白细胞介素1刺激破骨细胞性骨吸收作用的实验研究

目的：了解白细胞介素1β（IL－1β）在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用及其相应的作用机制。方法：分别将新生大鼠破骨细胞单独以及和成骨细胞联合接种于预置象牙片的培养板中。24h后培养液中加入不同浓度的IL－1β。继续培养48h,然后取出象牙片,超声处理后行甲苯胺蓝染色,光镜下观察骨吸收陷窝的数目并计算其部面积。结果：IL－1β能够明显增加坡骨细胞和成骨细胞联合培养组象牙片上吸收陷窝的数目和面前,且刺激作用呈剂量依赖性,但对单独培养的破骨细胞无明显刺激作用。结论：IL－1β的刺激骨吸收作用由成骨细胞所介导,而非直接作用于破骨细胞。     

白细胞介素-28和白细胞介素-29的研究进展

白细胞介素-28(IL-28A、IL-28B)和白细胞介素-29(IL-29)是一组由病毒或双链RNA诱导的多种细胞产生的新型白细胞介素，它们能结合一种由IL-10RB和IL-28Rα组成的异二聚体型Ⅱ类细胞因子受体，通过Jak-STAT信号通路而发挥其抗病毒或其他防御功能。作者就IL-28与IL-29的分子结构、编码蛋白、受体与生物学活性等作一综述。     

芹甙元抑制破骨细胞分化的机制研究

目的 探讨芹甙元抑制破骨细胞分化机制。方法 小鼠骨髓巨噬细胞(BMMs)分不同浓度的芹甙元组,通过CCK-8法检测芹甙元对BMMs的细胞毒性,抗酒石酸酶(TRAP)染色法检测各组成熟破骨细胞数量,荧光定量聚合酶法(qPCR)检测各组破骨细胞分化标志基因(NFATC1、TRAP、CTSK、Atp6v0d2、Dc-stamp、C-Fos)mRNA的表达,Western blot法检测核转录因子κB p65(NF-κB p65)中磷酸化蛋白的水平。结果 CCK-8检测结果显示,芹甙元在50μmol/L范围内对BMMs无明显的细胞毒性;TRAP染色结果显示,TRAP染色阳性的破骨细胞数目随着芹甙元浓度的升高而减少;qPCR检测结果显示,随着芹甙元浓度的升高,破骨细胞分化基因(NFATC1、TRAP、CTSK、Atp6v0d2、Dc-stamp、C-Fos mRNA)mRNA的表达水平明显降低(P<0.05);Western blot法检测结果显示,芹甙元组p65的磷酸化水平相对于对照组明显降低(P<0.05)。 结论 芹甙元可以通过NF-κB通路抑制破骨细胞分化与成熟,有望作为治疗骨质疏松骨溶解的潜在药物。     

冬凌草甲素抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨冬凌草甲素抑制破骨细胞分化的作用及其机制。方法通过体外培养原代骨髓巨噬细胞（BMMs）,观察不同浓度冬凌草甲素对BMMs增殖的抑制作用和破骨细胞分化的影响;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞数目和铺展率;qRT-PCR法检测破骨细胞降钙素受体（CTR）、组织蛋白酶K（CTSK）、活性T细胞核因子c1（NFATc1）mRNA表达水平。结果与对照组相比,经冬凌草甲素处理48、72h后,6.4滋M以上的冬凌草甲素对BMMs的增殖有明显抑制作用,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;经冬凌草甲素处理96h后,3.2滋M以上的冬凌草甲素对BMMs的增殖有明显抑制作用,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;在NF-资B受体活化因子配体诱导下,与对照组相比,0.4、0.8滋M冬凌草甲素可明显减少破骨细胞分化数目和铺展率（均P＜0.01）,且其CTR、CTSK、NFATc1mRNA表达水平均下调（均P＜0.01）。结论冬凌草甲素通过下调破骨细胞分化转录调控因子NFATc1的表达抑制破骨细胞的分化。     

