异鼠李素对肺癌的影响及其抗肿瘤机制的初步探讨

目的：探讨异鼠李素体外对人肺癌细胞A549、体内Lewis肺癌增殖的影响及初步研究其抗肿瘤机制。方法：以不同浓度异鼠李素；UUA体外培养的A549细胞中。用MTT比色法，细胞计数法。细胞生长曲线的测定、细胞形态学变化、克隆形成,^3H-TdR掺入实验等观察测定体外抗肿瘤活性，用流式细胞仪、基因组DNA片段分析，彗星电泳、免疫组化等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用；     

异鼠李素及黄酮对人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的 :探讨新药异鼠李素及黄酮能否抑制人肺癌细胞A5 49、人乳腺癌细胞MCF 7增殖及其初步研究其机制。方法 :以不同浓度异鼠李素、黄酮加入体外培养的A5 49、MCF 7细胞中 ,用MTT比色法 ,细胞计数法 ,细胞形态学等观察测定体外抗肿瘤活性 ,用流式细胞仪等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。结果 :新药异鼠李素及黄酮对人肺癌细胞A5 49、人乳腺癌细胞MCF 7有明显抑制作用 ,其作用与肿瘤细胞凋亡有关。结论 :异鼠李素及黄酮是一种有较好前景的抗肿瘤的新型中药 ,诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用机制之一异鼠李素及黄酮对人肺癌细胞A549、…     

Polo-like激酶l反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的： 探讨Polo-like激酶1（Plk1）基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法： 培养肺腺癌细胞株A549，构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1，通过脂质体介导转染A549细胞，采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达，细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡，MTT法检测长春瑞宾（NVB）对各组细胞的生长抑制率。结果： A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24 h，Plk1 mRNA及蛋白表达均下降；细胞变圆、漂浮、增殖减慢；S期细胞百分数（BrdU标记指数）显著低于对照组（P<0.05）；转染后48 h A549细胞出现G₂/M期阻滞（P<0.05）并发生凋亡；等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组（P<0.05），转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著（P>0.05）。结论： pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达，抑制A549细胞增殖，诱导凋亡，并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

IFNγ调控人肺癌A549细胞Fas／FasL表达对T淋巴细胞生长的影响

为探讨IFNγ调控有肺癌细胞Fas/FasL表达对T细胞生长的影响，分别采用FACScan,RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白质及mRNA表达；以荧光染色及FACScan法观察细胞凋亡；用苔酚兰排除实验分析细胞生长。结果表明，人肺癌细胞A549及T－细胞系（Jurkat)均有Fas及FasL表达；IFNγ可引起A549Fas表达上调，且与剂量相关，并增加了A549细胞凋亡诱导的敏感性；A549细胞与Jurkat细胞共培养实验证明：人A549细胞通过Fas/FasL介导导致Jurkat细胞生长抑制及凋亡诱导；IFNγ处理A549细胞后，减少了其对Jurkat细胞的生长抑制。上述结果提示：Fas/FasL途径介导了A549细胞与Jurkat细胞之间的凋亡，IFNγ通过对人肺癌细胞Fas/FasL系统表达调控，使A549细胞自身对凋亡诱导的敏感性增加，并对T细胞生长的抑制作用减弱，提示IFNγ在防止肿瘤细胞逃避免疫监控有一定作用。     

异鼠李素诱导肿瘤细胞凋亡

目的 :异鼠李素 (Isorhmnetin)是一种已知的黄酮类化合物 ,目前已用于临床心血管疾病的治疗 ,但异鼠李素对肿瘤的抑制作用的研究还未见报道 ,因此我们采用人宫颈癌Hela细胞株、人肺癌YTLMC 90细胞株 ,观察异鼠李素对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :应用体外细胞培养技术 ,以 2 0ug/ml异鼠李素作用于培养的Hela细胞和YTLMC 90细胞进行光镜、电镜、细胞的生长观察、细胞集落形成实验、3H TdR掺入实验、及流式细胞仪的观察和分析。结果 :异鼠李素能强烈抑制Hela细胞和YTLMC 90细胞的增殖 ,抑制作用随药物作用时间延长而逐渐增加 ;细胞…     

Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖影响实验研究

目的：探讨慢病毒载体介导survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制，为肺癌基因治疗新策略提供帮助。方法:构建表达survivin-siRNA的慢病毒载体感染A549细胞株，测定病毒滴度。采用RT-PCR、免疫组化及Western blotting等检测感染后不同分组A549细胞survivin-mRNA和蛋白的变化及caspase-3蛋白的变化，通过流式细胞仪及MTT法检测感染后A549细胞周期及生长曲线。结果: RT-PCR及Western blotting检测显示，转染细胞(MOI=150)中survivin基因mRNA和蛋白的表达明显降低，抑制率分别为97%、88%；细胞生长曲线和周期结果显示转染组细胞增殖明显减慢，G1期细胞比例明显增加，S期细胞比例则明显减少；转染细胞中caspase-3被激活。结论: 慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制人肺腺癌A549细胞survivin基因的表达和细胞增殖，有效激发细胞凋亡，有望成为肺腺癌基因治疗的新策略之一。     

蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的影响

目的：研究蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响，为天然药物蛴螬的开发提供实验和理论依据。方法:应用MTT法检测蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株的抗增殖作用及细胞毒活性；通过倒置显微镜、HE染色、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）荧光染色方法观察肿瘤细胞的形态学改变；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化；应用免疫细胞化学技术（S-P法）检测用药前后凋亡通路中Bcl-2、Fas、caspase-9、caspase-3的表达改变，探讨蛴螬提取物对凋亡通路的影响。结果:(1)用MTT法检测结果表明，蛴螬提取物在体外对MCF-7人乳腺癌细胞株有明显的抑制增殖作用，实验组与对照组相比其生长抑制率有显著差异（P<0.01），而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性；(2)倒置显微镜观察表明，实验组可见胞核固缩、碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化；(3)HE染色表明实验组胞核浓缩呈蓝黑色、胞浆呈淡红色、核染色质浓缩、呈碎块状，有凋亡小体形成；(4)经AO／EB荧光染色观察结果表明，实验组出现凋亡细胞；(5)流式细胞仪结果表明实验组凋亡率明显增加，呈时间依赖性；(6)免疫细胞化学染色结果表明，实验组 Bcl-2表达下调，Fas、caspase-3、caspase-9表达均上调，与对照组比差异显著（P<0.01）。结论:①蛴螬提取物在体外显著抑制MCF-7人乳腺癌细胞株增殖；②蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响机制可能是通过下调Bcl-2，上调Fas、caspase-3 、caspase-9的蛋白表达而起作用，是经由细胞凋亡的线粒体途径和死亡受体途径来完成凋亡的启动和执行。     

应用RNAi技术沉默STAT3基因对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的 探讨应用RNAi技术沉默信号转导子与转录活化子3（STAT3）基因对乳腺癌MCF-7细胞的影响。方法 应用RNAi技术，以psilencer1．0-U6-STAT3-siRNA重组质粒体外转染MCF-7细胞，采用MIT实验、流式细胞仪检测MCF-7转染前后细胞增殖、细胞周期和早期凋亡的变化，通过Western blotting及半定量RT-PCR检测STAT3基因不同水平的表达。结果 MTT实验、流式细胞仪的结果显示，重组质粒转染组的MCF-7细胞的增殖明显受到抑制，且出现凋亡现象；Western blotting及半定量RT-PCR结果显示，重组质粒转染组细胞的STAT3基因表达在蛋白及RNA水平上都显著低于对照组（P〈0．01），而空白对照组及空质粒组无明显差异（P〉0．05）。结论 应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低乳腺癌MCF-7细胞STAT3的表达，进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡。     

人肺癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究肺癌细胞A549、Spc-A1、PLA801及Calu-3抗脱落凋亡的特性，为研究肺癌细胞抗脱落凋亡的机制提供理论依据。方法：应用形态学观察，流式细胞术结合PI及AnnexinV—FITC双标记染色法及Western blot法观察4株肺癌细胞脱落凋亡的特性。结果：脱落培养12h后，4株肺癌细胞有不同形态学变化；流式细胞仪检测发现Calu-3悬浮培养24h后，凋亡率与贴壁培养24h的凋亡率有明显差别；而A549等3种肺癌细胞系与贴壁培养的对照组相比较，其凋亡率无显著性差异，Western blot结果也验证了上述结果。结论：肺癌细胞Calu-3属于脱落凋亡细胞，而A549、Spc-A1、PLA801属于抗脱落凋亡细胞。     

