原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因表达水平初探

目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）mRNA的实时荧光相对定量方法,探讨其基因表达与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法基于TaqMan—MGB探针技术,以B—actin基因为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差,即△Ct值定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）相对定量方法,检测30例PBC患者、25例乙型肝炎（简称乙肝）后肝硬化患者及30名正常人外周血单个核细胞（PBMC）TRAIL基因的表达,同时检测血浆γ－谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）浓度,并作相关性分析：结果PBC患者PBMCTRAIL基因检测的△Ct值为2．4±1．2,其相对表达量是正常对照组的6．96倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,乙肝后肝硬化患者TRAIL基因△Ct值为3．3±1．7,其相对表达量是正常对照组的3．73倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,而PBC组与乙肝后肝硬化组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。PBC患者TRAIL的△Ct值与GGT浓度的对数值呈显著相关（r=－0．396,P〈0．05）。结论PBC患者及乙肝后肝硬化患者PBMC TRAIL基因表达水平明显升高,提示TRAIL在自身免疫性肝病及肝脏病毒损伤中均具有重要作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL基因表达水平初探

目的 建立检测人增殖诱导配体（APRIL）mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）APRIL基因的相对表达量,以Ct值比较法计算APRIL基因相对表达水平。结果 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA的△Ct值为9．3±2.0,与正常对照组比较．差异显著（P〈0．05）。采用2^-△△Ct法进行数据分析后,PBC组APRIL mRNA相对表达量比正常对照组高3．5倍。PBC患者中抗核抗体（ANA）阳性占80％,其中荧光模式为核膜型19例。其他型13例（着丝点型10例,混合型3例）,其APRIL基因相对表达量比正常对照组高6.5和1．7倍。结论 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平显著升高,且与ANA荧光模式相关。     

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的 建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性.方法 基于TaqMan-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达.结果 PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍.PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关.     

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqM an-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达。结果PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍。PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关。     

粒细胞集落刺激因子受体基因在原发性胆汁性肝硬化外周血单个核细胞的表达及临床意义初探

目的探讨粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)基因在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBM C)的表达情况及其临床意义。方法建立以18S rRNA基因为内参的实时荧光逆转录聚合酶链反应相对定量方法,检测30例PBC患者和30例正常人PBM C中G-CSFR基因的相对表达量。结果PBC患者PBM C中G-CSFR mRNA的ΔCT值为10.6±2.2,其相对表达量是正常对照组(8.9±0.4)的30%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论G-CSFR基因在PBM C中的表达降低与PBC的发病密切相关,提示G-CSFR在PBC的发病中可能具有一定作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血颗粒溶素表达增高及其意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）中外周血颗粒溶素的表达及意义.方法 用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测60例PBC患者颗粒溶素的mRNA表达,用ELISA法检测血清中颗粒溶素水平,以100例体检健康者、80例肝炎后肝硬化患者和80例SLE患者为对照组.结果 PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）中颗粒溶素mRNA的平均拷贝数（2.8±1.9）×10^8高于肝炎后肝硬化患者（5.6±2.9）×10^6、SLE患者（9.5±2.4）×10^6和体检健康者（2.5±1.4）×10^6（P＜0.01）.血清中颗粒溶素的水平为（16.12±2.24）ng/ml,也显著高于体检健康者、肝炎后肝硬化患者、SLE患者.结论 FQ-PCR法检测颗粒溶素的mRNA水平及ELISA方法检测血清中颗粒溶素的浓度,有助于了解PBC患者体内免疫状态,为临床诊治和研究提供依据.     

APRIL／BlyS表达与原发性胆汁性肝硬化的关联性研究

目的 探讨APRIL/BlyS在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的mRNA表达水平以及与体液免疫水平的关联性.方法 设计特异性的引物和探针,以人基因GAPDH为内参照,用实时定量PCR的方法检测42例健康人和56例原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中APRIL,BlyS的mRNA表达水平,采用ELISA方法在全自动酶标仪上检测血清中IgG,IgA,IgM的浓度.结果 与健康人比较,原发性胆汁性肝硬化患者外周血中APRIL,BlyS mRNA的表达升高(P<0.01),患者血清中IgM显著增高(P<0.01),患者中BlyS mRNA表达与IgM成显著正相关(r=0.763,P<0.01),而APRIL mRNA的表达与IgM的水平无相关性.结论 ARPIL,BlyS系统及其受体可能参与原发性胆汁性肝硬化的疾病进程,为监控原发性胆汁性肝硬化的病情和有效治疗提供了新的依据.     

