MMP—7反义寡核苷酸对KATOⅢ细胞MMP—7mRNA表达的影响

目的观察MMP-7反义寡核苷酸对恶性肿瘤细胞MMP-7mRNA表达的影响,探讨MMP-7反义寡核苷酸的治疗意义.方法将嵌合性硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸通过FuGENETM6导入低分化的胃癌细胞株KATOⅢ,采用RT-PCR检测该细胞表达情况.结果①FuGENE TM6能提高转染效率,增强反义抑制作用.②MMP-7反义寡核苷酸转染的KATOⅢ细胞MMP-7mRNA表达量(MMP-7/β-actm光密度比值为0.305±0.02)明显低于对照组、PS-sODN及PS-mODN组(分别为1.590±0.012,1.140±0.03,1.508±0.017),P＜0.05.结论MMP-7反义寡核苷酸可明显的降低肿瘤细胞的MMP-7mRNA表达水平.     

内皮缩血管肽反义寡核苷酸促进骨髓移植小鼠造血重建

目的观察内皮缩血管肽(Endostatin)反义寡核苷酸转染骨髓基质细胞后在骨髓移植(BMT)小鼠骨髓造血恢复过程中的作用。方法以脂质体作为转染载体,转染不同剂量的 FITC 标记的 Endostatin 反义寡核苷酸,荧光倒置显微镜观察转染效率,用流式细胞术检测最佳转染条件下转染率,用 RT-PCR 和 Western blot 方法检测最佳转染条件下 Endostatin 反义寡核苷酸对 BMT 后不同时间点小鼠骨髓基质细胞 Endostatin mRNA 及其蛋白质和血管细胞间黏附分子1(VCAM-1)mRNA 及其蛋白表达水平的影响。实验分为4组:①正常组:未经任何处理组;②BMT 组:空白对照组;③BMT+转染Endostatin 反义寡核苷酸组;④BMT+转染 Endostatin 错义寡核苷酸组。结果①在体外成功地将 En-dostatin 反义寡核苷酸导入骨髓基质细胞,转染率达86%;②以 Endostatin 反义寡核苷酸转染骨髓基质细胞后,BMT 后不同时间点骨髓基质细胞 Endostatin mRNA 及其蛋白表达被显著抑制[Endostatin 的灰度值分别为(0.09±0.03)～(1.44±1.19)和(0.02±0.02)～(0.14±0.05)](P<0.01或P<0.05),表明转染成功;③Endostatin 反义寡核苷酸转染有效促进了 BMT 后不同时间骨髓基质细胞 VCAM-1mRNA 及其蛋白表达[VCAM-1的灰度值分别为(1.60±0.92)～(8.05±0.87)和(0.07±0.02)～(0.67±0.09)](P<0.01或P<0.05);④Endostatin 错义寡核苷酸对 BMT 后不同时间骨髓基质细胞 Endostatin 和 VCAM-1的表达基本无影响(P>0.05)。结论 Endostatin 反义寡核苷酸可降低Endostatin 表达,增强 VCAM-1的表达,从而促进骨髓微血管生成,改善基质细胞与造血细胞之间和细胞外基质与造血细胞之间的联系而影响骨髓造血。     

应用完整原位杂交技术检测人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达

目的:探讨人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体的表达,及其对反义寡核苷酸胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响和食管癌发生、转移的意义。方法:实验于2004-09/12在河南省肿瘤病理重点实验室完成。体外分5组培养人食管癌EC9706细胞,其中4组分别用设计合成的3条封闭胰岛素样生长因子1受体不同基因位点的反义寡核苷酸1～3及1条无关寡核苷酸转染,另一组不转染。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA表达情况。结果:①胰岛素样生长因子1受体mRNA在食管癌EC9706细胞中呈阳性表达。②3条胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无差异(2.66±0.21,2.63±0.23,2.65±0.22,P>0.05),但均显著低于无关寡核苷酸组及无转染组(5.67±2.86,5.02±2.75,P<0.05)。结论:胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染人食管癌EC9706细胞后,可体外抑制EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达,从而抑制食管癌的发生和转移。为临床预防食管癌的发生、发展和转移提供了理论依据。     

