LASP1在鼻咽癌组织中的表达及其临床预后价值分析

摘 要：［目的］ 探讨LASP1在鼻咽癌组织中的表达与预后的关系,及其在鼻咽癌中的功能。［方法］ 免疫组化法检测79例鼻咽癌患者组织标本中LASP1蛋白的表达。Western Blot和Real-time PCR检测鼻咽癌细胞株中LASP1表达。Transwell小室实验明确体外LASP1对细胞迁移和侵袭能力的影响。Kaplan-Meier法分析LASP1表达与患者预后的关系,Cox比例风险回归模型分析LASP1表达在鼻咽癌患者预后预测中的价值。［结果］ LASP1在鼻咽癌组织（0.087±0.103）表达显著高于癌旁组织（0.016±0.010）（t=2.154,P=0.034）。LASP1在N2~3期（χ2=38.406,P<0.001）与Ⅳ期（χ2=4.595,P=0.043）患者表达较N0~1和Ⅱ~Ⅲ期患者更高。LASP1高表达与低表达两组患者总生存（overall survival,OS）、无远处转移生存（distant metastasis free survival,DMFS）和无局部复发生存（relapse free survival,RFS）分别为(114.5±8.5)个月 vs (137.5±4.6)个月(P=0.038）、(112.3±9.1)个月vs (140.3±3.8)个月（P=0.009）和(108.6±9.4)个月 vs (134.6±5.3)个月（P=0.029）。LASP1高表达（HR=4.437,95%CI：1.148~17.415,P=0.031）和TNM分期（HR=5.512,95%CI：1.075~28.254,P=0.041)是患者生存的独立预测因素。LASP1在鼻咽癌细胞株中表达（1.47±0.35）较正常鼻咽上皮细胞株（0.90±0.11）也显著升高（t=4.488,P<0.001）。过表达LASP1的鼻咽癌细胞株与对照组相比,Transwell小室细胞侵袭［（238.7±36.2） vs （48.7±11.6）］、迁移［（571.0±15.7） vs （91.6±20.3）］能力显著增强（P<0.01）。采用特异性shRNA敲低LASP1表达,鼻咽癌细胞体外侵袭［（168.7±14.6） vs （64.3±7.4）］和迁移［（205.0±9.8） vs （79.0±10.5）］能力受到抑制（P<0.01）。［结论］ LASP1在鼻咽癌组织和细胞中过表达,与鼻咽癌患者分期相关,且LASP1高表达是患者预后不良因素。体外功能实验表明LASP1发挥促进肿瘤侵袭和迁移功能。提示LASP1在鼻咽癌进展中发挥重要作用,可作为鼻咽癌诊治新的分子靶点。     

miR-218-5p靶向N-cadherin调节胃癌细胞迁移、侵袭分析

摘 要：［目的］ 研究miR-218-5p靶向N-钙黏蛋白（N-cadherin）调节胃癌细胞迁移、侵袭的作用及机制。［方法］ 收集28例胃癌组织及癌旁组织,检测miR-218-5p及N-cadherin的表达水平;培养MNK45胃癌细胞,分为转染阴性对照（NC）mimic的NC组和转染miR-218-5p mimic的miR-218-5p组,检测细胞的迁移及侵袭数目、N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力。［结果］胃癌组织中miR-218-5p的表达水平（0.45±0.09）显著低于癌旁组织的（0.71±0.22）（P<0.05）,N-cadherin的表达水平（0.93±0.20）显著高于癌旁组织的（0.67±0.14）（P<0.05）,且miR-218-5p的表达水平与N-cadherin的表达水平呈负相关（r=-0.201,P<0.05）。miR-218-5p组MNK45胃癌细胞的迁移数目（65.57±11.49）及侵袭数目（67.11±10.34）均少于NC组（113.84±20.13,98.72±18.57;P均<0.05）,N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、野生型N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力低于NC组（P<0.05）。［结论］ miR-218-5p在胃癌中低表达,过表达miR-218-5p能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,靶向抑制N-cadherin是可能的分子机制。     

