地龙抗凝活性成分提取工艺的研究

目的研究地龙抗凝活性成分的提取工艺。方法以凝血酶时间（TT）为指标,考察地龙提取液中抗凝物质的活性大小,以紫外分光光度法测其蛋白含量为指标,用L9（3^4）正交试验考察地龙的提取工艺。结果地龙水提液的凝血酶时间与蛋白质含量成正相关（P〈0．01）;以蛋白质含量作为指标,地龙水提最优工艺为：用10倍量水浸泡15min,提取15min,第2次加10倍量水不浸泡、直接提取15min。结论为地龙抗凝活性成分的水煎提取和续分离的样品处理提供了实验依据。     

猴头菌-地龙生物转化物体内外抗凝血活性研究

目的 探讨猴头菌-地龙（HD）生物转化物体内外抗凝血活性。方法 以华法林钠为西药阳性对照组,以逐瘀通脉胶囊为中药阳性对照组,以地龙和猴头菌为HD生物转化物的原料药材对照组,生理盐水为阴性对照组,将36只健康家兔分6组分别灌胃各组药物水煎液或混悬液,30~40 min后耳缘静脉采血,离心,将血浆置于凝血分析仪上测定凝血活酶时间和凝血酶原时间,进行统计分析。结果 在给定剂量下,体内抗凝血活性：华法林钠片 > HD生物转化物 > 地龙≈逐瘀通脉胶囊 > 生理盐水≈猴头菌,体外抗凝血活性：HD生物转化物 > 地龙 > 猴头菌≈华法林钠片≈生理盐水≈逐瘀通脉胶囊。结论 HD生物转化物有显著的抗凝血活性,有良好的开发应用前景。     

基于蛋白酶活力的地龙酒制工艺优选

目的 优化地龙酒制工艺。方法 采用纤维蛋白平板法检测酶活力;以炮制温度、炮制时间、加酒量和焖润时间为考察因素,以蚯蚓纤溶酶活力为考察指标,采用L₉(3⁴)正交试验法优选地龙酒制工艺参数。结果 每100 kg地龙,加黄酒12.5 kg拌匀,焖润30 min,70℃翻炒2 min时,其酶活力最高(每克31.8万单位)。结论 该炮制工艺稳定、可行,可用于地龙的酒制。     

一种新型海洋纤溶酶体外抗凝与溶栓作用研究

目的对本实验室制备的一种相对低分子质量新型海洋纤溶酶的体外抗凝和溶栓作用进行初步评价,为进一步的动物实验研究打下基础。方法以pH7.4的生理盐水作阴性对照,以蚓激酶作阳性对照,在体外研究新型海洋纤溶酶对Wistar大鼠和家兔新鲜血液的抗凝集和血栓溶解作用。结果该新型海洋动物纤溶酶具有显著的血栓溶解作用,并具有一定的抗凝血效果,从血栓中释放的血细胞形态较使用蚓激酶优。结论该新型海洋纤溶酶具有潜在的应用价值。     

闪式提取猴头菌-地龙生物转化物中抗凝血活性成分的工艺研究

目的 优选闪式提取猴头菌-地龙生物转化物（Hericium erinaceus-Pheretima biotransformation,HD）中抗凝血活性成分工艺参数。方法 以活化部分凝血酶时间为评价指标,以水作提取溶剂,提取2次,通过响应面设计试验法,对闪式提取HD中抗凝血活性成分的主要工艺参数进行优化。结果 闪式提取HD中抗凝血活性成分的最优工艺条件为：提取2次,第1次提取加水12倍,5 500 r·min^-1提取7 min;第2次提取加水10倍,5 500 r·min^-1提取7 min。在此工艺条件下所制备提取液的活化部分凝血酶时间均值最高,为（53.42±3.02）s。结论 通过优化与验证,首次创立了闪式提取HD中抗凝血活性成分的工艺路线。该工艺提取速度快,提取溶剂无毒,提取设备操作简单、所占空间小,节约资源。     

