微小RNA-125b靶向调控乳腺癌易感基因相关蛋白1调节胰腺癌细胞增殖及侵袭

目的探究微小RNA(miR)-125b可否通过调节乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)调节胰腺癌细胞的发生与发展进程, 探讨其在胰腺癌中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测2018年1月至2020年12月21例在我科接受手术患者的胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞系中miR-125b和其靶蛋白的表达水平。通过细胞克隆实验、流式细胞凋亡检测技术、划痕实验以及细胞侵袭实验检测转染前后胰腺癌细胞增殖、凋亡、细胞迁移和侵袭能力, 组间比较采用t检验。结果 miR-125b在胰腺癌组织中的表达显著上调(2.48±0.46比0.68±0.15, t=13.991, P<0.01)。过表达miR-125b组的BAP1的表达明显低于对照组(465.57±11.28比933.80±15.46, t=5.894, P<0.01)。过表达miR-125b组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组(214.56±8.45比78.43±5.15, t=3.482, P<0.01)。过表达BAP1组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显...     

DNA甲基转移酶1对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法采用小干扰RNA(siRNA)沉默前列腺癌细胞株(PC3和DU145)中DNMT1表达, 通过定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的体外增殖能力;TransWell检测细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot检测si-DNMT1细胞后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。组间比较采用t检验。结果 qPCR和Western blot实验结果显示DNMT1在前列腺癌细胞中高表达, 并成功构建siDNMT1 PC3和DU145细胞系。4 d后, CCK-8结果显示, siDNMT1细胞增殖能力低于相应对照组[PC3:1.27±0.71和1.44±0.48比1.66±0.58, t=7.268、5.108, P<0.01;DU145:1.43±0.12和1.27±0.10比1.80±0.06, t=4.841、7.493、P<0.01]。Transwell显示, 与对照组细胞比较, siDNMT1细胞迁移和侵袭...     

多嘧啶序列结合蛋白1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的检测多嘧啶序列结合蛋白1(PTBP1)在前列腺癌中的表达水平, 并探究PTBP1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法运用UALCAN数据库分析PTBP1基因在前列腺癌组织中的表达水平、PTBP1基因与前列腺癌患者总生存期(OS)的关系, 收集前列腺癌及癌旁组织, 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测前列腺癌及癌旁组织、正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞中PTBP1 mRNA和蛋白质的相对表达水平。在前列腺癌PC3细胞中转染siRNA-PTBP1, 将细胞分为转染组(si-PTBP1)和对照组(NC), 采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率。利用细胞克隆形成实验和细胞计数盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)及EMT标志蛋白的表达水平;所有结果应用SPSS 26.0统计软件分析。结果 UALCAN数据库显示PTBP1基因在前列腺癌组织中表达水平升高(P<0....     

含V-Set免疫球蛋白域蛋白2对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响及机制

目的探究含V-Set免疫球蛋白域蛋白2(VSIG2)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及具体机制。方法质粒转染构建VSIG2敲低和过表达细胞系, 分为sh-VSIG2#1/sh-VSIG2#2组和oe-VSIG2组, 并分别以sh-NC和Vector组作为对照。蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆测定胰腺癌细胞增殖能力。Transwell和划痕实验检测侵袭及迁移能力。KEGG对VSIG2相关基因进行通路富集分析, Western blot检测通路关键指标的表达量。以VSIG2过表达细胞系进行功能回复, Western blot检测通路指标表达量变化。组间比较采用t检验和单因素方差分析。结果 CCK-8结果显示, sh-VSIG2#1比sh-VSIG2#2组72 h吸光度值低于sh-NC组(1.122±0.056比0.997±0.063比1.561±0.072, t=8.876、8.994, P<0.05);oe-VSIG2组72 h吸光度值高于Vector组(2.103±0.102比1.604±0.089, t=12.21...     

小干扰RNA靶向抑制Ezrin蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的 探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对人乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响.方法 采用小干扰RNA方法下调人乳腺癌MCF-7细胞中Ezrin的表达,分别通过RT-PGR和Western blot检测siRNA下调Ezrin基因和蛋白表达的水平.并采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪榆测细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭能力. 结果 RT-PCR和Western blot结果显示,RNA干扰后Ezrin基因蛋白水平均明显下调(F=41.97,P＜0.01),RNA干扰后MCF-7细胞G2-M期细胞比例下降(t=-5.997,P＜0.01);细胞凋亡增加(t=4.479,P＜0.01);细胞的侵袭能力下降,穿过人工基底膜的细胞数量明显减少(t=5.268,P＜0.01).结论 Ezrin在乳腺癌生长和侵袭转移过程中发挥重要作用.     

