肾衰宁对肾小球系膜细胞产生细胞外基质成分的影响

 目的观察中药复方制剂肾衰宁灌肠液(以下简称肾衰宁,SSN)对体外培养的人肾小球系膜细胞产生细胞外基质成分的影响,冀以从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用双抗夹心ELISA法和放免法,观察SSN大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞产生纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和胶原Ⅵ(Col Ⅳ)的影响.结果肾衰宁灌肠液大鼠血清可抑制体外培养的人肾小球系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系,即随药物浓度的增加对系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ的抑制率也相应增加.结论肾衰宁对体外培养的人肾小球系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ有明显的抑制作用,提示肾衰宁抑制系膜细胞产生细胞外基质是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

不同种类细胞外基质材料对胰岛细胞活力和功能的影响

目的　比较在不同细胞外基质材料上培养胰岛细胞对胰岛细胞活力和功能的影响。方法　采用胶原酶Ⅴ型消化法 ,经Fi coll密度梯度离心法纯化获得的胰岛细胞 ,按 10 0 0胰岛当量单位 /ml密度分别在I型胶原、I型和Ⅳ型胶原、Matrigel3种不同细胞外基质材料包被的 2 4孔培养板上培养 ,以不包被组为对照。培养 7天时进行丫啶橙 碘化丙啶 (AO PI)染色。放免法检测培养第 2、4、6、8、10天时胰岛素基础分泌水平及培养 4天时胰岛素刺激分泌水平。结果　AO PI染色显示 :Matrigel包被组和I型与Ⅳ型胶原混合包被组胰岛细胞的活力优于I型胶原包被组和对照组 ,I型胶原包被组的胰岛细胞活力优于对照组 ,Matrigel包被组的胰岛细胞活力最好。糖敏感性和分泌特性检测表明 :Matrigel包被组胰岛细胞的糖敏感性和胰岛素分泌活性最好。Matrigel包被组和I型与Ⅳ型混合胶原包被组中培养的胰岛细胞胰岛素刺激分泌水平优于对照组 (P <0 0 5 ) ,而Ⅰ型胶原包被组和对照组比较差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论　将胰岛细胞在Matrigel和I型与Ⅳ型混合胶原上培养能够改善胰岛细胞的活力和功能。     

细胞外基质的结构与功能

传统的组织学观念认为，细胞外基质（extracellular matrix,ECM)成分无生物学活性，仅是把细胞粘联在一起的连接物和支持物。随着现代科学技术的发展，人们不仅对ECM成分的结构逐渐有所了解，而且对其功能有了新的认识。近年来的研究发现，ECM不仅决定细胞形态，还控制细胞的生长、分化、调节细胞受体及基因表达，影响细胞的代谢和运动。因而CM在器官发生、创伤愈合等方面的重要作用逐渐引起了人们的重视。     

细胞外基质对前脂肪细胞分化转归的影响

前脂肪细胞是存在于脂肪组织中的一种未分化细胞,它可以依照能量需求增殖分化为成熟脂肪细胞.在特定的条件下,它也可以向血管内皮细胞、巨噬细胞及成骨细胞转分化.细胞外基质(ECM)作为一种重要的细胞外环境,其对前脂肪细胞的分化及转归具有重要的影响.脂肪组织受到创伤后,细胞外基质质与量的改变将对前脂肪细胞产生怎样的影响,它会不会朝着与修复相关的方向转分化,对这一问题的深入研究将有利于揭示脂肪组织参与创伤修复的内在机制.     

6 Gy全身照射对皮肤伤口几种细胞外基质成分的影响及W11-a12的促愈作用

目的 研究全身放射损伤对皮肤伤口细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分的影响及康复新（W11-a12)的促愈作用。方法 100只雄性健康昆明种小鼠被随机分为单纯创伤组（SW组）和全身放射损伤合并创伤组（CRW组）,每组50只,CRW组采用6Gy全身照射复合皮肤创伤模型。观察伤后1,3,5,7,10d时伤口组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原（CL-Ⅰ、CL-Ⅲ）、弹力纤维（EF）、纤维黏连蛋白（FN）含量的变化及W11-a12对其的作用。结果 合并全身放射损伤后,皮肤伤口内几种基质成分的含量呈不同程度降低。其特点是：（1）对不同的ECM成分抑制程度不同,按含量降低由重到轻依次是FN、CL-Ⅰ、EF、CL-Ⅲ;（2）对ECM不同成分抑制的持续时间不同,按降低时间由长到短依次是CL-Ⅰ、CL-Ⅲ、EF、FN。使用W11-a12后,单纯皮肤创伤和合并全身放射损伤的皮肤伤口中几种主要ECM成分的含量均显著增高。结论 伤口内ECM成分含量减少是合并放射损伤后伤口难愈的主要原因之一、W11-a12具有促进单纯创伤伤口和合并全身放射损伤的皮肤伤口中ECM合成与分泌的作用。     

