牙胚组织中成釉蛋白表达免疫组织化学和原位杂交的特点

目的：观察人牙胚组织中成釉蛋白的表达特点。 方法：实验于2002—02／04在解放军第四军医大学口腔内科实验室完成。取孕5个月流产男性胎儿（产妇知情同意），截取上、下颌骨，常规方法制备人牙胚组织石蜡切片。用兔抗人AMBN多克隆抗体，对人牙胚组织石蜡切片和正常狗牙周组织石蜡切片进行免疫组织化学染色。标记人成釉蛋白cDNA探针，对人牙胚组织石蜡切片进行原位杂交。 结果：①免疫组织化学染色发现成釉蛋白由内釉上皮细胞在分化为成熟成釉细胞前开始表达，分泌期成釉细胞高度表达并持续整个釉质形成期，新形成的牙釉质染色阳性；成牙本质细胞在分泌牙本质基质之前开始表达成釉蛋白。在牙本质形成过程中成牙本质细胞持续表达成釉噩白，呈弱阳性，前期牙本质中呈弱阳性染色；上皮根鞘细胞染色阳性。狗牙周组织染色发现牙骨质表层细胞呈强阳性染色，新形成的牙骨质中可见阳性染色颗粒，呈网状分布。②对人牙胚组织石蜡切片的原位杂交显示，成釉蛋白在成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞中有表达，表达部位与免疫组织化学结果一致。 结论：内釉上皮首先表达成釉蛋白，之后前成牙本质细胞达成釉蛋白。成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞表达成釉蛋白。     

人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性

目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫后,颈动脉取血,分离血清并用饱和硫酸铵纯化,制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体,用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效价。用WesternBlot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。结果:①ELISA检测结果:表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10000。②WesternBlot显示:成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达,相对分子质量约为65000,在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。结论:制备了抗人成釉蛋白抗体,为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础,从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白,并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65000。     

荧光原位杂交与免疫组织化学技术检测乳腺癌人表皮生长因子受体2基因扩增及蛋白表达研究

目的 探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测乳腺癌人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)基因表达及扩增状态的临床意义.方法 采用FISH和IHC技术分别检测35例乳腺癌患者手术切除标本的HER2基因和蛋白表达情况及17号染色体倍体性,分析HER2基因扩增和蛋白表达状态的差异与17号染色体倍体性的相关性.结果 IHC与FISH检测的总符合率为82.8％;FISH检测HER2基因扩增情况与IHC检查HER2蛋白表达为(卅)、(++)和(-/+)者的符合率分别为93.3％,60.0％和90.0％; HER2基因绝对拷贝数阳性和阴性的患者中分别存在26.7％和10.0％的17号染色体多体扩增.结论 IHC是初步筛查HER2基因状态的首选方法;IHC检测HER2蛋白阳性的乳腺癌标本存在假阳性,FISH可准确、稳定地检测乳腺癌组织中HER2的基因状态及17号染色体倍体性.     

大鼠脑神经元和胶质细胞中葡萄糖转运体表达和定位的免疫组织化学证据

目的：探讨Mr 45000葡萄糖运输体1在脑实质细胞中的分布。方法：实验于2004-08／09在首都医科大学宣武医院低氧医学研究所神经生物研究实验室完成。选择SD成年二级大鼠2只，雄性，体质量约250g。1只大鼠脑制成匀浆后，验证葡萄糖运输体1 C-末端的部分合成肽免疫家兔制成的抗血清对Mr 45000葡萄糖运输体1的特异性应用免疫印迹试验。另1只雄性大鼠在深麻醉下，取脑制成20μm切片，观察Mr 45000葡萄糖运输体1在大鼠脑实质细胞中的定位应用抗生素蛋白——生物素复合体染色法和免疫电镜法。结果：①葡萄糖运输体1 C-末端的部分合成肽免疫家兔制成的抗血清是一种高效价的对Mr 45000葡萄糖运输体1特异的抗体。②Mr 45000葡萄糖运输体1蛋白在正常脑的胶质细胞以及皮质以外某些特定部位的神经元中表达。③Mr 45000葡萄糖运输体1阳性胶质细胞多数是少突胶质细胞，少数是星形胶质细胞。结论：在适当延长抗体和脑组织切片反应时间的基础上，Mr 45000葡萄糖运输体1在星形胶质细胞、少突胶质细胞和某些特定部位的神经元中均有表达。     