苏氨酰tRNA合成酶在肝细胞癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨苏氨酰tRNA合成酶(TARS)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与患者预后、肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的关系。方法收集93例HCC患者的临床病理资料, 用免疫组织化学检测肝癌组织和癌旁组织中TARS的表达差异, 分析其与患者临床病理特征及预后的关系;使用小干扰RNA(siRNA)技术下调肝癌细胞内TARS的表达, 细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的迁移、侵袭能力, 组间比较采用单因素和多因素方差分析及t检验。结果肝癌组织中TARS的表达明显高于癌旁组织(60.2%比25.8, P<0.01);TARS高表达组的整体生存期明显低于TARS低表达组(P<0.01), TARS高表达是影响HCC患者整体生存独立风险因素(P<0.01)。siRNA组细胞中TARS mRNA表达(0.04±0.01比0.99±0.03, P<0.01)及蛋白(0.18±0.02比1.11±0.07, P<0.01)表达低于对照组。CCK-8实验结果表明, 与对照组比较, TARS降表达组细胞吸光度值在第3天(3.08±0.03...     

含三方基序54调控胰腺癌增殖、侵袭和转移的机制

目的探讨含三方基序54(TRIM54)在胰腺癌中的调控机制。方法胰腺癌细胞株(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)和正常胰腺上皮导管细胞(HPDE)株购自美国模式培养物集存库(ATCC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TRIM54在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)和胰腺导管腺癌(PDAC)细胞中的表达。通过转染质粒(shRNA)敲低TRIM54的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力。Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本t检验, 多组样本之间的比较采用方差分析。结果通过RT-PCR检测, HPDE中TRIM54信使RNA(mRNA)表达水平明显低于胰腺癌细胞(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)(1.00±0.02比2.05±0.04比1.37±0.03比1.62±0.02比3.18±0.10比3.59±0.07, F=1 042.04, P<0.05)。Western b...     

叉头框蛋白M1促进三阴性乳腺癌进展的分子机制

目的探讨叉头框蛋白M1(FOXM1)在乳腺组织表达水平及其对乳腺癌细胞进展的影响。方法选取2022年1月至2023年1月郑州大学第一附属医院择期手术的68例乳腺癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用蛋白质印迹法(Western blot)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析FOXM1蛋白和mRNA表达水平;采用对照短发卡RNA(shRNA)和FOXM1 shRNA慢病毒感染乳腺癌细胞MDA-MB-231, 建立对照组和FOXM1 KD组细胞, 采用噻唑蓝(MTT)法测定两组细胞的活力;流式细胞术分析两组细胞的周期和凋亡水平;Transwell分析两组细胞迁移和侵袭能力, Western blot分析两组细胞上皮细胞和间质细胞标志物表达水平;采用荧光定量PCR分析肿瘤和细胞中FOXM1靶基因KIF4A、MYBL2和Integrin β1 mRNA表达水平。组间比较采用t检验。结果癌旁组织FOXM1蛋白表达水平(1.29±0.28)明显低于三阴性乳腺癌组织(1.90±0.26), 差异有统计学意义(t=12.890, P<0.05)。荧光定量PCR结果显示, 癌旁组织FOXM1 mRN...     

叉头框蛋白A2对肿瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化的影响

目的探讨叉头框蛋白A2(FOXA2)对肿瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化的影响。方法选取河南大学淮河医院2019年6月至2021年10月收治的64例卵巢癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用蛋白质免疫印迹分析肿瘤和癌旁组织中FOXA2蛋白表达水平。采用转染试剂转染对照质粒和FOXA2过表达质粒至人卵巢癌细胞SKOV3, 分别为对照组和观察组。采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析对照组和观察组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力。采用体外移植瘤实验分析两组细胞的迁移能力。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析FOXA2靶基因表达。组间数据比较采用t检验。结果癌旁组织FOXA2蛋白表达水平(1.13±0.24)明显高于卵巢癌组织FOXA2蛋白表达水平(0.47±0.14), 差异有统计学意义(t=18.640, P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.67±9.95)%]明显高于观察组细胞划痕愈合率[(56.60±7.06)%], 差异有统计学意义(t=5.452, P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(150.83±18.35)...     

