铅暴露对大鼠海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体mRNA的影响

处于生长发育期的儿童 ,对铅的毒性特别敏感。Ｎ 甲基 Ｄ 天门冬氨酸 (ＮＭＤＡ)受体是一种兴奋性氨基酸受体 ,在脑的发育、学习与记忆、脑缺血等机制中起重要作用[1] 。生长发育期海马ＮＭＤＡ受体是铅作用的重要目标 ,本研究通过建立生长发育期低水平铅暴露的系列大鼠模型 ,应用半定量ＲＴ ＰＣＲ方法 ,检测大鼠海马ＮＭＤＡ受体亚单位ＮＲ2Ａ和ＮＲ2ＢｍＲＮＡ的表达水平 ,以揭示铅对ＮＭＤＡ受体基因的影响 ,从而探讨铅损害儿童学习记忆功能的神经毒理机制。材料和方法1 材料 :ＳＤ大鼠 (清洁级 )由浙江大学医学院实验动物中心提供 ,血…     

神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

为研究神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血后神经细胞凋亡的影响,将63只7日龄SD大鼠分为4组假手术组,对照组、保护组、治疗组,制成缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,分别于缺氧缺血(HI)前及HI后腹腔注射GM1和生理盐水,通过HE染色、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的生物素化的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)和电镜观察,比较各组神经细胞凋亡.结果显示对照组阳性细胞数明显高于保护组、治疗组(t=7.16,5.08,p＜0.01),且治疗组与保护组相比,阳性细胞数无明显差异(t=1.85,p＞0.05).本实验显示GM1确实能减少新生大鼠脑组织缺氧缺血后海马CA1区细胞凋亡,且GM1在HI前或后应用同样有效.     

神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

为研究神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血后神经细胞凋亡的影响,将63只7日龄SD大鼠分为4组:假手术组,对照组、保护组、治疗组,制成缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,分别于缺氧缺血(HI)前及HI后腹腔注射GM1和生理盐水,通过HE染色、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的生物素化的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)和电镜观察,比较各组神经细胞凋亡。结果显示对照组阳性细胞数明显高于保护组、治疗组(t=7.16,5.08,p<0.01),且治疗组与保护组相比,阳性细胞数无明显差异(t=1.85,p>0.05)。本实验显示GM1确实能减少新生大鼠脑组织缺氧缺血后海马CA1区细胞凋亡,且GM1在HI前或后应用同样有效。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对缺氧缺血新生大鼠海马CA1区神经元凋亡影响的研究

探讨抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对缺氧缺血新生大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响.将70只7日龄Wistar大鼠随机分成3组,①假手术组(n=10)仅作颈正中切口,不作颈总动脉结扎;②观察组(NAC组n=30,HIBD)后即刻腹腔内注射NAC 200 ug/只;③对照组(生理盐水组n=30),HIBD后即刻腹腔注射等体积的生理盐水.假手术组于手术后即刻,观察组、对照组于处置后48小时断头取脑,进行HE和Tunel染色光镜下检测脑细胞凋亡数.结果对照组大鼠海马CA1区可见典型的凋亡细胞,表现为细胞固缩、胞浆深染、核浓缩、碎片、核浆分布不清,有凋亡小体形成;NAC组上述凋亡细胞明显减少;Tunel染色对照组阳性细胞数与NAC组比较差异有明显的统计学意义(P＜0.05).结论NAC对HIBD后海马CA1区神经细胞凋亡有明显的抑制作用.     

神经节苷脂治疗新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的研究

目的：观察神经节苷脂(GM1)对缺氧缺血(HI)新生大鼠的治疗作用及对凋亡相关基因Bax/Bcl-2表达的影响。方法：应用生后第7天的SD大鼠,制备缺血缺氧性脑病(HIE)模型。用TUNEL法检测细胞凋亡,用免疫组织化学SABC法检测Bax/Bcl-2的表达。结果：新生大鼠HI后脑细胞存在凋亡。GM1治疗能减少细胞凋亡。治疗组皮质凋亡细胞数为55.75±6.71,较HI组75.25±4.94下降(P<0.01);治疗组海马凋亡细胞数较对照组也有下降(47.25±6.6 vs 32.14±4.88),P<0.01。各组Bax和Bcl-2表达皆为阳性,但在HI对照组,Bax表达更强,而Bcl-2表达较弱。结论：应用GM1治疗HI脑损伤可减少脑细胞凋亡,GM1治疗对凋亡相关基因Bax/Bcl-2表达有一定的影响,HI脑损伤后细胞凋亡可能与这两种基因相关。     

