凋亡抑制蛋白survivin在食管鳞癌中的表达及其与p53、Bcl-2相关性研究

目的：探讨survivin的表达在食管鳞癌（ESC）发生、发展中的作用及其与p53、Bcl-2蛋白表达的相互关系。方法：应用免疫组织化学SP法，检测survivin、p53和Bcl-2蛋白在50例ESC组织和20例癌旁正常食管组织中的表达。结果：50例ESC组织中survivin表达阳性率为80．0％，其表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移有关（P〈0．05），而与癌组织分化程度无关（P〉0．05）。而20例癌旁正常食管组织中survivin低表达，阳性率为5．0％（P〈0．01）。癌组织中p53和Bcl-2蛋白表达与survivin显著相关（P〈0．05）。结论：survivin在食管癌组织中异常表达，有望成为食管癌基因治疗的新靶点；抑癌基因p53的失活和凋亡相关基因Bcl-2的表达上调与survivin基因的表达可能在食管癌癌变中起协调作用。     

结肠癌组织中抑癌基因PTENp53的表达意义

目的 探讨抑癌基因PTEN、p53在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌发生发展、临床病理特征之间的关系。方法 应用免疫组织化学S-P法检测PTEN和p53基因在59例结肠癌、20例结肠腺瘤、19例正常结肠组织中的表达，并结合患者的临床病理资料进行分析。结果 结肠癌组织中PTEN、突变型p53基因的阳性表达率分别为54．2％、66．1％，结肠腺瘤组织中分别为95％、0，突变型p53基因在正常结肠组织和结肠腺瘤组织中不表达，PTEN基因在正常结肠粘膜和结肠腺瘤组织中几乎全部呈阳性表达。结肠 癌组织中PTEN基因的表达与正常结肠黏膜和结肠腺瘤组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05），结肠癌组织中突变型p53的表达显著高于结肠腺瘤以及正常结肠黏膜组织中的表达（P〈0．05）。随结肠癌临床分期增加、浸润深度加深、淋巴结的转移、Duckh分期的增加，突变型p53基因的阳性表达率逐渐升高（P〈0．05），PTEN基因的阳性表达率逐渐降低（P〈0．05），PTEN基因与突变型p53基因的表达呈负相关（P〈0．05）。结论 PTEN和p53基因的异常表达与结肠癌的发生、发展和病理学特征有关；PTEN、p53基因在结肠癌的发生、发展中起协同作用。     

急性髓系白血病blc—2与bax基因的比值和耐药

目的：了解凋亡抑制基因（Bcl-2)、凋亡诱导基因（Bax)在急性髓系白血病的表达及Bcl-2/Bax比值与耐药关系。方法：用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax抗原表达,细胞培养四氮唑蓝比色法（MTT）药敏试验检测急性髓系白血病（AML）耐药的情况。结果：AML患者Bcl-2高于正常对照组,Ｂax低于正常对照级,其Bcl-2/Bax比值显著高于正常对照组（P＜0．01）。产生耐药组的病例Bcl-2/Bax高于敏感组（P＜0．05）,Bcl-2/Bax高比值患者化疗反应差（P＜0．05）。结论：Bcl-2,Bax的异常表达在AML形成、发展和产生耐药起一定作用,检测Bcl-2,Bax比值对治疗药物选择、预后的判断有重要意义。     

