耐药胰腺癌细胞株对放射敏感性影响的初步探讨

目的初步探讨耐药胰腺癌细胞株的耐药性对其放射敏感性的影响。方法选取人胰腺癌细胞株SW1990经氟尿嘧啶（5-FU）、阿霉素和吉西他滨诱导后建立三株耐药细胞亚株（SW1990／FIL1、SW1990／ADM、SW1990／GZ）,通过流式细胞仪及直线加速器照射后进行细胞周期及放射生物学相关参数检测。结果细胞周期分析显示,与亲本株SW1990相比,SW1990／FU与SW1990／Gz的Go／G。期比例增高,G2／M期比例明显降低;SW1990／ADM各细胞周期百分比变化不大。集落实验结果表明,与亲本株SW1990相比,SW1990／FU及SW1990／GZ的存活分数（sir2）分别升高26．9％（P＜0．01）和14．4％（P＜0．01）,差异有统计学意义;SW1990／ADM的sir2升高1．1％,差异不明显。结论耐药胰腺癌细胞株的耐药性对其放射敏感性具有一定影响,胰腺癌耐药细胞株放射敏感周期G2／M期比例降低,从而导致其放射敏感性降低,耐放射性增加。     

应用基因芯片技术筛选胰腺癌多药耐药相关基因

目的应用基因芯片技术筛选胰腺导管腺癌（PDAC）获得性多药耐药（MDR）相关基因。方法通过含人类全基因组的寡聚核苷酸基因芯片（Affymetrix HG U133 2．0plus）筛查人胰腺癌细胞株SW1990与多药耐药细胞亚株SW1990／5-FU,SW1990／ADM和SW1990／GEM之间的表达基因差异,并进行生物信息学分析。结果与亲本株SW1990相比,3株耐药细胞亚株中表达均有差异的基因共有165条;其中上调表达基因43个,下调表达基因122个。差异表达基因的功能分类包括：抗氧化还原、细胞凋亡、细胞周期、信号转导、细胞黏附相关的基因等。聚类分析发现差异基因中的PRDX4簇、TNKS2簇及CCDC5簇可能与耐药发生密切相关。结论胰腺癌对化疗的多药耐药是复杂的多基因作用的结果。本试验初步建立了胰腺癌多药耐药发生相关的总体基因表达改变图谱,为胰腺癌多药耐药发生机制的研究提供了新的靶点。     

胰腺癌细胞株耐药与凋亡相关基因的改变

目的探讨凋亡相关基因的改变与胰腺癌细胞耐药的关系。方法利用含有18000条人类基因的cDNA基因芯片对人胰腺癌细胞株SW1990及其耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM间的差异表达基因进行筛选。结果人胰腺癌细胞株SW1990与耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM间的共同差异表达基因有170条,其中6条与细胞凋亡相关。结论凋亡相关基因hSiah2、TIA1、CDC2、PDCD2、MAPK6及MAP4K3可能参与了胰腺癌耐药过程的发生,可能成为新的胰腺癌耐药相关基因。     

Hedgehog信号通路相关蛋白在人胰腺癌SW1990耐药株中的表达及意义

目的:探讨Hedgehog信号通路蛋白在人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990中的表达,为克服胰腺癌获得性耐药提供实验基础。方法:采用浓度梯度递增法建立人胰腺癌SW1990耐药株,采用噻唑蓝法测定SW1990亲代与耐药细胞IC50。实时荧光定量PCR检测亲代与耐药细胞mRNA中hedgehog信号通路成员Shh、SMO、Gli-1的表达差异。Western印迹法检测亲代与耐药细胞中上述蛋白质的表达。结果:人胰腺癌耐药株SW1990的IC50从亲代的(3.1±0.2)μmol/L提高到(232.2±12.3)μmol/L。荧光定量PCR结果显示耐药株中Shh、Gli-1的表达提高了(12.07±1.71)倍和(4.15±0.42)倍。亲代SW1990中未检测到SMO表达,而耐药细胞中却可以检测到SMO的表达。Western印迹结果同样显示,人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高表达上述蛋白质。结论:人胰腺癌耐药株中高表达部分hedgehog信号通路蛋白。针对hedgehog信号通路的靶向治疗可能为克服胰腺癌耐药提供新的理论基础。     

人乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶基因的表达和意义

目的：探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase，GCS）基因在人乳腺癌细胞的表达及意义。方法：体外培养人耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7／ADR和人敏感乳腺癌细胞MCF-7，MTT法检测MCF-7／ADR细胞耐药倍数，RT-PCR法检测两种细胞GCSmRNA的表达，免疫细胞化学法检测GCS蛋白表达水平。结果：MCF-7／ADR细胞耐药倍数为53倍，RT—PCR检测结果显示两种细胞均有GCSmRNA表达，且MCF-7／ADR细胞GCSmRNA表达水平较MCF-7细胞有显著升高（P〈0．05），免疫细胞化学结果显示二者GCS蛋白均有表达且表达水平有显著差异（P〈0．05）。结论：GCS基因在乳腺癌细胞中表达，GCS对于乳腺癌的发生发展具有重要作用，GCS在耐药乳腺癌细胞的高表达证明GCS与肿瘤耐药密切相关，为肿瘤耐药的逆转治疗提供了新的方向。     

