卵巢癌组织KLK11基因的表达意义

目的: 探讨卵巢癌KLK11基因中的表达及临床意义. 方法: 采用RT-PCR和免疫组化技术检测48例卵巢癌组织中KLK11 mRNA及其蛋白的表达,并分析其与临床病理资料的关系. 结果: KLK11蛋白表达位于细胞质. KLK11 mRNA及蛋白的表达与临床分期有关,晚期(Ⅲ, Ⅳ期)KLK11 mRNA及蛋白的表达水平明显高于早期(Ⅰ, Ⅱ期,P＜0.05),中低分化癌KLK11 mRNA及蛋白的表达明显高于高分化癌(P＜0.05),但KLK11 mRNA及蛋白的表达与组织学类型无关. 结论: KLK11基因表达可能与卵巢癌的恶性程度有关.     

卵泡刺激素对卵巢癌细胞株增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的 观察卵泡刺激素（FSH）对卵巢癌细胞株SKOV-3和ES-2细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法将FSH以不同浓度（10、20、40、80、160mU／m1）分别作用于1×10^5或2．5×10^6个SKOV-3细胞和6×10^4或1．5×10^6个ES-2细胞,FSH0mU／ml为对照组,其中FSH作用于SKOV-3细胞的适宜时间为48h,ES-2细胞为24h,分别测定细胞的增殖活性;细胞凋亡和细胞周期情况;细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2（MMP-2）的活性;SKOV-3和ES-2细胞内MMP-2蛋白及mRNA表达的变化;细胞的迁移侵袭能力。结果 （1）随着FSH浓度的增加,SKOV-3细胞的增殖活性升高,与对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。（2）随着FSH浓度的增加,SKOV-3细胞的凋亡率下降,分别为0．94％±0．06％、0．71％±0．03％、0．22％±0．02％、0．32％±0．02％、0．55％±0．05％,与对照组（1．30％±0．10％）比,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。（3）FSH浓度自40mU／ml起,SKOV-3细胞G0／G1（均P〈0．05）。（4）FSH可提高SKOV-3细胞MMP-2mRNA和胞质中MMP-2蛋白含量及细胞培养上清液中MMP-2的活性。（5）侵袭实验：SKOV-3细胞加FSH组和对照组穿透基底膜细胞数分别为（157±20）、（27±9）个／高倍镜（×200）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;划痕实验也显示FSH提高了SKOV-3细胞的迁移能力。FSH作用于ES-2细胞的表现与SKOV．3细胞基本一致。结论 FSH可促进卵巢癌细胞株SKOV-3和ES-2细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡。     

氯喹对卵巢癌细胞增殖、迁移和自噬的影响

目的：探讨氯喹对卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞增殖、迁移和自噬的影响。方法：采用CCK8法检测不同浓度氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞后的增殖能力;克隆形成实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞克隆形成的影响;划痕实验和Transwell实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞的迁移能力的影响;红绿双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬双标质粒转染A2780细胞和SKOV3细胞,荧光显微镜观察氯喹处理48 h后自噬小体的形成和自噬流的变化;Western Blot检测氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞48 h后自噬标志蛋白LC3的表达及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结果：氯喹显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖能力和迁移能力,另外,氯喹处理能显著抑制卵巢癌细胞的自噬水平。A2780细胞和SKOV3细胞经氯喹处理后LC3Ⅱ、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白表达水平显著增高,而AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著降低。结论：氯喹能显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖和迁移能力,并可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞自噬。     

PHF19对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨PHF19基因对宫颈癌细胞株Hela和HCC94的增殖、侵袭和迁移的影响.方法 培养人宫颈癌Hela细胞和HCC94细胞,用siRNA敲低PHF19基因的表达.RT-qPCR检测不同组细胞中PHF19基因mRNA水平的表达情况.采用CCK-8检测细胞的增殖情况.采用细胞划痕、Transwell实验观察PHF1...     

KLK11在卵巢肿瘤组织中的表达及其临床相关性

目的探讨KLK11基因在卵巢癌组织中的表达状况。方法应用免疫组织化学检测KLK11在卵巢癌组织、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达状况。结果 KLK11蛋白在正常卵巢上皮细胞中均有表达;KLK11在卵巢癌组织中的表达均低于其在正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织的表达(P=0.016,P=0.013);KLK11在浆液性卵巢癌组织的表达高于其他类型的卵巢癌组织(P=0.045,P=0.012);早期卵巢癌组织中(Ⅰ/Ⅱ期)KLK11的表达明显高于晚期卵巢癌(Ⅲ/Ⅳ期)(P=0.002,P=0.010);KLK11在卵巢癌组织的表达水平与肿瘤的病理分级无明显关系(P=0.510,P=0.747);KLK11表达与卵巢癌淋巴结转移等预后因素有明显相关性(P=0.027);KLK11阳性与阴性患者的平均生存时间分别为39.3个月和28.9个月(P=0.031)。结论 KLK11在卵巢癌组织中表达下调,且其表达与卵巢癌的临床分期以及淋巴结转移有相关性,提示KLK11的表达失调可能对卵巢癌的诊断及预后有一定价值。     

