结缔组织生长因子在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型中的表达及意义

结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)是肺纤维化(PF)发病过程中细胞因子网络中的关键因子之一。本研究拟观察CTGF及其相关因子在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化肺组织中的表达状况,探讨它们在肺纤维化形成中的作用。材料与方法　(1)实验动物及分组:Wistar大鼠4 2只随机分为2组,每组2 1只。实验组,经气管注入BLM(5 0mg/kg) ;对照组以同样方法注入等量生理盐水。于实验第7、14、2 8天每组处死7只大鼠。(2 )病理学检查:两组大鼠肺组织经苏木精伊红(HE)染色切片,肺纤维化诊断标准按文献[1]的标准。按Szapiel等[2 ] 方法…     

氯沙坦对大鼠肺纤维化模型的干预作用及对MCP—1和bFGF表达的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ的1型受体拮抗剂氯沙坦对大鼠肺纤维化模型的干预作用及可能的机制。方法：Wistar大鼠经气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化，随后分别每日口服氯沙坦10mg/kg（L组），泼尼松（强的松）20mg/kg(P组）和生理盐水（B组）进行干预，对照组气管内和口服均用生理盐水，各组动物均于气管内灌药后第3，7，14，28，56天分别处死6只，通过苏木素－伊红染色，Masson胶原染色，天狼猩红染色偏光法及测定肺组织羟脯氨酸浓度来评价治疗效果，用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测单核细胞趋化因子1（MCP－1）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的mRNA在肺内的表达，用免疫组化及酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测MCP－1和bFGF蛋白在大鼠肺组织的表达。结果：L组的肺泡炎和肺纤维化程度及肺组织的羟脯氨酸含量显著低于B组，其MCP－1和bFGF的蛋白表达显著地低于B组。结论：氯沙坦能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化，这种作用有可能部分通过抑制MCP－1和bFGF的表达而实现。     

葡萄糖对血管内皮细胞小凹蛋白1和血管内皮生长因子表达的影响

为了探讨高浓度葡萄糖损伤血管内皮细胞及其对小凹蛋白-1和血管内皮生长因子表达的影响。将人脐静脉内皮细胞株ECV304．分别培养在对照组和含5.5mmol／L、11.1mmol／L、22.0mmol／L、33.0mmol／L葡萄糖的培养基中。经葡萄糖培养24h后，噻唑蓝法测定细胞增殖活性，硝酸还原酶法测定培养上清液中一氧化氮浓度，免疫组织化学和免疫印迹方法检测细胞中小凹蛋白-1和血管内皮生长因子的表达。结果发现，随着葡萄糖浓度的增加，内皮细胞增殖活性呈浓度依赖性抑制(r=-0.776，P=0.000)；一氧化氮浓度呈浓度依赖性增加(r=0.698，P=0.000)；小凹蛋白-1和血管内皮生长因子为棕黄色颗粒，主要分布于胞浆中；血管内皮生长因子的表达呈浓度依赖性增加(r=0.645，P=0.009)；小凹蛋白-1的表达也呈浓度依赖性增加(r=0.808，P=0.000)。提示高糖可诱导血管内皮细胞的血管内皮生长因子和小凹蛋白-1的表达，此变化可能与糖尿病患者高糖致血管病变有关。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激原代培养的HUVECs,检测HUVECs表达VEGF的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达也随之升高,经统计学检验有相关性;在相同瘦素浓度下, 随着作用时间的延长,VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达也随之升高,且有相关性。结论:瘦素可以刺激HU- VECs表达VEGF而且呈时间和剂量相关性。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞血管形成及血管内皮生长因子受体1的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对诱导大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构的影响,以及对血管内皮生长因子受体Flt-1的作用。方法分离、培养大鼠心脏微血管内皮细胞。应用Matrigel检测不同浓度碱性成纤维细胞生长因子作用后心脏微血管内皮细胞形成管腔的情况。逆转录聚合酶链反应检测各组血管内皮细胞Flt-1mRNA的表达量。结果应用Matrigel可诱导心脏微血管内皮细胞管腔样结构形成,随着碱性成纤维细胞生长因子浓度升高(0、51、0和20μg/L),管腔样结构形成的数量逐渐增多,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时管腔样结构的数量有所减少(P<0.05)。Flt-1 mRNA的表达量随碱性成纤维细胞生长因子作用浓度的升高(0、5、10和20μg/L)而逐渐增高,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时其mRNA水平有所降低(P<0.05)。结论应用Matrigel可在体外诱导培养的大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构。碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构有促进作用,并在一定范围内呈剂量依赖性关系。碱性成纤维细胞生长因子影响大鼠心脏微血管内皮细胞膜受体Flt-1的表达,在一定范围内亦呈剂量依赖性,且这种剂量依赖性同微血管内皮细胞管腔样结构形成的数量一定范围内呈现一致性。     

