肝癌组织中乙肝病毒x蛋白与缺氧诱导因子-1α的表达及关系

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(Hepatititis B virus X protein,HBx)和缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor,HIF1α)在肝癌组织中的表达及关系.方法采用免疫组织化学染色方法检测78例经福马林固定、石蜡包埋的原发性肝癌组织标本中HBx和HIF-1α的表达;免疫荧光检测HepG2及稳定转染HBx基因的HepG2(HBx-transfected HepG2)细胞中HIF-1α的表达.结果78例肝癌组织标本中,HBx和HIF-1α免疫组织化学染色阳性率分别为74.23%(58/78)和69.23%(54/78);免疫荧光检测表明:正常氧状态下,HeptG2中HIF-1α的表达阴性而HBx-transfected HepG2中表达阳性,主要位于细胞浆,部分位于细胞核.在缺氧状态下,HeptG2和HBx-transfected HepG2的细胞质和细胞核均有表达.结论HBx及HIF-1α在人肝细胞肝癌组织中广泛表达,二者存在明显相关(P＜0.01),在正常氧状态下,HBx可诱导HIF-α在HepG2细胞中表达.提示:共同表达可能对原发性肝癌细胞的形成有重要作用.     

缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸抑制HBx诱导的血管内皮生长因子的表达

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)诱导的人肝癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用。方法 用编码HBx基因全长的pHA-HBx质粒转染肝癌HepG2细胞;Western Blot方法鉴定HBx基因的整合和表达;用转染后的细胞建立表达HBx的裸鼠人肝癌模型。实验组用HIF-1α反义寡核苷酸作肿瘤组织内注射,对照组以相同体积的生理盐水作瘤体注射,观测不同时间点裸鼠肿瘤的生长状况。采用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGF表达水平和微血管密度。结果 HBx基因成功整合人肝癌HepG2细胞基因组并表达;实验组经反义寡核苷酸处理后肿瘤体积和重量均低于对照组,两组间差异有显著性意义(P<0.05);实验组肿瘤组织中HIF-1α表达下调;实验组肿瘤组织中VEGF表达为(21.6±6.7)％,低于对照组的(78.6±10.2)％(P<0.01),微血管密度为19.75±7.38,低于对照组的36.64±12.25(P<0.01)。结论 HIF-1α反义寡核苷酸肿瘤组织注射可以抑制肝癌组织中HBx诱导的VEGF表达,抑制表达HBx的肿瘤生长。     

在肝癌细胞中HBx对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的揭示在常氧和缺氧状态下，缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在HepG2中的表达及HBx对HIF-1α表达的调节。方法 对肝癌细胞HepG2及HBx转染的HepG2分别进行常氧和缺氧培养，其中缺氧状态用1％O2、5％CO2和94％Nz模拟，缺氧时间分别为1h，2h，4h，8h，16h，32h。采用免疫印迹检测HIF-1α表达。结果 在常氧状态下，HepG2细胞中HIF-α几乎无表达而HBx转染的HepG2明显表达。二者在缺氧1h开始均表达，8h达到高峰，16h后逐渐下降，测量二者缺氧8h时的表达，发现HBx转染的HepG2细胞中HIF-1α的表达增高。结论 在常氧状态下，HBx可诱导HIF-1α在HepG2细胞中表达。在缺氧状态下，HIF-α在HepG2细胞中表达与缺氧的时间相关且HBx可增强缺氧状态下HIF-1α在HepG2细胞中表达。提示HBx可能通过HIF-1α通路在肝癌的形成过程中发挥重要的作用。     

重组表达质粒pcDNA3/HIF-1α的构建及其在人肝癌细胞株HepG2的稳定表达

目的:构建缺氧诱导因子(HIF-1α)基因的表达质粒,经脂质体转染人肝癌细胞株HepG2,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞模型,为肝癌研究提供有效工具。方法:采用RT-PCR方法扩增肝癌细胞株HepG2内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,转染HepG2细胞后,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞株,免疫荧光染色和Western-blot分析HIF-1α蛋白的表达。结果:通过酶切鉴定,凝胶电泳分析,两条带大小分别位于5.3kb和2.55kb,与预期结果符合,序列测定证实HIF-1α与GeneBank公布的序列一致。经脂质体包裹转染HepG2后,免疫荧光染色和Western-blot分析证实HIF-1α蛋白的表达明显上调。结论:经脂质体途径成功构建稳定表达HIF-1α的细胞模型,为肝癌研究提供了一个有效的工具。     