免疫组织化学切片行EBER原位杂交检测方法的建立及应用

目的 在石蜡组织免疫组织化学(IHC)阴性切片上建立EBER原位杂交(ISH)检测方法,为EB病毒相关淋巴组织病变在组织资源不足的情况下提供及时有效的检测结果及诊断依据。方法 回顾性收集首都医科大学附属北京友谊医院病理科2021年1月至2023年2月间EBER原位杂交检测阳性的病例23例,其中NK/T细胞淋巴瘤8例,弥漫大B细胞淋巴瘤6例,伯基特淋巴瘤2例,经典霍奇金淋巴瘤4例,传染性单核细胞增多症3例。先选取1例组织量充足的EB病毒阳性弥漫大B细胞淋巴瘤组织用于IHC后EBER ISH前组织预处理条件的摸索,然后使用最佳预处理条件建立本实验的检测流程并用于另外22例组织中。22个蜡块每例连续切片2张,1张进行常规的EBER原位杂交检测,归为对照组;另1张归为实验组,先进行IHC染色,再按最佳预处理条件进行EBER原位杂交。最后对两组切片杂交的成功率、阳性强度、阳性细胞比例及组织细胞结构进行观察对比。结果 实验组EBER杂交的成功率为90.91%(20/22),与对照组[100%(22/22)]相比,差异无统计学意义(P>0.05),杂交成功的切片阳性着色位于细胞核,定位准确,背...     

造釉细胞瘤免疫组织化学观察

目的 :观察酶标免疫技术对造釉细胞瘤的组织化学表达情况。方法 :应用LSAB法对 14例造釉细胞瘤免疫标单 (多 )克隆抗体联合标记。共计 4类 12项。即上皮性 3项、间叶型 3项、神经源性 3项、激素类 3项。结果发现 :在立方或柱状上皮中的阳性率EMA5 7%、α1 -AT10 0 %、S -10 0 10 0 %、NSE71%、激素类均为 10 0 %。在星网状细胞中的阳性率VI71%、NSE71%、激素类均为 10 0 %。反应强度激素类及NSE较强 ,其它次之 ,上皮性最弱。结论 :1 对此瘤来源提出新看法 ,2 此瘤对激素有较强依赖性 ,3 对诊断低分化肿瘤有一定参考意义     

大鼠脑神经元和胶质细胞中葡萄糖转运体表达和定位的免疫组织化学证据

目的:探讨Mr45000葡萄糖运输体1在脑实质细胞中的分布。方法:实验于2004-08/09在首都医科大学宣武医院低氧医学研究所神经生物研究实验室完成。选择SD成年二级大鼠2只,雄性,体质量约250g。1只大鼠脑制成匀浆后,验证葡萄糖运输体1C-末端的部分合成肽免疫家兔制成的抗血清对Mr45000葡萄糖运输体1的特异性应用免疫印迹试验。另1只雄性大鼠在深麻醉下,取脑制成20μm切片,观察Mr45000葡萄糖运输体1在大鼠脑实质细胞中的定位应用抗生素蛋白—生物素复合体染色法和免疫电镜法。结果:①葡萄糖运输体1C-末端的部分合成肽免疫家兔制成的抗血清是一种高效价的对Mr45000葡萄糖运输体1特异的抗体。②Mr45000葡萄糖运输体1蛋白在正常脑的胶质细胞以及皮质以外某些特定部位的神经元中表达。③Mr45000葡萄糖运输体1阳性胶质细胞多数是少突胶质细胞,少数是星形胶质细胞。结论:在适当延长抗体和脑组织切片反应时间的基础上,Mr45000葡萄糖运输体1在星形胶质细胞、少突胶质细胞和某些特定部位的神经元中均有表达。     

