含V-Set免疫球蛋白域蛋白2对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响及机制

目的探究含V-Set免疫球蛋白域蛋白2(VSIG2)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及具体机制。方法质粒转染构建VSIG2敲低和过表达细胞系, 分为sh-VSIG2#1/sh-VSIG2#2组和oe-VSIG2组, 并分别以sh-NC和Vector组作为对照。蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆测定胰腺癌细胞增殖能力。Transwell和划痕实验检测侵袭及迁移能力。KEGG对VSIG2相关基因进行通路富集分析, Western blot检测通路关键指标的表达量。以VSIG2过表达细胞系进行功能回复, Western blot检测通路指标表达量变化。组间比较采用t检验和单因素方差分析。结果 CCK-8结果显示, sh-VSIG2#1比sh-VSIG2#2组72 h吸光度值低于sh-NC组(1.122±0.056比0.997±0.063比1.561±0.072, t=8.876、8.994, P<0.05);oe-VSIG2组72 h吸光度值高于Vector组(2.103±0.102比1.604±0.089, t=12.21...     

长链非编码RNA01137在胰腺癌细胞生物学特性中的作用

目的探究Lnc01137对胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法收集2021年6月至2021年9月贵州医科大学肝胆外科34例人胰腺癌组织及癌旁组织样本。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Lnc01137在胰腺癌细胞系中和胰腺癌组织中的表达水平。在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中提取胰腺癌组织与癌旁组织中Lnc01137的表达量, 提取胰腺癌患者总生存月数和无病生存月数并进行分析。RT-qPCR检测Lnc01137在细胞核和细胞质中的相对表达, 并进行RNA荧光原位杂交(FISH)定位。通过慢病毒转染在胰腺癌细胞中敲低Lnc01137的表达, 检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达。采用通路富集分析(GSEA)在京都基因与基因组百科全书(KEGG)中进行基因富集分析, 组间比较采用t检验, 组内两两比较采用LSD-t检验。结果 Lnc01137在胰腺癌细胞系MIA PaCa-2和PANC-1中表达较高, 在胰腺癌组织中的表达明显高于胰腺癌癌旁组织, 并在细胞质中呈现高表达状态, 另外Lnc01137高表达与患者预后不良相关。功能试验显示敲低Lnc01137显著抑制胰腺癌...     

黑色素瘤缺乏因子2通过磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、凋亡的作用机制

目的探讨黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)对胰腺癌恶性细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过慢病毒转染技术构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1, 并分别通过定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证AIM2的mRNA及蛋白水平。通过BrdU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、细胞凋亡以及细胞周期实验检测过表达AIM2对胰腺癌细胞株功能的影响。通过转录组测序探究AIM2在胰腺癌中的作用机制并进行验证, 使用基因表达差异分析评估多组样本之间的差异, 组间差异采用t检验分析。结果慢病毒转染可成功构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株。BrdU增殖实验结果表明, BxPC-3和PANC-1细胞LV-AIM2-OE组的增殖能力显著低于LV-NC组(吸光度值:0.502±0.006比0.543±0.005、0.956±0.032比1.235±0.091, t=5.568、2.903, P<0.05);划痕及Transwell实验结果表明, 过表达AIM2后BxPC-3、PANC-1细胞的迁移[(51.960±4...     

叉头框蛋白O3在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞的影响

目的分析叉头框蛋白O3(FOXO3)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞运动和增殖的影响。方法检索LinkedOmics数据库胰腺癌患者胰腺癌和癌旁组织FOXO3表达。Western印迹和实时定量聚合酶链反应检测胰腺癌细胞系和人胰腺星状细胞HPSC中FOXO3表达。选择低表达FOXO3的PANC-1、MIAPaCa-2胰腺癌细胞, 分别转染FOXO3过表达质粒和阴性对照质粒。克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和细胞周期检测各组胰腺癌细胞运动和增殖能力。结果 LinkedOmics数据库中, 64例胰腺癌患者癌组织中FOXO3蛋白相对表达水平明显低于癌旁组织(t=8.36, P<0.001)。PANC-1细胞过表达FOXO3后细胞克隆数为(30.0±6.6)个(40倍视野下计数), 低于阴性对照细胞的(92.7±6.7)个, 差异有统计学意义(t=11.54, P<0.001)。PANC-1和MIAPaCa-2在上调FOXO3表达后细胞划痕修复率较对照组显著下降。Transwell实验PANC-1细胞FOXO3过表达后(每个100倍视野下)穿膜数(21.0±6...     