乙型肝炎病毒相关性肝癌患者癌组织中HBx和CEACAM1的表达及其意义

目的：检测乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)在乙型肝炎病毒相关性肝癌（乙肝相关性肝癌）组织中的表达,探讨二者在肝癌发生、发展及转移中的关系及意义。方法：采用免疫组织化学方法(SP法)检测81例乙肝相关性肝癌组织中HBx和CEACAM1的表达,分析HBx和CEACAM1与乙肝相关性肝癌临床病理特征的关系。Western blotting检测人正常肝细胞系QZG、肝癌细胞HepG2及稳定转染HBx的肝癌细胞HepG2（HepG2-X
）中CEACAM1的表达。结果：81例乙肝相关性肝癌组织中HBx表达阳性率为74.07% (60/81),CEACAM1表达阳性率为71.60% (58/81),二者与门静脉侵袭、淋巴结转移和TNM分期有关联(P<0.05,P<0.01)。HBx与CEACAM1的表达呈负相关（rs=－0.310,P<0.05）;稳定转染HBx的肝癌细胞HepG2（HepG2-X）中, CEACAM1蛋白表达水平与肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞系QZG比较显著降低。结论：HBx的高表达和CEACAM1的低表达与乙肝相关性
肝癌的侵袭、转移有关联,HBx可能通过抑制CEACAM1表达促进肿瘤的发生与发展。
      

常氧酸性环境对肝癌细胞HepG2 HIF-1α蛋白表达及其活性的影响

目的:观察常氧酸性环境对体外肝癌细胞低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α蛋白表达及其活性的影响,初步探讨其在肿瘤生长中的作用。方法:体外培养肝癌细胞HepG2,以MTT法测定常氧酸性环境(AP组,pH 6.5)作用20 h后细胞存活率,并与正常培养细胞(SD组,pH 7.2)作比较;Western印迹法检测AP组和SD组HepG2细胞核内HIF-1α蛋白表达的变化;应用转录因子DNA结合ELISA试剂盒(TransAMTM)分析AP组和SD组HepG2细胞核内HIF-1 DNA结合活性的变化;免疫细胞化学法和Western印迹法检测各组HepG2细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 蛋白表达的变化。结果:常氧酸性环境(pH 6.5)作用20 h后,AP组细胞存活率为(98.71±1.79)%,与SD组相比轻微降低,但无统计学意义(P>0.05)。Western印迹结果表明,AP组HepG2细胞核内HIF-1α和胞内VEGF蛋白条带平均灰度值分别是SD组的(9.34±1.67)倍和(3.42±0.83)倍,组间均有统计学差异(P<0.01)。AP组HepG2细胞核内HIF-1 DNA结合活性明显高于对照组(P<0.01)。结论:常氧酸性环境能显著提高HepG2细胞HIF-1蛋白含量及其DNA结合活性,同时其下游基因VEGF蛋白含量增加,推测除低氧环境外,酸性环境也可能是导致恶性肿瘤中HIF-1高表达的原因之一。     

HBx和HIF-1α在肝癌血管生成中的关系及临床意义

目的探讨乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)与缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)在乙肝相关性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织血管生成及转移中的作用。方法选择84例乙肝相关性肝癌组织和22例非乙肝相关性肝癌组织,免疫组化法检测HBx、HIF-1α及血管内皮细胞表面抗原(CD34)表达,光镜下记录微血管计数(microvessel density,MVD)。结果 84例乙肝相关性肝癌组织中HBx阳性表达率为73.81%(62/84)。62例HBx阳性表达组中的HIF-1α阳性率为69.35%(43/62),明显高于HBx阴性组40.91%(9/22)和非乙肝相关性肝癌组36.36%(8/22)(P<0.05)。HBx阴性表达的乙肝相关性肝癌组和非乙肝相关性肝癌组中HIF-1α阳性表达无统计学意义(P>0.05)。HBx和HIF-1α的表达呈正相关(rs=0.573,P<0.01);HBx和HIF-1α在高分化肿瘤组织中的表达高于低分化组织(P<0.05),且转移组表达高于无转移组;HBx阳性表达组平均MVD值明显高于HBx阴性组和非乙肝相关性肝癌组(P<0.01),有转移组MVD高于无转移组(P<0.01);有门脉侵犯组高于非侵犯组(P<0.05)。结论 HBx和HIF-1α广泛表达于乙肝相关性肝癌组织中,二者呈正相关;HBx可能通过上调HIF-1α的表达在乙肝相关性肝癌组织血管生成及转移中起促进作用。     