干细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞中原癌基因蛋白质c-kit及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义。方法以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞。实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF反义寡核苷酸组;(3)转染SCF错义寡核苷酸组。Western blot方法检测转染前后肝癌细胞中SCF、bFGF蛋白的表达,RT-PCR检测转染前后肝癌细胞中c-kit与bFGF mRNA的表达,用流式细胞仪检测转染SCF反义寡核苷酸后HepG2细胞凋亡率。结果与转染错义寡核苷酸组相比,SCF反义寡核苷酸对HepG2细胞中c-kit、bFGF的表达有明显抑制作用,转染SCF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01)。结论 SCF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,SCF/c-kit有可能作为PI3K/Akt信号通路的上游对肝癌细胞bFGF的表达起重要调控作用。     

应用完整原位杂交技术检测人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达

目的：探讨人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体的表达，及其对反义寡核苷酸胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响和食管癌发生、转移的意义。方法：实验于2004-09／12在河南省肿瘤病理重点实验室完成。体外分5组培养人食管癌EC9706细胞，其中4组分别用设计合成的3条封闭胰岛素样生长因子1受体不同基因位点的反义寡核苷酸1～3及1条无关寡核苷酸转染．另一组不转染。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA表达情况。结果：①胰岛素样生长因子1受体mRNA在食管癌EC9706细胞中呈阳性表达。②3条胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无差异（2．66&;#177;0．21，2.63&;#177;0.23，2.65&;#177;0.22，P&;gt;0．05)，但均显著低于无关寡核苷酸组及无转染组(5．67&;#177;2．86，5．02&;#177;2．75，P&;lt;0．05)结论：胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染人食管癌EC9706细胞后，可体外抑制EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达，从而抑制食管癌的发生和转移。为临床预防食管癌的发生、发展和转移提供了理论依据。     

血管内皮细胞生长因子反义RNA抑制人食管癌血管生成及生长和转移作用的研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子反义RNA在调节食管癌血管生成及生长、转移中的作用。方法用脂质体法将血管内皮细胞生长因子反义RNA转染到人食管癌TE-1细胞,噻唑蓝还原法检测细胞增殖情况;免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应技术检测血管内皮细胞生长因子蛋白和mRNA的表达水平,并将转基因肿瘤细胞接种于裸鼠体内,应用免疫组化法检测肿瘤内微血管密度,探讨微血管密度与肿瘤生长及转移的关系。结果反义血管内皮细胞生长因子基因的转染,使肿瘤细胞血管内皮细胞生长因子分泌减少,反义组裸鼠的肿瘤组织微血管密度(11.0±7.6)明显低于对照组及空载体组(50.8±11.7、48.9±7.0)(均为P<0.01)。结论血管内皮细胞生长因子反义RNA可使肿瘤细胞分泌血管内皮细胞生长因子减少,血管生成能力降低,有望成为食管癌基因治疗的靶基因之一。     

Id反义寡核苷酸对A549肺癌细胞的抑制及意义

【目的】观察Id反义寡核苷酸（IdASOD）对A549细胞中Id蛋白、mRNA表达及细胞的影响。【方法】体外培养A549细胞,并转染Id反义寡核苷酸;运用RT-PCR与Western-blot检测反义寡核苷酸对A549细胞中Id基因的抑制及蛋白表达的变化;用MTT法与细胞贴壁率检测转染反义寡核苷酸后A549细胞生物学特征的变化。【结果】转染反义寡核苷酸后A549中IdmRNA与蛋白表达水平明显低于未转染组（P〈0．05）,细胞存活率与活性明显下降（P〈0．05）。【结论】IdASOD对A549细胞及Id基因与蛋白表达有明显的抑制作用。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠在体肺癌细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸基因治疗方法对模型小鼠在体肺癌细胞的抑制作用。方法:于2001-05/2002-01在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,用反义寡核苷酸及正义寡核苷酸皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况。用免疫组化方法检测血管内皮生长因子蛋白表达,强阳性为,弱阳性为+。通过反转录多聚酶链反应检测血管内皮生长因子mRNA的表达,计算血管内皮生长因子与β-actin比值作为血管内皮生长因子表达水平参数。结果:30只模型鼠均进入结果分析。①平均瘤质量:对照组、血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组分别为(7.83±0.78),(4.49±0.43)和(7.73±0.69)g。②血管内皮生长因子在癌周表达强度高于癌内,在对照组及血管内皮生长因子正义寡核苷酸组多呈强阳性,而血管内皮生长因子反义寡核苷酸组多呈弱阳性。③血管内皮生长因子120/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.1594±0.025)低于对照组[(0.4020±0.032),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.3805±0.030),P<0.01]。④血管内皮生长因子164/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.3073±0.021)低于对照组[(0.8780±0.029),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.8481±0.020),P<0.01]。结论:血管内皮生长因子反义寡核苷酸与肿瘤血管的生成密切相关。原位注射血管内皮生长因子反义寡核苷酸能抑制小鼠在体肺癌细胞的生长。     

