McAb Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的现场应用及疗效考核

我们用中国预防医学科学院寄生虫病研究所检测血吸虫病人循环抗原的单克隆抗体Dot—ELISA(McAb Dot—ELISA)试剂盒在四川省几个地区作现场应用,结果如下.检测对象粪孵阳性的慢性血吸虫病人;健康献血员;华支睾吸虫病人;肺吸虫病人;不同血吸虫病流行区村民.     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅰ

将血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体用于Dot—ELISA,共检测2175份血清,其中急性血吸虫病血清210份,阳性率为91.9％;慢性血吸虫病血清798份,阳性率为86.7％;正常人血清752份,假阳性率为1.1％;除肺吸虫病外,对其他寄生虫病或非寄生虫感染疾病血清无明显交叉反应。用单盲法Dot—ELISA检测3批血清,结果敏感性为86.5％～95.1％;特异性为96.9％～100.0％。检测流行区居民547份血清,Dot—ELISA阳性反应130份;粪检阳性72例。两者均为阳性者55例,相符率为76.4％。上述结果表明,Dot—ELISA检测循环抗原确实具有较好的敏感性与特异性,适于大规模应用及流行病学调查。     

应用ABC—Dot—ELISA检测弓形虫抗体的研究

应用弓形虫可溶性抗原行ABC—Dot—ELISA,对10份病人血清28份感染兔血清和10份阴性人血清及38份阴性兔血清进行检测,与常规Dot—ELISA相比,两者的符合率一致,但其敏惑度可提高5.0倍。与卫氏并殖吸虫、华枝睾吸虫和日本血吸虫病人和感染动物,进行了交叉反应,除与急性血吸虫病人出现阳性反应(14/16)外,其余未见交叉反应。阳性血清经吸收抑制后,抗体滴度下降明显。本法特异性高、敏感性强、重复性好,抗原可长期保存;结果判断方便,阳性反应斑点经久不退,可待复查。     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。     

Dot-ELISA检测血吸虫病人循环抗原及抗体的研究

用Dot-ELISA平行检测日本血虫病人循环抗原及抗体。循环抗原测定结果表明,30例急性血吸虫病人、51例慢性血吸虫病人及30例经吡喹酮治疗后5～6年的病人血清的阳性率分别为86.7%、78.4%及23.3%。30例华枝睾吸虫病人血清未出现交叉反应。40例健康人血清中有1例出现弱阳性反应。抗体测定结果表明,上述急性、慢性及治疗后病人血清的阳性率分别为100.0%、96.1%及30.0%;平均效价为1:367.6、1:181.7及1:9.8。有2例华枝睾吸虫病人出现交叉反应,其效价均为1:80,健康人均为阴性。循环抗原与抗体测定结果大多数相一致。     

鄱阳湖区血吸虫病人免疫状态研究Ι血吸虫病人特异性同种型抗体特征分析

目的了解鄱阳湖区血吸虫病人特异性同种型抗体反应水平及特征。方法以可溶性虫卵抗原(SEA)和成虫抗原(AWA)为检测抗原,采用间接ELISA法检测血吸虫病流行区及非流行区人群血清中8种特异性同种型抗体(IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgM、IgA)水平。结果血吸虫病流行区粪检阳性人群特异性同种型抗体水平显著高于流行区粪检阴性人群和非流行区人群(P均<0.001),流行区粪检阴性人群除SEA和AWA特异性IgG2、IgG4和抗AWA IgE抗体外,其他同种型抗体水平均显著高于非流行区人群(P均<0.05)。流行区粪检阳性人群中,儿童SEA、AWA特异性IgM和SEA IgG1水平显著高于成人,AWA特异性IgG水平则显著低于成人(F=6.136,P=0.014);男性除AWA特异性IgG(F=4.677,P=0.032)和IgG1(F=5.55,P=0.020)显著高于女性外,其他抗体同种型之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗3个月后,SEA抗原特异性IgG1、IgG3、IgG4抗体水平显著下降(P<0.001,P=0.029,P=0.044);治疗12个月后,除SEA特异性IgE、IgM和AWA IgG4、IgM外,其他抗体均显著低于治疗前水平(P均<0.05)。结论血吸虫病流行区粪检阳性人群血吸虫特异性同种型抗体水平显著高于流行区粪检阴性人群和非流行区人群,治疗12个月后,大部分同种型抗体水平显著下降;流行区粪检阴性人群血吸虫特异性抗体水平高于非流行区人群。抗体诊断试剂盒研制应注意阴性参考血清的选择。     