鼠血管内皮生长因子及其抗体对内皮细胞增生影响的研究

目的 研究探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其抗体对内皮细胞增生的影响。方法 采用体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用^3H－TaR掺入检测技术分别检测鼠血管内皮生长因子（mVEGF）及其抗体和Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）小鼠关节组织提取液对HUVEC增生影响。结果 抗VEGF中和抗体抑制在mVEGF刺激下引起的HUVEC增生及在CIA小鼠关节组织提取液作用下引起的HUVEC增生,抑制率分别为72．2％和69．9％。结论 mVEGF特异性作用于血管内皮增生;CIA形成的早期关节组织内可能产生大量的VEGF,并以较强的生物活性形式存在,能被抗VEGF中和抗体抑制。     

缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨在缺氧条件下人脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达及缩血管活性物质内皮素 ,舒血管活性物质NO和NO抑制剂LNNA对VEGF基因表达的影响。方法　体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ,经缺氧及血管活性物质处理 ,Northern杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等观察VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　缺氧 6h内皮细胞可见VEGF表达。ET可促进VEGFmRNA的表达 ,NO可明显抑制VEGFmRNA的表达 ,NO抑制剂LNNA也影响VEGFmRNA的表达。ELISA检测VEGF蛋白水平分别为 6h组 (8 2± 1 1) μg/L ,ET +6h组 (9 37± 1 0 2 ) μg/L ,NO +6h组 (2 86± 0 91) μg/L ,LNNA +6h组 (14 75± 1 87)μg/L。 结论　缺氧可诱导人脐静脉血管内皮细胞分泌VEGF并受血管活性物质的调控 ,ET促进其表达 ,NO抑制其表达。     

联合促血管生成素-1及血管内皮细胞生长因子基因治疗对大鼠新生血管通透性的影响

目的　探讨联合转染促血管生成素 1(angoipoietin 1,Ang 1)及血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因对大鼠下肢新生血管通透性的影响 ,并观察不同基因剂量配比的差异。方法　制造大鼠下肢血管闭塞病理模型 ,按不同剂量配比肌肉内电转pcD2 Ang 1和 或pcD2 VEGF基因。应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化染色检测外源基因在骨骼肌中的表达 ,通过伊文思蓝灌注观察其对新生血管通透性的影响。结果　逆转录聚合酶链反应及免疫组化染色均能检测到外源基因的表达。随着转入pcD2 VEGF剂量的增加 ,血管通透性逐渐增加 ;而随着转入pcD2 Ang 1剂量的增加 ,血管通透性逐渐下降。其中pcD2 VEGF 10 0 μg pcD2 Ang 12 0 0 μg组通透性与正常对照最为接近 [( 8 5 7± 0 74 )ng mlvs ( 8 4 2± 0 82 )ng ml,P >0 0 5 ]。结论　联合转pcD2 Ang 1基因可逆转pcD2 VEGF基因增加血管通透性的副作用 ,其中pcD2 VEGF与pcD2 Ang 1比例为 1 2时血管通透性最接近生理状态。与单基因治疗相比 ,适当配比的联合转基因可能成为治疗闭塞性血管病更安全、更有效的新方法。     