凋亡调节蛋白Bcl-2家族在非小细胞肺癌中的表达

目的在手术切除的原发性非小细胞肺癌(NSCLC)标本中检测凋亡调节蛋白Bcl-2家族中的Bcl-2、Bax和Mcl-1的表达特征和预后的意义。方法用针对人体的Bcl-2、Bax与Mcl-1的特异性鼠源性抗体采用免疫组化法,检测它们在50例NSCLC患者手术切除的石蜡包埋标本中的表达情况,并结合临床病理分型和追踪预后分析其表达的意义。结果(1)非小细胞性肺癌标本中抗凋亡因子Bcl-2和Mcl-1分别有15例(30%)和29例(58%)表达阳性,有23例(46%)的标本中有促凋亡因子Bax表达阳性。Mcl-1与Bax的表达之间存在正相关(P=0.06)。Bcl-2、Bax和Mcl-1的免疫组化染色以胞浆为主。(2)Mcl-1与Bax在肺癌的不同临床病理分型中没有差异(分别为P>0.250和P>0.900)。(3)Bcl-2的表达与原发性NSCLC手术切除患者总的无复发生存率(P=0.02)和无转移生存率(P<0.01)呈负相关,Mcl-1与Bax的表达与预后无关。结论在NSCLC中,Bcl-2家族蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bax的表达等都很常见。Mcl-1的抗凋亡功能可能是通过在蛋白质水平与Bax相互作用形成异二聚体,拮抗Bax的促进凋亡功能而实现的。可能由于它们在凋亡中复杂的相互作用,凋亡调节蛋白Bcl-2家族的表达对NSCLC的临床预后没有直接的影响。     

凋亡基因蛋白Bcl-2、Bax,p53在子宫内膜异位症组织中的表达及相关研究

目的探讨凋亡调节基因Bcl-2、Bax、p53在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法免疫组织化学SP法检测子宫内膜异位症患者60例盆腔异位内膜及在位内膜和40例正常子宫内膜组织中Bcl-2、Bax、p53的表达。结果 Bcl-2在异位内膜组表达强于在位内膜及对照组,差异有统计学意义(P值均<0.05),Bax在异位内膜组的染色强度低于在位内膜组和对照组,差异有统计学意义(P值均<0.05);p53在正常子宫内膜及子宫内膜异位症患者在位内膜中均呈阴性表达,在子宫内膜异位症患者异位内膜中的阳性表达率为20%,表达水平显著高于正常子宫内膜及在子宫内膜,差异有统计学意义(P<0.05)。结论凋亡调节基因Bcl-2、Bax、p53在子宫内膜异位症发生、发展中发挥重要作用。     

慢性肝病肝组织中TNF-α、TNFR及Bcl-2家族的表达

目的：探讨乙型肝炎病毒相关性慢性肝病肝损伤时TNF－α、TNFR及Bcl-2家族对肝细胞凋亡的调节作用。方法：采用HE染色、免疫组织化学方法检测28例慢性乙型肝炎、22例乙型肝炎后肝硬化患者肝组织中Fas、FasL、Bax、Bcl-2、Bcl-α及Bcl-XL的表达，用分子杂交法检测肝组织中TNF－αmRNA、TNF受体（TNFR) 表达的阳性率及表达程度。结果：各种凋亡蛋白在慢性肝炎组和肝硬化组中的表达无显著差别，但促凋亡因子与抑凋亡因子相比，有显著或极显著差异（P＜0．05，P＜0．01）。TNF－α、TNFR阳性表达率在肝硬化组为90．9％、95．5％，明显高于慢性肝炎组（P＜0．05，P＜0．01）。结论：抑制促凋亡因子、阻止肝细胞大量凋亡对防治慢性肝炎重症化有重要的临床意义。     

鼻咽癌c—src、p53与VEGF表达及其相关性研究

目的研究鼻咽癌组织中原癌基因c—src、抑癌基因P53与血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学S—P法，研究40例鼻咽癌组织和10倒正常鼻咽粘膜组织切片中的c—src、P53与VEGF的表达。结果鼻咽癌组织中c-src、p53和VEGF的表达明显高于正常鼻咽粘膜组织（P〈0．01），且三者之间具有显著相关性（P〈0．01）；c—src、P53及VEGF分别与鼻咽癌临床分期、淋巴结转移和骨、肺、肝等远处转移及五年生存期有关（P〈0．05）：III、IV期和有转移患者c—src、p53及VEGF表达较I、II期和无转移鼻咽癌患者显著增高。结论c—src、P53及VEGF可作为判断鼻咽癌预后及指导临床治疗的有意义指标。     

