辛伐他汀对内皮细胞分泌NO、NOS的影响

目的研究HMG-CoA还原酶抑制剂辛伐他汀对内皮细胞分泌NO和NOS活力的影响，并探讨其机制，以阐明其在治疗动脉粥样硬化中的降脂外作用。方法培养人脐静脉内皮细胞（ECV304），分别用不同浓度TNF-α刺激，在50ng／mlTNF-α刺激的基础上用不同浓度的辛伐他汀（0．1μmol／L、10μmol／L、10．0μmmol／L）及10μmmol／L辛伐他汀＋0．2mmol／L甲羟戊酸共育。用硝酸还原酶法测定培养上清NO的浓度，用化学比色法测定NOS的活力。结果不同浓度的TNF-α刺激24h后．培养液上清液NO浓度、eNOS活力明显低于空白对照组（P〈0．05），iNOS活力明显高于空白对照组（P〈0．05）。与TNF-α（50ng／ml）刺激组相比．各浓度的辛伐他汀明显增加NO的生成，提高eNOS的活性（P〈0．01），降低iNOS活力．而该作用可被甲羟戊酸逆转。结论TNF—α可以抑制血管内皮细胞NO的生成，降低cNOS的活性，辛伐他汀可以增加NO的生成。提高eNOS的活性，而该作用可被甲羟戊酸逆转。辛伐他汀降脂外作用部分是通过抑制甲羟戊酸的合成而实现的。     

镁对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和一氧化氮合酶亚型的影响

目的：观察镁对人脐静脉内皮细胞一氧化氮（NO）和一氧化氮梧酶（NOS）不同亚型的影响。方法：镀铜镉还原法测定培养液中NO2^-/NO3^-含量，免疫组织化学法观察内皮细胞型NOS（eNOS)和诱导型NOS（iNOS)的表达。结果：与正常对照组相比，Mg^2 各剂量组NO2^-/NO2^-含量较高，差异具有显著性（P＜0．05）；H2O2＋Mg^2 各剂量组NO2^-/NO3^-含量高于H2O2组，差异具有显著性（P＜0．05）。与正常对照组相比，H2O2组iNOS和NF－κB P65平均灰度下降，eNOS平均灰度升高，且均具有显著性差异（P＜0．05），Mg^2 各剂量组eNOS平均灰度下降，具有显著性差异（P＜0．05）；与H2O2组相比，H2O2＋Mg^2 各剂量组iNOS和NF－κB P65平均灰度显著升高（P＜0．01），eNOS平均灰度下降（P＜0．05）；H2O2＋Mg^2 各剂量组eNOS和iNOS平均灰度低于相应的Mg^2 剂量组，且具有显著性差异（P＜0．05）。结论：镁的抗氧化作用机制可能涉及调控细胞转录因子和一氧化氮合酶不同亚型。     

Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响

目的：利用猴脉络膜-视网膜内皮细胞建立内皮细胞（EC）单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1（Ang-1）对该模型通透性的影响．方法：待EC于孔径0．8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养：对照组（DMEM培养基含25mmol／L葡萄糖）、高糖组（DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖）、Ang-高糖组（DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖＋0．25mg／L Ang-1）．于1,3,5,7d4个时间点,以含白蛋白1g／L的D—Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数（8）及滤过系数（K1）;并于5d和7d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNAladder．结果：3,5,7d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组（P〈0．01）;Ang-高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异（P〉0．05）．高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5d及7d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder．结论：高糖能够促进细胞凋亡,增加EC单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的EC单层通透性增高．     

五味子甲素SchA缓解MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤的机制研究

目的：探讨五味子甲素（SchA ）缓解1-甲基-4-苯基吡啶离子（M PP＋）诱导S H-SY5Y细胞损伤的可能机制。方法实验分为5组,空白对照组,加入无血清培养基进行培养;模型组（M PP＋进行诱导）;SchA组;SchA与M PP＋共同处理的SchA组,其中SchA终浓度分别为1、3、5μmol/L ,M PP＋终浓度为1 mmol/L。NO检测试剂盒检测各组细胞 NO含量,Western blot检测细胞总Akt、p-Akt的蛋白表达情况。结果与对照组相比,1 mmol/L MMP＋诱导后,SH-SY5Y细胞NO含量明显增高（P＜0．05）,经5μmol/L SchA及MPP＋共同处理的SH-SY5Y细胞,NO的含量明显降低。各组总Akt相对表达水平没有明显变化（P＞0．05）;模型组细胞p-Akt相对表达水平较对照组减少,SchA组细胞p-Akt蛋白相对表达水平随SchA浓度的升高而升高,且与模型组比较差异都有统计学意义（P＜0．05）。结论 SchA缓解MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤可能与影响NO含量及p-Akt蛋白表达有关。     