双夹心DIGFA检测血吸虫循环抗原的应用研究

以日本血吸虫重组极低密度脂蛋白（ＳＶＬＢＰ）制备的多抗为捕捉抗体，胶体金标记血吸虫虫卵多克隆抗体为覆盖抗体，采用双夹心金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）检测血吸虫病病人血清中循环抗原。结果７０份急性血吸虫病病人血清的阳性率为１００％，１５９份慢性血吸虫病病人血清的阳性检出率为６２．３％；１２０份流行区健康人群血清检测均阴性；１００份非流行区健康人群血清，２份呈阳性反应，假阳性率为２％。与肺吸虫病病人血清     

量化检测日本血吸虫循环抗原的初步研究

目的探索量化检测日本血吸虫循环抗原的方法。方法用AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA(S-ELISA)检测SEA-TCA抗原,并根据测得的OD490值和相应抗原浓度计算回归方程式,再用该法和fSjc26GST-PcAb双抗体夹心ELISA方法检测急慢性日本血吸虫病人的血清循环抗原。并初步应用于检测流行区和传播阻断地区的人群血清循环抗原。结果AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA测得SEA-TCA浓度(y)与OD490值(x)呈明显的正相关(r=0.981,y=128.08x-46.95);血清循环抗原的平均含量,急性血吸虫病人(206.27±36.62 ng/ml)显著高于慢性血吸虫病人(122.88±75.13 ng/ml)。两组双抗体S-ELISA检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率均为100%(34/34),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率则分别为87.50%(70/80)和78.57%(63/80),特异性分别为90.74%(98/108)和92.59%(100/108)。用以上两法对流行区和传播阻断地区的人群血清进行循环抗原检测,其阳性率分别为34.52%(87/252)和9.72%(49/504),具有显著性差异。结论两组双抗体S-ELISA用于检测日本血吸虫循环抗原均有较好的效果,其中AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA能量化检测日本血吸虫循环抗原。     

检测血液中循环抗原和抗体诊断血吸虫病应用价值的研究

为了解血液中循环抗原和抗体与血吸虫病的关系,我们利用单克隆抗体Dot—ELISA试验和DGS—COPT试验,对宿主血液中循环抗原和抗体进行了检测,并对诊断血吸虫病的应用价值进行研究,现报告如下.     

双夹心DIGFA检测血吸虫循环抗原的应用研究

以日本血吸虫重组极低密度脂蛋白 ( SVL BP)制备的多抗为捕捉抗体 ,胶体金标记血吸虫虫卵多克隆抗体为覆盖抗体 ,采用双夹心金标免疫渗滤法 ( DIGFA)检测血吸虫病病人血清中循环抗原。结果 70份急性血吸虫病病人血清的阳性率为 10 0 % ,15 9份慢性血吸虫病病人血清的阳性检出率为 6 2 .3% ;12 0份流行区健康人群血清检测均阴性 ;10 0份非流行区健康人群血清 ,2份呈阳性反应 ,假阳性率为 2 %。与肺吸虫病病人血清的交叉反应率为4.0 % ( 1/ 2 5 ) ;与华支睾吸虫病病人血清未见交叉反应。提示该法具有较高的敏感性和特异性 ,判断结果比较客观 ,且简便、快速 ,适合于基层医院及现场应用     

Dot－ELISA检测抗原与IHA、COPT检测抗体诊断血吸虫病的比较

本文比较了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测循环抗原，间接血凝试验（ＩＨＡ）、环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）检测抗体诊断血吸虫病的效果。１２例急性血吸虫病患者血清３种方法检测均为阳性；２７７例慢性血吸虫病患者血清３种方法检测阳性率分别为７９．４２％、６４．６２％和６３．１８％。１４例华支睾吸虫病患者血清和８９例健康人血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测均为阴性。１０例急性血吸虫病患者，在离开流行区经吡喹酮治疗后３７周时粪检全部转阴，检测血清循环抗原４例转阴，其余６例滴度大幅度下降；ＩＨＡ检测３例转阴，其余７例几何平均倒数滴度（ＧＭＲＴ）由４７．５７降至９．３５；ＣＯＰＴ检测平均环沉率由２１．５％降至４．１２％。结果表明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测血吸虫循环抗原具有较好的敏感性和特异性。这３种方法在血吸虫病诊断及疗效考核中均有一定价值。     