人细胞外基质磷酸化糖蛋白对人牙髓细胞生长和黏附的影响

目的探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)对人牙髓细胞(HDPCs)黏附、伸展、增殖的影响。方法常规培养获得人牙髓细胞,各实验组中MEPEs的浓度分别为0.01,0.1,1,10,100μg/L以不加MEPE作为空白对照组。细胞计数法测定细胞的黏附能力;通过计数高倍视野中伸展的细胞数,计算骨髓基质细胞在不同时间的伸展率;MTT法检测各组细胞的增殖活性。结果体外培养的人牙髓细胞生长良好;各实验组间及与对照组比较,100μg/L组对细胞的黏附性的影响有差异;各组细胞的伸展率无差异;MEPE对人牙髓细胞有较明显的促增殖作用。结论 MEPE对体外培养的人牙髓细胞的伸展率无影响,但可明显促进其黏附性和增殖。     

不同浓度葡萄糖对大鼠间皮细胞增殖及细胞外基质产生的影响

观察了不同浓度葡萄糖对膜腹间皮细胞增殖和产生细胞外基质的作用，发现：①不同浓度的高渗葡萄糖可以抑制大鼠腹膜间皮细胞的增殖，引起间皮细胞的死亡，增强层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的产生；②葡萄糖浓度与在此环境下培养的活细胞百分比呈负相关，但与层粘连蛋白的产生呈正相关，且活细胞百分比与层粘连蛋白的产生呈负相关。提示：培养液中葡萄糖的浓度在大鼠腹膜间皮细胞的增殖和细胞外基质的产生中起重要作用。     

6 Gy全身照射对皮肤伤口几种细胞外基质成分的影响及W11-a12的促愈作用

目的研究全身放射损伤对皮肤伤口细胞外基质(extracellular matr ix, ECM)成分的影响及康复新(W11-a12)的促愈作用. 方法 100只雄性健康昆明种小鼠被随机分为单纯创伤组(SW组)和全身放射损伤合并创伤组(CRW组),每组50只.CRW组采用6 Gy全身照射复合皮肤创伤模型.观察伤后1,3,5,7,10 d时伤口组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原(CL-Ⅰ、CL-Ⅲ)、弹力纤维(EF)、纤维黏连蛋白(FN)含量的变化及W11-a12对其的作用. 结果合并全身放射损伤后,皮肤伤口内几种基质成分的含量呈不同程度降低.其特点是(1)对不同的ECM成分抑制程度不同,按含量降低由重到轻依次是FN、 CL-Ⅰ、EF、CL-Ⅲ;(2)对ECM不同成分抑制的持续时间不同,按降低时间由长到短依次是 CL-Ⅰ、CL-Ⅲ、EF、FN.使用W11-a12后,单纯皮肤创伤和合并全身放射损伤的皮肤伤口中几种主要ECM成分的含量均显著增高. 结论伤口内ECM成分含量减少是合并放射损伤后伤口难愈的主要原因之一,W11-a12具有促进单纯创伤伤口和合并全身放射损伤的皮肤伤口中ECM合成与分泌的作用.     

异种无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后细胞外基质的变化

目的观察异种无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后细胞外基质的动态变化。方法以SD大鼠为动物模型,在其背部造成4 cm×5 cm的全层皮肤缺损。大鼠分为薄自体皮移植组和猪无细胞真皮基质+薄自体皮移植组,分别于移植后1,2,3,4,8,12,16周取标本,检测羟脯氨酸含量、Ⅰ/Ⅲ型前胶原mRNA的表达、透明质酸含量及纤维连接蛋白的变化。结果猪无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后,各时相点羟脯氨酸含量、Ⅰ型前胶原mRNA的表达均低于薄自体皮移植组(P<0.05);Ⅲ型前胶原mRNA的表达与薄自体皮移植组差异无统计学意义(P>0.05);透明质酸含量高于薄自体皮移植组(P<0.05);而纤维连接蛋白的表达在早期高于薄自体皮移植组,后期则低于薄自体皮移植组(P<0.05)。结论猪无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后能够减少胶原合成和Ⅰ型前胶原mRNA的表达,增加皮肤中透明质酸含量,从而减轻瘢痕增生。纤维连接蛋白早期表达增高有利于创面愈合及基底膜的重塑,而后期表达降低有助于减轻瘢痕增生。     

