MicroRNA-335-5p对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的影响*

目的 探讨microRNA-335-5p（miR-335-5p）对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞（RASFs）增殖、 侵袭和凋亡的影响。方法 选取2018年3月—2019年3月湖州市第三人民医院收治的50例类风湿性关节炎 （RA）患者和50例接受关节置换手术的关节外伤患者的滑膜组织标本,并分离培养RASFs。采用实时荧光定 量聚合酶链反应检测滑膜组织和RASFs中miR-335-5p和DKK1的表达,荧光素酶报告基因检测评估miR335-5p对DKK1荧光素酶活性的影响。将miR-335-5p模拟物、si-DKK1和pcDNA-DKK1转染RASFs,分别 通过ELISA比色法、Transwell法和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况。结果 与正常组织和RASFs相 比,miR-335-5p在RA组织和RASFs中下调（P <0.05）,而DKK1在RA组织和RASFs中上调（P <0.05）。荧光 素酶报告基因检测显示,miR-335-5p可特异性结合DKK1的3′UTR,抑制其荧光素酶活性（P <0.05）。此外, miR-335-5p 可降低 DKK1 的表达（P <0.05）。过表达 miR-335-5p 或敲除 DKK1 可抑制 RASFs 的增殖和 侵袭,诱导 RASFs 凋亡（P <0.05）。而过表达 DKK1 可逆转 miR-335-5p 对 RASFs 的影响（P <0.05）。结论 miR-335-5p可通过直接靶向DKK1的表达,抑制RASFs的增殖和侵袭,诱导其凋亡。     

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK) 2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Tra...     

栀子对类风湿性关节炎大鼠滑膜细胞增殖及IL-1β分泌的影响

【目的】研究中药栀子对类风湿性关节炎大鼠滑膜细胞增殖及IL-1β分泌的影响,进一步探讨该药物的作用机制。【方法】建立II型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型;口服栀子浸膏,观察药物对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;MTT法检测药物对大鼠滑膜细胞生长活性及IL-1β分泌的影响。【结果】与模型组比较,栀子浸膏可以剂量依赖性抑制大鼠足肿胀的程度(P<0.01);给药组滑膜细胞生长活性显著下降,高剂量组滑膜细胞IL-1β分泌量明显低于模型组(P<0.01)。【结论】栀子浸膏在类风湿性关节炎大鼠中可以抑制滑膜细胞的生长活性,下调致炎因子IL-1β的分泌水平,提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。     

circPTPRA靶向miR-140-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移的机制研究

目的：探讨circPTPRA对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移的影响及其对miR-140-5p的调控作用。方法：原代分离培养人正常滑膜成纤维细胞与类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分为NC组(不转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-circPTPRA组(转染si-circPTPRA)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-140-5p组(转染miR-140-5p mimics)、anti-miR-NC+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-NC和si-circPTPRA)、anti-miR-140-5p+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-140-5p和si-circPTPRA)。qRT-PCR检测circPTPRA与miR-140-5p的表达量;MTT实验检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移;双荧光素酶报告基因实验检测circPTPRA与miR-140-5p的靶向关系。结果：与正常滑膜成纤维细胞比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中circPTPRA的表达量升高,miR-140-5p的表达量降低(P&l...     

滑膜细胞培养上清液对成纤维细胞增殖反应的影响

采用组织块培养法可获得滑膜成纤维细胞。成纤维细胞增殖反应最适浓度为２×１０８Ｌ－１，亚适浓度为１×１０８Ｌ－１。佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠不同稀释度滑膜细胞培养上清液均可促进亚适浓度成纤维细胞增殖反应，其最适稀释度为１２０。这些结果提示，ＡＡ大鼠关节损伤可能与滑膜细胞分泌炎症介质促进成纤维细胞增殖有关。     

宫颈癌患者血清miR-574-5p和miR-497-5p表达的临床意义

目的:研究宫颈癌患者血清miR-574-5p和miR-497-5p表达的临床意义.方法:选择2016年1月至2018年12月在我院诊治的宫颈癌患者116例,为宫颈癌组;选择同期在我院病理确诊为宫颈上皮内瘤变患者45例,为宫颈上皮内瘤变组;选择同期在我院行健康体检者30例,为健康对照组.运用实时荧光定量PCR方法检测各组...     

