RP-HPLC法测定健康者尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量

目的建立RP-HPLC法同时检测人尿样中内源性氢化可的松及其代谢产物6β-羟基氢化可的松的含量。方法采用岛津Insertil ODS-3反相色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）进行梯度洗脱,柱温为30℃,流动相为水-乙腈,检测波长240nm。尿样用液-液萃取法处理,萃取剂为乙酸乙酯。结果 6β-羟基氢化可的松和氢化可的松标准曲线分别为y=0.004 l x-0.119 2,r=0.999 0;y=0.0127x-0.050 5,r=0.997 8,两者回收率均>95%,日内、日间RSD均<5%。20名健康志愿者尿中6β-羟基氢化可的松与氢化可的松质量浓度分别为（151.90±94.05）和（26.38±20.07）μg·L^-1,比值为6.32±2.36。结论本方法专属性强、灵敏度高、简单可靠,适用于大样本分析。     

高效液相色谱法测定尿中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的含量

目的:建立测定尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松含量的方法.方法:尿样9 mL以5 mL醋酸乙酯-乙醚(4∶1)提取后,有机相以氮气吹干,以甲醇溶解后进样,检测波长为240 nm.结果:6β-羟基氢化可的松和氢化可的松标准曲线方程分别为Y=0.033X-0.007,r=0.998 9和Y=0.067X 0.002,r=0.999 6;两者的回收率分别为98.56%和99.45%;RSD分别为4.47%和3.85%.10例健康志愿者的定时尿中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量分别为(194.1±66.8) μg·L-1和(24.0±9.4) μg·L-1.两者之间的比值为(8.5±2.9).结论:本法灵敏可靠,符合人体尿样中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松测定的要求.     

RP-HPLC法同时测定人血清中内源氢化可的松与可的松的含量

目的:建立测定人血清中内源性氢化可的松与可的松含量的方法。方法:采用迪马Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-甲醇(51:136:77);流速:1.2 ml·min~(-1);紫外检测波长:245 nm;柱温:30℃;进样量:30μl。结果:氢化可的松在50.0～300.0μg·L~(-1),可的松在10.0～100.0μg·L~(-1)的浓度范围内线性关系良好。氢化可的松与可的松的方法回收率分别为(101.83±1.19)%和(100.52±5.91)%。92名健康者血清中氢化可的松、可的松的浓度分别为(111.60±27.30)和(18.66±4.44)μg·L~(-1),其比值为(6.08±1.10)。结论:本法操作简便,灵敏度高,快速可靠,适用于氢化可的松与可的松含量的测定,为研究人体肝脏11β-羟基类固脱氢酶(11β-HSD)的活性及调整激素治疗方案提供有效的分析手段。     

反相高效液相色谱法测定注射用氢化可的松琥珀酸钠的含量

目的:采用反相高效液相色谱法测定注射用氢化可的松琥珀酸钠中21-氢化可的松半琥珀酸钠、17-氢化可的松半琥珀酸钠与游离氢化可的松的量.方法:ODS柱(4.0×250mm,10μm),流动相为甲醇:磷酸盐缓冲液,用0.008mol/L K2HP04溶液调节0.008mol/L KH2 P04溶液至pH=5.0)(43 : 57),检测波长242nm,流速1.0ml/min,柱温40℃.结果:氢化可的松琥珀酸钠的平均回收率99.68%.RSD为0.26%,氢化可的松琥珀酸钠在0.16～1.44μg浓度范围内呈良好线性,r=0.9999.游离氢化可的松在0.240～0.560μg浓度范围内呈良好线性,r=0.9999.结论:该方法快速、准确、灵敏,并能更好地控制药品质量.该方法已被中国药典2000年版2002增补本收载.     

