KLF5对吉西他滨诱导的肺腺癌细胞凋亡的促进作用及其机制

目的 研究krüppel-like factor 5基因（KLF5）的表达对吉西他滨介导的肺腺癌细胞凋亡的影响及分子机制。 方法 在体外培养的肺腺癌细胞H441中,分别转染KLF5表达质粒和空载体对照质粒培养68 h后,加入100 nmol/L的凋亡诱导药物吉西他滨处理4 h,使用细胞计数和流式细胞术方法检测细胞增殖和凋亡; Western blot检测KLF5蛋白的表达,RT-PCR检测KLF5及凋亡相关基因CD95和BAX的表达;免疫荧光染色比较凋亡相关蛋白Caspase 3的表达。 结果 Western blot结果证明KLF5转染成功。无吉西他滨诱导情况下,KLF5高表达对H441细胞的凋亡无显著影响,CD95和BAX基因的表达差异无统计学意义;吉西他滨诱导情况下,与对照组相比,KLF5高表达的H441细胞中凋亡细胞比例增加（P<0.05）,CD95和BAX基因的表达上升（P<0.05）,Caspase 3的表达上调。 结论 在吉西他滨诱导下,体外KLF5高表达促进肺腺癌细胞H441的凋亡。其机制可能是通过抑制细胞增殖和修复激活Caspase 3、CD95和BAX等细胞凋亡通路相关蛋白实现。     

吉西他滨联合槲皮素对胰腺癌细胞Panc-1凋亡的影响研究

目的研究吉西他滨联合槲皮素抑制胰腺癌细胞Panc-1增殖,促进其凋亡的效果.方法设立槲皮素(终浓度为50μM)、吉西他滨(50μg/ml)、吉西他滨联合槲皮素和对照组4组,MTS法检测药物对Panc-1细胞凋亡的影响,流式细胞仪检测联合药物处理对细胞凋亡和细胞周期的影响,最后应用荧光定量PCR法测定凋亡相关基因BCL-2家族蛋白的相对表达.结果吉西他滨联合槲皮素后,对胰腺癌促凋亡效果增强,同时改变细胞周期,使其S期减少,BCL-2家族促凋亡基因表达上调.结论槲皮素能够显著增强吉西他滨抑制胰腺癌恶性增殖的作用.     

吉西他滨对非小细胞肺癌细胞株A-549放疗增敏的机制

目的:研究吉西他滨(GEM)对体外培养非小细胞肺癌细胞的细胞周期改变和凋亡影响,及其放疗增敏的作用及机制。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞株A-549,分单纯培养细胞组、单纯照射组、单纯吉西他滨组及吉西他滨联合放疗组(联合放疗组);单纯照射组采用源皮距(SSD)为100 cm,剂量2 Gy,6 MV光子线照射;吉西他滨组采用MTT法选择对细胞生长抑制率≤10%的药物浓度(IC10)即为GEM的最佳实验浓度;联合放疗组采用最佳实验浓度的GEM加上述同等条件的照射剂量和方法;流式细胞仪分析上述各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:经MTT法检测显示,GEM在0.020-0.030μmol/L之间时为最佳实验浓度。流式细胞仪分析各处理组细胞的细胞周期和凋亡率结果表明,各处理组之间细胞在S期时的比例有显著差异(P<0.05),G2/M、S期比值变化最为明显;细胞凋亡率亦有统计学差异(P<0.05);单纯采用GEM浓度为0.02,0.03μmol/L时没有明显差别(P>0.05)。结论:吉西他滨可以具有放射增敏和协同作用,其机制可能与吉西他滨能改变A-549细胞生长周期并诱导其凋亡有关。     

c-myc RNA干扰增强肺腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的：探讨c-mycRNA干扰后肺腺癌细胞A549对吉西他滨敏感性的改变。方法：构建c-myc特异RNA小干扰（siRNA）的表达载体,转染A549细胞,G418筛选出稳定表达c-myc特异siRNA的细胞株,荧光实时定量RT-PCR和免疫印迹检测c-myc基因表达水平。吉西他滨作用于干扰有效A549细胞,分为GE＋siRNA组、GE组、siRNA组和空白对照组。每组12例,四甲基偶氮唑蓝法检测吸光度,流式细胞仪测凋亡率。结果：成功构建c-myc-siRNA表达载体。c-myc基因mRNA和蛋白表达下降71.9%和85.6%。吉西他滨作用于c-myc-siRNA细胞其吸光度在各时间点较单用吉西他滨组、单用c-myc-siRNA组以及对照组均下降（P＜0.01）,凋亡率增加（P＜0.01）。结论：c-mycRNA干扰后A549细胞的增殖减慢,对吉西他滨的敏感性增加。     