钙调蛋白2调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的探讨钙调蛋白2(CALM2)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA2.0)对癌症基因组图谱(TCGA)和基因型组织表达(GTEx)数据库中的179例胰腺癌和171例癌旁组织中CALM2基因的表达使用方差分析(ANOVA)进行差异分析, 对89例高表达CALM2的胰腺癌患者和89例低表达CALM2的胰腺癌患者分别绘制Kaplan-Meier曲线, 使用log-rank检验进行预后分析。采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染人源胰腺癌细胞系SW1990和ASPC1, 建立对照组和CALM2敲低组细胞系;采用慢病毒包被质粒感染人源胰腺癌细胞系BxPC-3, 建立对照组和CALM2过表达组细胞系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达CALM2后细胞内CALM2的mRNA和蛋白表达水平。采用克隆形成和皮下注射裸鼠荷瘤实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞增殖能力的影响, 采用划痕愈合实验和Transwell实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力的...     

含三方基序54调控胰腺癌增殖、侵袭和转移的机制

目的探讨含三方基序54(TRIM54)在胰腺癌中的调控机制。方法胰腺癌细胞株(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)和正常胰腺上皮导管细胞(HPDE)株购自美国模式培养物集存库(ATCC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TRIM54在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)和胰腺导管腺癌(PDAC)细胞中的表达。通过转染质粒(shRNA)敲低TRIM54的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力。Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本t检验, 多组样本之间的比较采用方差分析。结果通过RT-PCR检测, HPDE中TRIM54信使RNA(mRNA)表达水平明显低于胰腺癌细胞(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)(1.00±0.02比2.05±0.04比1.37±0.03比1.62±0.02比3.18±0.10比3.59±0.07, F=1 042.04, P<0.05)。Western b...     

胰腺星状细胞通过白细胞介素-22影响胰腺癌侵袭转移及化疗耐药的研究

目的探讨具有不同白细胞介素-22(IL-22)表达水平的胰腺星状细胞(PSC)对胰腺癌细胞侵袭转移及化疗耐药的影响。方法将人原代胰腺癌间质PSC细胞与胰腺癌PANC-1细胞共培养后检测IL-22的表达及胰腺癌细胞的生长增殖能力、迁移和侵袭能力变化;构建稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行体外共培养, 检测PANC-1细胞的生长增殖、迁移和侵袭能力;利用稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行体外共培养后检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况;将含有不同表达水平的胰腺癌间质PSC细胞与胰腺癌PANC-1细胞体外共培养并加入不同浓度梯度的吉他西滨培养72 h后检测细胞存活率, 计算细胞耐受吉他西滨的半数抑制浓度(IC50);将稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行混合后种植于裸鼠皮下, 40 d后处理裸鼠取出肿瘤并绘制肿瘤生长曲线, 比较两组细胞的成瘤能力。采用t检验分析各组间差异的显著性。结果单纯PANC...     

胞质分裂蛋白调节因子1通过激活黏附斑激酶调控膀胱癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨胞质分裂蛋白调节因子1(PRC1)对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及黏附斑激酶(FAK)在其中的作用。方法设计合成靶向抑制PRC1的小干扰RNA(siRNA), 分别转染人膀胱癌细胞系EJ和T24, 两种细胞系各分为对照组(转染对照siRNA)和敲低组(转染PRC1 siRNA), 通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹法检测两组PRC1、FAK、桩蛋白(Paxillin)的mRNA和蛋白质表达水平以及FAK和Paxillin的磷酸化水平。通过细胞迁移和侵袭实验分析两组的迁移和侵袭能力。采用t检验进行组间比较。结果敲低组EJ、T24细胞PRC1 mRNA表达量(0.43±0.11、0.55±0.07)低于对照组(1.00±0.19、1.00±0.20, t=4.533、3.699, P<0.05)。敲低组FAK mRNA表达量(0.95±0.05、1.09±0.14)与对照组差异无统计学意义(1.00±0.20、1.00±0.20, t=0.423、0.622, P>0.05)。敲低组Paxillin mRNA表达量(1.12±0.01、1.02±0.1...     

泛素特异性蛋白酶5调控三阴性乳腺癌迁移及增殖的机制

目的探索三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中USP5的表达及其对细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测USP5在TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549细胞中的表达。通过转染慢病毒(shRNA)敲低USP5的表达。采用免疫共沉淀(CO-IP)实验验证USP5对活化C激酶1受体(RACK1)泛素化水平的影响。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力, Transwell检测细胞迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本t检验。结果 MDA-MB-231细胞和BT-549细胞中USP5的表达(3.167±1.102, 4.700±1.609), 明显高于正常乳腺细胞系MCF-10A(1.000±0.300), 差异有统计学意义(t=3.287、3.915, P<0.05)。在USP5稳定敲低的细胞系中USP5蛋白的表达(MDA-MB-231:0.160±0.012;BT-549:0.190±0.028)显著低于阴性对照细胞(MDA-MB-231:1.000±0.179;BT-549:1....     

