分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

用脲酶(Urease)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞用PEG融合。ELISA法筛选分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,建立起6株杂交瘤细胞。细胞分泌抗体滴度高、亲和力强、特异性好,长期传代稳定。     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

SPA单克隆抗体的制备与纯化

以SPA作基础免疫BALB/C小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与SP_2/O瘤细胞常规融合,融合率100％;以快速EIISA检测抗体,阳性率60％。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为SPA特异性抗体。经鉴定属IgG2a及IgG2b亚类。电镜观察细胞融合,发现细胞内含逆转录病毒。经MAPS—100法纯化单抗腹水,获得了高纯度McAb。     

抗大肠杆菌_(506)株36kD蛋白单抗的制备及其在人精子上的免疫定位

用纯化的36kD蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以PEG进行细胞融合,融合率为86％。采用ELISA筛选出杂交瘤细胞阳性孔。经过4～7次有限稀释克隆化,共获得7株能稳定分泌36kD相应MCAb的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔,测定腹水McAb的效价为1:5×10~3～1:1×10~5,抗体亚型均为IgG1。用荧光显微镜观察,结果发现EC2作用的人精子头颈部出现明显荧光反应,提示共同抗原存在于人精子头颈部。这些结果有助于进一步探讨细菌感染引起男性不育的机制以及研制细菌避孕疫苗等工作。     

人红细胞凝集型单抗的制备与鉴定

目的制备人红细胞凝集型单克隆抗体并进行鉴定。方法以3种方式处理人血红细胞,获得红细胞免疫原,分别免疫Balb/c小鼠。应用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以凝集实验筛选分泌凝集型抗体的杂交瘤细胞,继而用有限稀释法克隆3次,并对杂交瘤细胞的稳定性进行测定。通过腹水法制备抗体,亲和层析法纯化抗体,对抗体的特性进行研究。结果 3种方式获得的免疫原均能建立有效的免疫反应,低渗加超声破碎法所获得的小鼠血清抗体效价最高。通过融合获得8株可稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,其中,4A1分泌的抗体凝集效价最高。抗体可使4种人血型的红细胞凝集,无种属交叉凝集反应。结论有效制备了针对人红细胞的凝集性单抗,为其之后的应用研究奠定了基础。     

人大细胞肺癌单克隆抗体的制备及其碘化后的免疫活性

为进一步扩大肿瘤放射免疫显像和放射免疫治疗的研究和应用,制备了抗人大细胞肺癌单克隆抗体。用人大细胞肺癌细胞(PLA-801)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,筛选出四株分泌抗体性能稳定的杂交瘤,在BALB/c小鼠中产生含抗体丰富     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。     

抗人红细胞膜抗原非凝集型单克隆抗体的研制及特性鉴定

目的:制备抗人红细胞膜抗原的非凝集型单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:应用杂交瘤技术,以人O型红细胞膜抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用聚凝胺试管法筛选识别红细胞表面共同抗原的抗体,玻片凝集实验剔除凝集型抗体(完全抗体),再将分泌非凝集型mAb(不完全抗体)的杂交瘤细胞株用有限稀释法克隆化3次。对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定。结果:获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞2E8。mAb2E8为IgG1类,可特异性地识别红细胞膜上的H抗原,没有种属交叉血凝反应。杂交瘤细胞的培养上清与人的A、B、AB和O型红细胞均能产生强凝集,凝集效价为1∶1024,腹水mAb的凝集效价达到1∶64×106。mAb的亲和力用凝集试验检测,出现血凝的时间为7s,3min以内凝块>1mm。结论:成功地制备了针对红细胞膜H抗原的非凝集性mAb,此mAb的凝集效价、相对亲和力及特异性均较良好,为构建双特异性抗体奠定了基础。     

抗乙肝病毒核心抗体的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用单克隆抗体HBc免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选到1C12、2G12两株分泌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株,经鉴定属于IgG2a亚类。经ELISA独特型结合试验,抗原—抗体结合抑制试验进行鉴定,证实为抗乙肝病毒核心     

杂交的杂交瘤(Hybrid hybridoma及其在免疫组化中的应用

作者采用杂交瘤技术,制备了大鼠的抗生长抑制素—抗过氧化物酶的双重特异性克隆抗体(Bispecifi c Monoclonal Antibodies),并将它应用于检查大鼠垂体生长抑制素的免疫组化中,证明它比化学法重建的双特异抗体好。取Lou大鼠1/3瘤细胞与辣根过氧物酶免疫的Wistar大鼠脾细胞融合,获得杂交瘤克隆YC6/41。使它对氮杂鸟嘌呤(8 AG)抵抗,对HAT敏感。反复克隆     

霍乱毒素及其亚单位的单克隆抗体研究

一、抗霍乱毒素(或其亚单位)单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立:本文报道以福尔马林脱毒的CT-B免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤Sp 2/0细胞融合。筛选到一株能产抗CT-B单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为AE 72-26。CT-B免疫组的试验中,获得4株能产抗体的杂交瘤细胞系,但效价很低,且兼有抗CT-A、抗CT-B抗体。     

单克隆抗体作为探测器用于雌激素受体的检出和性能描述

最近制出雌激素受体和糖皮质激素受体的特异抗体,从而使利用免疫化学技术来检出、纯化和研究类固醇激素受体成为可能。1、抗小牛亲雌受体的单克隆抗体用部分纯化的小牛子宫受体免疫Lewis系鼠,取其脾淋巴细胞与三种不同的骨髓瘤细胞系的细胞(P3-X63-Ag8、P3-NS1/1-Ag4 1和SP2/0-Ag14)融合,结果在一半以上微量板孔有杂交瘤增殖。增殖的杂交瘤系中几乎有10%分泌抗亲雌受体抗体44/485。     