细胞外基质的结构与功能（续）

2 ECM的功能 ECM的成份种类很多。各种成份之间在结构上具有显著的异质性,一种ECM成份在结构上含有较多的不同结构的功能区。即使是同一种ECM成份,在不同组织中结构也具有非均一性的特点。不同的ECM成份结合组成不同的组织结构。因此,ECM结构上的各种异质性决定ECM在功能上的多样性。     

脂肪组织工程中细胞外基质支架的研究进展

构建工程化脂肪组织需要三要素:1合适的种子细胞;2具有良好生物相容性及微结构的三维支架材料;3调控细胞生长及分化的细胞因子。而选择一种适宜的支架材料作为种子细胞贴附生长的生存场所是脂肪组织工程的研究基础。目前应用的支架材料包括天然多糖类、天然蛋白质类、人工合成类等材料[1],但至今仍无脂肪组织工程理想的支架材料。细胞外基质具有与天然组织器官相似的三维空间结构,利用去细胞技术,可脱去同种或异种器官或     

胃粘膜组织粘附分子CD44(V6)及细胞外基质糖蛋白Tenascin的表达

近年来研究表明，肿瘤细胞膜表面粘附分子、细胞外基质成分的相互作用可能在肿瘤的发生、浸润、转移中起重要作用〔１〕。因此同步检测细胞粘附分子及细胞外基质成分的异常改变对于揭示肿瘤发生、演进的机制具有重要意义。作者对不同病理阶段胃粘膜组织中粘附分子ＣＤ４４...     

N-乙酰半胱氨酸等对基质金属蛋白酶在大鼠慢性阻塞性肺疾病模型气道细胞外基质重塑中的作用

53只Wistar大鼠随机分为对照组、慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型组及N－乙酰半胱氨酸（NAC）组、蛋白激酶C（PKC）抑制剂H7组及转移生长因子（TGF）-β单抗组；研究基质金属蛋白酶（MMPs)及其组织抑制(TIMP－1）有COPD模型气道细胞外基质（ECM）重塑中的作用及NAC、H7及TNF－β单抗等干预因素的影响。结果表明，模型组气道壁以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质及脯氨酸（Hy)含量、粘膜下成纤维细胞（Fb )数、MMP－9、TIMP－1及TNF－βⅠ、Ⅱ受体在支气管肺组织中蛋白和（或）mRNA表达较对照组显著增高，72kDMMP-2及92kD MMP-9酶活性亦显著增高，NAC组及TNF－β单抗组Hy含量及Fb数较模型组显著降低，H7组Hy含量则显著增高，三个干预组MMP－2、9及TIMP－1和MMP－9、2酶活性表达均较模型组显著减弱，三个干预组TNF－βⅠ、Ⅱ受体亦有不同程度减弱。MMP－9、2及TIMP－1表达增强表明COPD大鼠模型ECM降解及合成代谢异常活跃，与气道ECM重塑密切相关。拮抗氧自由基或TNF－β对MMPs，TIMP－1及气道重塑具有调节和减轻作用，为探索防治气道细胞外基质重塑的途径提供了一定依据。H7由于具有强抑制胶原酶作用而使胶原沉积增多。     

细胞外基质与血管成形术后再狭窄

既往研究认为,血管成形术后平滑肌细胞的迁移、增殖是内膜增生和再狭窄的主要原因.近来人们逐渐认识到,细胞外基质比平滑肌细胞可能起更重要的作用.现综述细胞外基质在正常血管壁的分布、在血管成形术后的变化及其在再狭窄中的作用.     

大肠癌浸润的细胞外基质变化和内皮细胞的关系

 目的 探讨大肠癌浸润的细胞外基质变化和血管内皮细胞的关系,有助于了解大肠癌生物学行为改变,对于临床应用抑制细胞外基质降解治疗大肠癌具有实际意义。方法 应用免疫组化半定量分析。结果 癌旁组、各期浸润组的细胞外基质成分和内皮细胞变化与正常组比较,有显著差异(P＜0.05),LN、F8、CD34和肌动蛋白的增加,均与大肠癌的浸润有关。结论 提示抑制癌细胞对细胞外基质的降解和对血管内皮细胞的损伤,可阻止癌细胞的游走和浸润。     

人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备

目的 原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体.方法 设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性.结果 原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白.结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础.     