碳水化合物磺基转移酶11对胰腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制

目的观察碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)在胰腺癌组织中表达, 对胰腺癌细胞的增殖、侵袭等生物学行为的影响, 并探讨其作用机制。方法收集经手术切除的胰腺癌组织标本30例, 免疫组织化学法检测组织中CHST11的表达。采用RNA干扰技术敲低胰腺癌细胞株PANC-1、AsPc-1中CHST11的表达, 通过蛋白质印迹法(Western blot)实验筛选出转染效率最高的一条小干扰RNA(siRNA)进行后续实验。将实验分为CHST11-siRNA组和阴性对照组(NC组), 细胞增殖实验(CCK-8法)、原位缺口末端标记法(TUNEL)方法、Transwell小室法分别检测敲降CHST11对PANC-1、AsPc-1细胞株增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot实验检测敲降CHST11对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)激活水平的影响。定性资料使用χ2检验, 定量资料采取独立样本t检验或单因素方差分析。结果 CHST11在胰腺癌组织中阳性检出率(43%)高于正常组织(16%), 差异有统计学意义(...     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

敲减长链非编码RNA SNHG12对裸鼠人肾透明细胞癌移植瘤生长的影响

目的观察小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)对裸鼠人肾透明细胞癌(ccRCC)移植瘤生长的影响。方法选取福建省漳州市医院泌尿外科2021年12月至2022年10月经肾癌根治术患者的ccRCC及癌旁肾组织标本各11例, 进行实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SNHG12的表达;构建敲减SNHG12慢病毒, 获得稳定表达敲减SNHG12慢病毒的786-0细胞株(si-SNHG12组)及稳定表达阴性慢病毒的786-0细胞株(NC组);选取对数生长期的si-SNHG12组和NC组的786-0细胞株建立裸鼠人ccRCC移植瘤模型, 21 d后分离肿瘤组织, 测量肿瘤的重量和体积, 组间比较采用t检验。结果 ccRCC组织(5.925±4.380)中SNHG12的表达量显著高于癌旁肾组织(1.011±0.012), 差异有统计学意义(t=3.721, P<0.01);获得稳定表达敲减SNHG12慢病毒及稳定表达阴性慢病毒的786-0细胞株:si-SNHG12组(0.296±0.007)中SNHG12的表达量显著低于NC组(1.000±0.036), 差异有统计学意义(t...     

shRNA干扰KAP-1基因表达对胰腺癌肿瘤干细胞自我更新的影响

目的 研究KAP-1对胰腺癌肿瘤干细胞自我更新能力的影响.方法 采用免疫组织化学方法检测14例胰腺癌组织标本和配对癌旁组织标本KAP-1蛋白的表达情况.PCR扩增KAP-1 shRNA干扰序列,克隆至pGC-LV慢病毒表达载体;双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测.构建成功后感染人胰腺癌细胞株Panc-1细胞48 h后,通过Western blot实验和RT-qPCR实验检测KAP-1的表达量以及该细胞系相关EMT标志蛋白波形蛋白的表达.采用悬浮法培养人胰腺癌Panc-1细胞生成肿瘤干细胞球,通过测定初代以及次代肿瘤干细胞球的成球直径和数量判断KAP-1基因敲减对肿瘤干细胞球成球能力及自我更新能力的影响.结果 在14例胰腺癌组织标本和癌旁组织标本的免疫组织化学检测中,胰腺癌组织标本KAP-1阳性数为13例(P=0.002).构建的慢病毒载体感染细胞48 h后,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光.RT-qPCR实验显示感染KAP-1 RNA干扰慢病毒载体的Panc-1细胞KAP-1及EMT标志蛋白波形蛋白的表达量较未感染病毒细胞以及感染空载体细胞显著增高.KAP-1基因敲低表达的人胰腺癌Panc-1肿瘤干细胞球的初代以及次代的成球直径相较于转染空载体的Panc-1肿瘤干细胞球发生明显减小,在成球数量上也明显减少.结论 KAP-1在胰腺癌组织中存在表达,且与正常组织表达量具有明显差异.构建了高效稳定表达KAP-1的RNA干扰慢病毒转染系统.KAP-1转录因子表达量降低可以减弱人类胰腺癌细胞Panc-1细胞系生成干细胞球的自我更新能力.其机制可能与敲低KAP-1表达影响波形蛋白下调有关.     