降钙素基因相关肽抑制白细胞介素-1介导骨的吸收作用

目的　了解白细胞介素 - 1β(IL - 1β)在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用 ,并评价降钙素基因相关肽 (CGRP)的拮抗效果 .方法　将新生大鼠破骨细胞和成骨细胞混合培养 ,接种于预置象牙片的培养板中 .2 4 h后培养液中分别加入 IL-1β和不同浓度的 CGRP.继续培养 4 8h,然后取出象牙片 ,超声处理后行甲苯胺蓝染色 ,光镜下观察骨吸收陷窝数目并计算其总面积 .结果　 IL - 1β明显增加象牙片上吸收陷窝的数目 (37.2± 8.2 vs 2 2 .4± 5 .7) per slice (P <0 .0 1)和面积(μm2 ,976 1± 2 775 vs4 2 2 4± 1381,P<0 .0 1) ,而 CGRP则能够显著抑制 IL- 1β的刺激作用 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,且抑制作用呈剂量依赖性 (r1 =- 0 .5 6 ,P<0 .0 1;r2 =- 0 .4 9,P<0 .0 5 ) .结论　 CGRP可直接作用于破骨细胞并抑制其活化 ,并调节成骨细胞相关因子的释放而间接影响破骨细胞功能 .     

白细胞介素33——具有免疫调节作用的白细胞介素1家族新成员

白细胞介素33(IL-33)是最近通过生物信息学分析发现的一种IL-1家族的细胞因子。IL-33分布广泛,在胃、肺、脊髓、脑和皮肤中高表达,在如Crohn病的患者肠道、类风湿关节炎患者关节滑膜等慢性炎症组织中也能检测到。IL-33具有双重作用,作为分泌性细胞因子能够参与调节Th2免疫反应,并具有前炎性因子的作用;作为核因子则能定位于细胞核内,起转录抑制作用。IL-33在类风湿关节炎等慢性炎性疾病过程中扮演重要角色,对其的研究将为理解这些疾病的发病机制,寻找治疗靶点提供新的思路。     

白细胞介素与骨质疏松关系的研究进展

骨质疏松（0P）是以骨量减少、骨组织显微结构受损以及随之而来的骨折危险性增加为特征的一种退行性骨病。以往对OP发病的研究主要集中在营养因素和激素等方面。随着分子生物学的发展，对其发病的研究深入到了分子水平，细胞因子的研究越来越受到重视。调控破骨细胞与成骨细胞分化、活性的白细胞介素（interleukin，IL）发生改变，也能引起OP。现结合文献综述如下：     

WT161抑制小鼠破骨细胞分化及骨吸收的研究

目的 研究WT161对破骨细胞分化及骨吸收功能的作用及机制。方法 取8周龄雄性C57BL/6小鼠的骨髓巨噬细胞（bone marrow-derived macrophage,BMM）进行原代培养,通过CCK-8细胞毒性试验探究不同浓度WT161对BMM增殖的作用;通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察各浓度WT161对破骨细胞分化的影响;通过骨吸收试验探究各浓度WT161对破骨细胞骨吸收功能的作用;通过蛋白质印迹试验检测WT161对核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）p65、p-NF-κB p65及活化T细胞核因子（nuclear factor-activated T cell 1,NFATc1）信号通路的影响。结果 CCK-8结果显示当WT161浓度>0.63μmol/L时,WT161对BMM具有显著的抑制增殖作用;诱导破骨细胞分化时,WT161抑制BMM分化为破骨细胞,破骨细胞数目及铺展率明显减少;骨吸收试验显示WT161可显著抑制破骨细胞骨吸收功能;蛋白质印迹试验结果表明,WT161抑制NF-κB p65的磷酸化及下游NFATc1的表达。结论 WT161通过抑制NF-κB及下游的NFATc1信号通路从而抑制破骨细胞的分化及骨吸收功能。     

锝［99Tc］亚甲基二膦酸盐抑制类风湿关节炎患者外周血单核细胞向破骨样细胞转分化

目的：研究锝［99Tc］亚甲基二膦酸盐（technetium［99Tc］ methylenediphosphonate,99Tc-MDP）对核因子κB受体活化子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage-colony stimulating factor,M-CSF）诱导类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞 (peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向破骨样细胞转分化的影响。方法：从6例RA患者外周血中分离单核细胞,于RPMI-1640培养液中培养,RANKL（25 μg/L）和 M-CSF（25 μg/L）诱导转分化,用不同浓度99Tc-MDP干预（5,10,20,50 mg/L）,在不同时间点（4,12,20 d）终止培养并行HE染色,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色。结果：RA患者外周血单核细胞培养至第12～16天,可见大量TRAP染色强阳性多核巨细胞,99Tc-MDP可显著抑制上述变化,且其抑制作用随浓度的增加而增强（P＜0.05）。结论：99Tc-MDP可通过抑制破骨样细胞转分化而达到延缓RA骨质破坏的作用。     