免疫组织化学联合荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤分子细胞遗传学异常

目的 应用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）联合荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术检测多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）常见分子细胞遗传学异常.方法 对按照WHO诊断标准确诊的20例初诊MM患者,取骨髓组织石蜡包埋并切片,应用IHC技术对骨髓石蜡切片进行CD138单克隆抗体标记,选取CD138＋细胞丰富的骨髓石蜡切片,采用1q21/RB1、D13S319/p53、IGH三组序列特异性基因探针进行FISH检测.同时以10例非恶性血液病患者骨髓组织切片为对照建立各探针FISH检测的正常阈值,检测结果大于阈值为阳性,小于阈值为阴性.结果 （1）20例初诊MM患者中16例检出分子细胞遗传学异常（占80.0％）,其中1q21扩增5例（占25.0％）,RB1缺失6例（占30.0％）,D13S319缺失9例（占45.0％）,p53缺失3例（占15.0％）,IGH基因重排10例（占50.0％）.检出1种异常者5例（占25.0％）,同时有2种异常者6例（占30.0％）,3种异常者4例（20.0％）,4种异常者1例（占5.0％）.（2）IHC联合FISH技术检出率80％,而染色体G显带技术检出率10.0％,两组差异有统计学意义（P＜0.05）.（3）按年龄＜50岁、50 ～60岁、＞60岁分组,分子细胞遗传学异常检出分别为5例（83.3％）、6例（100％）、5例（62.5％）,经Fisher检验,年龄＞60岁与其他两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.（4）MM患者染色体与基因异常和其临床分型、分期之间,即p53基因与IgG型及Ⅲa期之间有关（P＜0.05）,染色体与基因异常以Ⅲ期和IgG型为主.结论 IHC联合FISH技术检测MM分子细胞遗传学异常有助于提高检测效率,明显优越于染色体G显带技术,同时可发现MM的分子细胞遗传学改变多数为复杂核型,且多数存在数目与结构异常.MM患者染色体和基因异常与其临床分型、分期、患者年龄之间具有相关性.     

溃疡性结肠炎患者大肠上皮细胞蛋白的表达

溃疡性结肠炎是弥漫性、连续性侵犯大肠黏膜及黏膜下层的炎症性疾病。多数病例可见到直肠以上连续性、糜烂性、溃疡病变形成。除大肠病变以外,还可见到其他脏器的病变发生,如皮肤黏膜病变(鹅口疮、结节性红斑、坏疽性脓皮症),关节病变(游走性关节炎、强直性脊柱炎),眼部病变(虹膜炎),胆道疾病(肝功能障碍、硬化性胆管炎)。因此可推断,在这些脏器存在着共同的抗原。近年来,认为溃疡性结肠炎是因为患者体内存在着原肌动蛋白自身抗原而发生的自身免疫性疾病。原肌动蛋白与肌动蛋白丝相结合存在于细胞内,     

人成釉蛋白C端肽的大量表达及纯化

目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,加入诱导剂IPTG至终浓度为0.1mmol/L,32℃继续振荡诱导培养5h,收集细菌,诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱Ni-NTA结合蛋白,收集洗脱蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。②离子交换层析缓冲液(pH 7.4,50 mmol/L Tris·Cl)平衡Q SapharoseHP层析柱,将初步纯化的蛋白样品加在Q Sapharose HP凝胶介质上,梯度洗脱结合的蛋白,收集洗脱峰,制样,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定洗脱蛋白。结果:①表达重组人成釉蛋白C端肽的金属螯合亲和层析结果:诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱下Ni-NTA结合蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳法电泳证实获得初步纯化的重组人成釉蛋白C端肽,其中仍含一些杂蛋白。②重组人成釉蛋白C端肽的离子交换层析结果:获得多个蛋白洗脱峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳法证实获得纯化的重组人成釉蛋白C端肽。结论:获得了纯化的人成釉蛋白重组蛋白。     

组织芯片技术在免疫组化及原位杂交阳性对照中的应用

组织芯片亦称组织微阵列(tissue microaryyay,TMA)是将数十个、数百个组织标本整齐地排列在同一张载玻片上的微缩组织切片。组织芯片具有高通量、节约组织原材料和检测试剂、实验条件一致性及实验结果可比性好、实验误差小等优点，在病理学研究中有广阔的应用前景…。我们利用组织芯片技术制作免疫组化及原位杂交的阳性对照组织芯片，将阳性对照的组织芯片与待检测的组织裱在同一张玻璃切片上，进行免疫组化及原位杂交染色，取得了比较理想的结果，现介绍如下。     