三结构域家族蛋白22在宫颈癌中的表达及其对高危型人乳头瘤病毒阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨三结构域家族蛋白22（tripartite motif protein 22,TRIM22）在宫颈癌中的表达及其与临床病理学特征的关系,并分析TRIM22对高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。［方法］ 收集2017年8月至2018年9月41例手术切除或活检的宫颈癌组织和18例正常子宫颈组织,分别提取总RNA和总蛋白。实时定量PCR分析TRIM22 mRNA表达,Western blot分析TRIM22蛋白水平,并分析TRIM22 mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。以HPV16阳性宫颈癌细胞系CaSki和HPV18阳性宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,用TRIM22表达质粒（pUNO1-hTRIM22a）和对照表达质粒（pUNO1）稳定转染CaSki细胞和HeLa细胞,以未转染细胞为对照组。实时定量PCR和Western blot检测转染后细胞中TRIM22 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测抗磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）和磷酸化AKT（phosphorylated AKT,p-AKT）蛋白表达。［结果］ TRIM22在宫颈癌组织中mRNA表达（0.99±0.16 vs 4.39±1.41,t=15.40,P<0.001）和蛋白水平（0.30±0.12 vs 1.32±0.27,t=19.97,P<0.001）均明显低于正常子宫颈组织,TRIM22在高危型HPV阳性宫颈癌组织中mRNA表达（0.94±0.14 vs 1.17±0.12,t=4.21,P<0.001）和蛋白水平（0.27±0.08 vs 0.43±0.18,t=3.86,P<0.001）均明显低于高危型HPV阴性宫颈癌组织。TRIM22 mRNA表达与淋巴结转移明显相关（1.04±0.16 vs 0.89±0.13,t=3.15,P=0.003）,与肿瘤大小、临床分期无明显相关（P>0.05）。pUNO1转染CaSki细胞和HeLa细胞与未转染细胞在TRIM22 mRNA和蛋白水平、细胞增殖、侵袭数、细胞周期、凋亡率、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量的差异均无统计学意义（P>0.05）,pUNO1-hTRIM22a转染后CaSki细胞和HeLa细胞中TRIM22 mRNA和蛋白水平显著性高于pUNO1组和对照组（P<0.001）,细胞增殖、侵袭数量（CaSki细胞：31.00±5.30 vs 135.30±17.24 vs 120.40±22.95,F=56.01,P<0.001;HeLa细胞：27.20±9.04 vs 112.80±12.03 vs 117.00±18.56,F=67.45,P<0.001）、处于G2~M期的细胞比例（CaSki细胞：2.04%±0.36% vs 12.72%±1.98% vs 12.40%±1.62%,F=57.82,P<0.001;HeLa细胞：3.07%±1.08% vs 8.26%±2.98% vs 10.92%±3.56%,F=22.82,P<0.001）、PI3K、p-AKT蛋白表达量均显著性低于pUNO1转染细胞和未转染细胞,而凋亡率显著性高于pUNO1组和对照组（CaSki细胞：11.90%±2.78% vs 5.27% ±1.78% vs 6.64%±1.19%,F=16.78,P<0.001;HeLa细胞：18.79%±4.64% vs 6.78%±1.03% vs 5.23%±1.09%,F=27.91,P<0.001）。［结论］ TRIM22在宫颈癌中的表达明显减低,其表达水平与高危型HPV感染、转移恶化密切相关。上调TRIM22表达可明显减弱高危型HPV阳性宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,促进宫颈癌细胞凋亡。     

长链非编码RNA linc01376调控鼻咽癌肿瘤进展机制分析

摘 要：［目的］ 探讨linc01376在鼻咽癌组织与细胞内的表达特征,分析其可能的调控机制。 ［方法］ 采用实时荧光定量（qT-PCR）方法检测鼻咽癌组织和细胞中linc01376表达水平;采用CCK-8法、克隆平板形成实验、流式细胞学检测、划痕实验、Transwell侵袭实验等检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化;通过Western blot实验测定分子蛋白水平,探索linc01376的下游调控机制。［结果］ qT-PCR结果表明,linc01376在鼻咽癌组织中表达明显高于正常鼻咽组织(20.230±1.815 vs 1.281±0.454,P<0.01)。linc01376表达越高,患者分期越晚（χ2=7.670,P<0.05）,肿瘤负荷越大(χ2=6.312,P<0.05)。细胞功能学实验显示与对照组相比,沉默linc01376明显抑制鼻咽癌细胞的增殖(5-8F：2.248±0.055 vs 1.790±0.041,t=6.675,P<0.01;CNE2：1.502±0.046 vs 1.012±0.068,t=5.994,P<0.01)、迁移和侵袭能力（5-8F：182.00±8.60 vs 92.67±6.24,t=11.89,P<0.01;CNE2：166.67±8.18 vs 90.67±3.68,t=11.98,P<0.01）。机制研究发现linc01376可通过影响miR-4757调控下游IGF1的表达,最终激活AKT/p-AKT信号通路发挥促进肿瘤进程作用。［结论］ linc01376在鼻咽癌进展中发挥重要调控作用,可能成为鼻咽癌靶向治疗的新靶点。     