大豆异黄酮对氧化损伤血管内皮细胞抗氧化作用的研究

目的：探讨大豆异黄酮（SI）对氧化损伤血管内皮细胞的抗氧作用。方法：体外培养血管内皮细胞，将细胞分为5组，即空白对照组（control)，氧化损伤对照组（ox-LDL)，氧化损伤加入维生素E对照组(VC ox-LDL)，氧化损伤加入大豆异黄酮低，中，高浓度组（SI－L＋ox-LDL,SI-M ox-LDL,SI-H ox-LDL)。将氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用于预先加入VE及不同浓度SI孵育24h的内皮细胞，继续培养24h，测定细胞外及细胞内丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活性，乳酸脱氢酶（LDH）释放情况及一氧化氮（NO)生成量。结果：ox-LDL组MDA含量，LDH释放百分比高于control组及VE＋ox-LDL组，（SI－L，M，H）＋ox-LDL组，差异有显著性（P＜0．01）；而ox-LDL组SOD，GSH－PX活性及NO浓度均低于control组和VE ox-LDL组，（SI－L，M，H）＋ox-LDL组，差异有显著性（P＜0．01）；另外，SI－M＋ox-LDL组与VE＋ox-LDL组比较，各指标均无显著性差异（P＞0．05）。结论：SI可减轻ox-LDL对血管内皮细胞的氧化损伤，起到一定的抗氧化保护作用。     

辛伐他汀对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用研究

目的：观察辛伐他汀对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用,并探讨其作用的机制。方法实验分为4组：对照组（健康体检者,A组）,高血糖组（B组,33．3 mmol/L葡萄糖）,高血糖＋低浓度辛伐他汀组（C组,33．3 mmol/L葡萄糖＋1．0μmol/L辛伐他汀）,高血糖＋高浓度辛伐他汀组（D组,33．3mmol/L葡萄糖＋10．0μmol/L辛伐他汀）。细胞增殖使用CCK-8实验检测,细胞凋亡使用 TUNEL 检测法,蛋白表达使用 Western blot 方法检测,基因检测采用实时荧光定量 PCR（real time PCR）。结果 B、C、D组的内皮细胞存活率分别为（42．5±6．4）％、（58．6±7．8％）和（71．3±11．7）％,各组之间差异有统计学意义（ P＜0．05）。A、B、C、D组内皮细胞的凋亡率分别为（1．8±0．6）％、（45．8±8．9）％、（22．7±6．4）％和（12．6±4．2）％,各组之间差异有统计学意义（ P＜0．05）。B组（0．13±0．03）内皮细胞Bcl-2蛋白的表达明显低于A组（1．02±0．16）,C组（0．28±0．04）明显高于B组,D组（0．68±0．11）又明显高于C组（P＜0．05,P＜0．01）。B组内皮细胞bax基因的表达明显高于A组,C组明显低于B组, D组又明显低于C组（ P＜0．05,P＜0．01）。结论辛伐他汀可以明显抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白表达和下调bax基因表达可能是其主要的作用机制。     

1, 25-二羟维生素D3对软脂酸诱导的胰岛素抵抗血管内皮细胞功能的影响

目的：探讨1, 25-二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]对软脂酸（PA）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs） 的胰岛素抵抗的影响及其可能作用机制。方法：用含0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mmol/LPA 的DMEM培养基培养HUVECs,建立胰岛素抵抗内皮细胞模型。分别用0、0.01、0.1、1.0、10、100nmol/ L1, 25(OH)2D3干预,硝酸盐/亚硝酸盐荧光试剂盒测定NO含量,Westernblot法测定pAkt及peNOS蛋白的 表达,qPCR法测定VDR、ET-1的表达。结果：0.6mmol/L的PA培养HUVECs18h后,培养液中的葡萄糖浓度 耗减显著低于对照组,细胞活力降低,胰岛素抵抗的内皮细胞模型建立。PA干预后NO含量较对照组HUVECs 减少（ P ＜0.05）,1nmol/L1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后NO含量增加,在1min时NO量达最 大值。1nmol/L浓度1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后peNOS及pAkt的蛋白表达量明显增加（ P ＜ 0.05）,ET-1的mRNA表达水平明显减少（ P ＜0.05）。结论：1, 25(OH)2D3增加PA诱导的胰岛素抵抗血管内皮细 胞peNOS、pAkt的表达,增加NO产生,降低ET-1的表达,可能对胰岛素抵抗的血管内皮细胞存在一定的保护作用。     