Effect of local viral transfer of interleukin 10 gene on a rabbit arthritis model induced by interleukin 1β

Backgroud Interleukin 16 （IL-1β） is the principal mediator in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. Continuous injection of interleukin 1β （IL-1β） into the knee articular cavities of anamals can induce models that resemble rheumatoid arthritis. The objective of this study was to evaluate the feasibility of local recombinant retrovirus viral interleukin 10 （rRV-vlL-10） gene transfer treatment of a rabbit model of arthritis induced by IL-16. Methods An hlL-1β-induced rabbit rheumatoid arthritis model was established using the MFG-hlL-1β-neo-HIG-82 cell line, which is capable of continuous secretion of hlL-1β. After transfecting the rabbit synovial fibroblast cell line （MFG-hlL-1β-neo-HIG-82） with rRV-vlL-10, G418 was then added to identify the positive clone. The rRV-vlL-10 positive clone was injected into the established rabbit rheumatoid arthritis model through intra-articular injection. Successful gene transfer was determined by reverse transcripUon-polymerase chain reaction （RT-PCR） and immunohistochemistry. The levels of IL-1β before and after treatment were determined by enzyme- linked immunosorbent assay. Results Retrovirus vector was an effective vector both to synoviocytes in vitro and synovium tissue in vivo as confirmed by RT-PCR and immunohistochemistry. The rabbit arthritis model treated with rRV-vlL-10 showed a dramatic remission of arthritis and a decline in the level of cytokines such as IL-1β. Conclusions Retrovirus-mediated transfecUon of vlL-10 successfully transferred the gene into rabbit synovium ex vivo and was able to suppress intra-articular inflammation response to IL-1β.     

唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白､钙调磷酸酶表达的影响

目的:探讨唑来膦酸(zoledronate,ZOL)对破骨细胞分化中钙调蛋白(calmodulin)和钙调磷酸酶(calcineurin)基因表达的影响?方法:小鼠RAW264.7细胞分为A?B两组,均用100 ng/mL核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导4 d;B组细胞在RANKL 诱导第2天加入1×10-6 mol/L ZOL处理48 h?RANKL 诱导4 d后收获细胞,检测破骨细胞生成及calmodulin?calcineurin基因表达情况?结果:B组多核破骨细胞数?吸收陷窝数目及面积分别为(8.8 ± 2.3)个?(6.7 ± 1.2)个和(997.1 ± 14.8)μm2,均显著低于A组的(19.7 ± 2.9)个?(13.3 ± 1.5)个和(1 676.9 ± 24.9) μm2(P < 0.01)?B组calmodulin mRNA及蛋白水平较A组分别降低了51.0%和78.7%(P < 0.05),calcineurin则分别下降了37.0%和69.5%(P < 0.01)?免疫荧光细胞化学显示,B组calmodulin?calcineurin的荧光强度较A组也明显下降?结论:ZOL可显著抑制破骨细胞生成,并下调破骨细胞分化中calmodulin和calcineurin的mRNA和蛋白水平,而calmodulin?calcineurin可能参与了ZOL对破骨细胞形成和功能的抑制?     

小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响

目的: 构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响。方法: 提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用PmeⅠ线性化后转化到含pAdEasy-1 的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒 Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响。结果: 与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK) mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论: 成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化。     

Changes in serum levels of soluble osteoclast-associated receptor in human rheumatoid arthritis

Background  Osteoclast-associated receptor (OSCAR) is a member of the newly identified leukocyte receptor complex, and has recently been described as a key molecule in osteoclastogenesis. In this study, we measured the levels of soluble osteoclast-associated receptor (sOSCAR) in the serum of rheumatoid arthritis (RA) patients and healthy controls to examine whether sOSCAR may play a role in the process of inflammatory arthritis.

Methods  Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to measure the levels of sOSCAR in the serum of 40 healthy controls and 40 RA patients.

Results  The serum levels of sOSCAR were significantly lower in RA patients than in healthy controls, and were inversely associated with inflammatory activity.

Conclusion  sOSCAR is decreased in patients with RA and reduced levels of the protein are associated with increased inflammatory response.