MiR-144-5p在胃癌中的表达及其生物学功能

摘 要：［目的］ 探讨miR-144-5p在胃癌组织和细胞中的表达及生物学功能。［方法］ 采用qRT-PCR 检测miR-144-5p在胃癌组织和细胞系中的表达水平,并验证miR-144-5p mimics的转染效率;分别采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell实验检测miR-144-5p mimics对胃癌细胞AGS和HGC-27增殖、克隆形成能力、细胞周期和侵袭能力的影响。［结果］ MiR-144-5p在胃癌组织的表达水平明显低于癌旁组织（0.607±0.257 vs 1.000±0.360,t=5.616,P<0.001）。MiR-144-5p低表达与胃癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期显著相关（P<0.05）。MiR-144-5p在胃癌细胞SNU-1、HGC-27、SGC-7901、KATO Ⅲ及AGS中表达水平显著低于正常人胃黏膜上皮细胞GES-1（F=12.17,P<0.001）。转染miR-144-5p mimics后,AGS（t=4.902,P=0.001）和HGC-27（t=4.154,P=0.003）细胞中miR-144-5p的表达水平显著增高;AGS和HGC-27细胞的增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力均被抑制（P<0.05）,G1期细胞比例增加、而S期的细胞比例减少（P<0.05）。［结论］ MiR-144-5p在胃癌组织和细胞中表达降低,与胃癌患者的TNM分期较晚和胃癌细胞恶性程度较高有关,提示miR-144-5p在胃癌的恶性进程中起重要作用。     

MicroRNA-1254靶向组蛋白去乙酰化酶7调控胃癌细胞增殖和侵袭

摘 要：［目的］ 探究microRNA-1254（miR-1254）对胃癌细胞增殖、侵袭的调控作用及分子机制。［方法］ 使用TargetScan7.1工具预测分析miR-1254对组蛋白去乙酰化酶7（histone deacetylase 7,HDAC7）的靶向作用位点;miR-1254 mimics和miR-1254 inhibitor转染胃癌细胞系SGC-7901,用实时荧光定量PCR检测miR-1254及HDAC7 mRNA表达;CCK-8法检测胃癌细胞增殖活性;Transwell法检测胃癌细胞侵袭能力;蛋白质免疫印迹实验检测STAT3、磷酸化STAT3的表达水平。［结果］ MiR-1254可以靶向结合HDAC7 mRNA 3′UTR区域。与对照组相比,转染miR-1254 mimics组miR-1254表达水平升高（t=13.51,P=0.0002）,HDAC7 mRNA表达水平显著性降低（t=4.667,P=0.0095）,而转染miR-1254 inhibitor组miR-1254表达水平显著性降低（t=10.41,P=0.0005）,HDAC7 mRNA表达水平显著性升高（t=4.008,P=0.016）。与对照组相比,转染miR-1254 mimics组细胞增殖活性显著性下降（F=30.4,P<0.0001）,细胞侵袭能力显著性减弱（t=6.284,P=0.0033）;与转染miR-1254 mimics组相比,miR-1254 mimics+HDAC7组细胞增殖活性升高（F=22.16,P=0.0002）,且侵袭能力增强（t=5.842,P=0.0043）。转染miR-1254 mimics抑制了STAT3的磷酸化,转染HDAC7表达载体可以减弱miR-1254对STAT3磷酸化的抑制作用。［结论］ MiR-1254可以通过靶向HDAC7抑制胃癌细胞STAT3的活化,并抑制细胞的增殖和侵袭。     