MMP-2与MMP-7在直肠癌中的表达及临床意义

目的研究直肠癌中MMP-2和MMP-7的表达情况,探讨它们与直肠癌侵袭和转移的关系及临床意义。方法对60例直肠癌、20例癌旁正常组织进行MMP-2和MMP-7免疫组化染色。结果MMP-2和MMP-7在癌组织中表达明显高于癌旁正常组织,二者之间差异显著（P〈0.05）,MMP-2和MMP-7表达均与肿瘤分化程度、Dukes分期及淋巴结转移呈正相关（P〈0.05）。结论直肠癌组织中MMP-2、MMP-7的表达与肿瘤进展有一定关系,可被视为反映直肠癌生物侵袭性的有价值的标志物,联合检测有助于判定结直肠癌临床病理特征及预后。     

Roles of matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) in cancer

Matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) is a small proteolytic enzyme that secretes zinc and calcium endopeptidases. It can degrade a variety of extracellular matrix substrates and other substrates and plays important regulatory roles in many human pathophysiological processes. Since its discovery, MMP-7 has been recognized as a regulatory protein in wound healing, bone growth, and remodeling. Later, MMP-7 was reported to regulate the occurrence and development of cancers and mediate the proliferation, differentiation, metastasis, and invasion of several types of cancer cells via various mechanisms. Thus, matrix metalloproteinase-7 may be a promising tumor biomarker and therapeutic target. The expression of MMP-7 correlates with the clinical characteristics of cancer patients, and its expression profile is a new diagnostic and prognostic biomarker for a variety of human diseases. Hence, manipulating the expression or function of MMP-7 may be a potential treatment strategy for different diseases including cancers. This review summarizes the role played by MMP-7 in carcinogenesis of several human cancers, underlying mechanisms, and its clinical significance of the occurrence and development of cancers.     

MMP-7、MMP-9蛋白在胃癌组织中表达的意义

目的 探讨基质金属蛋白酶MMP-7、MMP-9在胃癌组织中的表达、侵袭及转移的关系。方法 应用免疫组化SP法检测87例胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中MMP-7、MMP-9的表达情况。结果 MMP-7、MMP-9在正常胃组织未见表达，在癌旁组织中有低表达，分别为21．84％，17．24％，在胃癌组织中表达率明显增高，且表达率的高低与淋巴结转移、分化程度、浸润程度呈密切相关性（P〈0．05）。且MMP-7、MMP-9在胃癌组织中表达具有相关性。结论 MMP-7、MMP-9在胃癌组织中的高表达且两者呈正相关，并对胃癌的预后判定有一定意义。     

MMP-2、MMP-7蛋白在胃癌组织中表达的意义

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-7在胃癌组织中的表达、侵袭及转移的关系。方法应用免疫组化卵法检测87例胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中MMP-2、MMP-7的表达情况。结果MMP-2、MMP-7在正常胃组织表达率为阴性，在癌旁组织中有低表达，分别为18．4％、21．8％，在胃癌组织中表达率明显增高，且表达率的高低与淋巴结转移、分化程度、浸润程度呈密切相关性（P〈0．05）。且MMP-2、MMP-7在胃癌组织中表达具有相关性。结论MMP-2、MMP-7在胃癌组织中的高表达且两者呈正相关，并对胃癌的预后判定有一定意义。     

基质金属蛋白酶-2、7在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨结直肠癌中基质金属蛋白酶-2、7(MMP-2、MMP-7)的表达及其临床意义.方法 采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)法和免疫组化法检测42例结直肠癌组织及其邻近正常黏膜组织中MMP-2 mRNA和MMP-7 mRNA及其蛋白,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系.结果 结直肠癌组织MMP-2 mRNA、MMP-7 mRNA的转录水平和MMP-2、MMP-7的表达水平均显著高于邻近正常黏膜组织(P均<0.05),且均与浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期正相关.结直肠癌组织MMP-2 mRNA转录水平和MMP-7 mRNA转录水平、MMP-2表达水平和MMP-7表达水平均呈正相关(rs=0.454,P=0.003;rs=0.343,P=0.026).结论 MMP-2和MMP-7在结直肠癌发生发展中起重要作用,联合检测二者有助于结直肠癌的恶性程度及生物学行为的判断及预后评估.     