地龙活性蛋白药理学作用研究进展

地龙是我国重要的中药材之一,其性寒、味咸,具有清热定惊、通络、平喘、利尿等作用。现代研究发现地龙有活血化瘀、溶栓降压、抗肿瘤、平喘止咳、消炎止痛等作用。地龙药材中地龙活性蛋白（Earth-worm active protein,EWAP）是一种含有纤溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分的生物活性蛋白,随着现代医药技术对其研究的不断深入,EWAP 的药用价值也越来越受到重视。近年来,国内外医药工作者对EWAP的药理作用研究不断有新的进展和成果,本研究就此对EWAP药理作用最新研究进展进行综述,为其进一步开发利用提供参考。     

地龙提取物柱层析各部位的平喘活性研究

目的：研究地龙提取物柱层析各部位的平喘活性。方法：采用乙酰胆碱组胺混合液和卵白蛋白分别致豚鼠哮喘发作,观察哮喘潜伏期。结果：5％～15％甲醇的乙酸乙酯洗脱部位可明显延长哮喘发作潜伏期,其他部位均无显著性意义。结论：5％～15％甲醇的乙酸乙酯洗脱部位是中药地龙平喘的主要活性部位。     

全蝎不同工艺提取物抗凝血及溶栓作用的比较研究

目的比较全蝎不同工艺提取物对抗凝血、溶栓作用的影响。方法比较原粉冷浸、水煎煮、水煎醇沉、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同提取工艺对凝血酶原时间(PT)、纤溶活性(FA)、大鼠凝血时间(CT)及静脉血栓重量(TW)的影响。结果4项指标中以上6种工艺与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.05);3种酶解工艺组与空白对照组相比有极显著性差异(P<0.01),其中仿生酶解组与原粉冷浸组相比有极显著性差异(P<0.01)。结论仿生酶解方法所得样品液抗凝血及溶栓作用较常规方法有极大提高,具有广阔的应用前景。     

地龙舒腰口服液提取工艺研究

目的优选地龙舒腰口服液提取工艺。方法运用正交试验,以阿魏酸含量及提取物浸膏为评价指标,考察影响提取的3个因素,加水量、提取次数和提取时间。结果影响提取效果的因素大小依次为:提取次数、加水量、提取时间。结论最佳提取工艺为:A3B3C2。即:A3为10倍量水,B3为提取3次,C2为1.5 h。     

中药地龙的活性成分与药理作用研究

目的对中药地龙的主要活性成分和相应的药理作用进行总结和研究。方法采用临床研究和实验室分析两种方法结合的形式,总结地龙的主要活性成分和相应的药理作用。结果分析结果表明,高度不饱和脂肪酸、蛋白质、脂类、核苷酸、酶类、微量元素是中药地龙的主要活性成分,其主要的药理作用包括调节心血管、调节血液循环系统、调节免疫系统、调节肝脏功能、调节肾脏功能、抗肿瘤、抗氧化,其主要具有降压、抗癌、抗血栓、抗心律失常、增强免疫功能的功效。结论临床医生和药剂科的工作人员,对中药地龙的主要活性成分和相应的药理作用进行充分的了解和掌握,对临床正确、合理用药有着积极的意义,可以针对病人的病情进行对症和有效的治疗,帮助患者早日摆脱病魔多带来的困扰。     

地龙抗凝血活性体外评价方法的建立

目的 建立一种基于全自动血凝分析仪测定纤维蛋白原-凝血酶时间的地龙及其相关制剂的抗凝血活性的体外评价方法。方法 以威廉环毛蚓提取物为研究对象,采用BCA蛋白测定法测定可溶性蛋白含量,以抗凝血活性为指标,建立纤维蛋白原-凝血酶时间法测定活性,以活性浓度与可溶性蛋白浓度的比值（比活）作为活性评价指标。结果 10批地龙提取物可溶性蛋白含量为（26.56±3.57）%,比活为（34.64±3.98）U·μg^-1。其比活大小与蚓激酶标准品（43.60 U·μg^-1）相当,且是市售蚯蚓酶（22.17 U·μg^-1）比活的1.5倍。结论 采用BCA蛋白测定法测定地龙提取物可溶性蛋白,方法简便、可靠;所建立的纤维蛋白原-凝血酶时间法,操作简便,人为影响因素小,结果客观准确,可用于实时测定,重复性和仪器精密度良好,线性范围较广,具有可行性,可用于地龙及其制剂活性的评价。     

