丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种单股正链ＲＮＡ病毒。ＨＣＶ的基因组编码的核心蛋白自身或者与细胞的蛋白结合形成不同的复合物形式，对于ＨＣＶ感染的致病机制、ＨＣＶ感染的慢性化、以及感染的宿主细胞的信号转导、生长特点和细胞的恶性转化过程密切相关。     

丙型肝炎病毒核心蛋白DNA免疫初步研究

目的　观察HCV核心蛋白基因的DNA免疫效果。方法　将HCV核心蛋白基因插入真核表达载体pcDNA3.1( ) ,构建重组质粒pcDNA3.1 c。在证明该重组质粒可在哺乳动物COS7细胞中表达的基础上 ,用重组质粒 10 0 μg免疫小鼠 ,同时设立空白质粒组和PBS组两组对照 ,初次免疫后 4周、8周各进行一次加强免疫。小鼠体液免疫反应和T淋巴细胞增殖检测分别采用间接免疫荧光法和MTT法。结果　pcDNA3.1 c可在COS7细胞内表达HCV核心抗原 ,接种于Balb c小鼠能有效诱导体液和细胞免疫应答。结论　重组质粒pcDNA3.1 c对于丙型肝炎防治具有潜在价值     

丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子的调控

HCV核心蛋白能与胞内多种蛋白相互作用,影响细胞信号转导级联,从而调控NF-κB,AP-1,STAT,E lk-1和SRE等多种转录因子,影响一系列基因的表达。HCV核心蛋白在HCV所致病变的发生机制中起非常重要的枢纽作用。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

目的：进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建，并在人源肝细胞QSC7701中进行表达与鉴定。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1—3011质粒中扩增出HCV核心（core）基因片段，构建peDNA3．1（-）／core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701，用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达，再通过Western blot印迹法进行鉴定。结果：所克隆的core片段大小正确，序列正确；成功的构建了pcDNA3．1（-）／core重组表达质粒，瞬时转染QSG7701细胞，用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达，Western blot印迹法显示其分子量约为21000。结论：丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3．1（-）／core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白，从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统，同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。     

丙型肝炎病毒核心蛋白与信号转导及转录活化蛋白3的相互作用

为了观察丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CORE)对信号转导及转录活化蛋白3(STAT3)表达的影响,寻找CORE与STAT3相互作用的功能区域。对Huh-7、转染表达CORE的Huh-7和含有全长HCV基因的复制子(Replicon)Huh-7的STAT3及磷酸化STAT3(p-STAT3)表达水平作比较;并对CORE与STAT3进行免疫共沉淀试验、谷胱甘肽S转移酶(GST)结合试验。结果显示,CORE能直接结合并诱导STAT3和p-STAT3表达,不同病毒株CORE及CORE不同功能区域结合STAT3和p-STAT3能力不同,CORE结合于STAT3主要依耐于CORE的N端的1~126氨基酸。因此,CORE与STAT3的相互作用可能是HCV感染又一新的分子致病机制,在引起HCV持续感染和肝细胞癌的发病机制中起重要作用。     

丙型肝炎病毒蛋白疫苗的研究进展

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HcV)是丙型肝炎的病原体，是导致输血后肝炎和急慢性非甲非乙型肝炎的主要致病因子。HCV感染常导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。目前尚没有治疗丙型肝炎的特效药物，也没有有效的丙型肝炎病毒疫苗。本文对HCV的感染与免疫及HCV蛋白疫苗的研究进展作简要的综述。     

丙型肝炎病毒核心蛋白寡核苷酸适配子的筛选与鉴定

目的：筛选、鉴定抗HCV核心蛋白（C蛋白）的寡核苷酸适配子（aptamers）。方法：利用systematic evolution of ligands by exponential enrichment(SELEX)技术，以HCV C蛋白为靶分子，从体外合成的81bp随机单链DNA文库中筛选与HCV C蛋白特异结合的寡核苷酸适配子，并进行了解离常数（Kd）测定和适配子序列测定。再分别利用Clustal W软件包和DNA Folding Sever分析适配子的一级结构和二级结构。结果：经过9轮循环筛选，随机ssDNA库与HCV C蛋白的结合率从0.5%上升到32.5%。所有的一级结构没有共同的同源序列，但可分5个家族，每个家族具有共同的保守序列。二级结构分析表明，适配子形成的茎环、凸环结构可能是与HCV C蛋白结合的结构基础。其中寡核苷酸适配子C4与HCV C蛋白特异结合的亲和力最高，Kd值为68nmol/L。结论：利用随机寡核苷酸文库成功获得抗HCV C蛋白的寡核苷酸适配子。     

