硅酸二钙离子溶出液体外促进成骨细胞分化及对BMP2和Smad1表达的影响

目的探讨硅酸二钙离子溶出液促进成骨细胞分化的能力及其可能的机制。方法人成骨细胞株MG63细胞分别培养于硅酸二钙离子溶出液条件培养基（实验组）及正常培养基（对照组）中,于培养3、6、9、12d后检测细胞分化标志物和骨形态蛋白2（BMP2）及其信号传递蛋白Smad1基因的表达,同时以ELISA法检测分泌至培养基中的BMP2浓度。以茜素红S染色定量检测钙矿沉积情况。结果硅酸二钙离子溶出液条件培养基中硅离子浓度显著高于正常培养基,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。此条件培养基能促进MG63细胞晚期分化,并能促进其钙矿沉积,也能促进BMP2的分泌及其基因表达,以及Smad1基因的表达。结论硅酸二钙离子溶出液有促进MG63细胞分化的能力,这可能与高浓度硅有关,刺激MG63细胞表达BMP2及其信号传递蛋白可能是其作用机制之一。     

不同浓度葡萄糖对MG63细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察不同浓度葡萄糖和高糖波动对具有人成骨细胞表型特征的MG63细胞增殖?细胞周期及凋亡的影响,探讨糖尿病性骨质疏松症的发病机制?方法:用不同浓度葡萄糖(5.5?33.3和5.5?33.3 mmol/L交替)分别刺激培养的MG63细胞24 h,MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率?结果:①高糖及高糖波动可抑制MG63细胞的增殖,与高糖组相比,高糖波动组的抑制效应更加明显;②高糖及高糖波动可阻滞MG63细胞周期,使G1期细胞比例增加,S期比例减少,诱导细胞凋亡?高糖波动组作用更加明显?结论:高糖波动可抑制成骨细胞增殖,阻滞其细胞周期,诱导细胞凋亡?推测高糖波动可能通过对成骨细胞增殖及细胞周期?细胞凋亡的影响而参与糖尿病性骨质疏松症的发生发展     

骨桥蛋白在体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化中的作用

目的：观察骨桥蛋白是否能诱导体外培养的大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向成骨细胞分化,探讨其在骨折愈合过程中的作用机制,为其以后在骨折愈合方面的研究提供确切的理论依据。方法：以冲洗法获取Wistar大鼠骨髓,用贴壁法分离提纯BMSCs,传至第3代后分组,体外培养的BMSCs分为实验组和对照组,实验组添加含0.2nmol/L骨桥蛋白的DMEM条件培养基;对照组为不含骨桥蛋白的DMEM培养基,于不同时间点收集细胞。通过光镜观察培养的细胞形态,以细胞计数法测定生长曲线,应用流式细胞仪分析细胞周期,并行碱性磷酸酶（ALP）染色和活性测定及骨钙素（OCN）含量测定。结果：实验组细胞具有成骨细胞的形态学特征;实验组细胞生长曲线右移,细胞G0/G1期比例平均增加13.17%（P〈0.01）,S期比例减少74.93%（P〈0.01）;实验组ALP染色呈阳性,且ALP活性、OCN含量均较对照组明显提高。结论：骨桥蛋白对BMSCs有促进成骨分化的作用。     

成骨细胞培养微环境对Hela细胞STAT_3的转录表达及细胞增殖的调控作用

目的:探讨成骨细胞微环境(OBM)对Hela细胞STAT3转录表达及细胞增殖的影响。方法:分离培养大鼠成骨细胞,取其培养液与DMEM血清培养基按照1:1比例混合,培养Hela细胞。分为对照组与实验组(添加成骨细胞培养液)。采用Real time PCR检测STAT3的mRNA水平,CCK-8法检测Hela细胞增殖。结果:成功分离成骨细胞,并取其培养液作用于宫颈癌Hela细胞。与对照组相比,在24 h、48 h、72 h,实验组STAT3mRNA水平分别升高约28.2%、37.5%、32.1%,实验组细胞增殖能力分别升高约11.7%、29.5%、24.6%。结论:OBM可上调宫颈癌Hela细胞中STAT3的转录表达并促进细胞增殖。     

二膦酸盐对MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的体外观察二膦酸盐对骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用。方法将不同浓度的二膦酸盐药物与MG-63细胞体外培养,采用MTT比色法测定其细胞活力,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258细胞染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡检测。结果MTT比色法测得药物作用72h对MG-63细胞的ID50为52.37μmol/L;细胞生长曲线表明细胞增殖数量与药物浓度及时间有显著依赖性;细胞荧光染色观察实验组细胞形态改变;细胞流式观察细胞凋亡实验组较正常差异有显著性,72h后细胞凋亡率40.2%±2.1%相比正常细胞2.8%±0.7%有统计学意义;细胞周期分析实验组细胞SubG1相比正常组显著累积G2/M细胞被阻滞。结论二膦酸盐抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。     