微小RNA-125b靶向调控乳腺癌易感基因相关蛋白1调节胰腺癌细胞增殖及侵袭

目的探究微小RNA(miR)-125b可否通过调节乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)调节胰腺癌细胞的发生与发展进程, 探讨其在胰腺癌中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测2018年1月至2020年12月21例在我科接受手术患者的胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞系中miR-125b和其靶蛋白的表达水平。通过细胞克隆实验、流式细胞凋亡检测技术、划痕实验以及细胞侵袭实验检测转染前后胰腺癌细胞增殖、凋亡、细胞迁移和侵袭能力, 组间比较采用t检验。结果 miR-125b在胰腺癌组织中的表达显著上调(2.48±0.46比0.68±0.15, t=13.991, P<0.01)。过表达miR-125b组的BAP1的表达明显低于对照组(465.57±11.28比933.80±15.46, t=5.894, P<0.01)。过表达miR-125b组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组(214.56±8.45比78.43±5.15, t=3.482, P<0.01)。过表达BAP1组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显...     

siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的:探讨慢病毒介导的siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响。方法:运用HER2基因小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞,荧光定量RT-PCR和Western blotting观察HER2 mRNA和蛋白表达的改变,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞可显著抑制HER2 mRNA和蛋白表达;体外侵袭实验显示siRNA沉默HER2后,PANC-1细胞侵袭能力明显下降。结论:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒能有效抑制HER2的表达,抑制胰腺癌细胞体外侵袭能力。siRNA沉默HER2可能为预防和治疗胰腺癌的侵袭转移提供一种新的策略。     

微小RNA-200c对人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化的作用

目的观察微小RNA-200c(miR-200c)在人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法应用流式细胞术(FACS)在人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出以CD24⁺CD44⁺ESA+作为标志物的胰腺癌干细胞。将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到胰腺癌干细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)和miR-200c的表达。Transwell试验检测细胞的侵袭能力。采用t检验。结果人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出CD24⁺CD44⁺ESA+细胞(0.8%)。miR-200c在胰腺癌干细胞中的相对表达值(0.15±0.01)显著低于PANC-1细胞(1.00±0.09),差异有统计学意义(t=3.306,P<0.05)。胰腺癌干细胞平均穿膜细胞数[(321.00±7.62)个]明显高于PANC-1细胞[(70.00±16.47)个],差异有统计学意义(t=2.152,P<0.05)。转染miR-200c前体片段24 h后的胰腺癌干细胞中miR-200c的相对表达值(3.70±0.42)明显高于转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中miRNA-200c的相对表达值(0.22±0.21),差异有统计学意义(t=2.073,P<0.05)。E-cadherin、vimentin、ZEB1 mRNA在转染miRNA-200c前体片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(3.12±0.02)×10^-4、0.36±0.15、(0.38±0.07)×10^-4,在转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(1.31±0.05)×10^-4、1.16±0.08、(1.13±0.03)×10^-4,两组比较差异有统计学意义(t=1.941、2.165、2.308,P<0.05)。转染miR-200c前体片段后的胰腺癌干细胞的平均穿膜细胞数[(80.00±5.35)个]明显低于转染阴性对照片段的干细胞[(310.00±19.41)个],两组比较差异有统计学意义(t=2.613,P<0.05)。结论miR-200c过表达可以抑制胰腺癌干细胞的上皮-间充质转化,逆转其侵袭能力。     

吞噬和细胞运动蛋白2对胰腺癌细胞趋化性和转移能力的影响

目的:观察吞噬和细胞运动蛋白2(ELMO2)对胰腺癌细胞株人源胰腺癌细胞系-1(PANC-1)的趋化运动能力、细胞黏附能力和侵袭能力的影响,探讨其作用机制。方法:2018年9月至2019年7月应用小干扰RNA技术对PANC-1中ELMO2蛋白进行敲减。采用配对设计方法,分为ELMO2蛋白敲减组、阴性敲减链对照组和空白对...     