MMP-2、MMP-7和MMP-14在胃癌患者组织中表达的临床意义

目的探讨胃癌组织中MMP-2、MMP-7和MMP-14的表达及临床意义。方法应用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色法(S-P)法检测98例胃癌组织中MMP-2、MMP-7和MMP-14蛋白的表达。对照组20例为良性胃病变黏膜组织。结果胃癌组中MMP-2、MMP-7和MMP-14表达的阳性率明显高于对照组(P<0.05);胃癌组中MMP-2及MMP-14的阳性表达率与胃癌的肿瘤浸润深度、淋巴转移、肿瘤大小、大体分型、临床肿瘤分期有关(P<0.05或P<0.01)。MMP-7的阳性表达率与胃癌的肿瘤浸润深度、淋巴转移、分化程度、大体分型、临床肿瘤分期有关(P<0.05或P<0.01)。MMP-2和MMP-7蛋白表达正相关性(r=0.271,P<0.01);MMP-2和MMP-14蛋白表达正相关性(r=0.268,P=<0.01);MMP-7和MMP-14蛋白表达正相关性(r=0.202,P<0.05)。结论 MMP-2、MMP-7、MMP-14的表达上调与胃癌的浸润和转移有关。     

EB病毒感染与基质金属蛋白酶-7在胃癌发生中的作用

目的探讨EB病毒(EBV)感染、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)在胃癌发生和发展中的相互作用。方法采用原位核酸杂交技术检测304例胃癌和相应癌旁组织中EBV小RNA(EBER1)的表达,确证EBV相关胃癌(EBVaGC)。采用免疫组化技术检测20例EBVaGC、46例临床指标与之匹配的EBV阴性胃癌(EBVnGC)以及66例相应癌旁组织MMP-7的表达,结合患者临床病理资料进行综合分析。结果 (1)胃癌组织EBV阳性率为6.58%,显著高于相应癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)EBVaGC和EBVnGC中MMP-7的阳性率分别为65.00%和60.87%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EBV感染与部分胃癌的发生相关,但未观察到EBV感染对胃癌组织中MMP-7表达的影响。     

食管癌螺旋CT征象与MMP-7表达

目的探讨食管癌浸润转移的SCT征象与MMP-7表达间关系.方法46例食管癌术前行SCT增强扫描,术后标本采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中MMP-7表达.结果SCT对食管癌邻近结构有无受侵和有无淋巴结转移判断准确率为89.13%(41/46)和86.96%(40/46),与手术病理结果一致性好(P＜0.001).MMP-7阳性表达率为60.87%;邻近结构有、无侵犯组及淋巴结有、无转移组MMP-7的阳性表达率分别为91.67%,50.00%和87.50%,46.67%(P＜0.05).结论SCT征象可以反映食管癌MMP-7的表达情况及其生物学特性.     

膝关节滑膜炎滑膜清理术前后MMP-7与MMP-9测定和关节功能的影响分析

目的 探讨膝关节滑膜炎滑膜清理术前后基质金属蛋白酶(MMP)-7与基质金属蛋白酶(MMP)-9测定和关节功能的影响。方法 膝关节滑膜炎患者72例根据随机抽签方法分为治疗组与对照组各36例,对照组采用传统滑膜刨削手术治疗,治疗组采用关节镜下滑膜清理术。结果 治疗后治疗组的有效率是97.2%,对照组的有效率是80.6%,治疗组比对照组的疗效更为显著,差异具有统计学意义(P＜0.05)。两组术后的Lysholm功能评分明显增加,而疼痛评分明显减少,与术前对比差异明显,具有统计学意义(P＜0.05); 同时术后治疗组的Lysholm功能评分与疼痛评分与对照组对比差异也有统计学意义(P＜0.05)。术后两组滑膜组织的MMP-7与MMP-9阳性表达率都明显降低(P＜0.05),与此同时,术后治疗比对照组在MMP-7与MMP-9阳性表达率方面要明显低,差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 关节镜下滑膜清理术治疗膝关节滑膜炎能缓解疼痛,改善膝关节功能,降低MMP-7与MMP-9的表达,从而提高治疗综合疗效。