一种中药单体小复方对变应性鼻炎模型小鼠的免疫调节作用

目的：探讨3种中药单体淫羊藿苷、黄芩苷、黄芪甲苷经优化配比组成的小复方对变应性鼻炎模型小鼠的免疫调节作用。方法：采用卵清蛋白腹腔注射与滴鼻结合的方法建立变应性鼻炎小鼠模型,分离小鼠脾淋巴细胞后体外培养,并将细胞分为空白对照组、刀豆素A组、复方组3组,在不同时间点运用细胞增殖-毒性检测试剂盒连续观察各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期变化,荧光定量分析仪结合荧光探针Fluo-3检测细胞内游离钙离子浓度变化。结果：中药单体小复方可以有效抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎小鼠脾淋巴细胞增殖（P〈0.01）,且呈现出一定的时效关系,抑制率随时间的延长而增强,在48h达最大值。流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化发现,刀豆素A可以通过降低G0/G1期百分比,升高S期与G2/M期的百分比而促进细胞进入分裂期,复方组与刀豆素A组相比,则在4个时间点均可以升高G0/G1期比例,并降低S期与G2/M期的比例,作用在24h最显著（P〈0.05或P〈0.01）。荧光定量分析仪检测发现,前24h,刀豆素A诱导后的淋巴细胞荧光强度随时间延长而逐渐增强,而复方组可以明显抑制刀豆素A导致的荧光强度升高,降低细胞内游离钙离子浓度（P〈0.01）。结论：中药单体小复方可以抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎模型小鼠脾淋巴细胞增殖,其作用机制可能为通过降低细胞内游离钙离子浓度,从而抑制细胞由G0/G1期进入S和G2/M期。     

BMP2、Noggin和IGF-1对成骨细胞的调节作用

目的 研究骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、noggin、胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor 1,IGF-1)对成骨细胞增殖的调节作用.方法 将人成骨肉瘤细胞MG63于RPMI 1640培养基中培养,添加不同浓度的BMP2、noggin、IGF-1蛋白进行药物干预,用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl-tetrazolium,MTT)法研究成骨细胞的增殖率.结果 各药物干预组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),对成骨细胞增殖的作用效应呈剂量和时间依赖性,其作用的最佳时间均在72 h.各药物组内之间比较,确定了最佳作用浓度,BMP2为2×10-9 mol/L,对MG63细胞的增殖率达179.59%;noggin为8×10-9 mol/L,对其增殖的抑制率达到15.51%;IGF-1为1×10-8 mol/L,其增殖率达189.80%.结论 BMP2、IGF-1对MG63细胞增殖有促进作用,而noggin则抑制MG63细胞的增殖.     

GSK-3抑制剂治疗肺癌的可行性研究

目的探索GSK-3抑制剂治疗肺癌的可行性,为临床防治肺癌提供帮助。方法将A549细胞株培养于10%小牛血清的DMEM中,A549细胞培养进入指数生长期,消化细胞并控制细胞悬液细胞密度,以2×105/孔细胞数接种于置有无菌血片的6孔板进行爬片,细胞贴壁后,加入含10%小牛血清的DMEM孵育14h,换含终浓度0、10mm LiCL的DMEM孵育。将上述培养出的细胞分为两组:实验组(经含10mm LiCL的DMEM孵育),空白对照组(经含0mm LiCL的DMEM孵育)。对实验组和空白对照组进行流式细胞检测及免疫组化检测Casepase-3,胞核或胞浆染成棕色颗粒为阳性细胞,选择5个有代表性的高倍视野,计数100个细胞中阳性细胞个数/HP X5作为统计数据。采用SPSS 11.0统计软件包进行处理。结果细胞周期分布分析比较:实验组与空白对照组比较,细胞周期明显停滞于G0/G1期;其G0/G1期,S期,G2/M期分别为58.8%,0.2%,41.0%。免疫组化法测定Casepase-3比较:实验组Casepase-3表达明显高于空白对照组,阳性率分别为(37.6±1.51)%和(3.4±1.67)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论GSK-3抑制剂作用于肺癌细胞,能使肺癌细胞产生大量调亡,证明该药治疗肺癌具有可行性。     

湖北五峰绿茶抗宫颈癌Caski细胞作用的研究

目的 研究从湖北五峰绿茶提取的茶多酚抗宫颈癌Caski细胞作用及其可能的机制. 方法茶多酚按不同时间(24h,48h,72h)及不同浓度(1～8mg/ml)分别处理Caski细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期. 结果 8mg/ml茶多酚处理Caski细胞72h可显著地抑制Caski细胞增殖,2mg/ml茶多酚处理Caski细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现,且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少. 结论茶多酚可抑制Caski细胞增殖并激发细胞凋亡.     