bFGF对新生大鼠缺氧缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

为研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对新生大鼠缺氧缺血 (HI)后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响 ,应用新生Wistar大鼠制备缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)模型 ,用HE染色、电镜及原位缺口末端标记 (TUNEL)法检测bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响。结果显示HE染色、电镜及TUNEL法均证实HI后海马存在选择性神经细胞凋亡 ,尤以CA 1区为重 ,CA 2和CA 3区病变较轻。TUNEL检测结果 ,bFGF治疗组阳性细胞数 ( 1 5 2 3± 1 4 2 )低于未治疗组 ( 2 5 1 2± 2 0 2 5) ,差异显著 (P <0 0 5)。因此 ,bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞确有保护作用。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对缺氧缺血新生大鼠海马CA1区神经元凋亡影响的研究

探讨抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对缺氧缺血新生大鼠海马CAl区神经元凋亡的影响。将70只7日龄Wistar大鼠随机分成3组,①假手术组:(n=10)仅作颈正中切口,不作颈总动脉结扎;②观察组(NAC组n=30,HIBD)后即刻腹腔内注射NAC 200ug/只;③对照组(生理盐水组n=30),HIBD后即刻腹腔注射等体积的生理盐水。假手术组于手术后即刻,观察组、对照组于处置后48小时断头取脑,进行HE和Tunel染色光镜下检测脑细胞凋亡数。结果:对照组大风海马CAl区可见典型的凋亡细胞,表现为细胞固缩、胞浆深染、核浓缩、碎片、核浆分布不清,有凋亡小体形成;NAC组上述凋亡细胞明显减少;Tunel染色对照组阳性细胞数与NAC组比较差异有明显的统计学意义(P<0.05)。结论:NAC对HIBD后海马CAl区神经细胞凋亡有明显的抑制作用。     

新生鼠缺血再灌注脑损伤神经节苷脂的保护作用

目的 探讨神经节苷脂(GM1)对细胞凋亡的影响和脑保护作用。方法采用栓线法建立新生大鼠的大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。腹腔注射GM1,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡染色,测定血清内皮素水平和NO水平。结果 假手术组偶见神经细胞凋亡,缺血再灌注组可见大量的神经细胞凋亡现象,GM1治疗组新生大鼠与缺血再灌注组相比,凋亡细胞明显减少;假手术组、缺血再灌注组和GM1治疗组新生大鼠血浆的内皮素含量(ng/L)分别为:41.6±4.06,63.45±6.91和50.67±5.20;N02-/NO3-含量分别是44.67±8.6、63.65±9.9和47.7±9.8。结论 GM1对新生大鼠脑缺氧缺血的保护作用可能通过抑制缺氧缺血性脑损伤后血浆内皮素和NO的生成而抑制神经细胞的凋亡过程。     

神经节苷脂GM1对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠发育及神经行为的影响

探讨神经节苷脂GM1对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠神经的保护作用,本文对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠用GM1治疗,并与假手术组和未治疗组对照,观察GM1对新生HIBD大鼠体重增长、脑重量、翻身、夹尾尖叫等行为的影响,并通过大鼠游走水迷宫实验观察GM1治疗对其年长后学习和记忆的影响.结果显示(1)实验后48 h三组动物体重即已有差别,以HIBD组最低,对照组最高,随着日龄的增加体重的差别越来越明显.至42天以HIBD组体重最低,GM1治疗组和对照组相近;(2)对HIBD 48小时左右两脑半球重量测定显示,HIBD组右脑明显重于左脑,提示有脑水肿存在,72小时至42天,右脑重量则明显减轻,提示有脑萎缩存在;GM1治疗组48小时右脑也明显重于左脑,但72小时至42天两侧半球的重量无差异;(3)实验24小时内大鼠神经行为异常发生率以HIBD组最高,其次是GM1治疗组,对照组最低;48小时后GM1治疗组神经行为异常的发生率明显低于HIBD组,与对照组相比无差异.大鼠游走出水迷宫的时间以正常对照组游走有规律且时间短,GM1治疗组与正常对照组相比无统计学差异,而HIBD组大鼠走出迷宫时间较治疗组及对照组明显延长.结论神经节苷脂GM1可以减少HIBD后的体重下降,使体重增长达正常水平.还可以减轻脑水肿和惊厥的发生,促进脑损伤的恢复,并增加HIBD大鼠年长后的学习和记忆功能.     