维拉帕米逆转胰腺癌化疗耐药的研究

目的　探讨多药耐药蛋白P 170拮抗剂维拉帕米对胰腺癌细胞株化疗耐药的逆转作用。方法　采用RT PCR法对胰腺癌细胞株SW 1990和CAPAN 1中多药耐药基因MDR1mRNA的表达进行半定量分析 ;罗丹明外排试验检测胰腺癌细胞株中P 170的功能 ;MTT比色法评估胰腺癌细胞株对化疗药物的敏感性 ,并比较单纯化疗与化疗联合维拉帕米对其的疗效差异。结果　RT PCR检测结果显示MDR1mRNA在SW 1990中的表达丰度为 0 5 75 0± 0 0 76 4 ,在CAPAN 1中的表达丰度为 0 186 4± 0 0 5 36 ,两者具有显著差异 (P <0 0 1)。罗丹明外排试验表明 :SW1990阳性细胞百分数明显低于CAPAN 1(P <0 0 1) ;维拉帕米可使SW 1990阳性细胞百分数明显增加 (P <0 0 1)。MTT结果表明 :SW1990较CAPAN 1对ADM、MMC耐药 ;维拉帕米可部分逆转其对ADM和MMC的耐药性。结论　MDR1可能参与胰腺癌细胞株化疗耐药 ;中等剂量的维拉帕米联合化疗可逆转具有MDR1表型的人胰腺癌细胞株对ADM和MMC的耐药现象。     

胰腺癌阿霉素耐药细胞株SW1990/ADM的建立及其耐药机理研究

目的　建立人胰腺癌阿霉素 (ADM )耐药细胞株SW 1990 /ADM ,探讨其耐药机理。方法　采用ADM体外浓度梯度倍增法诱导培养人胰腺癌细胞株SW 1990 10个月 ,获得耐药细胞株SW 1990 /ADM ,脱药培养 2个月后检测其生物学性状、药物敏感性及多药耐药基因mdr1的功能及表达情况。结果　与亲本细胞株SW 1990相比 ,SW1990 /ADM在形态学上发生了一系列变化 ;对包括ADM在内的多种化疗药物均表现出一定的耐药性 ,其对ADM、丝裂霉素、氟尿嘧啶和健择的耐药指数分别达到 4 9.6 0、7.2 5、3.80和 1.2 5 ;其mdr1mRNA的表达亦明显高于亲本细胞株SW 1990 (P<0 .0 1)。结论　体外浓度梯度倍增法可建立稳定传代的人胰腺癌耐药细胞株SW1990 /ADM。其耐药性与mdr1的表达呈正相关。     

反义寡核苷酸降低细胞株SMMC—7721／ADM之MRP基因表达的研究

目的 研究反义硫代磷酸寡核苷酸（AS－ODN）抑制人肝癌细胞耐药株（SMMC－7721／ADM）MRP基因表达的作用。方法 用人工合成互补于MRP基因mRNA特定片断的反义硫代磷酸寡核苷酸，以脂质体Lipofectamine为载体转染SMMC－7721／ADM细胞株，用RT－PCR测定mRNA表达，流式细胞技术测定细胞膜MRP1蛋白P190表达及MTTI地检测细胞对柔红霉素（DNR）和阿霉素（ADM）的敏感性。结果 AS－ODN能抑制AMR mRNA和其蛋白P190表达，提高细胞对DNR和ADM的敏感性。结论 （1）AS－ODN能降低MRP基因表达;(2)MRP介导的多药耐药（MDR）是SMMC－7721／ADM耐药的重要机理之一。     

Twist基因表达与肝癌多耐药细胞侵袭的相关性研究

目的研究胚胎发育相关基因Twist在人肝癌多药耐药细胞系HepG2／ADM中的表达及意义。方法建立肝癌多药耐药细胞系HepG2／ADM,利用荧光定量PCR技术及免疫印记法分别检测Twist mRNA及Twist蛋白;多药耐药相关基因MDR 1mRNA在HepG2／ADM及其亲本细胞HepG2中表达的差异。结果Twist在HepG2／ADM中表达上调,与亲本细胞 HepG2相比,mRNA(9．34 vs 1,P<0．05),蛋白(10．64±0．56 vs1,P<0．05),具有显著性差异,MDR1mRNA表达在HepG2／ ADM中显著上调,是其亲本细胞的348．99倍(P<0．05)。结论 Twist在HepG2／ADM中表达上调,这可能使得HepG2／ ADM转移扩张能力增加。     