白藜芦醇对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 研究白藜芦醇（Res）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法 应用四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM）检测FLS的增殖水平和细胞周期分布。结果 50～400μmol/L的Res作用24、48h和25～400μmol/L的Res作用72h,均能明显抑制FLS的增殖（P＜0.05）,且具有时间剂量依赖性。细胞周期分析显示与对照组比较,Res处理组的FLS的S期细胞所占百分比例明显增加（P＜0.01）;G2/M期细胞所占百分比例明显减少（P＜0.01）,并呈剂量依赖性。结论 Res对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞具有生长抑制作用,其抗增殖效应呈现一定的剂量、时间依赖方式。该作用可能与Res能够使FLS的细胞周期阻滞于S期有关。     

LncRNA MIR22HG通过海绵吸附miR-22-5p对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)增殖、凋亡和炎性反应的影响及其分子机制。方法 收集在本院接受治疗的37例RA患者及30例关节创伤患者的滑膜组织样本,采用qRT-PCR检测滑膜组织中MIR22HG和miR-22-5p表达水平。体外分离、培养和鉴定人RA-FLSs,将MIR22HG siRNA干扰质粒(si-MIR22HG)及其阴性对照质粒(si-NC)和miR-22-5p inhibitor及其阴性对照(inhibitor-NC)分别或同时转染至RA-FLSs中,qRT-PCR检测细胞中MIR22HG和miR-22-5p表达水平;CCK-8检测各组细胞增殖活性;AnnexinⅤ-FITC/PI检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平;Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-22-5p之间的靶向关系。结果 与关节创伤患者比较,R...     

AD5-10与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎

目的 研究抗死亡受体抗体(AD5-10)与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎的机制.方法 采用MTI法检测成纤维样滑膜细胞(FLS)存活率,用蛋白免疫印迹研究细胞凋亡信号通路蛋白和p53、p21的变化.结果 不同剂量的表阿霉素可增强FLS对AD5-10的敏感性,促进FLS凋亡.表阿霉素处理可使FLS细胞中caspase-3、-8、-9,c-FLIP,Bc1-2,p53和p21表达水平发生变化.结论 表阿霉素可能通过改变p53、p21、c-FLIP和Bc1-2协同AD5-10诱导FLS凋亡.     

下调lncRNA SPINT1-AS1通过靶向miR-211-5p对卵巢癌细胞生长和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)SPINT1-AS1对卵巢癌细胞生长和侵袭的影响及分子机制。方法 GEPIA数据库分析卵巢癌组织和正常组织中lncRNA SPINT1-AS1的表达。荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法测定卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和永生化卵巢上皮细胞系IOSE80中lncRNA SPINT1-AS1的表达。将SKOV-3细胞分为si-SPINT1-AS1组(转染lncRNA SPINT1-AS1 siRNA)和si-NC组(转染siRNA control)。MTT法和Transwell小室实验测定下调lncRNA SPINT1-AS1对SKOV-3细胞增殖活性和侵袭的影响。Western blot检测增殖表型蛋白(PCNA、CyclinD1)和转移表型蛋白(MMP2、MMP9)的表达。采用双荧光素酶报告系统鉴定lncRNA SPINT1-AS1和miR-211-5p的靶向关系。qRT-PCR检测下调lncRNA SPINT1-AS1对miR-211-5p表达的影响。结果 与正常组织比较,卵巢癌组织中lncRNA ...     

miR-299-5p靶向SP1对帕金森模型细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨微小RNA(miR)-299-5p靶向特异性蛋白1(SP1)对帕金森(PD)模型细胞凋亡的作用和机制。方法 46只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6)和PD组(n=40),PD组小鼠采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(MPTP)构建PD模型;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同时间小鼠脑组织中miR-299-5p和SP1 mRNA的表达;另取42只雄性C57BL/6小鼠随机均分为对照组、PD组、PD+Ad-NC(阴性对照载体)组、PD+SP1过表达腺病毒载体(Ad-SP1)组、PD+miR-299-5p过表达腺病毒载体(Ad-miR-299-5p)组、PD+Ad-miR-299-5p+Ad-NC组、PD+Ad-miR-299-5p+Ad-SP1组,除对照组外、其余各组小鼠均制作PD模型,各组小鼠取中脑组织切片、并相应处理;取SH-SY5Y细胞分为空白组、1-甲基-4-苯基吡啶(MPP⁺)组、MPP⁺+miR-299-5p模拟物阴性对照(mimic-NC)组、MPP⁺+miR...     