九节龙皂苷对小鼠胰腺癌p53、Bcl-2和Bax表达的影响

目的通过观察九节龙皂苷在胰腺癌发病不同阶段中对凋亡调控基因的影响,初步探讨九节龙皂苷防治肿瘤作用可能存在的分子机制。方法利用二甲基苯并蒽诱发的实验性胰腺癌小鼠模型,采用免疫组化染色的方法,分别标记p53、Bcl-2和Bax阳性细胞,分阶段动态观察九节龙皂苷对各种蛋白表达的影响。结果实验开始,预防组、治疗组的p53阳性率与对照组差别就均有统计学意义(P均<0.01);随实验观察时间延长,p53表达达到高峰,Bax则呈逐渐升高趋势,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值分别在第2和第3阶段达到峰值后呈下降趋势。至实验结束时,预防组p53、Bcl-2以及Bcl-2/Bax比值均低于对照组(除p53外,P均<0.05),而治疗组与对照组仅Bax差别具有统计学意义(P<0.01)。结论九节龙皂苷可能通过抑制突变型p53和Bcl-2的表达,诱导细胞凋亡,从而抑制胰腺癌瘤形成和发展。     

胃癌组织中凋亡相关基因survivin表达及其与p53、k-ras表达的相关关系

目的：探讨凋亡相关基因survivin在胃癌组织中的表达，及其与p53、k-ras表达的相关性。方法：应用免疫组织化学链酶亲和素－生物 素－过氧化物酶复合物法（SABC法），检测20例正常胃粘膜组织及120例胃癌组织中的survivin、p53和k-ras的表达，结果：20例正常胃粘膜组织中survivin呈阴性表达，而120例胃癌组织中92例呈阳性表达，阳性率为76．7％，差异有显著性（P＜0．05）。survivin基因表达与胃癌组织分化程度，临床分期及淋巴结转移呈正相关，p53与survivin基因表达显著相关，k-ras蛋白表达与survivin基因表达无明显相关性（P＞0．05）。结论：（1）survivin基因在胃癌组织中表达上调，提示该基因对胃癌发生发展起重要的作用。survivin基因的异常表达提示胃癌预后不良。（2）抑癌基因p53的失活与survivin基因的表达可能在胃腺上皮细胞癌变中起协同作用，survivin基因与k-ras基因可能通过不同的机制参与胃癌的发生机理。     

急性白血病细胞bcl—2和p53基因表达的研究

目的 研究bcl-2和p53基因在急性白血病（AL）细胞中的表达及其与AL分型，临床特征，疗效及预后的关系。方法 采用免疫组化方法检测54例初治AL骨髓细胞bcl-2和p53蛋白表达情况，分析其与FAB分型，临床特征，疗效及预后的关系。结果 AL骨髓细胞中bcl-2及p53基因的表达显著高于正常对照组（P＜0．05），而在急性髓系白血病（AML）与急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达无显著差异；在AML亚型中，bcl-2在M4及M5中的表达高于M1，M2和M3（P＜0．05）；而p53的表达在各亚型中无显著性差异（P＞0．05）。bcl-2的表达与初诊时的细胞数呈正相关（R＝0．44，P＜0．05），与疗效呈负相关（R＝－0．44，P＜0．05）。结论 bcl-2和p53基因的紊乱可能达AL的发病中起作用，还与白血病的某些特征，疗效及预后密切相关。     

Different contribution of BH3-only proteins and caspases to doxorubicin-induced apoptosis in p53-deficient leukemia cells