抗日本血吸虫单克隆抗体的制备及其在诊断中的应用

The present paper reported on an anti-CCA monoclonal antibody, McAb-IIID 10, which could be used in determinations of both parasite-oriented circulating antigens and specific anti-CCA antibodies. The established competitive ELISA (C-ELISA) using McAb-IIID 10 to detect schistosome-antibodies showed high sensitivity and specificity in the diagnosis of schistosomiasis with few cross-reactions. In field trials, coincident rates in 3 separate batches of serum samples when subjected to double-blind detections were obtained. A total of 1,915 serum samples had been determined by C-ELISA, among them 113 acute cases achieved a 100% positive rate, 765 chronic and 25 late cases showed 96.3% and 72% positive respectively. 70% of the 66 cured schistosomiasis cases turned to be negative. None of the 750 normal individuals showed positive reactions. No cross reaction was found in 27 sera from hydatidosis, whereas 1 and 2 positive reactions were found in 43 paragonimiasis sera and 126 clonorchiasis sera respectively. The established McAb-IIID 10 involved Dot-ELISA was found of value in the assessment of effective chemotherapy and showed a high negative conversion rate of 97.9% in 48 cured schistosomiasis patients. In 16 experimentally infected rabbits, 12 became negative in Dot-ELISA determinations at the 8th week post treatment, and the remaining 4 treated ones, the titer as well as the reaction intensity were also found reduced. A good coincidence rate was also found between C-ELISA and Dot-ELISA, their detection results may be complementary each other.     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

Dot-IGSS检测日本血吸虫病人血清抗体的研究

运用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)检测了日本血吸虫病人血清抗体,并与斑点酶联免疫试验(Dot-ELISA)作了比较。检测了急性血吸虫病人血清38份,两法结果全部阳性;慢性血吸虫病人血清70份,Dot-IGSS阳性69份(98.6％),Dot-ELISA阳性65份(92.9％);治疗后血吸虫病人血清40份,Dot-IGSS阳性15份(37.5％),Dot-ELlSA阳性11份(27.5％)。用两法检测华枝睾吸虫病人血清20份,均有1份为阳性;检测正常人血清40份,均未出现阳性反应。将8份阳性血清作倍比稀释(1:20～1:61440)后分别用该两法检测,Dot-IGSS的敏感性明显高于Dot-ELISA(P<0.05)。对120例过去无血吸虫病史、接触疫水且皮试阳性者血清检测结果表明,Dot-IGSS的阳性检出率明显高于Dot-ELISA、COPT及循环抗原测定法(P<0.01)。     

双抗体夹心-ELISA用于旋毛虫活动性感染的诊断及疗效考核

目的检测宿主血清中旋毛虫循环抗原 ( CAg)以诊断本病和考核药物疗效。方法双抗体夹心 -ELISA法。结果 94只实验感染旋毛虫小鼠 ,受染 3d后 ,即有 7%的小鼠显示阳性反应 ,受染 30 d,无论受染幼虫数目多寡 ( 50、1 50及 30 0条幼虫 /只 ) ,全部受染鼠 ( 1 0 0 % )均显示阳性反应。给予丙硫咪唑治疗后的第 1周 ,CAg的阳性率仍为 1 0 0 % ,但在治疗后第 2、3及 4周 ,则分别降为 60 %、2 0 %及 1 0 %。检测 61头感染旋毛虫猪血清中 CAg,4 0头 ( 65.6%± 6.1 % )呈阳性反应。 1 0 0头正常猪均为阴性 ,30头感染囊尾蚴和 30头感染弓形虫的猪 ,仅 1头感染弓形虫的猪出现轻度交叉反应。检测 36例旋毛虫病人血清中 CAg,2 6例 ( 72 .2 % )呈阳性反应。 50例正常人皆为阴性。 1 4 2例其他 9种寄生虫病人 ,仅 1例囊尾蚴病人出现轻度交叉反应。结论旋毛虫 CAg的检测具有早期诊断和考核药物疗效的价值。     

检测循环表膜抗原考核血吸虫病治疗效果的实验观察

本实验结果证明血吸虫感染免经吡喹酮治疗后循环表膜抗原逐渐下降。用斑点—ＥＬＩＳＡ检测结果表明：接种４条及１０条尾蚴的家兔于治后３个月，接种５０条及１００条尾蚴的家兔于治后６个月循环表膜抗原转为阴性．据此认为检测循环表膜抗原考核治疗效果较检测抗休具有阴转快的优点，值得在病人中进一步验证。     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。