Bio-oss骨粉对人胎盘来源间充质干细胞体外成骨活性影响的研究

目的: 研究人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)与Bio-oss骨粉结合后的增殖分化情况,探讨以人胎盘源干细胞(HPMSCs)作为种子细胞,Bio-oss骨粉作为支架材料联合构建组织工程化生物衍生骨的可能性。方法: 无菌条件下分离培养人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)并检测其分化能力。将细胞分为单独培养组与复合Bio-oss骨粉培养组。观察细胞与支架材料结合情况并在细胞形态特点、增殖分化能力方面将两组细胞进行比较。结果: 人胎盘源间充质干细胞与Bio-oss骨粉复合培养后,细胞形态、增殖分化能力与对照组人胎盘源间充质干细胞无明显差异。结论: 以人胎盘源干细胞(HPMSCs)为种子细胞、Bio-oss骨粉为支架复合培养构建组织工程化衍生骨是可行的。     

大鼠骨髓基质干细胞体外培养及成骨作用的实验研究

目的研究大鼠骨髓基质干细胞在体外条件培养下的成骨能力，为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法取大鼠骨髓基质干细胞进行体外培养，用倒置相差显微镜、钙染色、扫描电镜和X线能谱等手段观察细胞的生长情况和矿化能力。结果细胞呈贴壁型生长，形态为梭形或多角形，在条件培养液中这些细胞间不发生接触抑制，而是相互重叠成多层，形成钙化结节，与成骨细胞的特点相符合。碱性磷酸酶染色呈强阳性，结节钙染色阳性，X线能谱分析显示结节的主要组成元素为钙和磷。结论体外培养的大鼠骨髓基质干细胞具有与成骨细胞相似的形态特征，并能在体外形成钙化的新骨结节。     

血管内皮细胞对骨髓间充质干细胞成骨能力影响的体外研究

目的研究血管内皮细胞对骨髓间充质干细胞成骨能力的影响.方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞和肾血管内皮细胞,三维培养体系中直接、间接接触培养后,检测细胞中蛋白质和骨钙素含量及碱性磷酸酶活性.结果直接、间接接触培养及单独培养的骨髓间充质干细胞蛋白质含量为(0.195±0.023) mg/mL、(0.174±0.015) mg/mL、(0.152±0.015) mg/mL、(0.141±0.014) mg/mL;碱性磷酸酶活性分别为(0.625±0.223) μ/mg、(0.412±0.178) μ/mg、(0.141±0.08) μ/mg ;骨钙素含量分别为(0.800±0.124) μg/L、(0.435±0.216) μg/L、(0.235±0.146) μg/L.经方差分析各组差异显著(P<0.05).结论骨髓间充质干细胞与血管内皮细胞接触培养有良好的细胞相容性,血管内皮细胞可以显著提高骨髓间充质干细胞的增殖能力和成骨能力.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠下颌骨缺损Bio-oss植骨的影响

目的研究外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠下颌骨缺损Bio-oss植骨愈合的影响。方法选用48只体重约450g的Wistar大鼠随机分为2组,实验组24只,对照组24只。在大鼠左侧下颌角处制备5mm×4mm×2mm的骨缺损区。实验组植入含有基因重组大鼠碱性成纤维细胞生长因子的Bio-oss颗粒。对照组植入含生理盐水的Bio-oss颗粒。于术后2、4、6、8周分四批处死大鼠,取其左侧下颌骨进行X线和组织学检查。结果术后各个阶段实验组骨愈合的速度均高于对照组。结论外源性碱性成纤维细胞生长因子与Bio-oss复合后对大鼠下颌骨缺损的修复效果明显优于单纯应用Bio-oss骨。     

兔骨髓干细胞和脂肪干细胞体外成骨能力的比较

目的:评价两种不同来源的间充质干细胞,即骨髓干细胞(BMSC)和脂肪干细胞(ADSC)的体外成骨能力,为其将来应用于细胞治疗和组织工程研究提供一定的理论依据。方法:分别取同一只兔的髂骨骨髓和腹股沟脂肪作为BMSC和ADSC的来源,分离培养后比较成骨、成脂分化潜能,细胞表面抗原标记物;成骨诱导后检测碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR分析其成骨相关基因的表达情况。结果:BMSC和ADSC都具有向成骨、成脂分化的潜能;在成骨诱导分化后,BMSC有较高的ALP活性和较多的钙结节形成。RT-PCR结果显示:BMSC表达较高的BMP-2、OCN和OPN等成骨基因。结论:BMSC和ADSC都具有向成骨、成脂分化的潜能,ADSC有较好的成脂分化能力,BMSC有较好的成骨分化能力;两者都可以作为组织工程的种子细胞。     