氧化修饰型低密度脂蛋白与高糖对血管内皮细胞TGF—β1生成的影响及意义探讨

目的：通过用不同浓度的葡萄糖及氧化修饰型低密度脂蛋白（ox-LDL)刺激血管内皮细胞,测定其TGF－β的含量,探讨在高糖,高脂诱导下动脉粥样硬化形成中TGF－β1的分泌变化及其意义,方法：用酶消化法体外养血管内皮细胞,分别用LDL50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml和D－葡萄糖5mmol/L,25mmol/L,50mmol/L刺激内此细胞,24小时后收集培养上清,ELISA法测定培养上清内TGF－β1的含量,结果：ox-LDL能明显促进内皮细胞分泌TGF－β1（P＜0．01）,且有剂量效应,D－葡萄糖在5mmol/L的浓度下,与对照组比无明显差异（P＞0．05）,在25mmol/L的浓度下内皮细胞的分泌明显增加（P＜0．01）,在50mmol/L时,TGF－β1含量无明显增加（P＞0．05）,结论：ox-LDL和高糖能明显诱导内皮细胞分泌TGF－β1,提示其在动脉粥样硬化的病理过程中起着重要作用。     

波动性高糖对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的：对比研究波动性与稳定性高糖对肾小球系膜细胞（GMC）氧化应激的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株，分正常糖对照组（5．5mmol／L，NG）、稳定高糖组（25mmol／L。HG）、波动性高糖组（5．5mmol／L或25mmol／L，每24h交替，IHG），培养GMC6d，分别以二氢二氯荧光素（DCFH—DA）标记细胞，通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄（DCF）的荧光强度而测得细胞内ROS水平，比色法检测细胞上清液中的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果：与NG组相比，HG组与IHG组细胞内DCF平均荧光强度均显著升高（均P〈0．01），总SOD活力均下降（均P〈0．01），GSH含量均下降（P〈0．05，P〈0．01），MDA均升高（P〈0．05，P〈0．01）。与HG组相比，IHG组细胞内DCF平均荧光强度显著升高（P〈0．01），总SOD活力下降（P〈0．01），GSH含量下降（P〈0．01），MDA升高（P〈0．05）。结论：波动性高糖较稳定性高糖可能对GMC有更强的氧化损伤效应。     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的：研究辛伐他汀（SIM ）对高糖培养肾小球系膜细胞（GMC）增殖和细胞周期的影响,并观察其炎症因子和细胞外基质的变化。方法将大鼠 GMCs 分为4组：低糖组[LG 组,葡萄糖（Glu）5．6 mmol／L ],高糖组（HG 组,Glu 30 mmol／L ）, HG ＋ SIM （10μg／L）组和 HG ＋ SIM （25μg／L）组。采用4-甲基偶氮四唑蓝（M TT ）法检测各组细胞的增殖能力,同时比较各组细胞的 G0／G1,G2＋ M 期和 S 期细胞比例。比较各组细胞上清液中的转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（COL4）水平。结果 HG 组不同时刻的吸光度（A）高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG 组,差异有统计学意义（P＜0．05）。 LG 组的 G0／G1期细胞比例为（35．67±3．38）％,S 期细胞比例为（41．24±5．64）％;HG 组的 G0／G1期细胞比例为（25．88±4．02）％,S 期细胞比例为（28．65±1．88）％;HG ＋ SIM （10μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（28．12±2．01）％,S 期细胞比例为（35．55±2．09）％;HG ＋ SIM （25μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（31．85±3．52）％,S 期细胞比例为（39．82±2．23）％,差异有统计学意义（P＜0．05）。 HG 组上清液 TGF-β1、FN 和 COL4水平高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 SIM 可以通过降低 TGF-β1水平来抑制 GMCs 的增殖并调整细胞周期,抑制 GMCs 肥大。     

