14色流式检测人外周血白细胞亚群方案的建立

目的 建立14色流式检测人外周血中白细胞亚群方案.方法 用细胞膜表面抗体CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56、CD16、CD14、CD25、CD127、HLA-DR、CD123、CD11c和核酸染料DAPI建立14色流式染色方案,检测人外周血白细胞主要细胞亚群.取健康成年志愿者外周血标本分别对各抗体进行...     

肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究

目的 探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况.方法 分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点.结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要...     

超抗原肠毒素B对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

目的 观察超抗原肠毒素B(SEB)活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义.方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应.结果 与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖;而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCR Vβ14亚族.SEB刺激的T细胞早期(8 h)出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达(P<0.01或P<0.05).结论 CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志.     

华北油田健康成年人外周血淋巴细胞亚群参考值调查

目的建立华北油田健康成年人外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的正常参考值范围,为机体免疫状态的分析和研究提供参考。方法使用美国BD公司MultiTEST四色特异性淋巴细胞亚群荧光抗体,对376例健康成年人外周血淋巴细胞亚群进行标记,采用BD公司的FACSCalibur流式细胞仪进行检测,并用SPSS13.0软件统计分析结果。结果华北油田健康成年人淋巴细胞亚群参考值CD3+细胞为817～2048个/μl(43.2%～80.0%),CD3+CD4+细胞为390～1296个/μl(20.0%～51.0%),CD3+CD8+细胞为242～993个/μl(11.2%～42.0%),CD3-CD19+细胞为78～503个/μl(5.0%～19.0%),CD3-CD16+CD56+细胞为123～969个/μl(6.0%～36.8%),CD3+CD4+/CD3+CD8+为0.66～2.85。结论在同一地区,可以建立健康成年人外周血淋巴细胞亚群的参考值范围。     

AML—M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点

目的研究AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点，并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT—PCR-基因扫描技术分析初治AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖，免疫磁珠分选患者T淋巴细胞，体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化，并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖，TCR即分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族，体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同，有部分出现新的邯亚家族表达及克隆性增殖，有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖，体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML—M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖，部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态，可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL，体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加，并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞，提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。     

超抗原SEB对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

[摘要] 目的 观察超抗原肠毒素B（SEB）活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义。方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞、RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应。结果与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖,而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCRVβ14亚族。SEB刺激的T细胞早期（8 h）出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达（P ＜0.01或P ＜0.05）。结论CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志。     

淋巴细胞白血病和淋巴瘤T细胞受体基因重排研究

目的：探讨淋巴细胞白血病及淋巴瘤的T淋巴细胞受体（TCR）Vβ亚家族分布特点。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测急性淋巴细胞白血病5例,慢性淋巴细胞白血病2例,弥漫大B淋巴瘤3例及外周T淋巴瘤3例患者的外周血或淋巴结T淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达。对照组为健康人8例。结果：对照组健康8例外周血淋巴细胞表达全部24个Vβ亚家族。急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞TCR Vβ亚家族均呈限制性表达,外周T淋巴瘤2例和弥漫大B淋巴瘤1例Vβ亚家族呈限制性表达,另外3例表达未受抑制。而淋巴瘤患者淋巴结标本Vβ亚家族全部呈限制性表达。结论：TCR基因重排对淋巴瘤和淋巴细胞白血病的诊断有辅助作用。     

三色荧光抗体染色法测定T细胞亚群方法学的建立及临床应用

目的:研究三色荧光抗体染色方法测定人外周血T淋巴细胞亚群并探讨其临床应用.方法:三色荧光抗体染色流式细胞术测定15例健康志愿者及15例尖锐湿疣(CA)患者外用血Th1/Th2亚群及Tc1/Tc2亚群比例.结果:标本经流式细胞仪检测结果稳定.与健康对照组比较,CA患者Th1及Tc1细胞含量、Tc1/Tc2比值均减少(P＜0.05),该结果与文献报道的采用其他方法检测结果相一致.结论:三色荧光抗体染色流式细胞术能敏感精确地测定机体外周血T淋巴细胞亚群变化情况.     