高效液相梯度洗脱法测定尿液中羟基氢化可的松和氢化可的松的含量

目的用HPLC法(梯度洗脱)测定尿液中6β-羟基氢化可的松(6β-OHC)和氢化可的松(HC)的含量,计算6β-OHC和HC的比值以反映人体中CYP3A酶的活性,为其研究提供有效的分析手段.方法采用YMCPACK-ODS-A色谱柱(250mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%硫酸铵水溶液梯度洗脱,流速1 ml·min-1,紫外检测波长240 nm.结果尿液中6β-OHC在20～800ng·ml-1浓度范围内(r=0.998 6),HC在10～480ng·ml-1浓度范围内(r=0.999 9)线性关系良好,6β-OHC和HC的加样回收率分别为(99.8±3.6)%和(101.8±2.9)%,63名正常儿童的尿液中6β-OHC和HC的平均浓度分别为(109.94±57.13)ng·ml-1和(18.87±12.89)ng·ml-1,其比值为8.02±5.28.结论本法操作简便、快速,准确度较高,适合人体尿样中糖皮质激素含量测定.     

内源性氢化可的松为探针的体内CYP3A活性测定

目的建立测定精神病患者体内CYP3A酶活性的方法。方法直接收集20例精神病住院患者晨尿液,测定尿液中内源性氢化可的松与6β-羟基氢化可的松的含量,以6β-羟基氢化可的松/氢化可的松来评估CYP3A酶的活性。结果患者尿液中6β-羟基氢化可的松与氢化可的松的比值为(8.12±4.36)。结论CYP3A酶的活性可以通过测定6β-羟基氢化可的松与氢化可的松的比值进行预测。     

HPLC-ELSD法同时测定新氢化可的松乳膏中硫酸新霉素和氢化可的松的含量

目的建立HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)法,同时测定新氢化可的松乳膏中硫酸新霉素和氢化可的松的含量。方法色谱条件:C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1 mol/L三氟乙酸溶液(梯度洗脱);漂移管温度:110℃;载气流速:2.6 L/min。用硫酸新霉素和氢化可的松对照品分别测定新氢化可的松乳膏中硫酸新霉素和氢化可的松的含量。结果硫酸新霉素进样量在0.7～4.3μg范围内(r=0.999 7),氢化可的松进样量在1.0～2.9μg范围内(r=0.999 9)。结论该方法快速、简便、重现性好,灵敏度高。     

HPLC法测定肾移植患者血清中内源性氢化可的松浓度

目的:建立测定肾移植患者血清中内源性氢化可的松浓度的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈-水-甲醇(51∶136∶77),流速为1.2 mL·min-1,紫外检测波长为245 nm,柱温为30 ℃,进样量为30 μL。结果:氢化可的松血药浓度在50～300 μg·L-1范围内线性关系良好,最低检测限为8 μg·L-1;日内、日间RSD分别为4.04%～6.81%、4.09%～9.16%,低、中、高3种浓度的方法回收率分别为(103.12±4.53)%、(100.77±4.07)%、(101.61±6.92)%。肾移植患者内源性氢化可的松术后1～3、3～6、6～12、>12个月的浓度分别为(31.89±21.42)、(45.26±29.26)、(49.69±22.00)、(53.56±29.86)μg·L-1。结论:本法操作简便、灵敏度高、快速可靠,适用于肾移植患者血清中内源性氢化可的松浓度的测定。     

HPLC法测定维丁乳膏中2主药的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定维丁乳膏中2主药含量的方法。方法:色谱柱为YWG-C18,柱温为30℃,进样量为20μL,2组分丁酸氢化可的松和维生素E(VitE)的流动相分别为水-乙腈-冰醋酸(55:45:0·5)、甲醇-乙醚(90:10),检测波长分别为240、285nm。结果:丁酸氢化可的松和VitE检测浓度的线性范围分别为15～65(r=0·9999)、200～950mg·L-1(r=0·9996);平均回收率分别为97·9%(RSD=0·7%,n=6)、97·3%(RSD=1·7%,n=6)。结论:本方法准确、可靠、重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