神经节苷脂对缺氧缺血新生大鼠脑组织一氧化氮影响的研究

新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是新生儿期危害最大的常见病，重者可死亡或致残。随着对HIE发病机制研究的深入，发现一氧化氮（NO）在此病中明显升高。为此，我们在建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型的基础上，观察神经节苷脂（GM-1）对新生大鼠脑组织中NO含量的影响，旨在探讨神经节苷脂（GM-1）对中枢神经系统损伤是否有保护作用，并为临床治疗HIE提供理论依据。     

缺氧缺血新生鼠海马磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的变化及神经节苷酯对其影响

目的　研究缺氧缺血新生大鼠海马CA1磷酸化c AMP反应元件结合蛋白 (CREB)的变化及神经节苷酯 (GM1)对其的影响。方法　建立HIBD模型 ,用免疫组织化学法观察缺氧缺血 (HI)和GM 1干预后海马CA1区不同时间点p CREB的变化。结果　HI组、GM 1组CA1区 p CREB的表达一过性升高后迅速下降 ,两组相比无明显差异。结论　HI后CA1区p CREB表达呈现一过性的升高后迅速下降 ,GM1不能抑制 p CREB的表达 ,对神经元的存活无损害作用 ,具有较大的临床应用潜能     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血红素氧化酶-1表达与脑细胞凋亡的关系

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后海马区血红素氧化酶 1(HO 1)的表达 ,以及与细胞凋亡的关系。方法　 7日龄SD仔鼠 72只 ,随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交和免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO 1mRNA及蛋白阳性细胞数量变化 ;用原位缺口末端标记 (TUNEL)法检测凋亡的脑细胞。结果　 1.HIBD组右侧海马HO 1mRNA表达 4h开始升高 (P <0 .0 5 ) ,12h达高峰 ,4 8h开始略有下降 ,72h后仍高于对照组 (P <0 .0 1)。 2 .HO 1蛋白表达与HO 1mRNA表达变化规律相一致。 3.凋亡检测发现 ,HIBD组右侧海马 12h凋亡细胞数增加 ,2 4h已有明显细胞凋亡 (P <0 .0 1) ,72h凋亡细胞减少 ,仍高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　新生大鼠HIBD后HO 1mRNA及其蛋白表达增加 ,可能参与神经细胞凋亡     

外源性视黄酸调节乳鼠心肌细胞Tbx1的表达

目的 研究视黄酸(RA)对心肌细胞Tbx1基因表达的影响.方法 分离培养乳鼠心肌细胞,经不同浓度的RA处理后,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测乳鼠心肌细胞Tbx1基因在mRNA和蛋白水平表达的变化.结果 Tbx1基因在乳鼠心肌细胞有少量基础的表达,在予以RA刺激后,1×10-7mol/L RA使细胞内Tbx1基冈mRNA和蛋白含量表达分别增加1.51倍和1.10倍(P均<0.05),1×10-6 mol/L RA使细胞内Tbx1基因mRNA和蛋白含量表达分别增加2.21倍和2.38倍(P均<0.05).结论 RA可以上调乳鼠心肌细胞Tbx1的表达,且此作用呈剂量依赖效应.     

脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70的合成研究

目的：观察热休克蛋白70（HSP70）在缺氧缺血（HI）新生大鼠脑内的表达。方法：应用免疫组化法检测正常对照组以及HI组不同时间点的脑海马和皮质部位的HSP70阳性细胞数。结果：正常脑组织内未观察到明显HSP70阳性细胞，HI后阳性细胞明显增加。HI后2h即可观察阳性细胞，48h,72h达到高峰，7d时已经明显下降，结论：HI是脑HSP70合成及极为敏感的诱因，且HSP70的生成量随HI后时间增加呈动态变化过程。     

普米克令舒对哮喘大鼠气道平滑肌细胞NK-1受体表达的影响

目的 探讨普米克令舒对哮喘大鼠气道平滑肌细胞NK1受体表达的影响.方法 将45只Wistat大鼠随机分成正常对照组、哮喘组、普米克令舒治疗组,每组15只.用雾化吸入卵蛋白制作哮喘大鼠模型,治疗组吸入卵蛋白诱发哮喘后给予普米克令舒吸入治疗.第21天取大鼠气道平滑肌细胞原代培养.用体外堵养纯化的第4代细胞定量PCR检测各组气道平滑肌细胞NK-1受体mRNA表达差异.结果 普米克令舒治疗组气道平滑肌细胞NK-1受体mRNA相对含量为1.0820±0.1146,较哮喘组(1.168 7±0.1356)明显降低,但高于正常对照组(1.0347±0.2503),差异均有显著性(P＜0.05).结论 NK-1受体通过增加哮喘的神经源性炎症参与哮喘的发病机制.普米克令舒抑制哮喘大鼠气道神经源性炎症的作用与降低NK-1受体表达有关.     