膜结合型TRAIL在原发性胆汁性肝硬化患者外周血白细胞的表达及临床意义

目的检测膜结合型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(mTRAIL)在不同人群外周血白细胞的表达,探讨其与原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)疾病进展的相关性。方法应用流式细胞仪检测PBC患者、乙肝后肝硬化患者及健康对照外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞mTRAIL蛋白的表达,同时检测其血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α),γ-谷氨酰转肽酶(GGT)及碱性磷酸酶(ALP)浓度,并作相关性分析。结果mTRAIL在健康人外周血白细胞表达很低,而PBC及乙肝后肝硬化患者外周血淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞mTRAIL的阳性表达率均较正常对照组明显升高(P<0.01),尤以单核细胞表达为主,但两组肝硬化患者之间并无显著差异。PBC患者单核细胞TRAIL阳性表达率与血浆TNF-α、GGT及ALP浓度呈显著正相关(P<0.05)。结论PBC及乙肝后肝硬化患者外周血各群细胞mTRAIL表达明显上调,且PBC患者单核细胞mTRAIL阳性表达率与血浆TNF-α、GGT、ALP浓度显著相关,提示TRAIL信号异常在PBC发病及疾病进展中具有一定作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TNFSF9的表达及其疾病关联性

目的 研究原发性胆汁性肝硬化患者外用血单个核细胞TNFSF9的表达及其临床意义.方法 以40例健康人群作为对照,采用定量逆转录PCR检测40例原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞TNFSF9的表迭水平,血清中sTNFSF9的水平,并进一步分析其与Mayo评分的相关性.结果 原发挂胆汁挂肝硬化患者外周血TNFSF9的表达在蛋白水平(1 107.00±436.12)显著高于健康对照组(122.70±62.81);TNFSF9 mRNA水平(4.96±0.39)也较健康对照组(1.04±0.22)高,且均与Mayo评分呈负相关(rs=-0.327,P=0.041;rs=-0.400,P=0.013).结论 TNFSF9可能参与了原发性胆汁性肝硬化的发病机制,是潜在的治疗靶点之一.     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在原发性胆汁性肝硬化患者血清中的表达及意义

目的观察人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血中水平的表达,并探讨sTRAIL在PBC发病机制中的作用。方法用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测PBC患者26例（PBC组）,慢性肝炎肝硬化患者27例（慢性肝炎肝硬化组）以及健康体检者25例（正常对照组）的sTRAIL并同时测定IgG、IgA、IgM,观察各指标在PBC中的改变。结果PBC组和慢性肝炎肝硬化组sTRAIL浓度均显著高于正常对照组（158．73±42．45）pmol／L,（108．13±41.60）pmol／L vs（73．83±8．60）pmol／L（P〈0．01）。PBC组sTRAIL也较慢性肝炎肝硬化组明显升高（P〈0．01）。结论sTRAIL在PBC患者及慢性肝炎肝硬化患者血清中均升高,但二者升高程度比较差异有统计学意义,检测sTRAIL对PBC患者的,临床诊断中具有辅助作用并有助于PBC发病机制的研究。     

阿霉素增强TRAIL诱导的人骨髓瘤细胞系KM3细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨阿霉素增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人骨髓瘤细胞系KM3细胞凋亡的分子机制。方法采用TUNEL法和流式细胞术比较单独TRAIL及联合应用阿霉素对KM3细胞凋亡率的影响。Westem blot法检测阿霉素诱导前后KM3细胞核内转录因子NF-κB亚单位蛋白P65以及死亡受体DR5表达的变化。结果流式细胞术分析显示，10、20、50、100ng／ml的TRAIL联合应用1μg／ml阿霉素诱导KM3细胞后，细胞凋亡率分别为20．88％、40．03％、57．87％和60．82％，显著高于单独应用阿霉素或TRAIL诱导的细胞凋亡率；与TUNEL法检测结果一致。KM3细胞经不同浓度阿霉素（0．5、1．0、2．0、4．0μg／m1）联合20ng／ml TRAIL处理后，DR5受体的表达量随应用阿霉素浓度的增加而上升，而细胞核内P65蛋白表达量则随阿霉素浓度的增加而下降。结论骨髓瘤细胞膜DR5表达量提高和NF-κB的核转移是阿霉素协同TRAIL诱导凋亡反应的重要分子机制。     