RP-HPLC测定氧氟沙星氢化可的松滴耳液的含量

目的:建立氧氟沙星氢化可的松滴耳液含量测定的方法。方法:采用RP-HPLC法测定滴耳液中氧氟沙星与氢化可的松的含量。色谱柱为Poresphere C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.025 mol·L~(-1)磷酸溶液(用三乙胺调pH至3.0)(55:45);流速0.8 ml·min~(-1);检测波长为240 nm;检测灵敏度为0.16AUFS,进样量20μl。结果:氧氟沙星在30～480μg·ml~(-1)浓度范围内,峰面积与浓度的线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.8%;氢化可的松在5～80μg·ml~(-1)浓度范围内,峰面积与浓度的线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.9%。结论:本方法快速、简便,精密度好,重复性好,可作为氧氟沙星氢化可的松滴耳液的含量测定方法。     

Urinary 6β-Hydroxycortisol/Cortisol Ratio Most Highly Correlates With Midazolam Clearance Under Hepatic CYP3A Inhibition and Induction in Females: A Pharmacometabolomics Approach

Endogenous metabolites of cytochrome P450 (CYP3A) are useful in predicting drug-drug interactions between in vivo CYP3A inhibitors and inducers for clinical applications of CYP3A substrate drugs. This study aimed to develop predictable markers of the magnitude of hepatic CYP3A induction and inhibition in healthy female subjects using pharmacometabolomics. Twelve female subjects received midazolam during three study phases: 1 mg midazolam (control phase), 1 mg midazolam after pretreatment with 400 mg ketoconazole once daily for 4 days (CYP3A inhibition phase), and 2.5 mg midazolam after pretreatment with 600 mg rifampicin once daily for 10 days (CYP3A induction phase). Throughout the study, blood samples were collected 24 h after midazolam administration and urine samples at 12-h intervals during the 24 h before and after midazolam administration for the analysis of endogenous steroid metabolites. A statistical model was generated to predict midazolam clearance using measurements of endogenous metabolites associated with the inhibition and induction of CYP3A. Mean midazolam clearance decreased to ～20% of control levels during the inhibition phase and increased more than 2-fold during the induction phase. Of the urine and plasma metabolites measured, the 6β-hydroxycortisol/cortisol ratio was most significantly correlated with midazolam clearance during hepatic CYP3A inhibition and induction. Our results suggest that the urinary 6β-hydroxycortisol/cortisol ratio is the best predictor of hepatic CYP3A activity under both maximal inhibition and maximal induction. Furthermore, the predictive model including 6β-hydroxycortisol/cortisol as a covariate could be applied to predict the magnitude of CYP3A-mediated drug interactions.     

反相高效液相色谱法测定兔血浆中硝洛地平浓度

目的 :建立硝洛地平兔血浆样本固相萃取反相高效液相色谱分析方法。方法 :正交设计优选色谱条件及萃取条件 ,以非洛地平为内标 ,采用C18 固相萃取柱 ,色谱柱采用NOVA -PackC18 柱 (4 6mm×250mm ) ,检测波长为237nm。结果 :色谱条件为 :流动相 :乙腈 -水 (55∶45) ;流速 :1 0ml/min ;柱温 :45℃ ;萃取条件为 :A1B1C3。血浆样品在6 25～400μg/L浓度范围内呈现良好线性关系 ,r=0 9996 ;最低检测浓度为2 5μg/L。日内精密度RSD为3 81 %～5 58 % ;日间精密度RSD为4 60 %～8 76 % ;方法回收率为100 7 %～101 8 %。结论 :本方法灵敏度高、选择性强、简便快速、重现性好 ,可作为硝洛地平血浆样本测定方法     

离子色谱法测定尿碘浓度

目的:建立测定人尿样中碘离子浓度的离子色谱法。方法:采用离子色谱,在IonPacAS7柱上,用50mmol/L的硝酸为淋洗液测定尿液中碘离子的含量。检测方式为直流安培检测,工作电极为Ag电极,参比电极为Ag/Agcl电极。结果:碘离子浓度检测线性范围为50～1000μg/L(r=0.9998),平均回收率为95.8%～97.0%,相对标准偏差为2.6%～3.7%;测得的正常人尿碘浓度为100～300μg/L。结论:该方法稳定、准确、快速,可用于实际样品的测定。     

