

用抗人B因子单克隆抗体对B因子等位基因变异型抗原决定簇的初步研究

本文为了研究人B因子(BF)等位基因变异型间是否存在抗原决定簇的差异,用两株针对不同抗原决定簇的抗人BF单克隆抗体(A2、C_9)对纯化的FF型和S_A、S_B亚型的BF进行等电聚焦,免疫印渍,结果发现C_9与FF、S_A S_B均呈阳性反应;A_2与S_B、FF呈阳性反应,但却不与S_A反应。从而说明在FF与S_A间,S_A与S_B间有抗原决定簇的差异,该抗原决定簇与A2相关。     

Preparation and characterization of monoclonal antibodies directed against antigenic determinants of recombinant human tumour necrosis factor (rTNF)

A large number of monoclonal antibodies (McAb) binding to antigenic determinants of human tumour necrosis factor (TNF) were prepared from two fusions of mouse myeloma NSO cells with spleen cells from Balb/c mice immunized with highly purified recombinant (r)TNF. Several of these McAbs were highly neutralizing with respect to the biological activity (cytotoxicity) of TNF manifested in L-929 C1.10 cells. Antibody competition experiments suggested the presence of at least two antigenic determinants on the rTNF molecule through which binding of McAb effects neutralization of biological activity. Some of these McAbs were shown to be suitable for the development of immunoassays to quantify rTNF.     

应用单克隆抗体分析甲状腺球蛋白的抗原性

应用自制的10种抗人甲状腺球蛋白(HTg)单克隆抗体(McAb)对HTg 进行抗原性分析。7种McAb同时结合人和狗的甲状腺球蛋白(Tg),3种 McAb仅结合 HTg。根据竞争结合抑制试验的结果,可将McAb 分成反应性不同的5个组,其中8种 McAb对2-ME 处理的HTg的结合力显著下降,2种 McAb对 SDS 解聚及热变性HTg的结合力下降。Graves′病,桥本氏甲状腺炎等抗HTg自身抗体可抑制6种McAb对HTg的结合。这些结果提示:1.HTg分子上至少存在着5个抗原区域,一些抗原决定簇决定着种属特异性,另一些可能为哺乳动物共有。2.抗HTg McAb可以识别依赖二硫键的抗原决定簇。3.与抗HTg自身抗体反应的一些抗原决定簇,可能分布在一定的抗原区域内。     

Conformational specificity of monoclonal antibodies used in the diagnosis of tomato mosaic virus

Summary Ten monoclonal antibodies (McAbs) were raised to the tobamovirus, tomato mosaic virus (ToMV). Seven of the McAbs reacted with ToMV only when tested in an ELISA format, involving antibody-coated plates, which preserved the quaternary conformation of the viral protein. Two McAbs which reacted with ToMV only in an ELISA using virus-coated plates recognized an antigenic determinant present only on the disassembled form of the viral coat protein. One McAb reacted with both the assembled and dissociated forms of ToMV protein.All McAbs reacted in an identical manner with the 15 ToMV strains and isolates tested, confirming the previously established serological homogeneity of the ToMV species. Only two of the McAbs cross-reacted with two other tobamoviruses: tobacco mosaic virus (TMV) and ribgrass mosaic virus. Seven variations of ELISA were compared for their suitability to detect ToMV and TMV in tomato plants. Double antibody sandwich ELISA could be performed with a single McAb to ToMV as enough accessible epitopes are present on the virus to bind simultaneously to the coating and biotin-labelled antibody.With 3 Figures     

抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究

用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定簇均对蛋白酶敏感,其中2株的抗原决定簇既存在于蛋白质中,又存在于脂类中。9株McAbs所识别的抗原分子量均为30kDa。4株均作用于同一抗原决定簇,其它McAb各作用于另外互不相同的抗原决定簇。免疫电镜观察,McAb 1A3所作用的蛋白质抗原主要分布在细胞内,少量分布于细菌胞壁。9株McAbs除1株外均显示出很强的特异性,其中4株仅与牛型结核茵反应阳性。利用McAb 1A3通过亲和层析柱纯化牛型结核杆菌PPD后,得到亲和层析纯抗原Ag 1A3,它仅与牛型结核杆菌免疫血清反应阳性,与其它分枝杆菌免疫血清反应阴性;对牛型结核杆菌致敏的豚鼠皮肤反应阳性,而与人型及BCG致敏豚鼠皮肤反应阴性。     

抗人IL—2单克隆抗体的制备及其特征

用基因重组人IL—2(rIL—2)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与NS—1细胞株杂交,经3～5次克隆获得9株分泌抗IL—2单克隆抗体杂交瘤,所分泌抗体均为IgG_1。其中3B5杂交瘤诱生的腹水中抗体效价达10万倍稀释度。它既能中和用于免疫的rIL—2活性,也可中和其它来源的基因重组人rIL—2,但与天然rIL—2反应弱。rIL—2可与4C3抗体包被的Sepharose 4B组合,並能用1.5%醋酸洗脱。因此它可做为基因工程制备rIL—2的辅助试剂及用于与rIL—2相关的研究。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

免疫组化技术分析人淋巴组织的多种分化抗原

用间接免疫过氧化物酶和PAP技术检测本室制备的31种抗人分化抗原单抗与淋巴组织的反应性.结果表明,CD3、CD5单抗与扁桃腺和淋巴结的T细胞、大部分成熟髓质胸腺细胞和脾白髓的中央动脉周围淋巴鞘呈非常强的反应.CD4~+细胞在扁桃腺的分布与CD3~+细胞类似,但数量稍少.只有少部扁桃腺和淋巴结T细胞与CD8单抗反应,CD8单抗主要染大部分胸腺皮质细胞,但抗CD8单抗与脾窦的内皮细胞呈强阳性交叉反应.Wu59单抗同时与扁桃腺、淋巴结和脾脏的T、B细胞呈非常强的膜染色,并与胸腺皮质和髓质细胞呈阳性反应,该单抗可能识别白细胞共同抗原或LFA-1.Wu 26.145单抗除与扁桃腺生发中心呈弱阳性反应外,还与脾红髓窦状结构内的血小板呈强阳性反应.此外,抗B细胞及其亚群单抗与扁桃腺、淋巴结、脾白髓生发中心呈强阳性反应.抗IL-2受体单抗与上述组织基本上呈阴性反应。     

天花粉蛋白裂解片段的抗原性研究

本文采用21株抗天花粉蛋白单抗对4个经溴化氰裂解的天花粉蛋白裂解片段进行抗原决定基分析。7株单抗特异结合天花粉蛋白裂解片段CBTf_1,2株单抗特异结合CBTf_2,2株单抗特异结合CBTf_4,7株单抗呈交叉反应,3株单抗与片段无结合反应。采用纯化的CBTf_1,CBTf_2对4株抗天花粉蛋白单抗的竞争结合实验显示:这两个片段对单抗的百分结合率可达到或接近50%,证明经溴化氰裂解的天花花粉蛋白片段仍保持原有的抗原性,这为天花粉蛋白结构和功能关系的研究提供重要资料。