低渗作用对人成骨样细胞MG63功能的影响

目的 本试验通过研究低渗透压的静牵张作用对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2 ]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征.方法 用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h持续牵张作用后,用MTT法检测细胞增殖情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2 ]i含量波动情况.结果 随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mmol/L和240 mmol/L低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞增殖能力增强,[Ca2 ]i、ALP活性缓慢增高;而细胞在163 mmol/L低渗液作用下,细胞增殖受到抑制,8 h时出现[Ca2 ]i急剧升高,ALP活性明显高于其对照组.结论 低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2 -ATPase都有一定的影响作用,且Ca2 内流与ALP活性之间存在一定的相关性.     

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸序列在生物活性玻璃对人牙髓细胞生物作用中的影响

目的：生物活性玻璃（bioactive glass, BG）对人牙髓细胞（human dental pulp cells, hDPCs）的增殖及矿化有积极的作用,本研究目的是研究精氨酸-甘氨酸 天门冬氨酸-丝氨酸序列（Arg-Gly-Asp-Ser,RGDS）在BG对hDPCs的黏附、增殖及矿化作用中的影响。方法：用含不同质量浓度RGDS（12.5 mg/L、25.0 mg/L、50.0 mg/L、100.0 mg/L、200.0 mg/L）的BG浸提液培养hDPCs,对照组为不含RGDS的BG浸提液。采用细胞活性噻唑蓝（MTT）比色法于接种后4 h检测细胞黏附数量,于第1、3、5、7、9天测定细胞增殖,第14、28天对细胞进行茜素红染色检测矿化活性。结果：BG浸提液加RGDS组与单纯BG浸提液组相比,hDPCs黏附数目降低,呈RGDS浓度依赖性;BG浸提液加RGDS组的增殖活性早期低于单纯BG浸提液组,但后期两组之间差异无统计学意义;BG浸提液能够促进hDPCs的矿化,加入RGDS组的矿化活性与单纯BG浸提液组差异无统计学意义。结论：游离态RGDS不影响BG对hDPCs的增殖和矿化促进作用,但会与hDPCs结合进而影响hDPCs向培养皿底的黏附。     

蛋白酶体抑制剂MG132对人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响

【摘要】 目的 了解蛋白酶体抑制剂三肽基乙醛（Z-Leu-Leu-Leu-cho, MG132）抗人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞的活性,研究MG132治疗人子宫内膜癌的潜在应用价值。方法 用不同浓度的MG132(0,0.2,0.5,1.0 μmol/L)处理HEC-1B和Ishikawa细胞24 h、48 h,采用MTT法检测MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞增殖的影响;应用流式细胞术分别检测0.5 μmol/L MG132处理24 h后两种细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果 MG132能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,在本研究浓度范围内MG132浓度增高对两种细胞的抑制作用增强（P<0.01）,48 h抑制作用强于24 h(P<0.01),Ishikawa细胞对MG132的敏感程度大于HEC-1B细胞。MG132处理HEC-1B和Ishikawa细胞后凋亡率均增加（P=0.000）,细胞周期分析显示HEC-1B细胞G2期细胞比例增加（P<0.05）,Ishikawa细胞G1和G2细胞比例增加（P<0.05）。结论 蛋白酶体抑制剂MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞有增殖抑制、诱导凋亡和阻滞细胞周期的作用。MG132可能成为潜在的子宫内膜癌化疗药物。     

溶血磷脂酸对脊髓星形胶质细胞增殖的影响

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养脊髓星形胶质细胞增殖的影响。方法采用原代培养的大鼠脊髓星形胶质细胞,实验分为对照组(正常培养液培养)和LPA干预组(含有10μmol/L LPA的培养液培养);在不同时间点(0、6、12、24和48h),计数各组的细胞数目,采用Western blot和流式细胞术检测各实验组增殖细胞核抗原(PCNA)表达量变化及细胞周期进展情况。结果免疫荧光染色显示原代培养的脊髓星形胶质细胞纯度达98%;在各观察时间点,对照组和LPA干预组的星形胶质细胞的细胞增殖数目、PCNA蛋白表达量及细胞周期分布情况均无显著差异(均P>0.05)。结论 LPA对体外培养脊髓星形胶质细胞的增殖活力和细胞周期进展并无显著影响。     

Targeted silencing of heparanase gene by small interfering RNA inhibits invasiveness and metastasis of osteosarcoma cells