核受体LXRα在HBV阳性肝硬化及原发性肝癌组织中的表达及意义

目的：检测肝脏X受体（Liver X receptor alpha,LXRα）在HBV阳性肝硬化组织及原发性肝癌中的表达情况及临床意义。方法收集20例揭阳市人民医院及汕头大学医学院第一附属医院手术切除的HBV阳性肝硬化原发性肝癌组织标本,应用免疫组化染色检测LXRα表达。Huh7细胞中分别过表达小鼠mLXRα,及共过表达HBx （HBV X protein）和mLXRα,并检测mLXRα及HBx对内源性LXRα信号通路下游靶基因SREBP-1（Sterol regulatory element-binding protein 1）的影响;双荧光素酶报告系统检测人肝癌Huh7细胞中HBx对LXRα转录活性的影响。结果 LXRα在肝硬化组织中阳性表达率为95%,高于癌组织的25%。HBx上调SREBP-1的表达可能与HBx调控LXRα的转录活性有关。结论 HBx通过调节癌前高表达的LXRα的转录活性,并影响其信号通路可能与HCC发生相关。     

Effect of hepatitis B virus X protein on sodium oleate-induced lipid accumulation in HepG2 cells

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virusX protein,HBx)是否增加油酸钠诱导HepG2细胞的脂质沉积.方法 将质粒pIRES2-eGFP-HBx瞬时转染入HepG2细胞中,建立表达HBx的细胞模型(HepG2-HBx);以转染空载体pIRES2-eGFP( HepG2-pIRES2)和HepG2细胞(HepG2)作对照.观察转染后绿色荧光蛋白(GFP)的表达;转染后16 h开始用油酸钠处理各组细胞24、48 h(分别命名为HBx/OA组、空/OA组、G2/OA组),细胞内甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色了解细胞内脂质沉积情况;在油酸钠处理细胞24h,RT-PCR法检测SREBP-1和LXRα的mRNA表达水平,Westernblot检测HBx、LXRα及FAS蛋白表达水平.结果 转染后16 h HepG2-HBx细胞和HepG2- pIRES2细胞中开始有GFP的表达,提示转染成功;仅在HepG2-HBx细胞内有HBx表达,表明HepG2-HBx细胞模型构建成功.在相同油酸钠处理的条件下,HBx/OA组细胞内脂质含量和TG含量与对照组相比均明显增加(P＜0.01).在油酸钠处理细胞24h,HBx/OA组细胞内LXRα、SREBP-1的mRNA表达量和LXRα、FAS蛋白表达量较对照组均明显增加(P ＜0.01/0.05).结论 HBx通过上调HBx-LXRα-SREBP1/FAS通路脂质合成相关基因表达,可能增加HepG2-HBx细胞对外界脂代谢紊乱因素的易感性,从而增加油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积.     

缺氧诱导因子1α通过上调Snail促进HepG2肝癌细胞上皮-间充质化

目的上皮-间充质化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是实体瘤原发灶癌细胞获得转移能力的基础。缺氧诱导前列腺癌、肾癌、卵巢癌的EMT过程已得到证实,缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）在这些过程中发挥重要作用。但是HIF-1α和肝癌细胞EMT之间的关系目前并不清楚。本文探讨HIF-1α在肝癌EMT中的作用。方法利用可调控HIF-1α表达的肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞系,在排除缺氧其他反应干扰的情况下研究HIF-1α在肝癌细胞EMT过程中的作用和机制。结果过表达HIF-1α促进HepG2肝癌细胞EMT,下调HIF-1α表达可以抑制HepG2肝癌细胞EMT。HIF-1α促进EMT相关转录因子Snail的表达。结论 HIF-1α通过上调Snail来促进HepG2肝癌细胞EMT。     