ROR1-AS1调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体 1 反义 RNA 1（tyrosine protein kinase transmembrane receptor 1 antisense RNA 1，ROR1-AS1）调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化。乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC（转染shRNA 对照）、sh-ROR1-AS1（转染ROR1-AS1 shRNA）、sh-ROR1-AS1+Jagged1组（转染ROR1-AS1 shRNA，Notch1通路激活剂Jagged1处理）。CCK-8实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9，C-Caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3，C-Caspase-3）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、Notch1、Hes1蛋白表达。 ［结果］ 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞中ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞（P<0.05）。与对照组、sh-NC组比较，sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00%±9.82%，99.74%±12.05%，58.91%±6.33%)，细胞凋亡率升高(4.81%±0.26%，4.93%±0.34%，20.58%±2.11%），细胞迁移数目( 225.36±12.84个，224.89±19.56个，140.89±13.64个）和侵袭数目(180.47±16.32个，177.54±16.92个，110.44±10.87个)减少，细胞中C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与sh-ROR1-AS1组比较，sh-ROR1-AS1+Jagged1组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00%±11.58% vs 147.36%±12.05%），细胞凋亡率降低(19.54%±1.74% vs 8.36%±0.75%)，细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目（107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个）均升高，C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高（P<0.05）。［结论］ 下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力，激活细胞凋亡。     

SPON1表达对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响

摘 要：［目的］ 探讨SPON1表达对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响。［方法］ 骨肉瘤细胞株KHOS分为对照组、空白转染组和si-SPON1组,其中空白转染组转染siRNA,si-SPON1组转染siRNA-SPON1,采用MTT法检测各组细胞增殖,采用Tranwell细胞侵袭和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测SPON1蛋白以及FAK/Src信号通路蛋白表达。［结果］ si-SPON1组SPON1蛋白相对表达量为0.212±0.087,明显低于对照组和空白转染组（P＜0.05）;对照组、空白转染组和si-SPON1组转染12h、24h、48h和72h吸光度A值比较差异无统计学意义（P＞0.05）;si-SPON1组细胞迁移率和侵袭细胞数分别为14.08%±3.11%和75.64±24.20个,明显低于对照组和空白转染组（P＜0.05）;si-SPON1组p-FAK和p-Src相对表达量分别为0.354±0.100和0.310±0.101,均低于对照组和空白转染组（P＜0.05）;对照组、空白转染组和si-SPON1组FAK和Src蛋白相对表达量比较差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］抑制SPON1蛋白表达,可降低骨肉瘤KHOS细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与FAK/Src信号通路有关。     

抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响

目的：探讨抑制 miR-21 表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法：实验分为3组,以miR-21抑制剂转染HCT116细胞为转染抑制组（IN）,另设阴性对照组（NC）、空白对照组（MOCK）,以Real-time PCR检测转染后HCT116细胞中miR-21的表达,应用MTT法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移;以Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果：miR-21抑制剂转染后,HCT116细胞中miR-21的表达较NC和MOCK组细胞明显降低。下调miR-21后,HCT116细胞的增殖能力明显降低\[72 h时：（1.05±0.45） vs （1.43±0.02）,（1.45±0.01）;t=13.83,P=0000 159;t=14.88,P=0.000 119\],细胞凋亡率显著增加\[（16.30±1.00）% vs（1.87±0.53）%,（1.86±0.12）%;t=25.01,P=0.000 015 2;t=24.985,P=0.000 015 2\],细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞的侵袭\[（50±2.0） vs （115±3.0）,（111±3.0）个;t=29.09,P=0.000 008 31;t=31.23,P=0.000 006 27\]和迁移能力\[（22±2.0） vs （52.3±2.5）,（53.0±1.0）个;t=2401,P=0.000 017 8;t=16.34,P=0.000 082 0\]明显下降。miR-21抑制剂转染的HCT116细胞中PTEN的表达及其荧光素酶相对活性均显著增加。结论：miR-21可能通过抑制PTEN进而调控大肠癌细胞生物学行为,PTEN可能是miR-21的靶基因之一。     