耐药相关基因拓扑异构酶-Ⅱα在人胰腺癌细胞株中的表达

目的：探讨耐药相关基因拓扑异构酶－Ⅱα（TOPO－Ⅱα）在人胰腺癌细胞株中的表达。方法：通过逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）和Western-blot方法测定6株人胰腺癌细胞株（SW1990、Capan-2、AsPC-1、MiAPaCa-2、PANC－1、P3）中的TOPO－Ⅱα在基因和蛋白水平上的表达。结果：（1）TOPO－Ⅱα基因的表达以SW1990最高，PANC－1最低，与其他细胞株相比均具有显著性差异（P＜0．05）；（2）TOPO－Ⅱα蛋白的表达以SW1990、Capan-2较高，AsPC-1较低。SW1990，Capan-2与其余4株之间存在着显著性差异（P＜0．05），而SW1990与Capan-2之间无显著性差异（P＞0．05）；AsPC-1、MiAPaCa-2、PANC－1、P3之间均无显著性差异（P＞0．05）。结论：胰腺癌细胞对TOPO－Ⅱα抑制剂的低敏感性与TOPO－Ⅱα蛋白的低水平表达有关，TOPO－Ⅱα可能参与了胰腺癌对化疗的耐药。     

多药耐药相关基因及其蛋白在介导胰腺癌细胞原发性耐药中的作用及调控

目的 检测多药耐药相关基因（MDR1）及其蛋白（P-gP）在胰腺癌细胞株的表达,初步探讨胰腺癌发生先天性耐药的机理。方法 选择8株人胰腺癌细胞株,采用RT-PCR方法检测MDR1mRNA在胰腺癌细胞中的表达;通过免疫细胞化学方法检测P-gP的表达;以流式细胞仪检测胰腺癌细胞对罗丹明的外排情况,评价P-gP泵功能;最后通过P-gP抑制物维拉帕米与化疗药物联合应用,检测其对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果 MDR1mRNA在胰腺癌细胞株SW1990中的表达最高,除PCT-2未检测到MDR1的表达外,其余6株细胞均有MDR1的微弱表达;免疫细胞化学染色结果证实P-gP在SW1990中的表达明显高于其他细胞株。57．9％±5．4％的SW1990细胞内有罗丹明蓄积,而在P-gP阴性对照细胞中,99．5％±3．3％的细胞内存在罗丹明的积聚,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。P-gP抑制物维拉帕米与阿霉素或表阿霉素联合应用时可以部分逆转肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。结论 MDR1及P-gP在人胰腺癌细胞中存在一定量的表达;维拉帕米联合阿霉素可以明显抑制P-gP阳性细胞的生长。     

人结直肠癌耐药细胞株体外药物敏感性实验

目的 观察人结直肠癌细胞被抗肿瘤药物作用后对不同药物的耐受情况。方法 人结直肠癌LOVO细胞系分别在体外与氟尿嘧啶（5－FU）和阿霉素（ADM）作用,成功诱导LOVO／5－FU和LOVO／ADM两个耐药细胞株,体外细胞毒性实验观察它们对5－FU、丝裂霉素（MMC）、ADM、顺铂（DDP）、氨甲喋呤（MTX）、阿糖胞苷（Arac)等6种药物敏感性。结果 两株细胞对5－FU和ADM均有耐药,耐药指数分别为16．48、23．17,LOVO／5－FU对MMC、ADM及DDP为3．37、2．22、2．70倍耐药,LOVO／ADM对MMC、5－FU及DDP为4．96、11．66、3．70倍的耐药。结论 两株耐药细胞均产生了多药耐药（multidrug resistance,MDR),药物引起的耐药一般是交叉耐药。     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

目的 建立吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株SW1990/GZ,并探讨SW1990/GZ和胰腺癌肿瘤干细胞的相关性.方法 应用间歇浓度梯度倍增法建立吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株SW1990/GZ;倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法计算耐药指数(RI);荧光定量PCR检测ABCB1、ABCC1及ABCG2基因的表达水平;裸鼠皮下种植瘤试验观察SW1990和SW1990/GZ的成瘤能力;流式细胞仪通过侧群细胞(SP)法和表面特异抗原标记法(CIM4+CD24+)检测肿瘤干细胞含量.结果 在形态学上,SW1990/GZ较SW1990发生明显改变;SW1990/GZ的耐药指数是亲代SW1990的77.2倍;与亲代SW1990相比,耐药株SW1990/GZ中ABCB1、ABCC1及ABCG2的表达水平明显增高(P<0.01),裸鼠皮下成瘤能力增强(P<0.01);耐药株SW1990/GZ中SP细胞比例为(11.0±1.0)%,亲代SW1990中SP细胞比例为(4.6±0.9)%,CD44+CD24+细胞在两者中的比例分别为(8.7±0.8)%和(1.1±0.4)%(P<0.01).结论 吉西他滨耐药胰腺癌细胞株SW1990/GZ能高效富集胰腺癌肿瘤干细胞,CD44与胰腺癌获得性耐药关系密切,可能为克服胰腺癌获得性耐药提供新的治疗靶点.