MicroRNA 122促进吉西他滨对体外非小细胞肺癌细胞系A549的杀伤作用

目的 探讨microRNA 122（miRNA122）对细胞毒性化疗药吉西他滨对体外杀伤非小细胞肺癌细胞株的影响.方法 利用脂质体转染miRNA122的表达载体;CCK-8测定系列浓度梯度吉西他滨检测对非小细胞肺癌细胞株A549的抑制率,计算IC50值;平板克隆实验检测吉西他滨对A549细胞杀伤的影响;流式细胞仪-Annexin/PI双染实验检测吉西他滨诱导A549细胞凋亡率.结果 吉西他滨对A549细胞具有明显地体外杀伤作用,其IC50值为（78.65±5.25）nmol/L,转染miRNA122能够上调吉西他滨的活性,其IC50值为（10.26±1.18）nmol/L;流式细胞术结果显示：A549细胞凋亡率诱导转染空载体组为26.24％±1.94％,诱导转染miRNA122组为63.30％±3.96％.miRNA122能够显著上调吉西他滨诱导A549细胞凋亡率.RT-PCR和蛋白印迹实验表明,转染miRNA122能够显著上调A549细胞内miRNA122的表达水平,降低miRNA122靶基因和调控基因的表达水平.结论 miRNA122能够上调吉西他滨对非小细胞肺癌细胞系A549的体外杀伤作用.     

Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的：探讨SurvivinsiRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。方法：肺癌A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA转染＋吉西他滨组和正常对照组;噻唑蓝比色法（MTT法）检测各组细胞增殖率的变化,流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率。结果：SurvivinsiRNA＋吉西他滨组细胞的增殖率和存活率均明显低于siRNA转染组和吉西他滨组（P〈0．01）;且siRNA＋吉西他滨组与siRNA转染组、吉西他滨组比较,更高比率的A549细胞被阻滞于S期（P〈0．01）。结论：siRNA沉默Survivin表达,增加了肺癌A549细胞对吉西他滨的化疗敏感性。     

吉西他滨与奥曲肽联合应用对前列腺癌细胞PC-3的抑制作用

目的 研究吉西他滨与奥曲肽联合用药对去势抵抗性前列腺癌细胞PC-3增殖的抑制作用及对凋亡的影响.方法 体外培养人前列腺癌细胞株PC-3,应用MTT细胞实验研究空白组、对照组、不同浓度的奥曲肽组(0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL)与吉西他滨组(1μg/mL)单独使用以及联合使用不同时间段对PC-3细胞增殖抑制的影响;应用流式细胞仪检测对照组、奥曲肽组(8μg/mL)与吉西他滨组(1μg/mL)单独使用及联合使用对PC-3细胞凋亡的影响;并用Western-blot实验研究对照组、奥曲肽组(8μg/mL)与吉西他滨(1μg/mL)单独使用及联合使用对凋亡指标Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase9表达的影响.结果 MTT细胞实验显示,联合用药组作用72 h后,抑制率可达62%,显著高于对照组、奥曲肽组和吉西他滨组,差异均有显著统计学意义(P<0.05);AnnexinV-FITC细胞凋亡实验结果表明,联合用药组凋亡率25%,显著高于对照组、奥曲肽组和吉西他滨组,差异均有显著统计学意义(P<0.05);Western-blot结果显示,联合用药组Bcl-2表达低于对照组、奥曲肽组和吉西他滨组,而其Bax,Caspase3、Caspase9蛋白表达量显著高于对照组、奥曲肽组和吉西他滨组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 吉西他滨和奥曲肽可以协同作用,增强对去势抵抗性前列腺癌细胞系PC-3的增殖抑制和促凋亡作用,提示临床上两者联合应用于去势抵抗性前列腺癌治疗的可行性.     

人参炔醇联合吉西他滨对胰腺癌干细胞分化及活性的影响

目的: 探讨人参炔醇和吉西他滨联合作用对胰腺癌干细胞(pancreatic cancer stem cell, PCSC)干性及活性的影响。方法: 体外悬浮培养法培养和富集人胰腺癌PANC-1细胞系干细胞,采用荧光激活细胞分选法（fluorescence activated cell sorting,FACS）分选出CD133⁺的细胞亚群;将分选的CD133+细胞分为PBS（对照）组、人参炔醇组、吉西他滨组和人参炔醇与吉西他滨联合组,人参炔醇与吉西他滨最终浓度分别为164 μmol/L,2 μmol/L。流式细胞术检测各组细胞CD133+比例;CCK-8实验检测细胞增殖率;Annexin-V/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测增殖相关蛋白Ki-67及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果： 各组细胞处理48 h后,与对照组相比,人参炔醇组、吉西他滨组和联合组CD133⁺细胞比例明显减少, 而两药联合作用CD133⁺细胞比例减少更显著(P<0.01);人参炔醇和吉西他滨均可抑制胰腺癌PANC-1干细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05),而联合作用对干细胞增殖能力的抑制作用更显著(P<0.01),促进细胞凋亡更明显(P<0.01);与人参炔醇组和吉西他滨组相比,联合组的Ki-67和Bcl-2表达明显下降。结论： 人参炔醇联合吉西他滨可促进胰腺癌干细胞体外分化,并抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,从而抑制细胞活性。     