灰树花多糖体外抑菌及抗氧化活性研究

目的 研究灰树花多糖的抑菌及抗氧化活性。方法 采用紫外分光光度法,以D-无水葡萄糖为对照品,测定灰树花提取物中多糖含量;采用纸片扩散法,以头孢哌酮为阳性对照,测量不同浓度灰树花多糖提取物金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径;采用DPPH法和T-AOC试剂盒法,以清除率为指标,研究灰树花多糖的抗氧化活性。结果 灰树花提取物中多糖含量为53.49%;灰树花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有一定的抑菌作用,抑菌圈直径分别为13,11,10 mm;灰树花多糖浓度为0.05~10 mg·mL^-1时,对DPPH自由基具有一定的清除能力,当浓度高于0.5 mg·mL^-1时,开始显示出总抗氧化能力。结论 灰树花多糖具有一定的抑菌和抗氧化能力。     

木贼麻黄多糖的提取及体外抗氧化活性研究

目的 优化木贼麻黄多糖的提取工艺,初步研究木贼麻黄多糖的体外抗氧化活性。方法 采用热水浸提法提取木贼麻黄多糖,利用单因素试验结合响应面法对提取条件进行优化,并研究木贼麻黄多糖的体外抗氧化活性。结果 木贼麻黄多糖的最佳提取条件为：提取时间2.5 h,提取温度73℃,液料比25∶1,在此条件下多糖提取率为（5.57±0.072）%。木贼麻黄多糖对DPPH自由基和羟基自由基具有较强的清除能力,IC₅₀分别为703.9 μg·mL^-1和2 135.1 μg·mL^-1;对超氧阴离子自由基具有一定的清除能力,对Fe³⁺有一定的还原能力。结论 该提取工艺能较好地提取木贼麻黄多糖,所得木贼麻黄多糖具有一定的体外抗氧化能力,但活性低于同浓度的维生素C。     

乙酰半胱氨酸抗非酒精性脂肪性肝炎的体外活性研究

目的 研究乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）对游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）诱导的L02细胞的非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis,NASH）模型的炎症反应和胰岛素抵抗的活性。方法 用FFA处理L02细胞,建立NASH细胞模型;MTT法检测NAC对细胞生长抑制率的影响,并依此优选3个安全给药浓度;油红染色法观察细胞内的脂质沉积情况;Elisa法检测细胞的IL-8、TNF-α和葡萄糖转运蛋白-4（glucose transporter,GLUT-4）含量;Western blot及Elisa法检测细胞的胰岛素受体（insulin receptor,IR）含量。结果 NAC在10600.0μg·mL^-1的最大给药浓度时其细胞生长抑制率仅为34.10%,因此设定100,150和250μg·mL^-13个给药浓度;NAC各给药组较模型组82.45%的细胞脂变率,分别下降至61.77%,68.08%和79.28%,差异具有统计学意义（P<0.01）且呈浓度依赖性;NAC各给药组的GLUT-4和IR含量较模型组均显著提高（P<0.01）;NAC各给药组的TNF-α和IL-8含量较模型组均显著下降（P<0.01）。结论 NAC的细胞毒性极小,可不同程度地降低NASH细胞的脂变率,尤其可改善模型细胞的胰岛素抵抗及炎症反应水平,表现出在治疗NASH方面的潜在价值。     

水蛭类药材抗凝血作用的初步实验

以水蛭（ＨｉｒｕｄｅｎｉｐｐｏｎｉｃａＷｈｉｔｍａｎ）蚂螨（ＷｈｉｔｍａｎｉａｐｉｇｒａＷｈｉｔｍａｎ），柳叶蚂螨（Ｗ．ａｃａｎｕｌａｔａＷｈｉｔｍａｎ）３种动物即水蛭类药材的干燥体为材料，进行了抗凝血作用的实验研究，结果表明，３种动物的干燥虫体，都有抗凝血物质存在，都具类似尿激酶样抗栓酶的生物活性。     