Bcl-2 family proteins are key regulators of the intrinsic apoptotic pathway, either facilitating (Bax, Bak, BH3-only) or inhibiting (Bcl-2, Bcl-x_L, Mcl-1, A1) mitochondrial release of apoptogenic factors. The role of caspases in this process is a matter of controversy. We have analyzed the relative contribution of caspases and Bcl-2 family of proteins in the induction phase of apoptosis triggered by doxorubicin in two p53-deficient leukemia cell lines, Jurkat and U937. First, we have found that caspases are dispensable for the induction phase of doxorubicin-induced apoptosis in both cell lines but they are needed to speed up the execution phase in Jurkat cells, not expressing Bax. Thus, down-regulation of Bak expression by siRNA significantly prevented doxorubicin-induced apoptosis in Jurkat but not in U937 cells. Reduction of Mcl-1 protein levels with siRNA increased sensitivity to apoptosis in both cell lines. Moreover, our results indicate that the contribution of BH3-only proteins to apoptosis is cell line specific. In Jurkat cells simultaneous silencing of Bim and PUMA was necessary to reduce doxorubicin-induced apoptosis. In U937 cells silencing of Bim or Noxa reduced sensitivity to doxorubicin. Immunoprecipitation experiments discarded an interaction between Mcl-1 and Bak in both cell lines and underscored the role of Bim and PUMA as mediators of Bax/Bak activation.     

Apoptotic markers p53, Bcl-2 and Bax in primary lung cancer

BACKGROUND: Apoptosis is the fundamental process necessary for eliminating damaged or unwanted cells. Alterations in the apoptotic pathway appear to be key events in cancer development and progression. The aim of the study was to determine the p53, Bcl-2 and Bax expressions in lung cancer, taking into account histological heterogeneity and the adjacent bronchial resection margin. MATERIALS AND METHODS: Tissue specimens from 60 histopathologically verified lung cancer specimens and 12 bronchial stumps were evaluated. The presence of the studied markers was revealed by immunocytochemistry on paraffin-embedded tissue. RESULTS: The percentage of p53- and Bax-positive lung cancers was comparable (51.6% for both proteins), while Bcl-2 immunoreactivity was observed in fewer (31.6%) cases. There was no p53 accumulation in bronchial stumps, while Bcl-2 and Bax staining formed a repeatable specific pattern in bronchial epithelium. The differences in apoptotic marker expression between non-small cell lung cancer (NSCLC) and small cell lung cancer (SCLC) were revealed, especially regarding p53 and Bax expression (60% vs. 10%, p = 0.005 and 58% vs. 20%, p = 0.04, respectively). Taking into account the histological structure of NSCLC, Bax expression appeared to be more frequent in adenocarcinoma than in squamous cell lung cancers (88% vs. 42%, p = 0.004). No interrelationship between the studied proteins in lung cancer tissue was revealed. CONCLUSION: The expression of p53, Bcl-2 and Bax was altered in lung cancer tissue compared to histologically normal bronchial epithelium. The difference between apoptotic marker expression in NSCLC and SCLC could reflect the different pathogenesis of these two lung pathologies.     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨茅莓总皂苷对缺血性脑损伤的神经保护机制。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血2h,再灌注24 h模型,以HE染色,TUNEL标记和免疫组化的方法观察茅莓总皂苷5、10、20 mg.kg-1对凋亡细胞数目及相关蛋白Bc l-2,Bax表达的变化。结果3个剂量的茅莓总皂苷治疗组显示神经元形态病理改变明显减轻,降低残存细胞中TUNEL阳性细胞的百分率。增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,Bc l-2/Bax的表达比例增加。结论茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用,其机制可能与增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,提高Bc l-2/Bax有关。     

The course of uncarinic acid E-induced apoptosis of HepG2 cells from damage to DNA and p53 activation to mitochondrial release of cytochrome c