Bio-oss骨粉复合HIF-1α蛋白对拔牙创骨愈合影响的实验研究

目的:研究Bio-oss骨粉复合HIF-1α蛋白对拔牙创骨愈合的影响。方法:全麻下完整拔除3只Beagle犬的双侧下颌二、四前磨牙近中根,随机选择一个牙槽窝作为空白对照组,其余即刻分别植入bio-oss骨粉、bio-oss复合浓度为100 μg/L的HIF-1α蛋白,分别与术后6、12周取材,进行Micro-CT扫描、硬组织切片染色,观察拔牙创的骨愈合情况和组织病理学变化。结果:Micro-ct扫描显示,第6周时各组骨小梁数目、骨密度和BV/TV均有一定的差别。第12周时, bio-oss复合浓度HIF-1α组与bio-oss骨粉组、空白组差别显著(P<0.05),差别有统计学意义。硬组织切片显示第12周时,bio-oss复合HIF-1α组有良好的新骨形成。结论:Bio-oss骨粉复合HIF-1α蛋白骨修复材料可以促进拔牙创的愈合。     

富血小板血浆对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨影响的实验研究

目的:探讨富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bonemarrowmesenchymal stem cells,rBMSC)体外成骨能力的影响。方法:体外分离、培养rBMSC,经细胞表面标记物检测和体外诱导分化鉴定后,分别采用MTT法检测PRP对细胞增殖活性的影响;细胞化学法检测PRP对成骨诱导后rBMSC碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性的影响;RealTime-PCR检测PRP对细胞成骨分化指标Col-3、OPN mRNA表达水平的影响;扫描电镜观察PRP对rBMSC在Bio-Oss上粘附的影响。结果:rBMSC传代后细胞生长状态相对稳定,呈梭形;细胞表面标记物CD29阳性率为88.2%,CD90阳性率为98%,CD34细胞阴性率为2.8%,CD45细胞计数阴性率为2.7%;成骨诱导21 d后,茜素红染色可见明显矿化结节;成脂诱导14 d后,油红O染色可见红色脂滴形成。MTT检测,10%PRP组在培养1、3、5、7、9 d各时间点的OD值均显著高于空白对照组(P<0.05)。ALP染色显示,无论是诱导培养7 d还是14 d,成骨诱导液+PRP组的ALP活性均明显高于单纯成骨诱导液组,差异有统计学意义(P<0.05);另外,各组不同诱导培养时间点相比还发现,无论是实验组还是对照组,在诱导7 d时,ALP活性均较低;而在14 d,ALP的活性明显升高。RealTime-PCR检测显示,单纯10%PRP诱导培养7 d和14 d后细胞Col-3、OPN mRNA水平虽稍低于成骨诱导液组,但明显高于空白对照组,而10%PRP联合成骨诱导液诱导培养7 d和14 d的Col-3、OPN mRNA的表达量更高,与其他各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。另外各组诱导培养14 d的Col-3、OPN mRNA水平显著高于相应的7 d组(P<0.05)。扫描电镜结果显示PRP明显促进rBMSC在Bio-Oss骨粉上的粘附与伸展。结论:PRP对rBMSC的增殖、成骨分化,以及在生物材料上的粘附能力均具有明显的促进作用。     

小鼠骨髓基质细胞Kusa-Al体外成骨活性评价

目的：检测骨髓基质细胞系Kusa-Al体外成骨活性，分析其用于成骨细胞功能和分化机制研究的价值。方法：培养Kusa-Al细胞，在常规培养和成骨诱导培养条件下，分别检测细胞的体外成骨活性，包括碱性磷酸酶(ALP)活性、细胞钙沉积能力、体外矿化结节(CN)形成能力、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(0c)表达水平、NF-κB受体激活因子(RANKL)水平。结果：常规培养下，Kusa-Al细胞表现出较高碱性的ALP活性(约为0．75IU／mg)、一定的钙沉积能力，并可检测到OPN和OC表达，但无CN形成，RANKL蛋白低于可检测水平。诱导培养条件下，细胞ALP活性先升高后降低、钙沉积量持续升高、OPN和OC表达水平后期显著提高，汇片后3～7d检测到大量CN形成，汇片后24h可检测到RANKL蛋白。结论：Kusa-Al可能是一种成骨前体细胞，经诱导可以向成骨细胞分化，在体外表现出良好的成骨细胞活性。Kusa-Al细胞可作为成骨细胞功能及其分化机制研究的模型细胞。     