原发性胆汁性肝硬化患者三种免疫效应分子的表达及临床意义

目的研究颗粒溶素（granulysin，GNLY）、颗粒酶B（granzymeB，GrB）及穿孔素（perforin，PF）三种免疫效应分子在原发性胆汁性肝硬化（primarybiliarycirrhosis，PBC）外周血中的表达并探讨其与PBC的关系。方法以正常健康人和肝炎后肝硬化患者为对照，用实时荧光定量RT—PCR方法检测PBC患者PBMC中GNLY、GrB及PFmRNA的含量。用ELISA方法检测PBC患者血清中GNLY表达情况并分析其与肝功能的相关性。结果PBC组GNLY、GrBmRNA平均拷贝数显著高于健康对照组（P〈0．01）和疾病对照肝炎后肝硬化组（P〈0．001），而PFmRNA与对照组相比差异无统计学意义。PBC患者血清中的GNLY蛋白表达显著高于健康对照组（P〈0．01）和乙型肝炎后肝硬化组（P〈0．01）。血清中GNLY浓度与血清GGT、AIJP的浓度呈正相关（P〈0．01）。结论PBC患者GNLY、GrBmRNA和含量显著高于对照组，同时ELISA方法检测出PBC患者血清中GNLY蛋白含量显著高于对照组，GNLY、GrB表达与PBC的发病存在一定的关联性，为临床PBC病情的监控提供可靠依据。     

Preliminary clinical measurement of the expression of TNF-related apoptosis inducing ligand in patients with ankylosing spondylitis

It has recently been reported that tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) plays various roles in such autoimmune diseases as diabetes, multiple sclerosis (MS), and systemic lupus erythematosus (SLE). However, it has still remained unclear whether there is a close relationship between TRAIL and ankylosing spondylitis (AS). In this study, we investigated the association between the expression of TRAIL and AS. The specific messenger ribonucleic acid (mRNA) levels of TRAIL in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), serum sTRAIL, and TNF-alpha concentrations from 60 AS patients, 20 rheumatoid arthritis (RA) patients, and 30 healthy controls were determined by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results indicated that the expression levels of TRAIL mRNA, and serum sTRAIL were significantly elevated in AS patients, compared with RA patients and healthy controls, and there was a close association between TRAIL mRNA and sTRAIL levels. However, there was no significant difference between human leukocyte antigen (HLA)-B27-positive and -negative AS patients. In HLA-B27-positive patients, TRAIL mRNA and sTRAIL closely correlated with serum TNF-alpha and C-reactive protein (CRP), but did not correlate in HLA-B27-negative patients. In conclusion, upregulated expression of TRAIL might be somewhat specific for evaluation of AS.     

TRAIL联合药物诱导肿瘤细胞凋亡协同机制的研究

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducingligand,TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和恶性转化细胞凋亡,对大多数正常细胞却无杀伤作用,被认为是一种非常具有发展潜力的抗肿瘤因子,近年已成为国内外研究的热点。许多学者发现在TRAIL联合各种药物作用于肿瘤细胞的过程中二者有协同效应,但不同药物与TRAIL协同诱导肿瘤细胞凋亡的机制各不相同。     

原发性胆汁性肝硬化85例实验室检测指标的分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）的免疫学实验诊断特点。方法观察85例PBC患者的临床表现,并分析有关实验室检查资料。结果本组患者临床症状不典型。所有患者γ-谷氨酰转移酶（GGT）升高,98．8％（84／85）的患者碱性磷酸酶（ALP）升高,87．1％（74／85）的患者总胆红素（TBil）和结合胆红素（CBil）升高,81．2％（69／85）的患者丙氨酸转氨酶（ALT）、78．8％（67／85）的患者门冬氨酸转氨酶（AST）、52．9％（45／85）的患者球蛋白（GLB）、95．7％（22／23）的患者总胆汁酸（TBA）、84．0％（21／25）的患者高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）升高。自身抗体检测有59例抗核抗体（ANA）阳性（69％）,其中32例为核膜型,20例为着丝点型;85例患者抗线粒体抗体（AMA）均为阳性,其中80例（94．1％）AMAM2阳性。结论PBC无典型性临床症状,医生可以通过临床表现结合AMA,尤其是AMAM2的检测结果获得诊断信息。     

原发性胆汁性肝硬化85例实验室检测指标的分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)的免疫学实验诊断特点。方法观察85例PBC患者的临床表现,并分析有关实验室检查资料。结果本组患者临床症状不典型。所有患者γ-谷氨酰转移酶(GGT)升高,98.8%(84/85)的患者碱性磷酸酶(ALP)升高,87.1%(74/85)的患者总胆红素(TB il)和结合胆红素(CB il)升高,81.2%(69/85)的患者丙氨酸转氨酶(ALT)、78.8%(67/85)的患者门冬氨酸转氨酶(AST)、52.9%(45/85)的患者球蛋白(GLB)、95.7%(22/23)的患者总胆汁酸(TBA)、84.0%(21/25)的患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高。自身抗体检测有59例抗核抗体(ANA)阳性(69%),其中32例为核膜型,20例为着丝点型;85例患者抗线粒体抗体(AMA)均为阳性,其中80例(94.1%)AMA M2阳性。结论PBC无典型性临床症状,医生可以通过临床表现结合AMA,尤其是AMA M2的检测结果获得诊断信息。