HIF-1α和HIF-2α在人肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α在人肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR的方法从转录水平检测了56例原发性散发肾细胞癌和52例正常肾组织中HIF-1αmRNA及HIF-2αmRNA的表达情况,应用Western-Blot方法从蛋白质水平检测了HIF-1α和HIF-2α的表达情况。结果HIF-1αmRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为87.5%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-2αmRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为94.6%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05)。56例CCRCC组织标本中52例表达HIF-1α蛋白,阳性率为92.9%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05)。56例CCRCC组织标本中54例表达HIF-2α蛋白,阳性率为96.4%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α和HIF-2α的表达可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用。     

HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响

目的观察HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响。方法人肝癌HepG2细胞分为空白组(同步培养,不做任何处理)、对照组(转染siRNA)和siRNA干扰组(转染HIF-1α516 siRNA)。siRNA和HIF-1α516 siRNA通过脂质体转染HepG2,转染18h后Western blot检测HepG2细胞中HIF-1β核蛋白和全细胞蛋白的表达、ELISA法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9的含量,Transwell小室观察HepG2的转移侵袭能力。结果 HIF-1α516 siRNA能显著降低HepG2细胞HIF-1α516mRNA的表达(降低70.0%)(P<0.01);增强HepG2细胞的侵袭转移能力(增强71.10%)(P<0.01)。HIF-1α516siRNA对全细胞HIF-1β蛋白的表达无影响,但能促进HIF-1β蛋白的核转移(增强64.1%)(P<0.01)。HIF-1α516 siRNA能明显升高HepG2细胞培养上清中MMP-2、MMP-9蛋白表达,分别升高37.72%、55.46%(P<0.01)。结论 HIF-1α516能抑制HepG2的转移侵袭,其机制可能与抑制HIF-1β的核转移有关。     

乙肝病毒X蛋白对油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)是否增加油酸钠诱导HepG2细胞的脂质沉积。方法将质粒pIRES2-eGFP-HBx瞬时转染入HepG2细胞中,建立表达HBx的细胞模型(HepG2-HBx);以转染空载体pIRES2-eGFP(HepG2-pIRES2)和HepG2细胞(HepG2)作对照。观察转染后绿色荧光蛋白(GFP)的表达;转染后16 h开始用油酸钠处理各组细胞24、48 h(分别命名为HBx/OA组、空/OA组、G2/OA组),细胞内甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色了解细胞内脂质沉积情况;在油酸钠处理细胞24 h,RT-PCR法检测SREBP-1和LXRα的mRNA表达水平,Westernblot检测HBx、LXRα及FAS蛋白表达水平。结果转染后16 h HepG2-HBx细胞和HepG2-pIRES2细胞中开始有GFP的表达,提示转染成功;仅在HepG2-HBx细胞内有HBx表达,表明HepG2-HBx细胞模型构建成功。在相同油酸钠处理的条件下,HBx/OA组细胞内脂质含量和TG含量与对照组相比均明显增加(P<0.01)。在油酸钠处理细胞24 h,HBx/OA组细胞内LXRα、SREBP-1的mRNA表达量和LXRα、FAS蛋白表达量较对照组均明显增加(P<0.01/0.05)。结论 HBx通过上调HBx-LXRα-SREBP1/FAS通路脂质合成相关基因表达,可能增加HepG2-HBx细胞对外界脂代谢紊乱因素的易感性,从而增加油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积。     

HIF-3α在线粒体的表达及意义

  目的  探究低氧诱导因子-3α(HIF-3α)定位至线粒体的现象及其生理、病理意义。  方法  ① 低氧(1%O₂)或脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)、氯化钴(CoCl₂)模拟低氧处理人宫颈癌细胞系HeLa和人肾癌细胞系ACHN后,蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光(IF)检测HIF-3α在细胞中的分布及其在线粒体中的表达;②通过酶敏感实验观察HIF-3α的线粒体亚结构定位;③采用Western blot检测HIF-3α在正常小鼠不同器官组织、人肝癌组织线粒体中的表达情况。  结果  ① 在检测的2种细胞系(HeLa和ACHN细胞)中,HIF-3α在常氧及缺氧条件下均可定位至线粒体,且缺氧组HIF-3α在线粒体中的表达高于常氧组;②HIF-3α的消化模式与线粒体外膜蛋白一致;③HIF-3α在小鼠多种器官组织中均可定位线粒体,HIF-3α在人肝癌组织线粒体中的表达高于正常及癌旁组织。结论HIF-3α在常氧及缺氧条件下均可定位至线粒体外膜,低氧可促进其线粒体定位;该现象可能与肝癌的发生发展相关。     

