gp130胸外区近膜端缺失的突变体介导IL—6信号的研究

研究ｇｐ１３０胸外区远膜端和近膜端在ＩＬ－６信号转导的作用，方法用分子克隆手段构建全长的膜结合型ｇｐ１３０分子和胸外区第３０１－５８２位氨基酸残 的突变体分子，并通过阻滞电泳方法比较突变体与野生型分子在传导信号方面的差异。     

可溶性gp130和gp130反义核酸对IL-6诱导的靶基因启动子活性的影响

ｇｐ１３０是ＩＬ－６信号转导子，ＩＬ－６介导的信号转导起始于ｇｐ１３０与ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒα形成的复合物。为了研究ｇｐ１３０胞外区的结构与功能，在肝癌细胞ＨｅｐＧ２中建立了检测ＩＬ－６诱导基因表达强弱的方法，并观察了含胞外区全长（５９７个氨基酸）及氨基端３０４个氨基酸残基的ｇｐ１３０突变体，以及ｇｐ１３０反义核酸对ＩＬ－６生物学效应的影响。证明两个突变体和反义核酸均拮抗ＩＬ－６信号，为进一步研究ＩＬ－６受体拮抗剂奠定了基础。     

可溶性白细胞介素6受体β亚基拮抗IL—6信号的研究

ｇｐ１３０是白细胞介素６（ＩＬ－６）受体的β亚基和信号转导子。ＩＬ－６介导的信号转导起始于ｇｐ１３０与ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒα形成的复合体。为了研究ｇｐ１３０胞外区的结构与功能，我们克隆并表达了其胞外区全长及氨基端３０４个氨基酸残基的片段，并在白血病Ｒ２细胞、杂交瘤细胞和肝癌细胞中观察其生物学效应。结果发现，两个片段均拮抗ＩＬ－６信号，从而，证明了含细胞因子结合区的可溶性小片段和大片段都能与膜结合型     

可溶性IL—6Rβ亚基突变体在CHO细胞中的表达及 …

目的 弄清只含白细胞介素６（ＩＬ－６）受体β亚基（ｇｐ１３０）胞外第二、三个ＦＮⅢ区的可溶性突变体是否能结抗ＩＬ－６的生物学效应。方法 首先用重叠延伸ＰＣＲ方法扩增出ｇｐ１３０突变体ｅＤＮＡ；接着将其克隆到真核表达载体ｐＳＶＬ中；用脂质体转染法将此表达载体导入ＣＨＯ细胞中，通过点杂交和反转录ＰＣＲ证明其得到有效表达；用ＭＩＴ法在杂交瘤细胞和白血病细胞中观察了此突变体对ＩＬ－６生物学效应影响。结果     

sgp13OcDNA在痘苗病毒载体系统中的表达

ｇｐ１３０是一种分子量为１３０ｋＤ的细胞膜糖蛋白,是ＩＬ－６等多种细胞因子共用的信号传递分子。本研究将含ｇｐ１３０胞外区全长的可溶性片段的基因（ｓｇｐ１３０ｃＤＮＡ）构建到痘苗病毒载体中,并与野生型痘苗病毒在ＴＫ－１４３细胞中发生同源重组,用ＢｕｄＲ和Ｘ－ｇａｌ双重选择,得到带有人ｓｇｐ１３０的重组痘苗病毒（Ｖｓｇｐ１３０）。采用ＩＤＡ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ法证实：感染Ｖｓｇｐ１３０的ＴＫ－１４３细胞上清中有较强的ｓｇｐ１３０表达,表达产物分子量为１００ｋＤ左右。     