PUMA与c-myc在吉西他滨诱导CaPan-1细胞凋亡中的作用

目的 研究吉西他滨体外对人胰腺癌CaPan-1细胞生长的作用及机制。方法 将CaPan-1细胞暴露于浓度分别为1、5、10、15μmol／ml的吉西他滨10μl中，RT-PCR法检测细胞中PUMA、bax、bcl-2和c-myc mRNA的表达，MTT检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 吉西他滨促进CaPan-1细胞凋亡，抑制细胞生长，并有明显的剂量依赖性；药物处理的细胞凋亡伴有PUMA mRNA和c-myc mRNA上调，而bcl-2 mRNA和bax mRNA无明显变化。结论 吉西他滨通过促进体外CaPan-1细胞凋亡而抑制其生长，其诱导凋亡与表达上调的PUMA和c-myc的协同作用有关。     

吉西他滨对人肺癌A549细胞株CN-Ⅱ, APE/Ref-1 mRNA 和蛋白表达的影响

 【目的】 研究人肺癌A549细胞株在吉西他滨化疗时CN-Ⅱ, APE/Ref-1基因表达的变化,并探讨其在肺癌化疗耐药中所起的作用&#65377;【方法】 不同浓度吉西他滨0&#65380;10&#65380;20&#65380;40及60 μmol/L作用人肺癌A549细胞株24 h,分别以RT-PCR及Western blot方法测定用药后CN-Ⅱ和APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况&#65377; 【结果】 吉西他滨作用人肺癌A549细胞株24 h后, CN-Ⅱ和APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平均明显上升,并与吉西他滨的浓度呈正相关(CN-Ⅱ RT-PCR: r = 0.687, P = 0.009; Western blot: r = 0.594, P = 0.021; APE/Ref-1 RT-PCR: r = 0.669, P = 0.010; Western blot: r = 0.562, P = 0.029)&#65377; 【结论】 CN-Ⅱ和APE/Ref-1在肺癌化疗时表达明显增强,可能与化疗耐药性的产生有关,并提示针对CN-Ⅱ和APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高肺癌的化疗敏感性&#65377;     

吉西他滨联合热疗对胰腺癌ASPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨吉西他滨(GEM)联合热疗对胰腺癌ASPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及可能的机制。方法:将ASPC-1细胞随机分为对照组(无任何处理)、GEM组(给予30μmol/L GEM)和热化疗组(给予热疗联合30μmol/L GEM)。采用MTT法检测细胞增殖及活力情况。采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用Westerm blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测特异性蛋白1(Sp1)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、环氧合酶-2(COX-2)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白及mRNA表达情况。结果:30μmol/L GEM对ASPC-1细胞增殖有抑制作用,热化疗组抑制作用更明显(均P<0.05)。GEM前24 h给予43℃热疗1 h对细胞抑制作用更明显(均P<0.05)。与对照组比较,GEM组和热化疗组细胞迁移能力降低,且热化疗组降低更加明显(均P<0.05)。GEM组和热化疗组细胞侵袭能力较对照组降低,且热化疗组更明显(均P<0.05)。与对照组比较,GEM组和热化疗组细...     

吉西他滨联合奥沙利铂治疗非小细胞肺癌

目的了解奥沙利铂联合吉西他滨治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及毒副作用。方法对67例晚期非小细胞肺癌随机分为治疗组和对照组,治疗组给予奥沙利铂联合吉西他滨化疗;对照组给予顺铂联合吉西他滨化疗。21d为1个周期,完成2个周期后评价其疗效及毒副作用。结果两组患者的总有效率分别为62．5％和51．4％,差异无统计学意义。两组的主要毒副作用为骨髓抑制和恶心、呕吐、便秘,治疗组较对照组轻。结论奥沙利铂联合吉西他滨治疗晚期非小细胞肺癌与顺铂联合吉西他滨的疗效基本相同,但其化疗的毒副作用轻,在治疗过程中具有一定的优势．值得推广。     