外源性FHIT基因表达对肺腺癌细胞株A549恶性表型的逆转作用

目的 探讨FHIT（fragile histidine triad)基因表达在肺癌细胞增殖、凋亡、成瘤性中的作用。方法 应用脂质体转染法构建能高效表达外源性FHIT基因的A549－FHIT细胞和作为空载体对照的A549－vector细胞，裸鼠皮下接种构建肺癌移植瘤动物模型，应用逆转录－PCR、Western杂交、免疫组化、流式细胞计数等技术检测外源性FHIT基因转录、表达及对肺癌细胞株增殖、凋亡、成瘤性等的影响。结果 A549－FHIT细胞的生长曲线、克隆形成率、移植瘤体积和重量均显著低于A549－vector和亲本A549细胞；A549－FHIT细胞凋亡水平显著高于A549－vector和亲本A549细胞；与两个对照组相比，A549－FHIT细胞G0／G1比例显著增高。结论 外源性FHIT表达基因能够显著抑制肺癌细胞增殖和分裂，诱导其凋亡，抑制其成瘤性，提示FHIT基因在肺癌中具有抑癌基因的功能。     

三七皂甙R1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的：观察三七皂甙R1是否能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡及相关基因的变化。方法：300～1200μg／ml^-1三七皂甙R1处理HL-60细胞，光镜下观察细胞形态；MTT法测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测凋忘峰。结果：300～1200μg／ml^-1三七皂甙R1可抑制HL-60细胞生长，抑制率有剂量依赖性。流式细胞仪检测凋亡峰随药物浓度增大而增加。结论：三七皂甙R1可抑制HL-60细胞生长，诱导其凋亡。     

Polo-like激酶1反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的:探讨Polo-like激酶1(Plk1)基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法:培养肺腺癌细胞株A549,构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1,通过脂质体介导转染A549细胞,采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达,细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡,MTT法检测长春瑞宾(NVB)对各组细胞的生长抑制率。结果:A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24h,Plk1mRNA及蛋白表达均下降;细胞变圆、漂浮、增殖减慢;S期细胞百分数(BrdU标记指数)显著低于对照组(P<0.05);转染后48hA549细胞出现G2/M期阻滞(P<0.05)并发生凋亡;等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组(P<0.05),转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著(P>0.05)。结论:pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达,抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

TRAIL对多种肿瘤细胞的杀伤作用

目的： 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）作用下多种肿瘤细胞的生长抑制效应及凋亡诱导情况。方法： 利用大肠杆菌基因工程菌表达非融合rhsTRAIL，进行目的蛋白的分离纯化，得到rhsTRAIL样品，纯度为97%。通过倒置显微镜下观察、MTT法、流式细胞仪法检测其对细胞的生长抑制和诱导凋亡情况。结果： 一定浓度的TRAIL 可有效抑制LS174-T细胞、MCF-7细胞、GLC细胞、7402细胞、Jurkut T细胞生长，其生长抑制率具剂量依赖性，且各细胞对TRAIL敏感性不同，其中Jurkat T细胞最为敏感。用2 mg/L TRAIL作用Jurkat T细胞0-72 h，6 h后细胞即发生明显凋亡，其细胞凋亡率具时间依赖性。结论： 所制备的TRAIL可抑制多种肿瘤细胞生长，并诱导Jurkat T细胞凋亡。     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

miR-195对肺癌A549细胞生物学行为的调控作用

目的:探讨微小RNA(mi R)-195对肺癌细胞株A549生长、凋亡及迁移等生物学行为的影响和其相关作用机制。方法:对体外培养的A549细胞转染mi R-195 mimics,分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力、周期分布及凋亡情况;Transwell实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测相关调控因子cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb/Rb的蛋白水平;双萤光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:在A549细胞中过表达mi R-195可显著抑制细胞活力并引起细胞周期阻滞,同时细胞迁移率降低,而细胞凋亡率显著上升(P0.05);此外,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白水平均显著下降(P0.05)。双萤光素酶报告基因分析显示MYB可能是mi R-195的靶基因,且在过表达mi R-195的A549细胞中回补MYB可部分逆转mi R-195对细胞活力、凋亡及迁移的影响。结论:mi R-195可靶向MYB抑制肺癌A549细胞的生长和迁移,并促进其凋亡。     