N-myc下游调节基因家族成员3在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的探讨N-myc下游调节基因家族成员3(NDRG3)对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法实验分NDRG3敲减组和对照组,AGS-NDRG3小发夹状RNA(shRNA)组采用shRNA技术干扰AGS细胞中NDRG3表达,同时设置AGS-Vector对照组转染空白对照病毒;通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞中NDRG3 mRNA和蛋白表达以检查AGS-NDRG3 shRNA组中NDRG3敲减效果,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和Transwell实验分别检测两组细胞中细胞增殖和侵袭能力,利用流式细胞仪分析两组细胞中细胞周期分布情况,并通过Western blot检测敲减两组细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)和p53蛋白表达水平,组间比较采用单因素方差分析。结果AGS-NDRG3 shRNA组NDRG3 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组(NDRG3 mRNA,0.220±0.035比1.020±0.078,t=14.713,P<0.01;NDRG3蛋白,0.140±0.018比0.820±0.025,t=7.892,P<0.01),差异均有统计学意义。CCK-8实验结果显示,在培养24、48、72 h后,AGS-NDRG3 shRNA组细胞的增殖水平(0.388±0.025、0.576±0.044、0.873±0.051)明显低于对照组(0.457±0.033、0.674±0.047、1.125±0.062),差异均有统计学意义(t=4.983、5.852、8.082,P<0.01);Transwell迁移实验结果表明,AGS-NDRG3 shRNA组侵袭穿过Transwell小室膜的细胞数[(474.5±27.6)个]明显低于对照组[(1127.0±48.8)个],差异有统计学意义(t=12.380,P<0.01);细胞周期分析显示,敲减NDRG3表达的AGS细胞周期阻滞于S期,其S期占49.33%,对照组S期占30.29%(t=4.634,P<0.01),差异均有统计学意义;Western blot检测结果显示,敲减NDRG3表达后AGS细胞中Ki-67蛋白表达低于对照组(0.380±0.021比0.860±0.036,t=5.163,P<0.01)、野生型p53蛋白表达高于对照组(0.720±0.018比0.160±0.013,t=11.354,P<0.01),差异均有统计学意义。结论NDRG3可能通过调控p53通路促进AGS细胞增殖及侵袭能力。     

敲低长链非编码RNA PURPL-微小RNA-137-Ⅰ型跨膜受体蛋白信号通路抑制乳腺癌的机制

目的探究敲低长链非编码RNA PURPL调控微小RNA(miR)-137抑制物/Notch同源物1干扰物信号轴对抗乳腺癌的调控机制。方法生信系统分析PURPL与癌症相关性;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PURPL, miR-137, Ⅰ型跨膜受体蛋白(Notch1)在乳腺癌组织表达;蛋白质印迹法(Western blot)、免疫荧光检测Notch1在乳腺癌组织中蛋白和阳性信号的表达;双荧光素酶报告基因检验miR-137抑制物与PURPL和Notch1的调控机制;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Transwell实验、细胞伤口愈合实验及原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡分别检测下调PURPL-miR-137-Notch1轴对增殖、侵袭、迁移及凋亡的调控能力;构建乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤体积和重量, 生长情况。两组间比较采用独立样本t检验。结果 PURPL和Notch1在乳腺癌组织中高表达(1.01±0.09比2.81±0.22、1.02±0.11比3.19±0.28, t=62.903、59.918, P<0.01), miR-137低表达(0.99±...     

微小RNA-519d-3p靶向DCAF4L2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620, 同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用两样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降, 其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍, t=7.783, P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍, t=15.72, P<...     

微小RNA-135a调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和凋亡

目的探讨微小RNA-135a(miR-135a)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能的机制。方法构建miR-135a过表达和空载病毒的Saos-2细胞分别为miR-135a UP组(实验组), Control组(对照组)。采用实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测c-Myc信使核糖核酸(mRNA)的改变, 采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测c-Myc蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(PAM)通路蛋白的改变。细胞集落形成和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力, 划痕和Transwell实验分别检测迁移和侵袭能力, 细胞流式技术检测抗凋亡能力, 两组比较采用t检验。结果 miR-135a表达量实验组高于对照组(59.006±5.034比1.008±0.151, t=23.031, P<0.01), c-Myc与PAM通路蛋白表达量实验组低于对照组, 细胞增殖能力实验组低于对照组(CCK-8法:1.311±0.048比2.029±0.046, t=24.301, P<0.01...     