丙型肝炎病毒核心蛋白与载脂蛋白AⅠ相互作用的研究

erase Reporter Assay System检测荧光素酶强度.结果 CoIP试验显示有共沉带的出现,且大小正确.转染pACT-apoA Ⅰ和pBIND-core组,相对荧光素酶活性值较pACT和pBIND空载体组明显升高.结论 HCV-core可与apoA Ⅰ在体内相互作用,为慢性丙型肝炎致肝脂肪变的机制研究提供理论依据.     

丙型肝炎病毒核心蛋白在患者外周血单个核细胞内的核表达检测

目的　检测和研究丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)核心蛋白在患者外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMC)内核表达的意义 ,并探讨其与临床的关系。方法　对 6 6例慢性丙型肝炎患者PBMC标本进行免疫组化检测 ,并将HCV蛋白抗原定位分布情况与患者临床状况进行比较分析 ,对其中 2 7例患者PBMC进行HCVRNA和HCVAg的平行检测和分析。结果　免疫组化结果显示 ,慢性丙型肝炎患者PBMCHCVAg(core +NS3)阳性检出率为 77 2 7% (5 1 6 6 )。结果还证实 ,HCV核心蛋白均定位于胞核内 ,且呈强表达 ;NS3蛋白主要定位于胞质内 ,呈弱表达。当进行HCVAg在PBMC内定位情况与患者临床状况比较分析时显示 ,病情较重患者PBMC内核心蛋白表达阳性率 (35 2 9% )明显高于病情较轻者 (5 88% ) (P <0 0 0 1)。结论　HCV核心蛋白在PBMC内核表达与患者临床状况相关 ,提示其可能是丙型肝炎慢性化的一个指标 ,并可能在肝硬化和肝癌发生上起一定作用     

丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV核心)与NF-κB信号通路

NF κB信号通路与炎症、细胞增殖、凋亡及细胞的恶性转化密切相关 ,在肝疾病的发生发展过程中具有重要作用 ;丙型肝炎病毒 (HCV)感染常见 ,是慢性肝炎和肝细胞癌 (HCC)的主要致病因素 ;HCV通过其病毒蛋白干预细胞的正常功能 ,是其致病的主要因素之一     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有线氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶（NTPase）和螺旋酶（Helicase）的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性,是检测HCV感染的主要抗原之一。近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能。此外,NS53蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等。     

丙型肝炎病毒的分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒的分子生物学研究进展王海林，金冬雁丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，１９９１年国际病毒命名委员会（ＩＣＴＶ）将其归为黄病毒科丙型肝炎病毒属［１］。众所周知，ＨＣＶ主要是经血和血制品传播的。据最近美国ＣＤＣ国际监督系统的一项调查表...     

丙型肝炎病毒吸附靶细胞机制的研究进展

丙肝病毒（ＨＣＶ）吸附靶细胞是感染的前提，其机制的研究对病毒受体以及后续预防、治疗措施的研究有重要意义。近年来，该领域取得了一些进展，发现了几种能介导ＨＣＶ吸附的靶细胞胞膜分子，本文就介导ＨＣＶ吸附的机制和参与的膜分子结构与分布作一综述。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对HepG2细胞生长周期的影响