RNA干扰技术沉默STAT3对肺腺癌A549细胞生长抑制的作用

目的:利用RNAi技术研究STAT3对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,同时研究STAT3对CyclinDl,Bcl-2,BAX,Caspase-9的影响及其意义.方法:利用荧光定量PCR法检测后STAT3mRNA的表达,选取1条最能有效抑制STAT3mRNA的siRNA进行后续实验;利用AM-BLUE法检测STAT3siRNA的抑制率;利用流式细胞术(FCM)检测STAT3沉默前后肺腺癌A549细胞周期分布状况和凋亡情况;利用Western blot检测RNA干扰前后STAT3与CyclinDl ,Bcl-2,BAX,Caspase-9的蛋白表达.结果:STA3被沉默后,肺腺癌细胞A549生长被抑制(P<0.05);细胞处于Go/G1期(P<0.05),而S,G2/M期的细胞相对减少(P<0.05);凋亡细胞明显增多(P<0.05) ; STAT3基因被沉默后,CyclinDl、Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.05),BAX,Caspase-9蛋白的表达增高(P<0.05).Person相关性分析显示,RNAi后人肺腺癌细胞A549中STAT3与CyclinDl,Bel-2蛋白表达呈正相关(P<0.05),STAT3与BAX蛋白表达呈负相关(P<0.05),STAT3与Caspase-9蛋白表达无相关性(P>0.05).结论:RNA干扰技术抑制A549细胞STAB基因后,可阻断A549的细胞周期,使细胞阻滞在Go/G1期,无法进人到S,M期.同时可诱导肺腺癌A549细胞的凋亡.其机制可能为STAT3siRNA抑制了STAB基因的表达,从而使CyclinDl、Bcl-2蛋白表达降低,BAX蛋白表达增高.     

STAT3siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3表达和细胞生物学行为的影响

目的:观察经RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌细胞A549生长和凋亡的影响。方法:设计并经化学合成了针对STAT3基因不同位点的3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列(STAT3siRNA1、STAT3siRNA2、STAT3siRNA3),在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR法检测STAT3mRNA表达变化,筛选出抑制作用最强的STAT3-siRNA。免疫印迹法检测细胞STAT3、Cyclin D1、BAX、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达。AM-BLUE法测定A549细胞体外增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:经RNA干扰能有效降低A549细胞STAT3mRNA表达水平(P0.05),转染STAT3siRNA后,A549细胞STAT3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低(P0.05),而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高(P0.05)。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.854,0.910,P0.05);与BAX蛋白表达呈负相关性(r=-0.848,P0.05);与Caspase-9蛋白表达呈无相关性(r=-0.787,P0.05)。RNA干扰法沉默STAT3基因表达后,A549细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加。结论:STAT3siRNA可有效抑制A549细胞STAT3表达,抑制A549细胞生长并促进其凋亡。     

ATRA联合Genistein对肺癌细胞凋亡及ICAM-1表达的影响

目的 探讨ATRA联合Genistein对A549细胞凋亡及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法采用ATRA、Genistein单药及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并采用MTT法检测A549细胞的增殖抑制率,运用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1的表达。结果A549肺癌细胞经ATRA、Genistein及两者联合处理后,细胞增殖明显受抑制,凋亡指数明显提高,ICAM-1表达明显下调;其中以两者联合用药最为显著。结论ATRA联合Genistein能协同抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡,并可能下调ICAM-1的表达,进而降低肺癌细胞转移的潜能。     

RNA干扰技术抑制Polo-like激酶1表达对A549细胞的影响

目的： 观察RNA干扰技术能否有效抑制非小细胞肺癌细胞株A549细胞中Polo-like激酶1（Plk1）的表达水平，以及抑制后对A549细胞生长的影响。方法： 运用脂质体法，以Plk1为靶点，构建能产生siRNA的质粒载体psiRNA-hH1-Plk1并转入A549细胞。RT-PCR检测Plk1 mRNA表达的变化、Western blotting检测Plk1、cyclin B1、p53蛋白的表达变化、细胞计数分析细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡、免疫荧光染色检测α微管蛋白的表达。结果： psiRNA-hH1-Plk1质粒能特异地抑制Plk1基因的表达并使其活性下降，致使cyclin B1及p53蛋白的表达水平升高，微管聚集障碍或形成单极的纺锤体；A549细胞增殖减慢，出现G2/M期阻滞和凋亡。结论： 上述结果提示针对Plk1基因的RNA干扰有望用于肿瘤的基因治疗。     

下调p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响*

 目的： 应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2（PAK2）的表达,观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法: 构建针对PAK2基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病毒颗粒,感染MCF-7细胞,筛选获得稳定细胞株。Western blotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变;CellTiter 96 AQueous法和软琼脂集落形成实验检测MCF-7细胞体外增殖能力的改变;流式细胞术检测十字孢碱诱导的MCF-7细胞凋亡的变化。结果: MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后,PAK2蛋白表达量明显下降（P<0.01）,与阴性对照组相比,sh-PAK2组细胞生长明显减缓（P<0.01）,克隆形成的数目和大小明显下降（P<0.01）,十字孢碱诱导的细胞凋亡率显著增加（P<0.01）。结论：通过RNA干扰技术下调PAK2的表达,可抑制MCF-7细胞的生长和增殖,并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。