Inhibitive effects of glucose and free fatty acids on proliferation of human vascular endothelial cells in vitro

Objectives To investigate the effects of glucose and free fatty acids (FFAs) on the proliferation and cell cycle of human vascular endothelial cells in vitro , and to examine whether the combined presence of elevated FFAs and glucose may cross-amplify their individual injurious effects.Methods Cultured human vascular endothelial cells (ECV304) were incubated with various concentrations of glucose and/or FFAs (palmitate and/or oleate) for 24-96 h. Morphologic alterations were observed using a phase contrast microscope and an electron microscope. Inhibition of proliferation was measured by a colorimetric 3-［4, 5-dimethyl thiazol-2-yl］-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Cell viability was determined using trypan blue exclusion. Distribution of cells along phases of the cell cycle was analyzed by flow cytometry. Results Glucose 15 or 30 mmol/L, palmitate (PA) 0.25 or 0.5 mmol/L, and oleate (OA) 0.5 mmol/L inhibited proliferation and accelerated death of endothelial cells in a dose-and-time-dependent manner. After treatment with elevated glucose and/or FFAs, the G(0)/G(1) phase cells increased, whereas S phase cells decreased, suggesting that high glucose and/or FFAs mainly arrested endothelial cells at G(0)/G(1) phase. The inhibitive rates of proliferation and population of dead cells in endothelial cells incubated with glucose plus FFAs (glucose 30 mmol/L+PA 0.25 mmol/L, glucose 30 mmol/L+OA 0.5 mmol/L, glucose 30 mmol/L+PA 0.25 mmol/L+OA 0.5 mmol/L) increased more markedly than those treated with high glucose or FFAs (PA and/or OA) alone. Conclusion Both high ambient glucose and FFAs can inhibit proliferation and accelerate death of endothelial cells in vitro. These changes were cross-amplified in the combined presence of high levels of glucose and FFAs.     

胰岛素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞分泌血栓调节蛋白的影响

[目的]研究胰岛素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞可溶性血栓调节蛋白(solubility Thrombomodulin,sTM)分泌的影响和可能机制.[方法]将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为葡萄糖组(5.5、20和40 mmol/L)、胰岛素组(10 IU/mL)、高糖(40mmol/L)环境下的胰岛素组(10 IU/mL)和对照组(不含葡萄糖和胰岛素),于0、6、24、48和72h等不同时间点收集细胞上清液,采用ELISA法双抗体夹心法检测sTM水平,同时将各时间的细胞上清液与正常血浆等比例混合后测定活化部分凝血活酶时间(Activated partial thromboplastin time,APTT).[结果]在培养的48 h内,高糖环境下(葡萄糖浓度40 mmol/L)内皮细胞分泌sTM的水平随着时间的延长逐渐升高且均高于对照组(P＜0.05),但培养72h后sTM的水平不再升高,反而下降(P＜0.05),高糖环境下(葡萄糖浓度40 mmol/L),APTT值逐渐降低且均低于对照组(P＜0.01)；胰岛素组内皮细胞在不同培养时间,分泌sTM的水平逐渐升高且均高于对照组(P＜0.05),与单独应用高糖(葡萄糖浓度40 mmol/L)相比较均降低(P＜0.05),APTT值随着培养时间的延长逐渐升高,但仍低于对照组(P＜0.01).[结论]生理浓度胰岛素可降低高糖环境下内皮细胞分泌sTM的水平,在一定程度内可以抵消高浓度葡萄糖对内皮细胞的损伤作用.     

谷氨酸对体外培养大鼠神经细胞毒性机理的研究

为进一步探讨谷氨酸（Ｇｌｕ）的神经毒性机理,采用体外培养大鼠大脑皮质神经细胞１２～１４天,再分别加入Ｇｌｕ（Ｇｌｕ组）,Ｇｌｕ＋尼莫地平（拮抗剂Ｉ组）,Ｇｌｕ＋ＭＫ－８０１（拮抗剂Ⅱ组）,检测各组神经细胞胞浆总钙（ＴＣａ）及游离钙（Ｃａ＾２＋ｉ）。结果显示：Ｇｌｕ组ＴＣａ和Ｃａ＾２＋ｉ明显高于正常对组（Ｐ〈０．０５）,拮抗Ⅰ、Ⅱ组ＴＣａ、Ｃａ＾２＋ｉ均高于正常对照组（Ｐ〈０．０５）而低于Ｇｌｕ组＿     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.     