miR-320靶向Rab11对宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探讨miR-320对宫颈癌细胞SiHa增殖、侵袭及迁移的调控作用。方法选取宫颈癌细胞系SiHa,将细胞分为miR-320模拟基因组、miR-320抑制剂组、对照模拟基因组、对照抑制剂组,各组分别转染miR-320模拟基因、miR-320抑制剂、对照模拟基因、对照抑制剂。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组SiHa细胞中miR-320表达;Western blot检测各组SiHa细胞中Rab11蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。结果 miR-320抑制剂组SiHa细胞中miR-320相对表达量低于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞中miR-320相对表达量高于对照模拟基因组(P<0.05)。miR-320抑制剂组SiHa细胞的细胞活性、侵袭能力、迁移能力高于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞的细胞活性、侵袭能力、迁移能力低于对照模拟基因组(P<0.05)。miR-320抑制剂组SiHa细胞中Rab11蛋白表达高于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞中Rab11蛋白表达低于对照模拟基因组(P<0.05)。miR-320抑制剂组SiHa细胞的细胞荧光活性显著低于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞的细胞荧光活性与对照模拟基因组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-320可通过靶向Rab11调控SiHa细胞增殖、侵袭及迁移。     

褪黑素对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移和血管生成的影响

研究褪黑素对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移和血管生成的影响。MTT实验、划痕实验和Transwell侵袭实验分别观察褪黑素对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。诱导HUVECs成管,观察褪黑素对其影响。Western blot法检测SKOV3细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和波形蛋白(Vimentin)的表达。建立卵巢癌移植瘤模型,免疫组化检测CD31的表达。结果显示,褪黑素能抑制卵巢癌SKOV3细胞的侵袭和迁移,并且明显下调MMP-9、Vimentin和VEGF蛋白的表达,上调E-cadherin的表达。此外,褪黑素抑制了HUVECs的小管生成,体内CD31的免疫组化结果也显示褪黑素能够抑制微血管密度。结果提示,褪黑素能抑制卵巢癌细胞的侵袭、迁移和血管生成。     

卵巢癌组织内源性肽P1DA促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的：探讨卵巢组织中来源于AHNK2蛋白的多肽（peptide 1 derived from AHNK2 protein,P1DA）对卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法：P1DA处理对数生长期的SKOV3和OVCAR3细胞后,CCK?8法检测细胞活性变化,以探索P1DA对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖的影响;Transwell实验检测P1DA处理后细胞迁移、侵袭能力变化;流式细胞术检测P1DA处理后细胞凋亡率变化,分析P1DA对两种卵巢癌细胞凋亡率的影响。结果：P1DA处理后,卵巢癌细胞SKOV3及OVCAR3的细胞活性明显增加,迁移、侵袭能力明显增加,细胞凋亡率则无明显变化。结论：卵巢组织内源性肽P1DA可促进卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,对其凋亡无显著影响。     

SGI-1776 钝化Pim-1 对卵巢癌细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制

目的：检测SGI-1776 对卵巢癌HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其可能机制。方法：体外培 养卵巢癌HO-8910 细胞;M法和克隆形成法检测SGI-1776 对HO-8910 细胞的增殖抑制作用;PI 染色流式细胞术(ow cytometry,FCM) 检测SGI-1776 对HO-8910 细胞周期分布的影响;Transwell 法检测SGI-1776 对HO-8910 细胞迁移 及侵袭的抑制作用;ELISA,Western 印迹,siRNA/cDNA 转染检测SGI-1776 对HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭抑制 作用的可能分子机制。结果：SGI-1776 在体外对HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭呈现出浓度依赖性的抑制作用,阻 滞细胞周期于G1 期。随Pim-1 激酶活性降低,Pim-1 蛋白表达下调,同时Pim-1 下游蛋白CDK6,pCDK6,CDK4, pCDK4,CDK2 和pCDK2 表达下调,而P21 和P27 蛋白表达上调。用siRNA 干扰沉默Pim-1 基因,则SGI-1776 对 HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用明显加强;用Pim-1-cDNA 转染HO-8910 细胞,则能部分抵消SGI-1776 对细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论：SGI-1776 通过钝化Pim-1 而发挥其抑制卵巢癌HO-8910 细胞增殖、迁 移和侵袭的作用,提示Pim-1 是卵巢癌治疗的新的分子靶。     