RNF8促进表皮生长因子受体野生型非小细胞肺癌吉非替尼耐药的机制分析

摘 要：［目的］ 探讨RNF8在携带野生型表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）非小细胞肺癌吉非替尼（Gefitinib）耐药中的作用及机制。［方法］ 通过RNAi法敲低RNF8，通过CRISPR/Cas9方法敲除RNF8，采用细胞敏感性实验和细胞克隆形成实验法评估敲低或敲除RNF8的A549细胞对Gefitinib的敏感性变化；采用Western blot法检测细胞中p-EGFR、EGFR、p-Akt、Akt和RNF8的表达水平；以裸鼠异体成瘤模型评估在体内敲除RNF8对Gefitinib敏感性的影响；以药物浓度逐步递增法构建对Gefitinib耐药的A549稳定细胞系，通过药物敏感性实验检测敲低RNF8的耐药细胞系对Gefitinib敏感性变化。［结果］ 在A549细胞中敲低RNF8，与对照组相比，不同浓度（2、5、10 μmol/L）的Gefitinib对细胞的抑制率均显著增强（12.21%±1.68% vs 45.48%±1.35%；25.13%±1.57% vs 60.93%±1.40%；36.67%±5.89% vs 78.92%±2.36%）（P均<0.001）。在不同浓度（5、10 μmol/L）Gefitinib处理下，与对照组相比，RNF8敲除的A549细胞克隆形成数量显著减少（45.00±16.05 vs 26.00±4.18；34.33±9.82 vs 11.67±1.21）（P均<0.001）。机制上，在A549细胞中敲低或敲除RNF8，Gefitinib对细胞中Akt磷酸化水平的抑制作用增强；过表达RNF8，Gefitinib对细胞中Akt磷酸化水平的抑制作用减弱。在裸鼠异体移植模型中，Gefitinib处理后，与对照组相比，RNF8敲除组小鼠肿瘤体积显著缩小［(450.98±98.54) mm3 vs (163.48±37.72) mm3，P<0.001］。在Gefitinib抵抗的A549细胞中用不同的siRNA敲低RNF8，Gefitinib对细胞的增殖抑制率均显著增强（P均<0.001），且敲低RNF8重新诱导Gefitinib对细胞中Akt磷酸化的抑制。［结论］ RNF8通过调节Akt的磷酸化激活促进野生型EGFR非小细胞肺癌细胞Gefitinib耐药。     

RNASE4异常表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及机制研究

摘 要：［目的］ 阐明RNASE4在胶质瘤细胞迁移和侵袭中的潜在作用及机制。［方法］ 利用实时定量PCR（qPCR）检测RNASE4在正常胶质细胞和胶质瘤细胞系中的表达水平。将胶质瘤U87细胞分为对照组、siRNA-NC组和siRNA-RNASE4组。在体外细胞中瞬时转染siRNA-RNASE4，利用CCK-8法检测胶质瘤细胞U87增殖率。采用伤口愈合实验和Transwell小室实验检测U87细胞的侵袭和迁移能力。通过定量PCR和Western blot实验检测各组细胞中相关因子的表达。［结果］ RNASE4在胶质瘤细胞系T98（1.34±0.06，P<0.01）、A172（1.79±0.10，P<0.01）、U251（1.86±0.09，P<0.01）、U118（2.19±0.17，P<0.01）和U87（2.64±0.17，P<0.01）中较NHAs细胞系均异常高表达（1.00±0.05）。在胶质瘤细胞U87中下调RNASE4表达引起细胞增殖活力下降（48h，P<0.05；72h，P<0.01）。同时，siRNA-RNASE4组U87细胞的划痕愈合能力（46.0±4.6 vs 87.2±3.6，P<0.01）以及细胞侵袭能力（72.5±4.7 vs 147.8±16.8，P<0.01）均明显降低。下调RNASE4表达抑制了BCL2、MMP9基因表达，并促进各组细胞中E-cadherin表达（P<0.01）。［结论］ RNASE4能够通过调节BCL2、MMP9等因子的表达来调节胶质瘤细胞的增殖与迁移能力，发挥促癌因子的作用。     