应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR诊断弓形虫淋巴结炎

目的 研究弓形虫淋巴结炎的病理诊断.方法 应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术,检测71例病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)组织切片中的弓形虫.结果 在71例中应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术检测,弓形虫阳性病例分别为17例(23.94%)、35例(49.30%)、41例(57.75%),经统计学处理有显著差异(P＜0.005).结论 病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)病例中,部份为漏诊的弓形虫淋巴结炎病例.免疫组化、原位杂交及间接原位PCR均能显示淋巴结组织切片中的弓形虫,但弓形虫检测结果阳性率依次为间接原位PCR、原位杂交及免疫组化.     

Combined in situ hybridization and immunohistochemistry for automated detection of cytomegalovirus and p53

Background: Cytomegalovirus (CMV) infection has been shown to be associated with p53 overexpression in coronary artery restenosis. We investigated the occurance of this association in other forms of CMV infection using an automated in situ hybridization (ISH) technique.Methods and Results: We performed ISH for CMV using digoxigenin-labeled or biotinylated probes followed by avidin-alkaline phosphatase and nitroblue tetrazolium color substrate. Immunohistochemistry (IHC) was then performed using an anti-p53 antibody utilizing streptavidin-immunoperoxidase and 3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride as a chromogen. Sixteen cases with characteristic cytomegalic inclusions from a variety of body sites were examined. All 16 cases were positive for CMV by ISH. Nine of sixteen expressed nuclear p53. Six of these nine cases showed viral cytopathic effect in the cells with p53 expression. In an illustrative case, double colocalized staining for CMV and p53 protein was demonstrated in individual cytopathic cells. When microwave antigen retrieval was necessary, ISH was performed before IHC, and our standard microwaving time was reduced by two-thirds.Conclusions: The colocalization of p53 protein overexpression with CMV within single cells adds further evidence that this overexpression is a viral-induced phenomenon. The combined ISH and IHC assay can be carried out in a rapid automated mode, increasing the ease of investigating relationships between message and protein expression within single cells in a wide variety of settings. (Mol Diagn 1996 Dec;1(4):291-296)     

原位杂交与免疫组化双染法在淋巴瘤诊断中的应用

目的在淋巴瘤病例中建立EB病毒编码小RNA(EBER)原位杂交与免疫组化双重染色法。方法使用双染试剂盒在石蜡切片上先做原位杂交再做免疫组化。结果双染成功后细胞和组织结构完整。原位杂交阳性细胞的胞核呈蓝黑色,免疫组化阳性细胞的胞膜呈红色,双阳性细胞的核与膜蓝红对比鲜明,背景清晰。结论此方法可直观地判断感染EB病毒的细胞属于B细胞还是T细胞,有助于淋巴瘤的诊断。     

Expression of platelet-derived growth factor receptors in normal and diseased human kidney. An immunohistochemistry and in situ hybridization study.

We studied the expression of PDGF-alpha and -beta receptors in 10 normal and 40 pathologic human kidneys (five minimal change disease, five membranous nephropathy, 25 IgA nephropathy, five lupus nephritis), by both immunohistochemistry and in situ hybridization techniques. In normal-appearing kidneys, both PDGF-alpha and -beta receptors were expressed at the glomerular and interstitial level, the latter receptor more intensely than the former. The distribution and degree of expression of both receptors in nonproliferative glomerulonephritides were comparable with those found in normal-appearing kidneys. PDGF-beta receptor gene and protein expression were upregulated in proliferative nephritides both at the glomerular and the interstitial level and strictly correlated with the grade of histologic lesions. Finally, PDGF beta receptor expression was observed at a low level in normal-appearing renal vessels, and strikingly increased in injured arteries. Diseased kidneys displayed only a slight increase of PDGF-alpha receptor expression, chiefly at the interstitial level. Noteworthy, a few cases of lupus nephritis showed a moderate increase of PDGF-alpha receptor also at the glomerular level. These data establish PDGF-beta receptor activation as a candidate for driving glomerular and interstitial proliferation and, probably, expansion of extracellular matrix in proliferative glomerulonephritis, while the role of PDGF-alpha receptor activation at the renal level remains to be elucidated.     