雌激素对老年大鼠脂肪干细胞体外诱导成骨能力的影响

目的：通过观察雌激素对老年大鼠脂肪干细胞（ADSCs）体外增殖和成骨分化能力的影响,进一步明确雌激素水平和增龄变化与骨代谢相关性。方法：选取18月龄雌性SD大鼠ADSCs,雌激素刺激浓度为10-7mol/L,采用MTT法,茜素红染色及生化检测雌激素对ADSCs体外增殖与成骨分化能力的影响。结果：成骨诱导21d镜下观测含雌激素组茜素红染色阳性面积大于常规诱导组,非诱导组染色阴性。RT-PCR半定量检测显示含雌激素组较常规诱导组OCN表达强烈。结论：雌激素能增强老年大鼠ADSCs体外增殖与诱导成骨分化能力。     

兔成骨细胞体外培养及自体肌内成骨的实验研究

目的 :建立一种体外培养兔成骨细胞的生物学模型 ,并对其生物学特性及体内成骨能力进行研究。方法 :抽取日本大耳白兔骨髓液经离心后得骨髓单个核细胞 ,以1×106/ml的细胞浓度进行培养 ,经传代培养 ,通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜、透射电镜、碱磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和VonKossa钙染色等手段对获得的细胞进行生物学特性研究。然后将细胞与载体材料—膨体聚四氟乙烯(ePTFe)复合培养1周后回植自体兔肌肉内 ,4周、8周后分别取材 ,组织学方法观察其成骨能力。结果 :培养的细胞形态多样 ,呈集落样生长 ,可相互重叠成复层状 ,胞浆富含线粒体、粗面内质网和高尔基体 ,胞浆突起长短、粗细不等 ,互相连接。培养细胞富含ALP活性Ⅰ型胶原和VonKossa染色均阳性。这与典型成骨细胞的生物学特性相似。成骨细胞经体外增殖 ,与载体复合培养后生长良好。植入体内早期(4周时 )形成的骨基质结构疏松 ,周围仍有较多成骨细胞 ,晚期 (8周时 )则可见形成的骨样组织结构致密 ,内有骨细胞位于骨陷窝中 ,与典型的骨组织结构相似。结论 :用兔骨髓基质细胞在体外筛选、培养成骨细胞的方法是可行的     

犬骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的实验研究

目的：研究骨髓基质干细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs)在体外培养，诱导后的成骨活性，探讨BMSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性和可行性。方法：抽取成年犬骨髓，用梯度离心法获取单核细胞，经条件培养液体外诱导培养后，进行组织化学、免疫组化、原位杂交检测，并在透射电镜下观察其成骨活性。结果：第1代细胞Alkaline phosphatase(AKP)染色、Core-binding factor alpha subunit 1(Osf2/Cbfal)、Osteopotin(OPN),I型胶原的免疫细胞化学检测和I型胶原的原位杂交结果开始呈现阳性，第3代细胞Bone Sailoplain(BSP),Osteocalcin(OCN)免疫细胞化学染色开始呈现阳性，透射电镜显示细胞外有胶原分泌和钙盐沉积。结论：BMSCs不仅能大量扩增，且在一定条件下可向成骨细胞分化，是骨组织工程理想的种子细胞。     

胶原海绵与骨髓基质成骨细胞体外联合培养的实验研究

目的 :探索胶原海绵作为骨组织工程支架材料的可行性。方法 :将人骨髓基质成骨细胞以 1× 10 7mL的密度接种于胶原海绵上进行体外培养 ,用相差显微镜、光镜、扫描电镜观察细胞在胶原海绵上的生长、增殖情况。结果 :体外复合培养 1d后 ,成骨细胞即开始粘附于胶原海绵上 ,培养 7d后 ,分布于胶原海绵上的细胞增殖并分泌ECM。结论 :胶原海绵可作为成骨细胞体外复合培养的支架材料。     