金属硫蛋白在参环毛蚓不同组织中的表达研究

目的:研究金属硫蛋白(MT)在参环毛蚓不同组织中的表达。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,进行HE组织切片染色和免疫组化反应,并在显微镜下观察MT在参环毛蚓体内的分布。结果:在参环毛蚓表皮层和肌肉层均未发现明显的MT表达,而在其肠道的黏膜下腺细胞质之间均有明显的棕黄色斑点,且随着镉浓度的增加,MT的表达越来越强。结论:MT主要在参环毛蚓的肠道中表达,参环毛蚓对重金属的富集是通过肠上皮细胞来完成。     

响应面法优化川丹参总黄酮提取工艺及其体外抗氧化活性评价

目的 采用响应面法优化川丹参中总黄酮提取工艺,并初步探究总黄酮的体外抗氧化活性。方法 在单因素试验的基础上,以甲醇浓度（A）、提取时间（B）、提取温度（C）为自变量,运用Box-Behnken试验设计-响应面法优化超声辅助提取川丹参总黄酮工艺。同时,测定川丹参总黄酮对超氧自由基（O₂^-·）、羟基自由基（·OH）和DPPH· 3种自由基的体外清除活性。结果 通过响应面试验设计得到川丹参总黄酮最佳提取工艺：甲醇浓度71%,超声时间52 min,超声温度55℃,在此工艺条件下提取得率可达12.493%。在所测浓度范围内,川丹参总黄酮对O₂^-·、·OH和DPPH·均有一定的清除效果,其最大清除率分别达到93.4%,60.3%和40.3%。结论 Box-Behnken设计-响应面法优化川丹参总黄酮提取工艺方法简便,可预测性较好;川丹参总黄酮具有体外抗氧化活性,值得进一步研究和利用。     

京尼平苷体内外微透析回收率的研究

目的 探究京尼平苷在自制线性微透析探针上的体内外回收率与灌流速度、药物浓度、透析膜长之间的关系。方法 采用HPLC测定微透析样品浓度,考察不同灌流速度、不同药物浓度和不同透析膜长对体外正向和体外反向回收率、体内反向回收率的影响。结果 自制探针性质稳定;探针回收率与京尼平苷的药物浓度无关,与灌流速度成反比,随透析膜长增加而增加;体外的正向与反向探针回收率有显著性差异（P<0.01）,而体内反向回收率低于体外反向回收率,与体外正向回收率无显著性差异;新探针体内回收率大于使用过1次的探针体内回收率（P<0.05）。结论 在京尼平苷的皮肤药动学研究中,宜采用体内反向回收率或体外正向回收率作为药物的探针回收率来校正。     

衢枳壳不同组分体外降糖活性研究及4种黄酮组分含量分析

目的 研究衢枳壳不同极性组分体外降糖活性,并明确各组分中4种黄酮类化合物的含量。方法 采用系统溶剂法提取与分离衢枳壳中不同极性的黄酮组分,通过体外试验明确各组分对α-葡萄糖苷酶活性和HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。采用Agilent Zorbax SB C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈-0.02%磷酸水溶液（20︰80）为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长280 nm,柱温35℃,外标法测定衢枳壳各组分中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量。结果 衢枳壳各组分均具有α-葡萄糖苷酶抑制作用,抑制强弱顺序为正丁醇组分[IC₅₀：（0.033±0.010） mg·mL^-1] > 甲醇组分[IC₅₀：（0.092±0.006） mg·mL^-1] > 乙酸乙酯组分[IC₅₀：（0.170±0.014） mg·mL^-1] > 氯仿组分[IC₅₀：（0.509±0.070） mg·mL^-1];衢枳壳甲醇组分和正丁醇组分能够显著促进HepG2细胞葡萄糖的消耗,差异具有统计学意义（P<0.05）。含量测定方法经方法学认证,各项参数均符合要求。经分析发现：衢枳壳各组分中均含有芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷等黄酮类化合物,且正丁醇组分中各黄酮成分含量最高。结论 衢枳壳各组分均具有α-葡萄糖苷酶抑制作用,且随着各组分中黄酮类化合物含量增高作用增强。同时,含有较高黄酮类组分含量的衢枳壳组分具有促进HepG2细胞葡萄糖消耗的作用,如甲醇、正丁醇和乙酸乙酯组分。