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的比较桂林市荧光原位杂交法（FISH）和免疫组织化学法（IHC）检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体（HER-2）基因扩增及其蛋白表达情况的一致性．探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义。方法应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相关性。结果FISH与IHC结果总的符合率为82．0％．两者之间存在较好的一致性fkappa=0．6401,FISH检测IHC结果为3＋、2＋和0／1＋者的符合率分别为92．9％、70．0％和80．8％;IHC3＋及2＋者出现17号染色体多体性的几率比IHC0／1＋者高（P〈0．05）。结论FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性：FISH检测IHC3＋者符合率较高,FISH与IHC的差异主要在于IHC2＋和IHC0／＋组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法．而IHC结果为2＋或0／1＋者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定。     

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的 比较桂林市荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体(HER-2)基因扩增及其蛋白表达情况的一致性,探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义.方法 应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相天性.结果 FISH与IHC结果 总的符合率为82.0%,两者之间存在较好的一致性(kappa=0.640),FISH检测IHC结果 为3+、2+和0/1+者的符合率分别为92.9%、70.0%和80.8%;IHC3+及2+者出现17号染色体多体性的几率比IHC0/1+者高(P<0.05).结论 FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性;FISH检测IHC3+者符合率较高,FSH与IHC的差异主要在于IHC2+和IHC0/+组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法 ,而IHC结果 为2+或0/1+者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定.     

喉鳞癌中HPV的免疫组化,原位杂交,PCR和间接原位PCR检测

目的 探讨ＨＰＶ与喉癌发生的关系。方法 采用免疫组化,原位杂交,ＰＣＲ和间接原位ＰＣＲ技术检测５０例喉鳞状细胞癌中的ＨＰＶ感染情况。结果 免疫组化衣壳抗原阳性６２例（１２％）,原位杂交阳性１３例（２６％）,ＰＣＲ阳性１０例（２０％）,原位ＰＣＲ阳性１７例（３４％）,综合上述方法阳性率为４２％（阳性２１例）。结论 ＨＰＶ感染与喉癌有着明显的关系,间接原位ＰＣＲ在检测ＨＰＶ感染时具有较高的敏感性,特异     

人牙胚组织在裸鼠肾囊膜培养模式下的成牙能力

背景:建立一种科学可靠、简便可行,既可以人为进行干预,又不会影响牙齿继续发育的体外培养模式对于了解人类牙齿发育的组织学特点至关重要.目的:将流产人胚胎12周的磨牙牙胚植入到裸鼠肾囊膜下培养.观察其成牙情况,建立人牙胚再生的培养模式.设计、时间及地点:细胞水平的动态观察实验,于2005-03/2006-12在福建师范大学生命科学学院和发育与神经生物学福建省高校重点实验室完成.材料:12周流产人胚胎由福州市第二人民医院妇产科提供,6～10周龄Blab/c裸鼠.方法:无菌条件下分离新鲜的12周流产人胚胎下颌,分离磨牙牙胚.将牙胚移植到裸鼠肾囊膜下分别培养4,8,12和16周,取移植块.主要观察指标:以苏木精-伊红染色和Azon法染色后进行形态学观察.结果:生长4周的人牙胚内,可以观察到造釉器和牙乳头的细胞发生形态改变,牙上皮细胞和间充质细胞开始极化,胞体变长形成前成釉质细胞和前成牙本质细胞.生长8周时,前成釉质细胞和前牙本质细胞的极化变得更加明显,细胞已变成高柱状,在未来牙尖区域可发现少量牙本质的形成.培养12同时,可见连续完整的牙本质.生长16周的人牙胚,已经形成连续完整的成釉质细胞,牙釉质、牙本质和成牙本质细胞层.结论:肾囊膜是入牙胚组织体外培养的良好模式.