急性白血病骨髓基质细胞体外培养的生长特性及细胞外基质的检测

目的探讨人急性白血病骨髓造血微环境与正常的差异。方法采用Dexter型骨髓培养体系，动态观察白血病骨艇基质细胞体外生长特性，瑞氏染色计数CFU-F集落，流式细胞仪检测融合层骨髓基质细胞的VCAM-1表达及ELISA法检测培养上清中IL-6、TNF-α含量。结果急性白血病骨髓基质细胞贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合层形成时间均明显推迟；CFU-F计数显著减少；白血病骨髓基质细胞表达VCAM—1低于正常对熙组；白血病基质培养上清液中的TNF-α和IL-6含量明显高于正常对照组。结论急性白血病骨髓基质细胞的体外生长特性、粘附分子及细胞因子表选均存在异常。     

基质糖基化对角质形成细胞迁移功能损害的机制

目的 探讨糖尿病条件下大鼠创面愈合过程中角质形成细胞迁移功能受损的可能机制.方法 选用SD大鼠6只,取背部表皮进行角质形成细胞培养;制作并鉴定糖基化基质模型;评价糖基化基质对正常大鼠角质形成细胞迁移功能的影响;测定糖基化基质对正常大鼠角质形成细胞粘附功能、培养12,24 h黏附形态、伪足形成、微丝表达、整合素表达的影响.结果 糖基化层黏连蛋白对细胞迁移较对照组有明显抑制(P＜0.05);对细胞贴壁率无明显影响(P＞0.05),但抑制了细胞的伸展及伪足的伸出,干扰了微丝的聚集,降低了整合素的表达(P＜0.05).结论 正常大鼠皮肤角质形成细胞在糖基化基质上出现迁移功能受阻,这可能是与整合素信号传导出现障碍,引起整合素、肌动蛋白表达减少和微丝形成,从而引起丝状伪足和板状伪足形成减少有关.     

细胞外基质降解酶系统在肾脏疾病中作用的研究

肾脏细胞外基质合成、降解失衡与重塑并最终导致细胞外基质积聚是各种肾病发展至终末期肾衰的共同病理表现,而调控细胞外基质代谢的细胞外基质降解酶类的表达与活性异常在其中发挥重要的作用。研究纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物（PA/PAI）以及基质金属蛋白酶及其抑制物（MMP/TIMP）在肾病发生与发展中的作用及其调控已成为热点问题,以前偏重于对抑制物（PAI与TIMP）的研究,近来研究发现,降解酶及其抑制物之间表现出了复杂的动态演变。尽管已经进行了大量的研究,但是其确切机制尚未完全阐明。明确PA/PAI与MMP/TIMP系统中各个组成成分在不同的疾病模型或者疾病发展阶段特定的致病作用,并解析其遗传与分子调节机制,有助于进一步明确慢性进展性肾病的发生发展机制,进而通过干预细胞外基质降解酶的活性或表达,达到治疗或者预防肾脏疾病的目的。     

体外培养骺板、关节及肋软骨细胞外基质中糖胺多糖含量的检测和比较

目的　建立定量检测体外培养软骨细胞外基质中糖胺多糖 (GAG)含量的方法 ,以评价体外培养骺板、关节及肋软骨细胞的生物学功能活性。　方法　改进的二甲基亚甲蓝 (DMB)比色法测定细胞外基质的糖胺多糖含量 ,细胞 -玻片甲苯胺蓝 (TB)染色光镜观察。　结果　原代软骨细胞具有最高的GAG分泌活性 ,骺板 (70 .12± 7.72 ) μg cm2 ,关节 (92 .0 0± 10 .15 ) μg cm2 ,肋软骨(80 .61± 11.40 ) μg cm2 ,至第三代则出现了非常明显的下降 ,骺板 (5 3 .2 7± 9.5 0 ) μg cm2 ,关节 (63 .88± 11.92 ) μg cm2 ,肋软骨 (5 8.94± 8.2 1) μg cm2 ;TB染色结果与GAG含量变化相一致。三种软骨细胞间比较差异无显著性意义。　结论　在体外培养过程中 ,软骨细胞随传代次数的增加而其功能活性逐渐降低 ,第三代以后的软骨细胞不适于作为组织工程种子细胞。DMB比色法准确、灵敏 ,可作为一种用于评价体外培养软骨细胞功能活性的有效分析方法。