人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系

目的研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质，然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加，并与内源性的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达水平一致。结论首次证实人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控，为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型。     

人hsp90β基因的诱导表达与染色质活化的关系

目的 研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法 采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质。然后采用狭缝杂交技术比较热诱地前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果 发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加,并与内源性的ｈｓｐ９０β     

p53反式结合hsp90β基因

目的 探讨hsp90β基因中p53结合位点（＋31／＋60）是否参与p53与hsp90β基因的反式结合,以进一步揭示该位点在p53调节hsp90β基因转录中的作用。方法 将含有p53结合位点的hsp90β基因片段插入质粒pBS-SK,然后将综与突变引物和选择引物一起依次退火和延伸,经过两 轮细菌转化,酶切筛选出突变阳性粒后进行序列分析。采用电泳迁移率变更测定（EMSA）检测突变后基因片段与转染p53表达质粒的Jurkat细胞核抽提物的结合。结果 序列分析证实p53结合。结论 hsp90β基因中p53结合位点的核心序列在p53与hsp90β基因的反式结合中关键作用。     

入hsp90p基因的热诱导表达与染色质活化的关系

目的研究人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系.方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Jurkat细胞内的活性和非活性染色质,然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人hsp90β基因在活性和非活性染色质中的分布,并用Northern印迹杂交的方法研究热休克诱导下的hsp90β mRNA表达.结果发现热休克诱导使细胞内人hsp90β基因在活性染色质中的含量明显增加,并与内源性的hsp90βmRNA表达水平一致.结论首次证实人hsp90β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控,为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型.     

人热休克蛋白hsp90β基因的染色体定位

目的：研究ｈｓｐ９０β基因的染色体定位。方法：以３ＨｄＣＴＰ和３ＨｄＧＴＰ标记的ｈｓｐ９０β基因－１１０２／＋６８ｂｐ片段为探针，进行染色体原位杂交。结果：分析了２５７个杂交分裂相，１９６５个杂交银颗粒在各条染色体上的分布，发现５号染色体上有杂交银颗粒１８５个，占全部杂交银颗粒的９４１％（Ｐ＜００１）；在５ｑ１３５ｑ２２之间有杂交银颗粒８２个，占全部杂交银颗粒的４１７％，占５号染色体上杂交银颗粒的４４３％。结论：ｈｓｐ９０β定位于５ｑ１３５ｑ２２。由于使用了ｈｓｐ９０β基因上游片段作为探针，本文结果只反映活性基因的定位，可排除假基因的影响。     

人热休克蛋白90β基因沉默质粒的构建及转染效率的观察

目的:构建能表达小发夹RNA,从而特异、有效抑制人Hsp90βmRNA水平的质粒,比较该质粒对不同细胞株的转染效率。方法:合成3条对应于靶基因3个区域的64nt寡聚核苷酸,插入pSUPEREGFP1质粒,用DH5α细菌扩增,用酶切和测序法鉴定。以绿色荧光蛋白表达为标记,比较不同比例脂质体和质粒条件下,HepG2、HUVEC、HeK2933种细胞株的转染效率。结果:构建的pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β33个重组沉默质粒,插入片段碱基完全正确。在相同条件下,所构建的质粒对HeK293细胞转染效率最高,HepG2细胞最低。结论:利用pSUPER质粒可成功构建人Hsp90β基因沉默质粒,该质粒对细胞株的转染效率可因细胞的不同而有显著差异。     

热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达

目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-jun N端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程.方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平.用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态.用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响.结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1 h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%.转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制.GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平.结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化的Rac信号通路有调节作用.     