血管内皮生长因子对培养内皮细胞合成一氧化氮的影响

目的 :探讨血管内皮生长因子 （VEGF） /血管渗透因子 （VPF）对内皮细胞 （EC）分泌一氧化氮 （NO）的影响。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞 （HUVEC）随机分为 6组 （n=6 /组 ） :1正常对照组 ;2 VEGF 1ng/ m l;3VEGF 10ng/ m l;4VEGF 10 0 ng/ m l;5低氧组 ;6低氧组 +VEGF 10 0 ng/ m l。采用硝酸还原酶法测定培养液中的 NO2 - ,NO3 -的含量以反映 NO水平。结果 :VEGF促进正常 EC分泌 NO,在一定浓度范围内呈剂量依赖性 ;低氧损伤 EC,使其分泌 NO减少 ;VEGF 10 0 ng/ ml预处理可保护 EC免受低氧损害 ,保持正常分泌 NO的功能。结论 :VEGF能够调节 EC的功能 ,为其促血管形成作用中 EC分裂、增殖、迁移奠定物质基础     

醛固酮对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的醛固酮对人脐静脉内皮细胞的增殖,流式细胞仪检测醛固酮对人脐静脉内皮细胞的凋亡,半定量RT-PCR及Western印迹分别检测人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA水平及蛋白水平的表达。结果①MTT比色法显示,醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性;②当醛固酮浓度增加到800μg/L后,其增殖抑制率不再升高,而此浓度时人脐静脉内皮细胞的凋亡率达到峰值的26.5%±3.3%;③经过醛固酮处理,人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降。结论醛固酮通过降低人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子表达抑制人脐静脉内皮细胞增殖并促进人脐静脉内皮细胞凋亡。     

血管内皮生长因子及其受体在肺气肿患者肺组织中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(VEGF受体2/KDR)在肺气肿患者肺组织中的表达及其与肺气肿的相关性。方法取35例行肺叶切除术患者[A组(吸烟伴肺气肿组)16例,B组(不吸烟肺功能正常组)14例,C组(吸烟但肺功能正常组)5例]的外周肺组织标本,ELISA法检测肺组织匀浆中VEGF的含量,免疫组化法检测KDR蛋白表达,RT PCR检测VEGF和KDRmRNA水平,TUNEL法检测肺泡隔细胞的凋亡。结果A组患者肺组织VEGF、KDR表达均低于B组(P<0.01),肺泡隔细胞凋亡率高于B组(P<0.01)。C组与B组相比,VEGF及KDR表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF及KDR水平减少与肺泡隔细胞凋亡的增加可能与肺气肿的发生相关。     

血管内皮生长因子和内皮抑素在肺纤维化中的作用

血管内皮牛长因子是一种生长因子,在正常肺组织和多种肺部疾病中均有表达.通过血管内皮牛长因子受体发挥生理作用,具有促进内皮细胞分裂增殖、促血管生成、增加血管通透性及抗凋亡等作用.内皮抑素是一种内源性血管生成抑制剂,可以抑制血管内皮细胞增殖、迁移并诱导其调亡,从而达到抑制血管生成作用.在肺纤维化中二者均有异常表达,但具体作...     

氯沙坦对大鼠肺纤维化模型的干预作用及对MCP-1和bFGF表达的影响

目的　研究血管紧张素Ⅱ的 1型受体拮抗剂氯沙坦对大鼠肺纤维化模型的干预作用及可能的机制。方法　Wistar大鼠经气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化 ,随后分别每日口服氯沙坦 1 0mg/kg(L组 )、泼尼松 (强的松 ) 2 0mg/kg(P组 )和生理盐水 (B组 )进行干预。对照组气管内和口服均用生理盐水。各组动物均于气管内灌药后第 3、7、1 4、2 8、56天分别处死 6只。通过苏木素 伊红染色、Masson胶原染色、天狼猩红染色偏光法及测定肺组织羟脯氨酸浓度来评价治疗效果。用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测单核细胞趋化因子 1 (MCP 1 )和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的mRNA在肺内的表达。用免疫组化及酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测MCP 1和bFGF蛋白在大鼠肺组织的表达。结果　L组的肺泡炎和肺纤维化程度及肺组织的羟脯氨酸含量显著地低于B组 ;其MCP 1和bFGF的蛋白表达显著地低于B组。结论　氯沙坦能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化 ,这种作用有可能部分通过抑制MCP 1和bFGF的表达而实现     

缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其对肝细胞生长因子表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其可能的机制。方法60只Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成3组,每组20只:(1)缬沙坦组,经气管插管灌注博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化,随后每日用缬沙坦16mg/kg灌胃进行干预;(2)模型组,气管内灌注用BLM,灌胃用生理盐水;(3)对照组,气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物于气管内灌注后第7、14、28、42天分别处死5只。取肺组织经苏木精-伊红、Masson胶原染色及测定羟脯氨酸浓度来评价治疗效果。用免疫组化及原位杂交方法分别检测转化生长因子β(TGF-β)蛋白和肝细胞生长因子(HGF)mRNA在肺内的表达。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量。结果缬沙坦组肺泡炎程度在第14、28、42天分别为(0·88±0·12)、(0·79±0·21)、(0·75±0·17)分,低于同期模型组的(2·05±0·25)、(1·38±0·12)、(1·19±0·11)分,差异均有统计学意义(P均<0·01);缬沙坦组肺纤维化程度在第7、28、42天分别为(0·28±0·03)、(1·74±0·18)、(1·91±0·09)分,也低于同期模型组的(0·45±0·10)、(2·08±0·32)、(2·77±0·15)分,差异均有统计学意义(P均<0·05);缬沙坦组肺组织羟脯氨酸含量在第14、42天分别为(1·08±0·13)、(1·39±0·20)μg/mg·pro,低于同期模型组的(1·45±0·19)、(2·19±0·37)μg/mg·pro,差异均有统计学意义(P均<0·01);缬沙坦组肺组织中TGF-β蛋白表达在早、晚期分别为2·27±0·30、2·05±0·18,均低于同期模型组的3·99±0·43、2·71±0·46,差异均有统计学意义(P均<0·05)。缬沙坦组HGFmRNA表达在早、晚期分别为1·61±0·20、0·52±0·19,均高于同期模型组的1·98±0·23、0·28±0·14,差异均有统计学意义(P均<0·05);缬沙坦组蛋白含量在早、晚期分别为(203±18)、(129±20)pg/ml,均高于同期模型组的(260±21)、(100±20)pg/ml,差异均有统计学意义(P均<0·05)。结论缬沙坦能减轻BLM诱导的大鼠肺纤维化,有可能通过抑制TGF-β和促进HGFmRNA的表达而实现。     

肝癌化疗栓塞术后残癌组织微血管密度及血管内皮细胞生长因子表达的研究

目的 研究肝癌经导管动脉内化疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)术后残癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,BFGF)的表达变化。方法 对40例原发性肝癌患者的手术切除标本作免疫组织化学染色,检测肿瘤组织的MVD和肿瘤细胞VEGF、BFGF的表达。40例患者中20例术前接受l~7次不等的TACE治疗(TACE组),另20例为直接手术患者,术前未进行任何其它治疗(直接手术组)。结果TACE组平均MVD为130.51±75.5,直接手术组为152.35±58.80,两组差异无显著性(t=－1.021．P=0.341)。VEGF平均染色强度TACE组为645.60±543.27,直接手术组为158.28±188.48,前者强于后者(t=281,P＜0.001)。BFGF阳性率TACE组和直接手术组分别为35%和40%,差别无显著性(x~2=0.107,P=0.744)。结论TACE术后残癌组织只有丰富的肿瘤血供,残存肿瘤细胞VEGF表达增强,可能在TACE术后肿瘤血供的重建中起重要作用。     