贵阳地区成人外周血淋巴细胞亚群及活化正常参考值

目的：对贵阳地区100例健康成人外周血淋巴细胞亚群及活化正常参考值进行调查并建立本实验室相应项目的正常参考范围。方法：采用BD Simultest IMK-Lymphocyte四色试剂盒的荧光抗体和BD活化双色试剂对100例体检健康的成人外周血进行染色,以FACSAria流式细胞仪进行分析,FACSDiva Software软件程序获取数据并分析结果,SPSS软件进行统计。结果：18～64岁健康成人的淋巴细胞亚群相对值正常参考范围为：CD3^＋细胞（总T淋巴细胞）为49．41％～79．93％,CD3^＋CD19^＋细胞（B淋巴细胞）为2．09％～16．05％,CD3^＋CD4^＋细胞（Th淋巴细胞）为19．56％～45．03％,CD3^＋CD8^＋细胞（Ts淋巴细胞）为11．96％-38．40％,CD3^＋／CD16^＋CD56^＋细胞（NK细胞）为0．19％～32．05％;活化的CD3^＋细胞的相对值为0％～7．33％,活化的CD8^＋细胞的相对值为0％～5．63％。女性Th淋巴细胞、活化的CD8^＋细胞相对值比男性高（P〈0．05）。结论：不同地域、不同种族健康成人外周血淋巴细胞亚群正常参考值有所不同,各实验室应建立针对本地区人群的相应参考值范围。     

肺癌患者血清TNF-β和外周血T淋巴细胞亚群变化的研究

目的探讨肺癌患者血清肿瘤坏死因子β(TNF-β)及外周血T淋巴细胞亚群的变化。方法应用ELISA法对肺癌患者血清TNF-β以及采用流式细胞仪(FCM)对肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群进行检测。结果肺癌患者血清TNF-β水平均明显低于正常对照组;而作为TNF-β的产生细胞T淋巴细胞(CD3 CD19-),特别是活化性T淋巴细胞(CD8 CD28 )均明显低于正常对照组。结论肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及血清TNF-β的水平均下降,且两者变化呈正相关,提示其与肺癌患者机体的免疫功能下降有关。     

初治活动性肺结核T淋巴细胞亚群检测及其临床意义

目的 观察肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群变化,探讨其免疫状态改变的临床意义.方法 采用流式细胞术检测89例初治活动性肺结核患者外周血T淋巴细胞亚群CD3 、CD4 、CD8 并结合临床资料进行分析.结果 与健康对照组比较,初治活动性肺结核患者外周血CD4 、CD4 /CD8 显著降低,而CD8 差异不显著;与血清结核抗体阴性者相比,结核抗体阳性者CD4 、CD4 /CD8 显著降低;T细胞亚群变化与排菌状态及病变范围无明显关联.结论 单纯T淋巴细胞亚群计数检测虽然在一定程度上反映了机体的免疫状况,但不能作为判断病情变化及预后的主要依据.     

T淋巴细胞亚群异常与特发性血小板减少性紫癜的关系

目的通过检测T淋巴细胞亚群及其凋亡,初步探讨T淋巴细胞亚群异常在特发性减少性紫癜(ITP)发病机制中的作用.方法采用流式细胞术对ITP患者及正常对照组的外周血淋巴细胞亚群进行检测;DNA琼脂糖凝胶电泳检测T淋巴细胞的凋亡.结果 ITP患者CD+3、CD+4和CD+4CD+25T细胞比例均显著低于正常对照组(P<0.05或P<0.01),而CD+8T细胞和CD+4T细胞表面Fas 表达均较正常组增加(P<0.01);T淋巴细胞凋亡敏感性增加.结论 ITP患者外周血T淋巴细胞亚群异常,T细胞免疫调控亚群(CD+4CD+25)凋亡增多,对自身反应性T细胞亚群免疫下调作用降低,破坏自身免疫耐受,在ITP的发病中起重要作用.     

卡介菌多糖核酸对梅毒血清固定患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的 研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对梅毒血清固定患者外周血T淋巴细胞亚群的影响,探讨BCG-PSN对梅毒血清固定可能的免疫调节机制. 方法 采用三色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测30例梅毒血清固定患者经卡介菌多糖核酸治疗前后外周血T淋巴细胞亚群,并与30例正常人群的检测结果相对照. 结果 BCG-PSN治疗前,梅毒血清固定患者外周血CD3 、CD4 淋巴细胞均低于正常对照组,差异有统计学意义(CD3 组P＜0.001;CD4 组P＜0.01),而CD8 淋巴细胞高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.001);经BCG-PSN治疗后,梅毒血清固定患者外周血CD3 、CD4 淋巴细胞均明显高于治疗前(P＜0.001),CD8 淋巴细胞明显低于治疗前(P＜0.001);治疗后梅毒血清固定患者外周血CD3 、CD4 、CD8 淋巴细胞与正常对照组差异无统计学意义(P＞.05). 结论 卡介菌多糖核酸可通过调节梅毒血清固定患者外周血T淋巴细胞亚群,纠正CD4 /CD8 失衡,起到辅助治疗梅毒血清固定患者的作用.     