杂交瘤冻存的简便快速方法

本文介绍两种在96孔微培养板内冻存和复苏杂交瘤细胞的简便快速方法,可提高对杂交瘤的管理水平,以避免细胞的丢失。具体方法是:用福尔马林杀死的嗜肺军团菌(OLDA株)或鹌鹑肌细胞,分别免疫Balb/c小鼠。杀鼠取脾细胞,与Sp 2/O—Ag14小鼠浆细胞瘤细胞杂交得LD 8 a 2—3 D 8-1 B 7和MF 2-5 A6杂交瘤。通过间接免疫荧光试验检测杂交瘤所分泌的抗     

抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的 :制备鼠抗人白细胞介素 15(hIL 15)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。方法 :自重组人白细胞介素 15(rhIL 15)基因工程菌中 ,提取融合蛋白GST IL 15,以 12 0g/LSDS PAGE分离鉴定 ,切取含有目的条带的凝胶 ,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 / 0骨髓瘤细胞常规融合 ,依次进行HAT选择培养 ,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化。对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定。另外 ,以rhIL 15包涵体蛋白 (rhIL 15IBP)免疫新西兰白兔 ,制备抗hIL 15的多克隆抗体 (多抗 )。用抗hIL 15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA。结果 :获得 1株可稳定分泌特异性抗hIL 15mAb的杂交瘤细胞。建立了双抗体夹心间接ELISA ,检测rhIL 15蛋白的敏感性达 10 μg/L。结论 :成功地制备抗hIL 15mAb ,并建立了一种可用于hIL 15检测的双抗体夹心间接ELISA。     

粉尘螨变应原第7 组分( Der f 7) 重组蛋白单克隆抗体的制备

目的:克隆表达粉尘螨变应原第7 组分(简称Der f 7)重组蛋白,制备抗Der f 7 单克隆抗体,并进行鉴定。方法:用pET28a(+)-Der f 7 原核表达体系表达Der f 7 重组蛋白,以此免疫BALB/ c 小鼠,将骨髓瘤细胞和脾细胞融合,经ELISA法筛选杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔,获得腹水,经蛋白A 琼脂糖介质纯化,后鉴定抗体的效价、纯度,采用免疫印迹法鉴定抗体的特异性。结果:获得三株稳定分泌重组Der f 7 单克隆抗体的杂交瘤细胞,产生的抗体纯度高,效价高于1 ：243 000。Western blot 显示能很好地识别Der f 7 重组蛋白。为Der f 7 变应原的定量、定位及相关过敏性疾病的诊疗奠定基础。结论:成功获得粉尘螨变应原第7 组分(Der f7)重组蛋白单克隆抗体,且抗体效价纯度及特异性较好。     

抗血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇的单克隆抗体

<正> 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫BALB/c 小鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞按 Kennett 方法作细胞融合,用有限稀释法克隆化2～3次后,建立一株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(A6-B6),其培养上清经浓缩后作免疫球蛋白亚类签定为 IgM,杂交瘤诱生的小鼠腹水经 SEA 免疫     

双分沁功能IgM、IgG2a单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

应用HB_sA_g采取两种不同的免疫方法免疫小鼠后。取免疫的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选出两株抗HB_s的单克隆抗体杂交瘤细胞株。常规免疫方法获得的细胞株为WHB_s1,分泌IgG1。脾内免疫方法获得的细胞株WHB_s2,分泌IgM和IgG_(2a)抗体。经过3个月的连续培养,能稳定分泌效价高,特异性强的单克隆抗体。     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及结果。为获得供融合用的小鼠脾细胞,用两种不同的方案免疫了两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第4号小鼠,于加强免疫4天后取脾,制成脾细胞悬液。按照常规方法与小鼠骨髓瘤SP 2/0·Ag 14细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔的上清液,从中选出两株(A3和B3)分泌抗重组人γ-干扰素的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组或自然的人γ-干扰素;与α-干扰素或β-干扰素无反应。此两株单克隆抗体的效价分别超过128,000和25,600。双扩散试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体;液氮中保存半年以上,仍保持原有的各种特性。     

抗成骨肉瘤mAb的制备、鉴定及其细胞毒效应

目的 建立抗人成骨肉瘤mAb杂交瘤细胞系并对其抗体特性进行研究。方法 利用我室自建的骨肉瘤细胞系（OS——9607）免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,经筛选和克隆化后,建立杂交瘤细胞系,以免疫组化和Western Blot等方法研究抗体特性,以MTT法研究细胞毒作用,结果 得到1株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系3D9,免疫组化结果显示着色区主要分布在细胞核上,相应抗原在成骨肉瘤标本和成骨肉瘤细胞系高度表达（83%）,正常组织未见表达,WesternBlot显示3D9相应分子量为Mr54000。MTT法示该抗体对成骨肉瘤细胞的杀伤率明显高于对照组。结论 得到的杂交瘤细胞系分泌的mAb体具有成骨肉瘤细胞特异亲和性,并有一定的细胞毒效应,可能成为新的成骨肉瘤生化标志,在肿瘤的免疫治疗方面有广阔的应用前景。