热休克蛋白90在胃癌研究中的进展

胃癌(GC)是我国最常见的消化道肿瘤。热休克蛋白90(HSP90)被称为分子伴侣,其在合成多肽、控制蛋白质数量、蛋白折叠、活性和降解过程中发挥重要作用。HSP90在胃癌组织中高表达,并通过调节癌细胞生长、粘附、侵袭、转移、血管生成和细胞凋亡等,在胃癌发展过程中起重要作用。近年来HSP90 抑制剂成为重要的胃癌分子治疗靶点,但在抗肿瘤方面和临床应用上有待深入研究。本文就HSP90在胃癌发生发展中的作用机制与表达意义,及HSP90抑制剂在胃癌中的研究作一综述。     

热休克蛋白90β在胰腺癌组织中的表达及其对预后的影响

目的研究胰腺癌组织中热休克蛋白90β(HSP90β)的表达及其对预后的影响。方法收集2015年1月至2018年1月郑州大学附属洛阳市中心医院病理科提供的51例胰腺癌标本和43例癌旁正常组织标本。采用免疫组织化学染色的方法测定HSP90β在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达水平,分析其与胰腺癌临床病理特征和预后的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果 HSP90β在癌旁正常组织中的阳性表达率(18.6%)低于胰腺癌组织(56.9%),差异有统计学意义(P<0.001)。HSP90β与胰腺癌分期、分化、有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示:HSP90β阴性表达患者生存时间长于阳性患者(P<0.05)。结论 HSP90β在胰腺癌组织中表达上调,可能参与胰腺癌的发生、发展、侵袭及转移过程,HSP90β高表达提示预后不良。     

热休克蛋白90在防治肿瘤方面的研究进展

热体克蛋白90是热休克蛋白家族中重要的蛋白之一,其作为分子伴侣参与调控、维持细胞内多种蛋白的构象和功能,在调节细胞生长、分化和凋亡等方面发挥重要的作用。近年发现,热体克蛋白90作为伴侣蛋白对肿瘤的恶性转变、生长、增殖及侵袭有着重要的作用,因而成为肿瘤治疗中的很有希望的药物作用分子靶点。本文对热体克蛋白90与肿瘤的关系及其抑制剂在肿瘤治疗中的应用进展进行了简要综述。     

热休克蛋白90β基因上游片段的转录调控活性研究

以人工合成的一对寡核苷酸为引物和人外周血淋巴细胞γＧＥＭ－１１基因文库为模板，通过ＰＣＲ护增并克隆了人ＨＳＰ９０β基因上游－１１０２／＋６８ｂｐ片段。将该片段删虍后克隆在报告基因－－荧火虫荧光素酶基因５｀上游，转染Ｊｕｒｄａｔ细胞后测定不同刺激条件下细胞裂解液中的荧光酶活性并同时测定荧光酶ｍＲＮＡ水平。结果表明，ＨＳＰ９０β基因上游片段在正常生理状态下通过启动子介导较高水平的基础转录；热休克时该片     

热休克蛋白90与肿瘤的研究进展

热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是主要作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠,维持细胞的蛋白质空间构象和保护细胞免受损伤等重要生物学功能的一种蛋白质。HSP90在维持分子伴侣结构、调控细胞周期及凋亡、协调激素信号传递、促进创面愈合方面发挥重要作用。并且HSP90在肿瘤的发生和演进中也发挥重要的作用。近年来,HSP90抑制剂针对恶性肿瘤进行相关研究,在分子靶向治疗方面取得一定的成果,但在临床应用还需进一步的研究。本文以热休克蛋白90为靶标对肿瘤的相互关系研究现状进行综述。     

热休克蛋白90α与胃癌的关系

热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP 90α)是主要的分子伴侣蛋白质,为生物进化过程中高度保守的蛋白质,在体内与体外有很多生物学活性,有关的基础研究颇多,近来发现其与肿瘤的关系密切,但与胃癌关系的研究报道极少。作者对近几年来HSP 90α的基础研究、HSP 90α与肿瘤关系的研究以及HSP 90α与胃癌的关系作一综述。     