     

橄榄苦苷对破骨细胞的分化以及骨吸收功能的影响

目的 探讨橄榄苦苷(oleuropein)对破骨细胞分化成熟以及骨吸收功能的影响及其可能机制.方法 把不同浓度的橄榄苦苷(12.5、25、50 μmol/L)分别加入由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的体外破骨细胞培养体系中,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resist ant acid phosphatase,TRAP)染色方法观察呈TRAP阳性的多核细胞;RAW264.7细胞也用RANKL诱导,用流式细胞仪分析橄榄苦苷对破骨细胞凋亡的影响;在扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)下观察骨吸收陷窝,并用图像分析软件统计其面积.采用Western blot法检测橄榄苦苷对破骨细胞特异性蛋白组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、激活T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATC1)及相关信号通路蛋白表达的影响.结果 TRAP染色结果显示,橄榄苦苷能显著抑制RANKL诱导的破骨细胞的形成,且呈浓度依赖性(P＜0.05);橄榄苦苷能下调破骨细胞特异性蛋白CTSK的蛋白表达水平(P＜0.05);橄榄苦苷对破骨细胞的凋亡无明显影响(P＞0.05);橄榄苦苷能显著减少骨吸收陷窝的面积(P＜0.05);橄榄苦苷能够下调NFATC1及磷酸化p38(p-p38)的表达(P＜0.05).结论 橄榄苦苷可以抑制由RANKL诱导的破骨细胞分化以及破骨细胞的骨吸收功能,可能和橄榄苦苷能够下调p38/MAPK信号通路有关.     

有机锗抑制佐剂诱导关节炎大鼠炎症组织局部组胺和5-羟色胺表达

目的:观察有机锗(β-羧乙基锗倍半氧化物,β-carboxyethylgermanium sesquioxide,Ge-132)对佐剂诱导关节炎大鼠炎症组织局部组胺(histamine,HA)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为6组(n=10)：空白对照组,模型组,低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(40 mg/kg)Ge-132治疗组以及吲哚美辛(IDMT,1 mg/kg)对照组。除空白对照组外其余各组大鼠均在右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,FCA)0.1 ml制备实验性类风湿性关节炎(RA)大鼠模型。于FCA注射前、注射造模后第3、6、9、12、15、18、21天测大鼠体质量和右足足跖容积,计算体质量增长率和足跖肿胀率。造模第21天处死大鼠,取右后足,测定炎症组织局部HA及5-HT的含量。结果:造模第21天,中、高剂量Ge-132治疗组及IDMT对照组大鼠体质量增长率优于模型组及低剂量组(P<0.01),与空白对照组无统计学差异。低、中、高剂量组大鼠足跖肿胀程度明显低于模型组(P<0.01),但高于IDMT对照组(P<0.01或0.05);高剂量组肿胀程度明显低于低、中剂量组(P<0.05)。低、中、高剂量组及IDMT对照组大鼠关节炎局部HA含量均显著低于模型组(P<0.01);但低、中剂量组高于高剂量组、IDMT对照组(P<0.01)。中、高剂量组及IDMT对照组大鼠关节炎局部5-HT含量显著低于模型组和低剂量组(P<0.01)。结论:中、高剂量Ge-132可能通过抑制HA、5-HT等炎症介质的释放显著减轻关节炎大鼠的局部炎症,效果与IDMT相近。     

miRNA-29c抑制前列腺癌细胞系LNCaP的增殖和侵袭

目的观察miRNA-29c(miR-29c)对前列腺癌细胞系LNCaP增殖和侵袭能力的影响,探讨其潜在的应用价值。方法采用qRT-PCR观察雄激素依赖性(LNCaP)与雄激素非依赖性(LNCaP-AI)前列腺癌细胞中miR-29c的表达差异;采用miR-29c抑制物(anti-miR-29c)下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,绘制LNCaP细胞生长曲线,利用流式细胞仪测定细胞周期;Transwell侵袭实验分析miR-29c抑制前后LNCaP细胞的体外侵袭能力。结果 qRT-PCR显示LNCaP-AI细胞中miR-29c水平明显低于LNCaP细胞(P<0.05);下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,可明显促进LNCaP细胞体外增殖及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-29c的正常表达有利于抑制LNCaP细胞的体外增殖和侵袭,有望成为前列腺癌生物治疗的潜在靶点。