microRNA 10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响

摘　要　目的:研究人微小RNA10a（microRNA10a，miR10a）对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法：利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选，获得高侵袭能力的BGC823P3亚系；通过miRNA芯片差异分析发现miR10a在高侵袭能力BGC823P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR10a，以脂质体包裹合成的miR10a（25、50、100、150 nmol/L）转染BGC823细胞，并设空白转染、无关序列转染对照组; Realtime PCR分别检测以上各组细胞miR10a的表达。采用细胞计数试剂盒8（Cell Counting Kit8，CCK8）检测miR10a对细胞增殖的影响，流式分析检测miR10a对细胞凋亡的影响，Transwell小室检测miR10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：化学合成的成熟型miR－10a转染后，BGC823细胞miR10a表达的提高以100 nmol/L miR10a转染组最佳，较无关序列转染组提高了2.06倍。 miR10a（１００ nmol/L）的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响，但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用，促进率分别为（88.34± 0.61）% 和（56.02±3.13）%。结论：转染成熟型人miR－10a能使胃癌细胞系BGC823中miR10a的表达提高，并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。     

盐酸川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞黏附能力的影响

摘 要：［目的］ 探讨盐酸川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞侵袭黏附能力的影响及其作用机制。［方法］ 小鼠Lewis肺癌细胞体外培养,细胞黏附侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,Western Blot检测各组细胞Twist、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的变化。［结果］ 经DDP与TMP干预36h后,与对照组相比,用药组细胞的侵袭能力呈剂量依赖性下降,且DDP联合TMP组与单独使用DDP组相比,抑制细胞侵袭的能力更为显著（P＜0.05,P＜0.01）。细胞黏附实验显示,与对照组（23.76±1.64）相比,单独应用顺铂（47.40±0.85）可显著性增高细胞黏附抑制率（P＜0.01）,而单独应用TMP需药物浓度达到2000μg/ml时才可显著性增高黏附抑制率（P＜0.01）,两药联合组黏附抑制率均高于单独使用DDP组,尤以高剂量组抑制率最为显著（P＜0.01）。与单独用药相比,DDP+TMP可降低Twist、N-cadherin蛋白,并上调E-cadherin蛋白的表达（P<0.01）。［结论］ 盐酸川芎嗪联合顺铂能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的侵袭和转移,其机制可能与直接抑制肿瘤细胞侵袭,抑制相关基因蛋白Twist及N-cadherin,促进黏附分子E-cadherin蛋白表达有关。     

miR-640通过抑制SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤对替莫唑胺的耐药

摘 要：［目的］评价miR-640介导Wnt/β-catenin通路对脑胶质瘤耐药细胞增殖、侵袭及替莫唑胺(temazolamide,TMZ)敏感性的影响。［方法］ 利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定脑胶质瘤细胞内miR-640的表达。U87/TMZ细胞分为NC inhibitor组、 miR-640 inhibitor组和miR-640 inhibitor+si-SLIT1组。用不同浓度（15、30、60、120、240 、480和960 μmol/L）TMZ处理细胞,检测细胞对TMZ的耐药性;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、Transwell实验检测U87/TMZ细胞增殖活力和侵袭力;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-640与SLIT1的靶向关系。采用Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ miR-640在脑胶质瘤细胞中高表达,转染后miR-640 inhibitor组的miR-640表达水平、侵袭细胞数目（57±23 vs 153±31）、IC50值（131.61±8.97 vs 293.33±11.28）、增殖率（18.48±4.23 vs 43.84±8.94）均比NC inhibitor组低（P<0.05）。miR-640靶向调控SLIT1的表达,miR-640 inhibitor+si-SLIT1组β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白表达水平均高于miR-640 inhibitor组（P<0.05）。［结论］miR-640通过SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤增殖、侵袭及对替莫唑胺的耐药性。     

TBL1XR1介导上皮-间质转化和干细胞特性调控头颈部鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