泛素结合酶E2T对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探究沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR检测UBE2T在人正常卵巢细胞系IOSE80和人卵巢癌细胞系HO8910和A2780中的表达;通过小干扰RNA技术对卵巢癌细胞进行si-UBE2T转染,Western blot检测转染效率。CCK8实验检测UBE2T对卵巢癌细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验以及Transwell实验检测UBE2T对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:与IOSE80相比,HO8910和A2780细胞中UBE2TmRNA表达均升高(P<0.001);转染后,与对照组相比,si-UBE2T组的蛋白表达降低,细胞的增殖、迁移及侵袭能力也降低(P<0.05)。结论:沉默UBE2T能够抑制卵巢癌细胞增殖、迁移以及侵袭,UBE2T可能是卵巢癌治疗的潜在研究靶点。     

微小RNA-145对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 评估微小RNA-145(miR-145)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 选取上皮性卵巢癌细胞株SKOV3及3AO,过表达miR-145后,qRT-PCR检测转染前后细胞株miR-145的表达,Transwell小室实验检测转染前后细胞迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法特异预测出miR-145靶基因zeb-2后,通过双荧光素酶报告实验进行验证,再敲低zeb-2后检测细胞移动能力。 结果 过表达miR-145后,SKOV3(t=10.752,P=0.000;t=5.617,P=0.005)及3AO细胞(t=10.111,P=0.001;t=21.746,P=0.000)的迁移及增殖能力均明显下降。双荧光素酶报告实验结果显示,共转染miR-145 mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(SKOV3:t=4.572,P=0.010;3AO:t=3.528,P=0.024),共转染miR-145mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体细胞差异无统计学意义(SKOV3:t=0.227,P=0.831;3AO:t=0.040,P=0.970)。过表达miR-145 48 h后,实时定量PCR检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=1.490,P=0.211)和3AO细胞(t=0.114,P=0.914)中zeb-2 mRNA表达差异无统计学意义。过表达miR-145 72 h后,Western blot检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=3.769,P=0.020)及3AO细胞(t=4.452,P=0.011)中zeb-2蛋白的表达水平明显下降。转染zeb-2 siRNA 72 h后,Western blot检测结果显示,SKOV3(t=4.660,P=0.010)和3AO细胞(t=4.594,P=0.010)中的zeb-2蛋白表达水平明显下调;Transwell小室实验检测结果显示,SKOV3(t=18.655,P=0.000;t=18.026,P=0.000)及3AO(t=5.500,P=0.005;t=8.780,P=0.001)细胞的迁移和侵袭能力明显下降。结论 miR-145可能是通过靶向抑制zeb-2来抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力。     

安石榴甙对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨安石榴甙(PUN)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:选取OS的U2 OS和MG63细胞,用不同浓度PUN处理,分别设置为不加PUN的对照组和50、75、100μmol·L-1 PUN组.用结晶紫法检测细胞增殖能力,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭和...     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的：探讨莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（5、10、25、50、100 μmol/L）莪术醇,0 μmol/L莪术醇为对照组,干预SKOV3细胞24 h、48 h的增殖抑制率,并计算IC50值;划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达的影响。结果：莪术醇对SKOV3细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性但不呈现时间依赖性,IC50值为48 μmol/L;莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的迁移与侵袭,促进其凋亡（均P＜0.01）,降低细胞PI3K、AKT总蛋白表达（均P＜0.05）,显著降低其活化形式p-PI3K、p-AKT的表达（均P＜0.01）;莪术醇与LY294002联用后表现出良好的协同作用,较单独用莪术醇时下调p-PI3K、p-AKT蛋白更为显著（P＜0.05）。结论：莪术醇能抑制SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT通路有关。     

干扰素调节因子1对舌鳞癌细胞增殖侵袭和迁移的影响

目的 研究干扰素调节因子对舌鳞癌细胞的侵袭和迁移的影响.方法 采用实时定量PCR和免疫组化检测IRF1在舌鳞癌组织中的表达水平,通过构建IRF1的过表达和IRF1沉默的质粒,在舌鳞癌细胞Tca8113中过表达IRF1或降低IRF1的表达水平后,检测其对Tca8113细胞增殖,侵袭和迁移的影响.结果 IRF1在舌鳞癌组织...     

MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的  探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法  将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果  CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论  miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

     

siRNA抑制人卵巢癌KLK6基因表达的实验研究

目的探讨siRNA沉默KLK6基因表达对卵巢癌细胞生长的抑制作用及其机制,为卵巢癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对KLK6 mRNA序列设计合成siRNA,构建2个重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6和PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/Non;将重组质粒导入卵巢癌SKOV-3细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照、阴性质粒转染对照及KLK6 siRNA重组质粒转染组,实时荧光定量PCR法检测KLK6 mRNA的表达的变化,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测量细胞生长情况。结果测序证实表达载体构建成功,在稳定转染重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6的卵巢癌SKOV-3细胞株中,KLK6 mRNA抑制率（76%）明显高于阴性质粒对照组（2.7%）,SKOV-3细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组。结论重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6可抑制卵巢癌细胞中KLK6基因的表达,并抑制卵巢癌细胞的生长。