吉西他滨对人口腔鳞癌细胞增殖及c-myc蛋白表达的影响

【目的】探讨吉西他滨体外对人口腔鳞癌细胞株KB增殖情况的影响。【方法】体外培养人口腔鳞癌细胞株KB,MTT法测定不同浓度吉西他滨对KB的抑制率,Western—blotting检测吉西他滨对c—myc蛋白表达影响。【结果】吉西他滨体外可抑制KB的生长,随着药物浓度的增加,对KB的抑制作用增强。与0μg／ml吉西他滨组比较,8、16、32μg/ml吉西他滨均可下调c—myc相对表达量（P〈O．05）。【结论】吉西他滨体外能抑制口腔鳞癌细胞增殖,可能与下调c—myc蛋白表达有关。     

吉西他滨和多西他赛联合顺铂对非小细胞肺癌的效果对比

目的：比较吉西他滨和多西他赛分别联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效。方法选取106例晚期NSCLC化疗初治患者,将其随机分成观察组(1000 mg/m 2吉西他滨+顺铂30 mg/m 2)与对照组(75 mg/m 2多西他赛+顺铂30 mg/m 2),各53例。1周期为21 d,连续化疗2个周期。对2组的疗效进行对比分析。结果观察组的总缓解率为43.40%(23/53),对照组的总缓解率为45.28%(24/53),且2组均未出现完全缓解,差异无统计学意义;观察组的肌肉酸痛、白细胞下降的发生率分别为0.00%和62.26%,对照组分别为30.19%和81.13%,差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组的皮疹、血小板减少的发生率分别为35.85%和54.72%,对照组分别为0.00%和32.08%,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论西他滨和多西他赛分别联合顺铂对晚期NSCLC的化疗效果相当,均有各自的不良反应,在临床治疗中,要根据患者对所产生的不良反应的耐受情况选择化疗方案,能有效提高患者的生存质量。     

托瑞米芬联合吉西他滨对肺癌细胞株A549生长和凋亡的影响

目的研究托瑞米芬(TOR)联合吉西他滨(GEM)对人肺癌株A549的影响,为肺癌的临床治疗提供新的方向。方法用MTT比色法检测各组药物对细胞生长的抑制作用,用HE染色观察用药后细胞形态,用细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。结果托瑞米芬能直接抑制肺腺癌细胞A549的生长,低剂量托瑞米芬(5、10μmol/L)与吉西他滨联用后的抑制率较单用吉西他滨明显提高,并且随药物浓度增高而增高。联合用药组较单用化疗药物组凋亡率提高,而单用托瑞米芬对细胞的凋亡率与对照组比无明显变化。结论托瑞米芬可抑制肺腺癌细胞A549的生长,但不能直接促进细胞凋亡;托瑞米芬与吉西他滨有明显的协同作用。     

吉西他滨联合PD-1单抗对肺癌小鼠肿瘤体内增殖能力的影响

目的 探究吉西他滨(GEM)联合程序性死亡受体-1(PD-1)单抗对肺癌小鼠肿瘤体内增殖能力的影响.方法 制备肺癌小鼠模型,将40只小鼠分为空白对照组(NC组)、PD-1组、GEM组和联合组,分别给予磷酸盐缓冲液(200μL/kg)、GEM溶液(50 mg/kg)、PD-1抗体(100μg/kg)、GEM溶液和PD-1...     

吉西他滨联合外照射诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：研究吉西他滨联合外照射诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞产生凋亡的作用。方法：采用MTT法检测吉西他滨（D）,外照射（R）,吉西他滨和外照射（R＋D）分别对MCF-7细胞的抑制作用,流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数,电子显微镜观察MCF-7细胞凋亡的形态学特征,结果：细胞生长抑制率随吉西他滨作用浓度的增加而逐渐增大;（R＋D）组与D组及R组凋亡指数比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：吉西他滨能诱导人乳腺癌细胞产生凋亡,并能明显增强放疗对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。     

吉西他滨联合卡铂治疗老年晚期非小细胞肺癌临床分析

目的:观察吉西他滨联合卡铂治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床疗效及毒副反应。方法:把同期住院的57例老年患者分为A、B两组,A组30例采用吉西他滨联合卡铂化疗,B组27例采用长春瑞滨联合顺铂化疗,分别治疗2个周期以上,对照观察其疗效、生活质量的变化及毒副反应。结果:A组有效率为43.33%(13/30),B组有效率为40.74%(11/27),两组比较无显著性差异,生活质量的提高A组优于B组,血液毒性主要为白细胞及血小板减少,两组比较无显著性差异,非血液毒性主要是恶心呕吐、静脉炎,多发生于B组。结论:吉西他滨联合卡铂治疗老年晚期非小细胞肺癌疗效好,毒副反应轻,患者易于接受。