长链非编码RNA WAC-AS1在胰腺癌中的临床意义及分子机制验证

目的探索长链非编码RNA(lncRNA) WAC-AS1在胰腺癌中的生物学功能和作用机制以及对胰腺癌预后的影响。方法基于在线数据库计算并分析WAC-AS1在胰腺癌组织中相对正常组织的表达以及与其预后、肿瘤微环境、免疫细胞浸润的关系。同时应用基因集差异分析(GSVA)以及基因集富集分析(GSEA)探讨了WAC-AS1在胰腺癌中的生物学作用以及参与的信号通路。构建质粒转染人胰腺癌PANC-1细胞系, 分成空载对照组、低表达组、中表达和高表达组, 细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测WAC-AS1对胰腺癌细胞的增殖影响, 蛋白质印迹法(Western blot)检测WAC-AS1过表达后B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和细胞周期蛋白(Cyclin) D1的变化, 组间比较采用t检验。结果 lncRNA WAC-AS1在胰腺癌组织中(P<0.01)相对正常组织呈明显高表达。在胰腺癌中, WAC-AS1主要影响患者的总体生存期以及无进展生存期[P<0.01, 风险比(HR)=0.559, 95%可信区间(CI):0.368～0.848;P<...     

RasTG基因与胰腺癌的相关性研究

目的体外观察高尔基嵌合Ras基因(RasTG基因)在胰腺癌组织中的表达情况和对人胰腺癌细胞株PANC-1的生长、增殖及细胞成瘤能力的影响,并探讨其作用机理。方法以人胰腺癌细胞株PANC-1为研究对象,构建含RasTG基因的慢病毒转染人胰腺癌细胞株PANC-1,利用RNA干扰技术干扰细胞内RasTG基因的表达,观察干扰后PANC-1细胞的增殖、转化和成瘤情况,并通过组织芯片技术检测胰腺导管癌及其癌旁组织中RasTG蛋白的表达情况。结果 ①RasTG无十分特异的组织表达谱,在脑、肝脏及肾上腺中表达相对较高;②RasTG在胰腺导管癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05);③干扰RasTG基因后的人胰腺癌细胞株PANC-1的生长、增殖和转化能力均下降;④干扰RasTG基因后的人胰腺癌细胞株PANC-1的成瘤能力明显减弱,转染组的成瘤体积明显小于未转染组(P<0.05)。结论 RasTG基因在动物体内广泛分布;RasTG在胰腺癌组织中的表达比在癌旁组织中高;干扰RasTG基因的表达后对人胰腺癌细胞株PANC-1的增殖、转化和成瘤能力均有抑制作用,RasTG基因是正调节因子。     

Beclin-1分子在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Beclin-l基因与胰腺癌发生发展的关系。方法 (1)回顾性收集2009年4月至2009年11月期间四川大学华西医院行手术切除的胰腺癌标本25例及正常胰腺组织20例,采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色方法分别检测胰腺癌组织及正常胰腺组织中Beclin-1 m RNA及其蛋白的表达水平,并分析胰腺癌组织中Beclin-1蛋白的表达水平与患者临床病理学特征之间的关系。(2)将PANC-1细胞分为2组,转染组细胞转染PLen O-WPI-Beclin-1重组慢病毒载体,未转染组细胞未进行重组慢病毒载体转染,分别于共培养24及48 h时采用PCR法检测Beclin-1 m RNA的表达水平。(3)将PANC-1细胞分为3组,转染组加入PLen O-WPI-Beclin-1重组慢病毒载体,空载体组加入PLen O-WPI载体,空白对照组未加入任何载体,各组细胞于培养1~7 d期间每天采用MTT法检测细胞增殖情况。结果 (1)人胰腺癌中Beclin-1 m RNA及其蛋白的表达水平均低于正常胰腺组织(P0.05)。在胰腺癌患者中,Beclin-1蛋白的表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤直径及分化程度均无关(P0.05),而与TNM分期及淋巴结转移有关,TNMⅢ期和Ⅳ期患者的Beclin-1蛋白的表达水平低于Ⅰ期或Ⅱ期患者(P0.05);淋巴结转移阳性患者的Beclin-1蛋白的表达水平低于阴性患者(P=0.011)。(2)转染24 h和48 h时,同时点转染组细胞中Beclin-1 m RNA的表达水平高于未转染组(P0.05)。(3)MTT实验结果显示,转染1、2及3 d时,转染组、空载体组和空白对照组细胞的OD值比较差异均无统计学意义(P0.05);从转染4 d开始,至转染7 d期间,同时点转染组细胞的OD值较空白对照组和空载体组均较低(P0.05)。结论 Beclin-1基因及其蛋白在胰腺癌组织中的表达均下调,其可能是胰腺癌发生发展的原因之一。将Beclin-1基因导入PANC-1细胞后,细胞的增殖能力降低,提示Beclin-1基因可能是胰腺癌基因治疗的目标基因。