热休克蛋白HSP90β在人胃癌组织及耐药细胞系中的表达

了解热休克蛋白ＨＳＰ９０β在人胃癌组织及多药耐药细胞系中的表达。方法ＳＡＢＣ免疫组化法：７０例胃癌组织，其中高分化腺癌１３例，中分化腺癌３２例，低分化腺癌１８例，粘液癌７例（包括粘膜癌和印戒细胞癌）。正常胃粘膜１７例，胃炎２３例及癌旁组织３５例作为对照。组织切片用正常羊血清封闭后，加入一抗（山羊抗人ＨＳＰ９０β多克隆抗体１：２００），４℃冰箱过夜；加二抗（生物素化兔抗山羊ＩｇＧ１：２００）３７℃３     

BTB/POZ结构域蛋白GRP对热休克中hsp90α基因表达的增强作用

目的探讨人BTB/POZ结构域GAGA元件结合相关蛋白(GRP)在hsp90α基因表达中的作用.方法用正义或反义GRP真核表达质粒或空载体,分别与装有hsp90α基因启动子(-1756- 37)的pREP4 episomal vector质粒和对照质粒pMCAT共转染Jurkat细胞,提取总RNA,用竞争性半定量RT-PCR测定hsp90α-氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因相对启动子活性.结果热休克时,GRP明显促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90α-CAT报告基因启动子活性.结论GRP可能通过参与染色质动态调整促进pREP4 episomal veetor质粒上hsp90α CAT的表达.     

BTB／POZ结构域蛋白GRP对热休克中hsp90a基因表达的增强作用

目的 探讨人BTB／POZ结构域GAGA元件结合相关蛋白(GRP)在hsp90a基因表达中的作用。方法 用正义或反义GRP真核表达质粒或空载体,分别与装有hsp90a基因启动子(-1756- 37)的pREP4 episomal vector质粒和对照质粒pMCAT共转染Jurkat细胞,提取总RNA,用竞争性半定量RT-PCR测定hsp90a-氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因相对启动子活性。结果 热休克时,GRP明显促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90a-CAT报告基因启动子活性。结论 GRP可能通过参与染色质动态调整促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90a CAT的表达。     

热休克蛋白90反义核酸抑制人消化道肿瘤细胞生长的作用

近年来,热休克蛋白90(ＨＳＰ90)的生物学作用受到人们的关注。ＨＳＰ90为胞浆分子伴侣的主要成员,其在肿瘤细胞生长、增殖中的作用值得研究。我们将反义ＨＳＰ90重组子转染人胃癌细胞系ＳＧＣ7901、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ7901/ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ7402及人食管癌细胞系Ｅｃ109,研究了ＨＳＰ90蛋白在这些细胞中的表达及其对细胞生长的影响。一、材料及方法1细胞系:人胃癌细胞系ＳＧＣ7901、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ7901/ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ7402及人食道癌细胞系Ｅｃ109;ＨＳＰ90反义核酸转染细胞ＡＨＳＧＣ7901、ＡＨ…     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达？…

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶－（ＭＡＰＫ）信号传导途径对Ｊｕｒｋａｔ细胞中热休克蛋白９０基因（ｈｓｐ９０）表达的影响。方法 用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹－增强型化学光系统（ＥＣＬ）检测热休克前后Ｊｕｋａｔ细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）、ｐ３８激酶及ｃ－Ｊｕｎ Ｎ－末端蛋白激酶（ＪＮＫ）的底物ｃ－Ｊｕｎ的磷酸化程度;分别用ＪＮＤ１的显性负突变质粒ＤＮ－ＪＮＫ１、ｐ３８ｃＤＮＡ反应表达质粒ａｎｔｉ－ｐ３８及     

热休克蛋白90对猪胚胎发育过程的影响

[目的]探讨热休克蛋白90对猪胚胎发育过程的影响.[方法]采用改良的退火控制引物差分显示(ACP)技术检测人工授精和核移植猪胚胎中的差异表达基因,再利用实时定量PCR法确认基因的表达情况.[结果]通过改良的ACP技术获得了若干个差异表达基因,利用实时定量PCR法进行了进一步确认,结果见热休克蛋白90在核移植猪胚胎中的表达水平明显低于人工授精猪胚胎(P<0.01).[结论]热休克蛋白90可能参与猪胚胎的发育过程.