慢病毒介导HIF-1α沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,转染293T细胞包装产生慢病毒,转染人肝癌细胞株HepG2细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。将HepG2细胞分为正常对照组、干扰对照组(转染NC-shRNA)、干扰组(转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl2)模拟肿瘤细胞缺氧微环境,应用Western Blot检测HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,CCK-8检测沉默HIF-1α基因对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测沉默HIF-1α基因对细胞凋亡的影响。Western Blot检测HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质细胞色素C(Cyt-C)表达的变化。结果:①成功构建HIF1α-shRNA慢病毒载体并转染HepG2细胞,缺氧培养细胞24h后,与正常对照组及干扰对照组相比,干扰组细胞内HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默HIF-1α基因。②沉默HIF-1α基因后缺氧培养的HepG2细胞增殖率下降(P<0.05),而细胞凋亡比例升高(P<0.01)。③Western Blot结果显示,与正常对照组及干扰对照组相比,沉默HIF-1α基因后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质Cyt-C表达上调(P<0.05或P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高。结论:通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默缺氧HepG2肝癌细胞HIF-1α基因,HIF-1α沉默能显著抑制缺氧HepG2细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其凋亡途径可能与激活内源性线粒体凋亡通路有关。     

Effect of Salvia Miltiorrhiza on Expression of Hypoxia Inducible Factor-1α and Microvessel Density in Rat Models of Hepatocellular Carcinoma

目的 观察丹参对肝癌大鼠模型缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、微血管密度(MVD)的影响. 方法 以二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌大鼠模型,用酶联免疫法检测血清HIF-1α的含量,免疫组织化学法检测大鼠肝癌组织HIF-1α的表达,用CD34标记免疫组织化学法检测微血管密度.结果 与模型组比较,丹参中、高剂量组能明显降低血清HIF-1α的浓度；免疫组织化学法结果显示,随着丹参剂量的增加,肝癌组织HIF- 1α的表达逐渐减弱,MVD逐渐降低. 结论 丹参可以抑制HIF-1α的表达,降低MVD,进而抑制肝癌细胞的生长和转移.     

人低氧诱导因子1α真核表达质粒的构建和鉴定

目的:构建人低氧诱导因子1α(HIF-1α)真核表达质粒及其在人肝癌细胞(HepG2)中的表达。方法:从HepG2细胞中提取总RNA,通过RT-PCR逆转录,获得HIF-1α的cDNA,双酶切后构建真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证碱基序列。用脂质体法将质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α转染至HepG2,以免疫荧光和Western Blot法分别对转染细胞进行HIF-1α表达分析。结果:扩增出HIF-1α全长cDNA,构建真核表达质粒,测序结果正确。经检测的质粒转染至HepG2细胞后,HIF-1α蛋白水平高于转染空载细胞。结论:成功构建人HIF-1α基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α,并证明其能在HepG2细胞内表达。     

去铁敏预处理对大鼠星型胶质细胞缺氧性损伤的保护作用

目的探讨去铁敏预处理对星型胶质细胞(AS)缺氧损伤的保护作用及可能机制。方法体外培养AS,建立去铁敏糖氧剥夺(OGD)模型,细胞分为:正常培养组、去铁敏预处理组(先给予去铁敏预处理,再给予去铁敏OGD)、OGD组(给予去铁敏OGD)。采用细胞活力测定、细胞核固缩比率、形态学改变评价去铁敏预处理后的保护效应。用免疫荧光染色检测去铁敏预处理后AS的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和促红细胞生成素(EPO)蛋白表达情况,RT-PCR检测HIF-1α和EPO的mRNA变化情况。结果去铁敏预处理组细胞形态保持良好,AS活力下降减轻为58%(OGD组25%,P<0.05),细胞核固缩百分比为38%(OGD组30%,P<0.05)。免疫荧光染色发现,体外培养的AS在预处理后出现HIF-1α和EPO蛋白表达。RT-PCR发现去铁敏化学缺氧能上调HIF-1α及EPO mRNA表达。结论去铁敏预处理有确切有效的抗缺氧损伤作用,这种效应与保护AS有关,其机制可能是去铁敏诱导了HIF-1α和EPO表达增加。     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...