摘 要：［目的］ 阐明转导素β1X连锁受体蛋白1（transducin β-like 1 X-linked receptor 1,TBL1XR1）可介导上皮-间质转化和干细胞特性,从而调控头颈鳞癌细胞的迁移、侵袭。［方法］ 利用UALCAN数据库网站搜索TBL1XR1在头颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达情况,应用Cbioprotal 在线分析平台分析癌症基因组图集（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中523例头颈鳞癌RNA-SEQ 数据。将慢病毒介导的TBL1XR1过表达载体、沉默载体和对应空白载体分别转染头颈鳞癌细胞Tu686。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验评价Tu686细胞的迁移、侵袭能力;Western blot、qRT-PCR检测上皮-间质转化标志物表达;肿瘤球形成实验、qRT-PCR检测干细胞特性;抑制Wnt/β-catenin信号通路后检测TBL1XR1过表达引起的细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化和干细胞特性。［结果］ TBL1XR1 mRNA 在头颈鳞癌组织中的表达明显高于相应癌旁组织（P<0.001）。过表达TBL1XR1的Tu686细胞划痕愈合能力（90%±4% vs 53%±6%）、Transwell迁移（0.68±0.04 vs 0.32±0.03）、侵袭能力（0.59±0.04 vs 0.26±0.04）较对照组显著性增强（P 均<0.05）。TBL1XR1表达被抑制时,细胞划痕愈合能力（70%±4% vs 96%±5%）、Transwell迁移（0.32±0.06 vs 0.63±0.08）、侵袭能力（0.24±0.04 vs 0.52±0.05）较对照组显著性降低（P均<0.05）。TBL1XR1过表达后,Tu686细胞的间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin表达升高,上皮细胞标志物E-cadherin表达降低;肿瘤球形成数较对照组明显增多（41±9 vs 13±4,P<0.05）,肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD44、CD133表达上调。抑制Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转TBL1XR1过表达引起的迁移、侵袭、上皮-间质转化及干细胞特性改变。［结论］ TBL1XR1可在体外介导上皮-间质转化和干细胞特性,进而促进头颈鳞癌细胞迁移、侵袭,其调控机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

miR-155-5p通过调控hMLH1促进甲状腺乳头状癌增殖侵袭的研究

摘 要：［目的］ 探讨microRNA-155-5p（miR-155-5p）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中的表达及作用,验证其对靶基因错配修复酶人类mutL同系物1（human mutL homologue 1,hMLH1）的调控作用。［方法］采用实时定量PCR法检测miR-155-5p在PTC组织和细胞中的表达水平。采用MTT增殖实验、Transwell侵袭实验观察miR-155-5p对PTC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用蛋白免疫印迹技术（Western blot）和荧光素酶报告实验验证miR-155-5p对hMLH1的表达调控。［结果］与癌旁正常组织相比,miR-155-5p在PTC组织中的表达水平明显增加,差异有统计学意义（t=3.492,P=0.002）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞中miR-155-5p的表达水平相比对照组明显增加,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：t=4.214,P=0.002,BCPAP细胞株：t=4.268,P=0.002）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞相比对照组增殖能力明显增强,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：48h t=4.378,P=0.012;BCPAP细胞株：48h t=22.106,P<0.001）;转染miR-155-5p mimics组通过Matrigel基质胶的细胞数量明显多于对照组,差异具有统计学意义（TPC-1细胞株：t=3.182,P=0.013;BCPAP细胞株：t=7.872,P<0.001）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞中hMLH1蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：t=5.137,P=0.007;BCPAP细胞株：t=3.684,P=0.021）。［结论］ miR-155-5p促进PTC增殖侵袭,其机制可能是通过调控hMLH1实现,这为PTC的治疗提供新的靶点。     