蛋白激酶C-核因子κB信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨蛋白激酶C(PKC) 核因子κB(NF κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　体外培养HPASMCs ,用工具药PKC激活剂 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)和NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC) ,将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA PDTC组在常氧和缺氧条件下培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测VEGFmRNA表达 ,Westernblot法检测VEGF和NF κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达 ,免疫细胞化学法检测NF κBp6 5的表达和定位 ,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果　( 1)NF κBp6 5胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2 /M % :常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA PDTC组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 5 ) ;缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )VEGFmRNA和蛋白表达 :常氧对照组、PMA组、PMA PDTC组组间差异均无显著性 (P均 >0 0 5 ) ;缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA PDTC组、常氧PMA组 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 5 )。 ( 3)缺氧PMA组NF κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2 /M %之间均呈正相关 (r =0 5 87～ 0 710 ,P均 <0 0 5 )。结论　常氧培养HPASMCs存在PKC NF κB信号转导通道 ;     

雷帕霉素对大鼠肺纤维化模型的干预作用及对转化生长因子表达的影响

目的研究雷帕霉素对大鼠肺纤维化模型的干预作用及可能的机制。方法150只SD大鼠采用随机数字表随机分成3组,每组50只：①雷帕霉素组。经气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化,随后每日用雷帕霉素口服溶液0．5mg／kg灌胃进行干预;②模型组,气管内灌注用博莱霉素,灌胃用生理盐水;③对照组,气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物均于气管内灌药后第3、7、14、28、56天分别处死10只。通过HE染色、Masson胶原染色、天狼猩红染色偏光法及测定肺组织羟脯氨酸浓度来观察肺泡炎和肺纤维化的程度。用逆转录-聚合酶链反应检测肺组织转化生长因子β1（TGF-β1）的mRNA表达。用免疫组化法检测大鼠肺组织TGF-β1蛋白的表达。结果模型组的肺组织羟脯氨酸含量和肺泡炎程度在各时间点均高于对照组,模型组的肺纤维化程度在第14、28和56天高于对照组（P〈0．05）;雷帕霉素组肺组织羟脯氨酸含量在第14、28和56天低于模型组,雷帕霉素组在第14和28天肺泡炎的程度低于模型组,雷帕霉素组在第28和56天肺纤维化程度低于模型组（P〈0．05）;模型组TGF-β1的mRNA表达在第3、7、14和28天高于对照组,雷帕霉素组TGF-β1的mRNA表达在第7和14天低于模型组（P〈0．05）。结论雷帕霉素能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,这种作用有可能部分通过抑制TGF-β1的表达而实现。     

血管内皮生长因子调节内皮祖细胞生物学功能

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）对体外培养骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及机制初探。方法密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定。单个核细胞培养7d后分为对照组和VEGF干预组。VEGF干预组加入不同浓度VEGF（25,50,75,100μg／L）培养48h,分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。RT—PCR法半定量检测VEGF对EPCs内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响。硝酸还原酶法比色测定VEGF对EPCs分泌一氧化氮的影响。结果VEGF可浓度依赖性地增加EPCs数量并明显促进EPCs的黏附、迁移和增殖能力,与对照组比较差异显著。VEGF可上调EPCseNOSmRNA的表达,促进EPCs分泌一氧化氮。结论VEGF可能通过上调EPCseNOSmRNA的表达影响EPCs部分生物学功能。     

肺脏基质细胞分泌的血管内皮生长因子对树突状细胞分化及功能的影响

目的 观察小鼠肺脏基质细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)对成熟树突状细胞(mDC)分化和功能及免疫耐受的影响.方法 建立肺脏基质细胞/树突状细胞共培养体系作为对照组,体系中加入VEGF抗体作为实验组(VEGF抗体组).反转录聚合酶链反应法检测肺脏基质细胞微环境中细胞因子的表达；透射电镜观察细胞形态.流式细胞术检测细...