MicroRNA-126对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、侵袭、凋亡的作用及其机制研究

目的 探究microRNA-126(miR-126)通过靶向Dickkopf-1(DKK1)参与类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞（RASFs）增殖、侵袭、凋亡的机制研究。方法 选取2018年6月—2019年9月在武汉市第一医院就诊的25例类风湿性关节炎（RA）患者的滑膜组织（RA组）,同时收集在该院同期接受膝关节十字韧带断裂重建手术的21例非类风湿关节炎患者的滑膜组织作为健康组,检测其miR-126和DKK1蛋白。利用RA组织构建原代RASFs,通过双萤光素酶报告验证miR-126与DKK1的靶向关系。将RASFs分为对照组、miR-126组、DKK1组、miR-126+DKK1组。采用CCK-8、Transwell及流式细胞术检测过表达miR-126和/或DKK1对RASFs增殖、侵袭和凋亡的影响。结果 RA组滑膜组织miR-126相对表达量低于健康组（P <0.05）,而DKK1蛋白相对表达量高于健康组（P <0.05）。miR-126 mimic与DKK1 Wt共转染后的相对萤光素酶活性低于miR-126 NC质粒与DKK1 Wt共转染（P <0.05）,证明miR...     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

二甲双胍对类风湿性关节炎患者滑膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨二甲双胍对类风湿性关节炎患者滑膜细胞增殖与凋亡的影响.方法 取类风湿性关节炎患者滑膜组织,用胰酶消化法分离其滑膜细胞,分别用流式细胞术和CCK-8法检测三种浓度的二甲双胍(10、20、30 mmol/L)对滑膜细胞增殖的影响,TUNEL和流式细胞仪检测滑膜细胞凋亡情况,ELISA法检测二甲双胍处理的滑膜细胞上清中的炎性因子和抗炎性因子.结果 三种浓度(10、20、30 mmol/L)的二甲双胍分别干预滑膜细胞24、48、72 h,均不同程度抑制了滑膜细胞的增殖,且成时间-浓度依赖性.CCK-8法检测结果显示20、30 mmol/L二甲双胍处理显著抑制了滑膜细胞的增殖(P＜0.05),流式细胞术结果表明20 mmol/L二甲双胍处理48 h后,Go/G1期滑膜细胞的百分比与对照组相比显著增加了约20％ (P ＜0.05),S期和G2/M期的细胞比例分别显著下降了9％和11％ (P ＜0.05).凋亡结果表明,20、30 mmol/L二甲双胍处理48、72 h,较对照组显著促进滑膜细胞的凋亡(P＜0.05),流式细胞术显示早期和晚期的滑膜细胞凋亡率约17.5％.检测炎性因子发现,20、30 mmol/L二甲双胍处理后显著降低炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平(P＜0.05),增加抗炎因子IL-10水平约66％和76％ (P ＜0.05).结论 二甲双胍可显著抑制体外培养的人滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡,可能与二甲双胍降低炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平和增加抗炎因子IL-10水平有关.     

类风湿性关节炎灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞γ-干扰素影响的初步研究

目的观察类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞IFN-γ水平的影响。方法抽取RA患者膝关节液分离滑膜液细胞,分实验组:2.0×10~6/mL非灭活滑膜液细胞,分别与2.0×10~5/mL、4.0×10~4/mL、2.0×10~4/mL甲醛灭活后的滑膜液细胞(灭活滑膜液细胞比非灭活滑膜液细胞为1:10、1:50、1:100)混合培养;对照组:单独培养细胞数为2.0×10~6/mL的非灭活滑膜液细胞。37℃,5%CO_2条件下培养48 h后,ELISA法测定炎症因子IFN-γ水平。结果(1)实验组较对照组IFN-γ水平明显降低(P<0.05);(2)实验组各组间比较,灭活滑膜液细胞比非灭活滑膜液细胞为1:10组较1:50组及1:100组相比较IFN-γ水平显著降低(P<0.05)。1:50组同1:100组IFN-γ水平无显著性差异(P>0.05)。结论(1)灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞IFN-γ的分泌具有抑制作用;(2)灭活滑膜液细胞比非灭活滑膜液细胞为1:10时,抑制IFN-γ分泌的作用最强;(3)灭活滑膜液细胞可抑制非灭活滑膜液的IFN-γ分泌,其机制有待进一步研究。     

LncRNA HOTAIR靶向miR-34a-5p调节类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的机制研究

目的:研究长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)对类风湿关节炎滑膜细胞(MH7A)凋亡的调控作用及其作用机制.方法:运用脂质体将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-HOTAIR组(转染pcDNA-HOTAIR)、antagomiRNA组(转染antagomiRNA)、antagom...