目的: 构建丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-core-1b)真核重组质粒,获得稳定表达HCV-core-1b的HepG2细胞株,观察HCV-core-1b对HepG2细胞株生长周期及cyclin D1 和pRb/p130表达的影响,探讨丙型肝炎病毒慢性感染的可能机制。方法: 将HCV-core-1b亚克隆入pBabe-Flag-puro载体,获得重组质粒pBabe-Flag-HCV-core-1b;将重组质粒转染病毒包装细胞Pheonix 293T,筛选获得分泌HCV-core-1b的病毒包装细胞株。利用包装细胞产生的病毒上清感染靶细胞,筛选后获得稳定表达HCV-core-1b的HepG2细胞株,流式细胞仪检测靶细胞生长周期的变化,Western blotting检测cyclin D1 和pRb/p130蛋白的表达。结果: 基因测序确认HCV-core-1b亚型基因编码区完整无移位,与标签蛋白Flag形成融合蛋白。HepG2-HCV-core细胞株成功表达Flag-HCV-core-1b蛋白,并导致细胞cyclin D1 和 pRb/p130的水平下调,显著改变了HepG2细胞生长周期,使细胞阻滞在G₀/G₁期。结论: 成功构建了pBabe-Flag-HCV-core-1b真核表达质粒,获得稳定表达Flag-HCV-core-1b融合蛋白的HepG2细胞。由于HCV-core-1b蛋白的表达,下调了HepG2细胞 cyclin D1和pRb/p130的表达,显著抑制HepG2细胞生长周期。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白4B研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白4B（NS4B）是至今为止功能尚不明确的HCV非结构蛋白，近年来的研究表明其定位于内质网膜，与细胞内膜结构的功能有关，在体外实验中。它和NS4A一起可以抑制宿主细胞的翻译；在一定程度上可以减弱机体对抗病毒药物干扰素-α（INF-α）的反应，同时使病毒可以逃避宿主对病毒的免疫；在HCV病毒的致瘤性方面亦有重要作用。可以与NS3，NS4A，NS5A，NS5B等相互作用。对其它非结构蛋白的功能起协同，促进甚或是下调作用。     

蛋白激酶R与丙型肝炎病毒核心蛋白相互作用区域定位

目的： 观察丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（CP）对蛋白激酶R(PKR)表达的影响；定位PKR与CP直接结合的区域。方法: 对Huh-7、转染表达CP的Huh-7及含有全长HCV复制子(replicon) Huh-7细胞株的PKR表达水平及干扰素（IFN）诱导前后replicon Huh-7细胞中HCV结构蛋白和非结构蛋白表达水平作比较；对CP与PKR进行免疫共沉淀试验、谷胱苷肽S转移酶（GST）结合试验。结果: Replicon Huh-7中PKR表达水平高于Huh-7及转染表达CP的Huh-7；IFN诱导后PKR表达增加，且明显抑制HCV结构和非结构蛋白的表达；PKR能与CP直接结合，依赖于PKR的N端1-180氨基酸（aa）。结论: CP能直接作用于PKR N端1-180 aa，导致PKR组成性激活，从而干扰PKR介导的相关信号转导通路。CP与PKR的相互作用是HCV病毒蛋白与细胞蛋白相互作用又一新的模式，在HCV持续感染及肝癌2者发病机制方面可能起重要作用。     

丙型肝炎病毒特异性细胞免疫研究进展

本文综述了近几年丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性细胞免疫研究进展，重点介绍了ＣＤ８＋细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）介导的细胞免疫在抗ＨＣＶ感染中的作用及来自病毒方面的并分析了小鼠在这一研究领域的价值。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在HepG2细胞中的表达及其对端粒酶活性的影响

目的 建立HCV核心蛋白细胞表达模型，并探讨其对细胞端粒酶活性的影响。方法 用PCR法扩增出HCV核心基因cDNA，将其插入真核表达载体pBK-CMV的HindⅢ和BamHⅠ位点间，构建重组质粒pBK-HCVc。再将重组质粒pBK-HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中，G418筛选，RT－PCR、免疫组化和蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。PCR－ELISA法检测端粒酶活性。结果 构建的pBK-HCVc质粒在HepG2细胞中有稳定表达。表达HCV核心蛋白的细胞HepG2-C的端粒酶活性较转染空载体的细胞HepG2-CMV明显升高。结论 HCV核心蛋白上调了端粒酶活性，可能是HCV诱发肝细胞癌的一种途径。     

丙型肝炎病毒研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）为RNA病毒，属黄病毒属。自从1989年ChOO等采用分子克隆技术首先克隆和描述了HCV基因组后，对于HCV的研究已经取得了很大进展。1病毒颗粒的特性：丙型肝炎病毒是一种球形外壳病毒，直径约50纳米。由血源感染的急性期患者和实验感染的黑猩猩中获得的HCV在蔗糖中的浮力密度约为1．069八m3，而复制后细胞培养所获得的HCV在蔗糖中浮力密度为1．129／cm3。血清中病毒的低密度与其中所含低密度脂蛋白有关，这种脂蛋白的出现与HCV有密切联系。这些脂蛋白使HCV更容易通过细胞摄粒作用进人肝细胞内。慢性肝炎患者中获…     

表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。