南京地区健康成年人外周血淋巴细胞亚群正常值调查

目的 :建立健康成年人外周血淋巴细胞亚群正常参考值。方法 :使用美国Becton Dickinson(B D)公司生产的双标荧光抗体 ,分别对 2 98例健康成年人外周血淋巴细胞亚群进行标记 ,用B D公司的FACSCaliburTM型流式细胞仪进行检测并分析结果 ,SPSS 10 0软件进行统计学处理。结果 :18～ 5 7岁健康成年人外周血中CD3 + 、CD3 -、CD19+ 、CD3 +CD4+ 、CD3 + CD8+ 及CD3 -CD(16+ 56) + 细胞数分别为 6 6 6± 8 7、11 3± 4 1、35 9± 6 7、2 9 7± 7 9及 2 1 2± 9 1。CD3 +CD4+ 与CD3 + CD8+ 的比率为 1 35± 0 75。男女之间CD3 + 、CD3 + CD4+ 及CD3 -CD(16+ 56) + 细胞数有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :在相同地域、相同种族 ,可以建立健康成年入外周血淋巴细胞亚群正常参考值。     

糖皮质激素对柯萨奇B3病毒感染小鼠免疫状态的调控

目的:研究病毒性心肌炎时应用糖皮质激素治疗对机体免疫指标的调控作用.方法:将240只4周龄Balb/c小鼠随机分为6组,每组40只,包括正常对照组、激素对照组、病毒对照组、早期激素治疗组、中期激素治疗组和晚期激素治疗组.正常对照组每只小鼠腹腔接种0.1 ml不含病毒的Eagle液,其他组每只小鼠均腹腔接种0.1 ml 107.5TCID50/ml的柯萨奇B3(CVB3)病毒液.正常及病毒对照组小鼠均予以生理盐水0.2 ml灌胃,激素治疗组小鼠分别在感染病毒后不同时期给予泼尼松1 mg/kg,灌胃给药10 d.采用膜联蛋白V(Annexin V)联合碘化丙啶(PI)染色双参数技术,即Annexin V/PI法,通过流式细胞术定量检测各组小鼠外周血、胸腺、脾脏淋巴细胞的凋亡,应用流式细胞仪自动细胞计数法测定外周血及脾脏T淋巴细胞亚群CD 3、CD 4、CD 8.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗心磷脂抗体(ACA).结果:正常小鼠外周血、胸腺、脾脏有少量淋巴细胞凋亡,短期服用激素不升高淋巴细胞凋亡率;病毒性心肌炎小鼠淋巴细胞凋亡增加,应用激素治疗可诱导活化淋巴细胞凋亡,减少其对心肌细胞的浸润.病毒性心肌炎小鼠外周血CD 3、CD 4、CD 8下降与应用激素治疗的心肌炎小鼠CD 3、CD 4、CD 8下降无显著性差异.正常小鼠抗心磷脂抗体阳性率很低,病毒性心肌炎小鼠ACA阳性率升高,早期及中期应用激素可降低ACA阳性率.结论:病毒性心肌炎应用激素治疗对细胞免疫功能无严重不良影响,还可明显抑制细胞毒T淋巴细胞对心肌的损害作用以及降低自身免疫应答.     