HPLC柱切换法测定血浆和尿样中头孢克肟浓度

用双泵HPLC柱切换系统直接进样测定血浆和尿样中头孢克肟(cefixime,CFIX)的浓度。血浆和尿样的回收率分别为99.1%和98.6%;最低检测浓度分别为0.05和0.2μg/ml;日内和日间的RSD小于5%;血浆和尿样浓度分别在0.1～3.2和1.0～32μg/ml范围内呈线性相关。此方法集样品净化、富集成分和色谱分析一次连续进行,操作简便、快速,可以进较大的样品量,灵敏度相对明显提高。     

EFFECT OF GRAPEFRUIT JUICE ON URINARY 6β-HYDROXYCORTISOL/CORTISOL EXCRETION

1. The aim of the present study was to evaluate the effect of grapefruit juice on urinary 6β-hydroxycortisol and Cortisol excretion in healthy subjects. 2. The ratio of 6β-hydroxycortisol/cortisol was significantly decreased (P= 0.036) in the 0–4 h fraction of urine after ingestion of grapefruit juice, but not in the 4–24 h fraction (P= 0.218) or for the compiled data, fraction 0–24 h (P= 0.114). 3. These results indicate that endogenous Cortisol metabolism may not only be of hepatic origin, but may also be dependent on the metabolic capacity of cytochrome P450IIIA (CYP3A) in the gut mucosa. 4. This finding may cast further doubts of the usefulness of the 6β-hydroxycortisol/cortisol ratio as an indicator of hepatic CYP3A activity.     

高效液相色谱法测定人血浆中顺铂的含量

目的建立以高效液相色谱法测定人血浆中顺铂含量的方法。方法色谱柱为Hypersil-ODS2,流动相为0.25mol/L氯化钠溶液-甲醇(29∶71),流速为1.1ml/min,检测波长为254nm,柱温为38℃。结果顺铂的线性范围为0.2~10μg/ml(r=0.9998),平均回收率为100.72%(n=5),最低检测浓度为0.1μg/ml。结论本方法是检测顺铂血药浓度的一种有效方法。     

反相高效液相色谱法同时测定复方苯甲酸酊中苯甲酸和水杨酸的含量

目的 :建立同时测定复方苯甲酸酊中苯甲酸和水杨酸含量的反相高效液相色谱法。方法 :采用 μBondapakC18 柱 ;流动相为甲醇 -0 02mol/LKH2PO4 溶液 (磷酸调 pH至3 1) (60∶40) ;检测波长为270nm。结果 :水杨酸和苯甲酸的线性范围分别为5～25μg/ml (r=0.9995)、10～50μg/ml (r=0.9998) ;加样回收率分别为100.4 % (RSD=0.85 % )、99.8 % (RSD=0.77 % ) ;日内RSD分别为0.84 %、0.56 % ;日间RSD分别为1.05 %、0.74 % (n=5)。结论 :反相高效液相色谱法适用于本制剂的含量测定 ,符合质量控制要求 ,方法简便、灵敏 ,测定结果准确。     

高效液相色谱法测定母乳中奥硝唑的方法学研究

目的 :建立高效液相色谱测定母乳中奥硝唑浓度的方法。方法 :以C8 柱 (4 0mm×150mm ,5μm)为色谱柱 ,甲醇 -水(30∶70)为流动相。母乳样品用乙腈直接沉淀蛋白 ,无须经过有机溶剂提取直接进样分析。结果 :母乳中内源性物质不干扰奥硝唑的测定 ,奥硝唑在2 0～30 0μg/ml浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好 (r=0 9997) ,最低检测限为0 49μg/ml。平均回收率为 (99 67±0 54) % ,高、中、低3种浓度的日内RSD≤2 5 % ,日间RSD≤2 1 %。结论 :本方法简便、快速、准确 ,重现性好 ,可应用于奥硝唑在母乳中的药动学研究