人可溶性IL-6R突变体H280 Ⅰ生物学特性的初步研究

利用定点突变技术获得的ｓＩＬ－６Ｒ突变体Ｈ２８０Ⅰ基因与天然ｓＩＬ－６Ｒ（ｗｔｓＩＬ－６Ｒ）基因分别转染Ｃｏｓ７细胞，转染细胞上清在７ＴＤ１、Ｒ２细胞系上测定生物学活性，并同时进行ＩＬ－６结合能力分析。结果显示，ｓＩＬ－６ＲＨ２８０Ⅰ可以保持同ＩＬ－６的结合能力，同时对ＩＬ－６的信号传递过程起拮抗作用，提示Ｈ２８０的改变可能影响ＩＬ－６Ｒ胞外区与ｇｐ１３０的结合。     

人可溶性IL—6R突变体H280I生物学特性的初步研究

利用定点突变技术获得的ｓＩＬ－６Ｒ突变体Ｈ２８０Ｉ基因与天然ｓＩＬ－６Ｒ（ｗｔ ｓＩＬ－６Ｒ）基因分别转染Ｃｏｓ７细胞，转染细胞上清在７ＴＤ１、Ｒ２细胞系上测定生物学活性，并同时进行ＩＬ－６Ｒ结合能力分析。结果显示，ｓＩＬ－６Ｒ ｈ２８０Ｉ可以保持同ＩＬ－６的结合能力，同时对ＩＬ－６Ｒ的信号传递过程超拮抗作用，提示Ｈ２８０的改变可能影响ＩＬ－６Ｒ胞外区ｇｐ１３０的结合。     

白细胞介素6受体研究新进展

白细胞介素６（ＩＬ－６）的受体系统由配体结合链白细胞介素６受体（ＩＬ－６Ｒ）和信号传递链ｇｐ１３０组成，其中ｇｐ１３０虽无配体结合能力，但参与ＩＬ－６高亲和力结合位点的形成。这两条链均为跨膜的单链膜糖蛋白，属于细胞因子受体家族。ＩＬ－６受体的双链模式可能也适用于此家族中的其他成员。与其他细胞因子的可溶性受体不同的是，可溶性ＩＬ－６Ｒ反而能介导ＩＬ－６的生物学作用，在肌体的免疫调节和与ＩＬ－６相关疾     

肝炎肝硬化患者血清sIL—6R和sgp130变化的研究

为了探讨肝炎肝硬化（ＨＣ）患者血清可溶性白介素６受体（ｓＩＬ－６Ｒ）和可溶性ｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）含量的变化及其临床意义，运用酶联免疫吸附法检测了３４例ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐｌ３０含量。结果表明：①活动性和静止性ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐ１３０水平均高于正常对照（Ｐ＜０．０１），ｓＩＬ－６Ｒ／ｓｇｐ１３０比值ＨＣ患者低于正常人，活动性ＨＣ患者低于静止性ＨＣ患者（Ｐ＜０．０１）；②血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐ１３０水平之间呈正相关（ｒ＝０．４１７，Ｐ＜０．０５），ｓＩＬ－６Ｒ、ｓｇｐｌ３０水平与血清Ｂｉｌ－Ｔ水平间亦呈正相关（分别为ｒ＝０．４７４，ｒ＝０．４８２，Ｐ＜０．０１），而与血清ＡＬＴ水平无明显相关性（分别为ｒ＝０．１９３，ｒ＝０．１５２，Ｐ＞０．０５）。提示：血清ｓＩＬ－６Ｒ、ｓｇｐ１３０与ＨＣ的病情演变有关     

Ras／NF—IL—6信号转导途径介导人骨髓瘤细胞KM—3中？…

目的 研究人骨髓瘤细胞ＫＭ－３中的ＩＬ－信号转导途径与生物学效应之间的关第。方法 分别采用ＭＴＴ、凝胶阻滞电泳（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ，ＥＮＳＡ）、免疫沉淀方法检测ＩＬ－６对ＫＭ－３细胞生长状态的影响、参与ＩＬ－６信号传递功能的转录因子以及蛋白激酶在ＫＭ－３细胞中的诱导激活状态。结果 ＩＬ－６可明显促进ＫＭ－３细胞增殖，并可引发Ｒａｓ／ＮＦ－ＩＬ－     