T淋巴细胞亚群异常与特发性血小板减少性紫癜的关系

目的 通过检测T淋巴细胞亚群及其凋亡，初步探讨T淋巴细胞亚群异常在特发性减少性紫癜（ITP）发病机制中的作用。方法 采用流式细胞术对ITP患者及正常对照组的外周血淋巴细胞亚群进行检测；DNA琼脂糖凝胶电泳检测T淋巴细胞的凋亡。结栗ITP患者CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋CD25^＋T细胞比例均显著低于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01），而CD8^＋T细胞和CD4^＋T细胞表面Fas表达均较正常组增加（P〈0．01）；T淋巴细胞凋亡敏感性增加。结论 ITP患者外周血T淋巴细胞亚群异常，T细胞免疫调控亚群（CD4^＋CD25^＋）凋亡增多，对自身反应性T细胞亚群免疫下调作用降低，破坏自身免疫耐受，在ITP的发病中起重要作用。     

晚期恶性肿瘤患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群监测及临床意义

目的:探讨晚期恶性肿瘤患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+）数值的变化及临床意义。方法:收集50例晚期恶性肿瘤患者,根据病种及临床分期进行标准方案化疗;采集患者首次化疗前和2个周期化疗后外周血标本,通过流式细胞仪检测T淋巴结细胞亚群在化疗前后的数值及比值,分析T淋巴细胞亚群水平变化。结果:50例晚期恶性肿瘤患者2个周期化疗后外周血CD3+、CD3+CD4+T淋巴细胞数目均显著低于首次化疗前（P<0.01）。CD3+CD8+T淋巴细胞数目在2个周期化疗后均高于首次化疗前（P<0.01）;CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比值在2个周期后均明显降低（P<0.01）。结论:晚期恶性肿瘤患者可以通过监测外周血中T淋巴细胞亚群数目评估患者免疫功能状态,并指导治疗及判断预后。     

流式细胞双标记技术定量检测淋巴细胞亚群凋亡

目的建立定量检测淋巴细胞亚群凋亡的方法.方法设立经甲基泼尼松龙(MP)处理人外周血淋巴细胞的MP处理组和未经MP处理的对照组.以电镜、DNA电泳对人外周血淋巴细胞行凋亡定性检测,以流式细胞TUNEL技术(TUNEL法)定量检测淋巴细胞凋亡发生率,采用PE-CD3联合FITC-TUNEL双标记法定量检测淋巴细胞亚群发生率.结果TUNEL法MP处理组淋巴细胞凋亡检出率(68.2±6.4)%,显著高于对照组(10.2±2.2)%(P＜0.01).双标记法凋亡检出率(70.2±3.6)%,与TUNEL法无显著差异.双标记法检测MP处理组CD3+细胞凋亡率(87.6±4.7)%,CD3-细胞凋亡率(23.0±3.2)%,CD3+细胞凋亡率显著高于CD3-细胞凋亡率(P＜0.01).结论流式细胞双标记凋亡定量检测技术可同时检测凋亡细胞及其表面标志,适用于淋巴细胞各亚群凋亡的定量检测.     

T淋巴细胞亚群在尖锐湿疣患者中的临床价值分析

目的 探讨T淋巴细胞亚群的检测在尖锐湿疣患者中的临床价值。方法 选取2017年1月～2018年1月期间来我院就诊的尖锐湿疣患者52例，将其作为实验组，并选取52例正常人作为对照组，两组均使用四色荧光抗体染色方法进行检测，检测外周血T淋巴细胞，并使用聚合酶链反应检测患者的人乳头瘤病毒基因亚型。结果 根据两组外周血T淋巴细胞亚群检测结果数据对比显示，实验组较对照组CD4+百分比上升。实验组较对照组CD8+百分比下降，实验组较对照组CD4+/CD8+比值上升，差异具有统计学意义（P＜0.05）。两组皮损T淋巴细胞亚群检测结果数据对比显示，实验组CD4+5个高倍视野平均个数较对照组下降，实验组CD8+5个高倍视野平均个数较对照组下降，实验组CD4+/CD8+的比值较对照组上升，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 T淋巴细胞亚群的检测在尖锐湿疣患者中具有较高的临床价值，有利于监测疾病的复发以及辅助治疗效果，因此，值得临床医学中的推广及应用。     

阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨阿德福韦酯抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法选择41例慢性乙型肝炎患者,均给予阿德福韦酯10mg,每日1次,共48周,检测治疗前、治疗12个月患者外周血T淋巴细胞亚群。结果经抗病毒治疗后,患者血清HBV DNA滴度明显下降,T淋巴细胞亚群失衡改善,CD4+T淋巴细胞上升,CD4+/CD8+上升,较治疗前明显提高,差异有统计学意义(P0.05)结论慢性乙型肝炎患者经阿德福韦酯抗病毒治疗后抑制HBV的复制,其外周血T淋巴细胞亚群的状态呈逐渐改善趋势。