SD大鼠成肌细胞冻存复苏后体外培养的实验研究

目的：探讨成肌细胞冷冻复苏后，体外培养条件下的生物学特征。方法：将原代、2、4、6代成肌细胞液氮冻存，4周后复苏并进行体外培养，并与未冻存的相应各代次传代成肌细胞进行体外增殖特征比较；同时对传代和复苏成肌细胞的第2代细胞融合率进行了观察。结果：复苏后成肌细胞倍增时间、平顶期较对照组长；但成肌细胞形态、特性未见明显变化；复苏后成肌细胞融合率与传代细胞一致。结论：成肌细胞冻存后可以作为组织工程化面肌修复所需的种子细胞来源用于实验研究。     

成人骨髓基质干细胞体外培养与鉴定

目的：本实验旨在建立一套体外分离培养人骨髓基质干细胞（human bone marrow stem cell HMSCs)的方法，观察HMSCs，体外培养并传代，观察原代及传代细胞的细胞形态及生长规律，第4代细胞用矿化液连续培养30天，在倒置显微镜下观察矿化结节形成情况。结果：体外利用骨髓基质细胞培养液成功培养了HMSCs,并连续传代5－7代，利用第4代细胞用矿化液连续培养30天，矿化结节形成，在细胞间有钙盐沉积。结论：HMSCs可以在体外培养成功，并可定向诱导为成骨细胞，有希望作为极佳的种子细胞应用于临床。     

锂盐对大鼠腭中缝扩张成骨的影响

目的：观察锂盐对腭中缝扩张后新骨形成的影响。方法：使用扩大簧对Wistar大鼠作快速扩弓,腭中缝扩大3d后每日给予LiCl灌胃,对照组使用NaCl。通过甲苯胺蓝染色定量分析新骨的形成,免疫组化染色检测β-catenin的表达。结果：腭中缝扩大后第3天开始有新骨形成,应用LiCl后新骨边缘成骨细胞表达β-catenin增加。半定量分析显示实验组7d新骨形成量显著增加,是对照组的1.36倍（P〈0.05）。结论：锂盐能够通过激活β-catenin信号,促进大鼠腭中缝扩大后的新骨形成。     

CVD-grown monolayer graphene induces osteogenic but not odontoblastic differentiation of dental pulp stem cells

Objective

The objective was to investigate the potential of graphene (Gp) to induce odontogenic and osteogenic differentiation in dental pulp stem cells (DPSC).

记忆合金牵引器弹力输出及对牵引成骨的影响

目的：了解记忆合金牵引器弹力输出特点，以及对牵引速度和新骨再生结果的影响。方法：设计不同记忆合金牵引器，生物力学检测仪测量绘制其弹力输出曲线，制作bi—focal牵引成骨重建一侧下颌骨3．5～4cm节段缺失的杂种犬动物模型，观察不同牵引器牵引成骨速度和长度。结果：记忆合金牵引器可输出稳定柔和的超弹性弹力，牵引速度超过传统的每天1mm，骨再生结果稳定，再生骨节段长度与牵引器外形设计和弹力强度相关。结论：记忆合金牵引器设计制作简便，弹力输出可控，可稳定成骨，具有深入研究价值。     

Marrow-derived osteoblasts seeded into porous natural coral to prefabricate a vascularised bone graft in the shape of a human mandibular ramus: experimental study in rabbits

To find out if it was possible to prefabricate bone graft in the shape of a human mandibular ramus that possessed a pedicle that carried blood. The pore size of the natural coral was about 200 microm with a porosity of about 36%. The natural coral was made into the shape of a human mandibular ramus. Marrow-derived osteoblasts were seeded into porous natural coral scaffolds in a density of 2 x 10(8)/mL in 300 microL cell suspension. After two days of in vitro incubation, five cell-coral complexes were implanted into cell donor rabbits under the inferior epigastric blood vessels to prefabricate a vascularised bone graft of specific shape. Two months later the bone formation was observed by gross inspection and histological examination. Two months after operation, a well-vascularised bone graft in the shape of the initial coral scaffold and with a blood-carrying pedicle had been regenerated successfully. Osteogenesis followed the pattern of endochondral bone formation. New bone could be seen on the surface and in the pores of coral on histological examination. We have shown that it is possible to fabricate vascularised bone graft in a predetermined shape using tissue engineering. This kind of bone graft may have future clinical application.