米格列奈对内皮细胞一氧化氮合成及氧化应激的影响

目的 观察口服降糖药米格列奈对高糖环境下内皮细胞一氧化氮（NO）合成及氧化应激反应的影响.方法 成功培养及传代人主动脉内皮细胞（HAECs）,分为对照组（葡萄糖浓度为5.5 mmol/L）、高糖组（葡萄糖浓度为30 mmol/L）、米格列奈组（30 mmol/L葡萄糖＋10 μmol/L米格列奈）.ELISA法测NO、上清液中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的含量;比色法分别检测6、12、24、48、72 h上清中超氧化物岐化酶（SOD）的活力及丙二醛（MDA）的含量.结果 ①米格列奈组24 h NO含量为（232.7 1±8.78）μmol/L,较高糖组低（P＜0.05）,随后逐渐升高,48 h和72 h含量[（263.48±6.32）、（270.91±6.03）μmol/L]较高糖组明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）.②干预24、48、72 h测米格列奈组eNOS的含量[（51.96±2.65）、（59.28±3.63）、（60.41±4.48） μmol/L]均较高糖组增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;同步测iNOS含量[（53.28±3.45）、（62.09±3.71）、（59.90±3.60） μmol/L]与高糖组相比明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.③干预6、12、24、48、72 h测米格列奈组SOD活力[（3.99±0.46）、（5.70±0.14）、（4.98±0.37）、（3.18±0.25）、（3.35 ±0.51） U/mL]较高糖组高,差异有统计学意义（P＜0.05）;测MDA含量[（0.500±0.014）、（0.633±0.018）、（0.623 ±0.051）、（0.510±0.030）、（0.513±0.015） nmol/mL]较高糖组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 米格列奈能减少高糖环境中动脉内皮细胞iNOS的生成,增强eNOS的活性和表达,促进内皮细胞NO的产生,同时能减轻高糖引起的氧化应激损伤.     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

Spartin和白脂素在糖尿病心脏微血管内皮损伤中的作用及其机制探讨

  目的  探讨spartin和白脂素(Asp)在高糖性心脏微血管内皮(CMECs)细胞损伤中的作用及其作用机制。  方法  培养小鼠CMECs,将其分为正常组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)和高糖组(HG组, 葡萄糖浓度为30 mmol/L),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot分别检测CMECs痉挛性截瘫基因20型(spastic paraplegia 20,SPG20) mRNA和spartin蛋白的表达。利用腺病毒(Ad)转染上调spartin表达、小干扰RNA(siRNA)转染下调,采用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、Asp对下调了spartin表达、并在48 h后用30 mmol/L葡萄糖干预24 h的CMECs进行干预,采用流式细胞学技术检测各组细胞凋亡率,一氧化氮(nitric oxide, NO)荧光探针染色检测NO的生成、超氧化物阴离子荧光探针染色及ELISA试剂盒检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的生成。建立2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)小鼠模型,分为T2DM组和T2DM+Asp组,模型建立成功后(随机血糖大于16.7 mmol/L)予以Asp(1 μg/g)每天腹腔注射1次,2周后小鼠心脏超声检查心脏舒张功能,心脏微血管腐蚀铸型后扫描电镜观察心脏微血管内皮完整性。  结果  与正常组相比,HG组小鼠CMECs中SPG20 mRNA及spartin蛋白表达均降低(P < 0.05)。在HG培养条件下,Ad感染后CMECs内ROS含量减少(P < 0.05),细胞凋亡水平降低(P < 0.05),NO生成增加;相反,siRNA干预后得到相反的结果。NAC能够部分逆转siRNA的上述作用。Asp能够上调CMECs SPG20 mRNA及spartin蛋白表达,减少ROS的生成,减少细胞凋亡,增加NO的生成,但下调spartin后给予Asp干预,Asp减少ROS生成、减少CMECs凋亡、NO生成增加效应被部分逆转。体内实验发现,Asp可改善2型糖尿病模型小鼠心脏功能和增加心脏微血管内皮的完整性和光滑性。  结论  Asp可通过上调spartin表达途径抑制CMECs内的氧化应激反应,从而减轻糖尿病心脏微血管内皮损伤。