新生儿缺氧缺血性脑病影像学诊断的比较研究

在围产新生儿医学所有问题中,新生儿脑损伤的治愈率和其生存后的生活质量,仍然是儿科医师的一个重要的研究课题。早期诊断和及时适宜地治疗脑损伤是改善预后的关键。为此,我们对住院的新生儿窒息病人常规进行头颅B超检查,并做CT对照,以求在边远基层地区获得最佳诊疗手段,及时施治有效的医疗措施,减轻脑损伤程度,提高新生儿存活率,降低神经系统后遗症的发生率。1对象与方法1.1对象1996年10月～2001年6月住院的新生儿窒息病人80例。入院日龄最小5m in,最大3d,平均(0.45熏2.04)h;80例中男47例,女33例;重度窒息56例,轻度窒息24例;早产儿2例,足…     

美金胺对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70合成的影响

为评估非竞争性：NMDA受体美金胺(Memantine)对缺氧缺血(HI)的脑保护作用，将HI模型鼠(结扎右侧颈总动脉后予8％氧2h)随机分为对照(NC,n=15)组、缺氧缺血(HI，n=25)组，HI前应用美金胺组(PRE，n=25)、HI后应用美金胺组(POST，n=24)。应用免疫组织化学方法观察各组海马及皮质部位热休克蛋白(HSP)70阳性细胞数，进一步从分子水平评估美金胺的脑保护效果。结果显示PRE组和POST组脑HSP70生成量明显低于HI组。提示HI是HSP70生成的强烈诱导剂，美金胺的应用则明显减少了HSP70的生成，具有一定的缺氧缺血脑保护作用。     

血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内GLUT3合成的影响

目的 探讨血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白3(glucose transporter 3，GLUT3)合成的影响。方法 在成功建立了缺氧缺血合并高，低血糖新生大鼠模型的基础上，应用免疫组化方法定量检测新生大鼠脑内海马和皮质部位GLUT3的合成。结果 正常情况下GLUT3随日龄增加而合成增加；缺氧缺血可引起GLUT3合成在短期内明显增加，但在HI后期降至较低的水平；HI前低血糖使GLUT3合成在HI后期更进一步降低；HI前重度高血糖则可引起各时段GLUT3合成明显增加，尤其在HI后期仍保持一定的水平。结论 在缺氧缺血前预先补充足量葡萄糖，有可能在一定程度上提高脑内应对缺氧缺血的侵袭、改善缺氧缺血程度的能力。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的亚低温治疗

目的　研究亚低温对缺氧缺血性脑损伤的保护作用 ,探讨亚低温治疗的最佳时机、深度、持续时间。方法　Wistar 7日龄新生大鼠 ,随机分为 :1) 2 9℃低温干预组、34℃低温干预组、常温 (37℃ )恢复组、正常对照组 (假手术组 ) ;2 ) 2 4h低温干预组、4 8h低温干预组、72h低温干预组、常温 (37℃ )恢复组、正常对照组 (假手术组 ) ;3)缺氧缺血后 0min起始低温干预组、6 0min起始低温干预组、12 0min起始低温干预组、6h起始低温干预组、常温 (37℃ )恢复组、正常对照组 (假手术组 )。每组均 2 0只大鼠均于缺氧缺血后 78h处死 ,测定脑组织含水量及微管相关蛋白 2 (MAP 2 )免疫组织化学染色 ,计算脑损伤程度。结果　 1) 2 9℃低温干预效果优于 34℃低温干预效果。 2 ) 72h低温干预效果优于 2 4、4 8h低温干预。 3)缺氧缺血后立即低温干预效果好 ,延迟 6h的低温干预仍有效。结论　缺氧缺血后立即 2 9℃低温干预 72h有显著脑保护作用     

新生大鼠脑缺氧缺血对脑组织谷氨酸及环核苷酸的影响

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)时谷氨酸 (Glu)和环核苷酸 (cAMP和cGMP)的代谢改变及意义。方法　选 7日龄Wistar新生大鼠 ,随机分为对照组和缺氧缺血组。采取结扎左侧颈总动脉并吸入低氧的混合气体制作HIBD动物模型。用氨基酸自动分析仪与放免法测定不同时间脑组织Glu、cAMP和cGMP含量。结果　脑缺氧缺血后即刻Glu(17.5 6± 5 .32mol/g　P <0 .0 1)和cAMP(15 .0 1± 3.80nmol/g　P<0 .0 5 )较对照组显著升高 ,随后逐渐下降 ,于 6 0～ 180min降至正常 ,cGMP则显著升高 (0 .88± 0 .19nmol/ g　P <0 .0 5 )。结论　新生大鼠HIBD时脑组织Glu、cAMP、cGMP含量发生变化 ,引起细胞兴奋性毒性和代谢改变是加重脑损害的重要因素