The effects of targeted silencing of heparanase gene by small interfering RNA(siRNA) on invasiveness and metastasis of osteosarcoma cells(MG63 cells) were investigated in the present study.Two complementary oligonucleotide strands were synthesized and inserted into pGenesil-1 vector based on the mRNA sequence of heparanase gene.The expression vector containing short hairpin RNA(pGenesil-shRNA) was constructed successfully.MG63 cells were randomly allocated into 3 groups:blank group,empty vector(pGenesil) transfected group and expression vector(pGenesil-shRNA) transfected group.Under the induction of Lipofectamine 2000,the recombinants were transfected into MG63 cells.Heparanase gene expression level was detected by RT-PCR and Western blotting.Cell prolifera-tion was measured by MTT assay.Cell invasiveness and metastasis were examined by cell adhesion and Transwell-ECM assays.HUVECs migration assay was applied for the detection of angiogenesis.As compared with negative controls,the mRNA and protein expression levels of heparanase were down-regulated by 76.1%(P<0.01) and 75.3%(P<0.01) respectively in the pGenesil-shRNA transfected group.Meanwhile,the proliferation,adhesiveness,invasiveness and angiogenesis properties of MG63 cells were all significantly inhibited.It was suggested that targeted silencing of heparanase gene by siRNA could dramatically inhibit the invasiveness and metastasis of osteosarcoma cells.     

Hela培养上清液对hUVEC细胞增殖的影响

目的研究子宫颈癌细胞（Hela）的培养上清液对人脐静脉内皮细胞（hUVEC）增殖的影响。方法以Hela细胞培养上清液和DMEM培养基的等比例混合液培养的hUVEC细胞为实验组,以纯DMEM培养基培养的hUVEC细胞为对照组。MTT法检测细胞增殖情况的变化;流式细胞术检测细胞周期的改变;PCR法检测CDK和CyclinD调控基因的表达情况。结果hUVEC经Hela细胞培养上清液作用96 h后,细胞数明显增加,S期细胞的比例明显上升,CDK和CyclinD调控基因表达明显上调。结论Hela细胞培养上清液能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖,其机制之一可能是通过上调CDK和CyclinD调控基因来诱导更多的细胞进入S期,从而导致细胞的快速增殖。     

复方黄黛片灭活兔血清对人红白血病细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨复方黄黛片(Compound Realgar and Natural Indigo Tablet,CRNIT)灭活兔血清对人红白血病(Human Erythroleukemia,HEL)细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响;方法:制备复方黄黛片、羟基脲片、生理盐水三组灭活含药兔血清,用不同浓度的血清处理HEL细胞,通过CCK-8检测细胞增殖-毒性,通过Annexin V/PI双染色流式细胞分析检测细胞凋亡,Cell Cycle Staining Kit流式细胞分析检测细胞周期。结果:1.在一定浓度范围内,复方黄黛片灭活兔血清对HEL细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,且强于羟基脲片组、生理盐水组(P0.05);2.对比复方黄黛片灭活兔血清处理HEL细胞24 h、48 h抑制率,提示其抑制作用呈时间依赖性;3.在一定浓度范围内,复方黄黛片灭活兔血清对HEL细胞凋亡的促进作用呈浓度依赖性,且优于羟基脲片组和生理盐水组(P0.05);4.经复方黄黛片灭活兔血清处理24 h,处于G1期的HEL细胞较对照孔增多。结论:复方黄黛片灭活兔血清能有效的抑制HEL细胞增殖,促进细胞早期凋亡,并影响HEL细胞周期。     

pIRES-p16ink4a-hRb1载体的构建及其对骨肉瘤细胞周期的调控

目的 应用内部核糖体插入位点（IRES）序列构建单启动子双顺反子穿梭载体pIRES-p16ink4a—hRb1并鉴定，观察其导入骨肉瘤细胞后对细胞周期的调控。方法 利用基因工程技术，将p16ink4a与hRb1全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中，质粒构建通过PCR、双酶切与测序鉴定；脂质体转染至p161nk4a表达缺失、hRb1表达阳性的骨肉瘤细胞株MG63，G418筛选获得抗性克隆，通过RT-PCR和Western blot法分析外源基因表达；流式细胞术分析细胞周期特异性和细胞凋亡率，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。结果 成功构建出pIRES-p16ink4a—hRb1载体，外源基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。与对照组比较，双基因导人组细胞生长抑制率显著上升，细胞周期显著阻滞在G1期，且细胞凋亡率极显著升高。结论 pIRES-p16ink4a—hRb1双顺反子穿梭载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功，为进一步研究p16ink4a与hRb1相互关系在细胞周期调控中的作用奠定了基础。