GAM cDNA稳定转染的M1细胞系的建立与鉴定

目的为搞清 GAM在 gp130介导的信号传导中所起的作用。方法选择在 IL - 6刺激下出现分化和增殖抑制的M1细胞系 ,分别用正向和反向插入 GAM c DNA的真核表达载体 p EF- BOS与 p SV2 - neo质粒共转染 ,经 G418选择培养筛选得到稳定转染的细胞 ,并用半套式 PCR方法证实了 GAM基因与这两种细胞基因组 DNA的整合。结果流式细胞仪分析表明正向 GAM c DNA转染的 M1细胞中 GAM的表达水平明显升高 ,3H掺入实验表明 GAM表达水平升高使 M1细胞对 IL - 6的反应性下降。结论 GAM高表达 M1细胞的建立为深入研究 GAM在 gp130介导的信号传导中的作用提供了良好的实验模型     

可溶性gp130(sgp130)在IL-6/IL-6R系统中的生物学作用研究

目的：在成功克隆、表达和纯化人可溶性ｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）分子的基础上,研究ｓｇｐ１３０在白介素６（ＩＬ６）／白介素６受体（ＩＬ６Ｒ）系统中的生物学作用。方法：采用转人膜型ｇｐ１３０的ＢＡＦ１３０细胞和人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ４ＣＮＴＦ和分离得到新鲜ＭＭ细胞,通过３ＨＴｄＲ的掺入做生物学检测,观察ｓｇｐ１３０在上述细胞上对ＩＬ６生物学活性的影响。结果：ｓｇｐ１３０对ＩＬ６和可溶性ＩＬ６Ｒ引起ＢＡＦ１３０细胞的增殖有抑制作用。此外,ｓｇｐ１３０对ＩＬ６刺激ＸＧ４ＣＮＴＦ细胞和分离得到新鲜ＭＭ细胞的增殖也有抑制作用。结论：ｓｇｐ１３０为ＩＬ６的拮抗剂。     

Ras/NF-IL-6信号转导途径介导人骨髓瘤细胞KM-3中的IL-6生物学效应

目的　研究人骨髓瘤细胞KM 3中的IL 6信号转导途径与生物学效应之间的关系。方法　分别采用MTT、凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)、免疫沉淀方法检测IL 6对KM 3细胞生长状态的影响、参与IL 6信号传递功能的转录因子以及蛋白激酶在KM 3细胞中的诱导激活状态。结果　IL 6可明显促进KM 3细胞增殖 ,并可引发Ras/NF IL 6信号转导途径活化 ,但Jak/STAT信号途径没有激活。结论　Ras/NF IL 6信号转导途径介导了IL 6对KM 3细胞的生长促进作用     

IL-6相关转录因子在人骨髓瘤细胞系IL-6信号转导中的作用

为研究IL 6在人骨髓瘤细胞系的信号传递过程中IL 6相关转录因子的活化状态。本研究在IL 6刺激前后提取人骨髓瘤细胞Sko 0 0 7的细胞核蛋白 ,分别以APRE、NF IL 6/ATF、NF κB、CRE、AP 1作为探针 ,采用凝胶阻滞电泳 (electro phoret icmobilityshiftassay ,EMSA )方法检测IL 6刺激前后Sko 0 0 7细胞中与以上DNA反应成分对应的转录因子的活化情况。结果显示 ,NF IL 6和NF κB在正常培养的Sko 0 0 7细胞中组成性激活 ;IL 6刺激前后STAT3和NF IL 6的活化状态有明显改变 ;CREB和NF κB的活化状态无明显变化 ;AP 1的激活情况与细胞的生存状态有关。表明在Sko 0 0 7细胞中与IL 6信号传递密切相关的转录因子是STAT3和NF IL 6;对细胞本身生存至关重要的转录因子是NF IL 6和NF κB。     