Uncarinic acid E, an active component isolated from Gelsemium elegans BENTH, has been reported to exhibit antitumor effects, but little is known about its molecular mechanisms of action. In this study, the growth-inhibitory activity of uncarinic acid E for HepG2 cells is in time- and dose-dependent manner. HepG2 cells treated with uncarinic acid E exhibited several typical characteristics of apoptosis through photomicroscopical observation, DNA agarose gel electrophoresis. The inhibitory effect of uncarinic acid E on HepG2 cells was partially reversed by the inhibitors of pan-caspase, caspase-3 and caspase-6. The protein expression ratio of Bcl-xL/Bax and Bcl-2/Bax was down-regulated and uncarinic acid E-induced apoptosis involves the initial phase mediated by the balance among Bcl-xL, Bcl-2 and Bax proteins, resulting in cytochrome c release from the mitochondria. Uncarinic acid E significantly increased the expression of p53 proteins indicates that p53 plays a pivotal role in the initiation phase of uncarinic acid E-induced HepG2 cell apoptosis. The phoshatidylinositol 3-kinase (PI3-K) family inhibitor wortmanin and the MEK inhibitor (PD98059) rescued the viability loss induced by uncarinic acid E through the expression of p53. Taken together, uncarinic acid E induces apoptosis in HepG2 cells via accumulation of p53, alters the Bax/Bcl-2 ratio, and activates caspases, resulting in cytochrome c release from the mitochondria.     

老年患者胃癌组织的体外化疗药敏性与凋亡抑制蛋白p53、生存素、Bcl-2表达的关系

目的探讨老年患者胃癌肿瘤组织的体外化疗药物敏感性与凋亡抑制蛋白表达的关系。方法 MTT法检测65例老年胃癌患者(≥65岁)及58例对照组患者(<65岁)肿瘤细胞原代培养药物敏感性。应用免疫组化法检测肿瘤组织凋亡抑制蛋白p53、生存素和Bcl-2的表达。结果10种化疗药物中,氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、奥沙利铂(L-OHP)、表阿霉素(eADM)、丝裂霉素(MMC)对老年患者肿瘤细胞的抑制率低于对照组(P<0.05)。老年组生存素、Bcl-2表达高于对照组(P<0.01),且两者表达存在正相关性(P<0.05);对照组p53的表达与Bcl-2存在正相关(P<0.01)。老年胃癌患者p53的表达与紫杉醇(PTX)、顺铂(CDDP)对肿瘤细胞的抑制率呈负相关(P<0.01),生存素与5-FU、PTX、L-OHP、CDDP、eADM的抑制率呈负相关(P<0.05),Bcl-2表达则与VCR、足叶乙甙(VP-16)、羟基喜树碱(HCPT)、PTX、吡喃阿霉素(THP)呈负相关(P<0.05);对照组p53与CDDP的抑制率呈负相关(P<0.05),生存素表达则与5-FU、VCR、HCPT呈负相(P<0.01),Bcl-2表达与VP-16、CDDP对肿瘤细胞的抑制率呈负相关(P<0.05),但与L-OHP的抑制率正相关(P<0.05)。结论老年胃癌患者与对照组存在不同的多药耐药表型,凋亡抑制蛋白在老年胃癌多药耐药中起重要作用。     

珍珠菜抗肿瘤有效部位对宫颈癌裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨珍珠菜抗肿瘤有效部位ZE4对裸小鼠皮下宫颈癌(HeLa)移植瘤的抑制作用及其分子机制。方法建立人宫颈癌HeLa裸小鼠移植瘤模型,观察不同浓度的ZE4对移植瘤生长的抑制作用,Western blot法检测Bax,Bcl-2,p53,p21,EGFR等蛋白的表达情况,免疫组化法检测移植瘤组织中血管内皮细胞膜抗原CD34的表达水平。结果与对照相比,ZE4对HeLa宫颈癌细胞移植瘤生长有明显的抑制作用,其中低、中剂量组效果尤为明显,抑瘤率分别可达44.57%和48.32%(与对照组相比P<0.01),且这两个剂量组的Bcl-2,EGFR蛋白的表达明显降低(P<0.01),而p53,p21,Bax蛋白的表达量则明显升高(P<0.05),免疫组化结果显示ZE4能有效抑制血管内皮细胞膜抗原CD34的表达。结论低、中浓度的ZE4对宫颈癌有明显的抑制作用,其抑瘤作用可能与诱导p53等凋亡相关蛋白表达及引起细胞周期阻滞有关,其中抑制血管生成及表皮生长因子EG-FR的表达也起了部分作用。