lncRNA-PVT1通过Hp/CagA介导的胃黏膜屏障损伤促进胃癌的发病机制研究

摘 要：［目的］ 探讨lncRNA-PVT1通过Hp/CagA介导的胃黏膜屏障损伤促进胃癌的发病机制。［方法］ 检测lncRNA-PVT1在CagA阳性幽门螺杆菌菌株（Hp-CagA+）和CagA基因敲除突变体（Hp-ΔCagA-）感染的人胃癌上皮细胞系AGS中的表达。过表达PVT1,分为对照组和PVT1组。qPCR和荧光原位杂交技术测定lncRNA-PVT1的表达,CCK8和流式细胞术检测细胞活力及凋亡率。检测细胞中活性氧（ROS）水平,透射电子显微镜（TEM）观察细胞中线粒体的超微结构;Western blot检测两组中细胞周期蛋白CDK4和cyclinD1,凋亡蛋白BAX、Bcl-2和裂解的caspase3,线粒体裂变相关蛋白DRP1和MFN2,紧密连接蛋白（occludin,claudin-1和ZO-1）的表达。 ［结果］ lncRNA-PVT1在Hp-CagA+感染AGS细胞中表达增加。过表达PVT1后增加Hp-CagA+感染AGS细胞中增殖,降低了其凋亡,调节Hp-CagA+感染AGS细胞中CDK4（1.22±0.02 vs 1.65±0.03）和cyclinD1（1.16±0.05 vs 1.53±0.01）的表达,增加了ROS生成的增加和线粒体膜电位（MMP）而升高了细胞的比例,增加了线粒体脊的肿胀畸形,降低了DRP1的磷酸化和MFN2（1.16±0.06 vs 0.59±0.03）和BAX（1.05±0.06 vs 1.40±0.03）的表达,升高了Bcl-2（1.66±0.03 vs 1.24±0.02）和裂解的caspase3（1.03±0.06 vs 1.71±0.02）的表达,增加了氧化应激反应诱导的线粒体功能障碍。过表达PVT1通过降低紧密连接蛋白occludin（4.13±0.05 vs 1.31±0.02）、 claudin-1（5.03±0.06 vs 1.33±0.03）和ZO-1（1.48±0.04 vs 0.60±0.01）表达增加了细胞屏障。 ［结论］ lncRNA-PVT1通过Hp/CagA介导的胃黏膜屏障损伤促进胃癌的发病,促进肿瘤形成和发展。     

MiR-655对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-655对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。［方法］ 通过qRT-PCR 验证奥沙利铂耐药和敏感结直肠癌组织蜡块中miR-655的相对表达量;CCK-8法检测细胞活性;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期。［结果］ 相比于癌旁的正常组织,对奥沙利铂耐药的结直肠癌组织中miR-655表达量相对较低（1.24±0.28 vs 0.25±0.12,P<0.01）,而对奥沙利铂敏感的结直肠癌组织中miR-655表达量相对较高（1.24±0.28 vs 2.68±0.76,P<0.01）。QRT-PCR鉴定miR-655转染效率结果显示,在miR-655 mimics组中miR-655表达水平相对于miR-NC组显著升高（1.70±0.10 vs 0.83±0.07,P=0.004）。CCK-8检测细胞活性结果显示,与L-OHP/miR-NC组相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞活性降低（48h：0.79±0.05 vs 0.56±0.03,P=0.0015;72h：0.65±0.05 vs 0.25±0.05,P=0.0081）。Transwell法检测细胞的侵袭能力结果显示,与L-OHP/miR-NC组相比,L-OHP/miR-655 mimic组细胞侵袭数量减少（845±85 vs 613±36,P=0.0292）。流式细胞术检测细胞周期结果显示,与L-OHP/miR-NC组G0/G1期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例增加（5.16±0.22 vs 45.53±0.75,P=0.022）,与L-OHP/miR-NC组S期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例降低（44.83±1.17 vs 20.75±0.36,P=0.015）,与L-OHP/miR-NC组G2/M期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例减少(22.86±1.21 vs 3.85±0.35,P=0.0023）。［结论］MiR-655能够提高结直肠癌细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,miR-655可能成为联同奥沙利铂治疗结直肠癌的新靶点。     

敲低PRMT5基因表达对胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 观察蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）在胃癌细胞中的表达,探讨敲低PRMT5表达水平后对胃癌细胞生物学行为的影响。方法 Western blot检测胃癌细胞系MGC803、SGC7901、MKN45和人胃黏膜上皮细胞GES-1中PRMT5蛋白表达水平,转染siRNA1和siRNA2质粒敲低PRMT5的表达水平,细胞增殖和凋亡实验、Transwell实验分别检测细胞增殖能力、凋亡率和细胞的侵袭能力,Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和Bax蛋白表达水平。结果 与GES-1细胞比较,MGC803、SGC7901和MKN45细胞中PRMT5蛋白表达水平增加（P<0.001）。敲低PRMT5表达后细胞的增殖和侵袭能力减弱,凋亡率增加（P<0.05）,β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加（P<0.001）。结论 PRMT5在胃癌细胞中表达水平升高,敲低其表达水平后可通过减弱Wnt/β-catenin信号通路转导抑制细胞的增殖和侵袭并促进细胞凋亡。