未知酪氨酸激酶对骨髓瘤细胞中IL—6诱导Ras／MAPK／NF—IL—6途径活化的调节作用

目的 研究两条主要的IL-6信号转导途径-JAK/STAT和Ras/MAPK/NFG-IL-6在人骨髓瘤细胞系KM-3中的诱导活化情况和调控机制。方法 首先分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）方法检测参与 IL-6信号转导功能的转录因子（STAT3、NF-IL-6）和蛋白激酶（JAK1、MAPK）在KM-3细胞中的诱导活化情况。然后采用特异性酢氨酸蛋白激酶 抑制剂Genistein作用于KM-3细胞,观察酢氨酸磷酸化作用对KM-3细胞中IL-6信号转导功能的影响。结果 IL-6刺激后,KM-3细胞中只出现了Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径的诱导激活,而JAK/STAT途径则不参与IL-6在KM-3细胞中的信号转导功能。Gwenistein的作用可明显抑制Ras/MAPK/NF-IL-6途径的活化。结论 一种目前尚无法确定的非JAK1酪氨酸蛋白激酶可参与并调节Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径在KM-3细胞中的诱导活化。     

IL—6在人骨髓瘤细胞U266中的信号转导途径与细胞增殖促进效应之间的关系

目的：研究人骨髓瘤细胞U266中IL－6信号转导途径激活与细胞增殖促进效应之间的关系。方法：首先分别采用MTT、凝胶阻滞电泳（electrwophoretic mobility shift assay, EMSA）和免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）方法观察IL－6对U266细胞生长的影响及两条IL－6信号转导途径在U266细胞中的诱导激活状态;然后采用化学试剂处理或转基因方法观察信号途径活化状态变化与IL－6效应变化之间的关系。结果：IL－6可明显促进U266细胞增殖,并在不同剂量下诱导JAK／STAT和Ras/NF-IL-6途径活化;Ras途径活化被特异性上调和下调时,IL－6对U266细胞的生长促进效应分别得以增强和减弱;而JAK／STAT途径活化受抑时,IL－6的促细胞生长效应反而加强。结论：Ras途径的诱导激活介导了IL－6对U266细胞的增殖促进效应;而JAK／STAT途径活化介导了与IL－6促细胞增殖相反的生物学效应。     

cAMP对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞增殖的抑制作用

目的 研究ＰＫＡ途径激活（或胞内ｃＡＭＰ水平升高）后对人骨髓瘤细胞的ＩＬ－６信号转导功能及细胞生长的影响。方法 采用ＰＫＡ途径激动剂Ｆｏｓｋｏｌｉｎ（ＦＫ）和ｃＡＭＰ类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ刺激人骨髓瘤细胞骨－Ｓｋｏ－００７,分别通过ＭＴＴ方法和凝胶阻滞电泳（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ,ＥＭＳＡ）方法检测ＦＫ和８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对Ｓｋｏ细胞的生长及其Ｉ     

Chromosomal localization of the IL-6 receptor signal transducing subunit,gp130 (IL6ST)

Signal transduction in eukaryotic cells is a complex process mediated, normally, by the interaction of soluble extrinsic protein factors and their cognate receptors. One example of this phenomena is the inflammatory cytokine interleukin-6 and the IL-6 receptor. However, the IL-6 receptor, once its ligand is bound, associates with another membrane glycoprotein, gp130, to potentiate the cytokine response. To further understand the basis of this interaction, and its possible implications in cellular transforming events, the corresponding gene(s) must be studied. Here we find that the human gp130 gene product is homologous to two distinct chromosomal loci on chromosomes 5 and 17. Furthermore, the presence of two distinct gp130 gene sequences is restricted to primates and is not found in other vertebrates.The HGM nomenclature committee has designated this human gene asIL6ST, for interleukin-6 receptor signal transducer.