METTL14调控CCNL2对乳腺癌细胞活性与侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase like 14, METTL14)通过m6A修饰的方式调控细胞周期蛋白L2(cyclin L2, CCNL2)对乳腺癌(breast cancer, BC)细胞增殖与侵袭的影响。方法收集2018年8月至2020年2月烟台山医院乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织, 高效液相色谱/质谱(HPLC/MS)定量与qRT-PCR检测组织中m6A、METTL14、CCNL2的表达水平。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR、Western blot验证METTL14与CCNL2的调控关系。RIP实验验证YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein, YTHDF2)与CCNL2的调控关系。MTT法检测细胞活性, Transwell检测细胞侵袭能力。结果与正常细胞(0.24±0.02)及组织(0.18±0.02)相比, 乳腺癌细胞MCF-7(0.47±0.03, t=11.05, P<0.001)和HS-578T细胞(0.41±0.03, t=8.17, P=0.001)及乳腺癌组织(0.39±...     

低氧相关的R-脊椎蛋白3对人乳腺导管癌细胞增殖能力的影响及其机制

目的体外观察低氧微环境对乳腺癌细胞增殖能力的影响, 并探讨其分子机制。方法细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)用于人乳腺导管癌细胞株(BT-474, 购于中国科学院上海细胞库)经低氧处理后的增殖能力;应用基因芯片对低/常氧处理后的细胞进行差异基因的表达检测, 并在体外行实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证;运用癌症基因组图谱(TCGA)及人类蛋白质表达图谱(HPA)数据库分析筛选的差异基因在乳癌及正常乳腺组织中的表达特征, 并分析其水平与患者临床病理学特征及预后的相关性;基因组百科全书(KEGG)通路分析、基因过表达实验、蛋白质印迹法(Western blot)等方法探讨其发挥功能的分子机制, 组间比较采用t检验。结果 BT-474细胞分别经常氧、低氧干预24、36、48 h后, 常氧组中的吸光度值显著低于低氧组(0.32±0.03比0.40±0.02, t=6.351;0.45±0.01比0.52±0.02, t=4.196;0.57±0.04比0.68±0.03, t=3.257;P<0.05);基因芯片分析结果提示R-脊椎蛋白3(r-spondin3, RSPO3)是细胞经...     

三结构域蛋白28通过上皮-间充质转化对肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒,对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,组间比较采用t检验。结果RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG20.84±0.02,HCCLM30.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG21.00±0.05,HCCLM31.00±0.07,t=5.488、7.240,P<0.01),差异有统计学意义。划痕实验结果显示,48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%],差异有统计学意义(t=22.971、5.780,P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个,明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个,差异有统计学意义(t=23.050、13.242,P<0.01)。Western blot结果显示,HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06,0.63±0.08,t=4.822、2.951,P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03,0.32±0.02,t=2.909、7.944,P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03,0.12±0.02,t=2.970、4.157,P<0.05)低于对照组,E-cadherin表达升高(0.25±0.05,0.27±0.07,t=3.242、5.021,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示,实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30,1.40±0.17,t=4.571、3.095,P<0.01),差异有统计学意义,N-cadherin(0.42±0.01,0.84±0.03,t=22.460、8.441,P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00,0.84±0.02,t=52.230、6.194,P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07,0.34±0.07,t=2.972、4.174,P<0.01),差异均有统计学意义。结论降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。     

信号转导与转录激活因子3下调DNAJB6在肺癌生物学行为中的机制

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中信号转导与转录激活因子3(STAT3)与DNA结合蛋白B6(DNAJB6)的关系及铁死亡对NSCLC生物学行为的影响。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖试验和细胞划痕实验对非小细胞肺癌细胞系A549和H1650进行细胞增殖能力检测。通过慢病毒转染A549和H1650细胞系, 检测NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC细胞系A549和H1650各项靶蛋白的表达, 组间比较采用t检验, 多组比较采用方差分析。结果 Western blot结果显示在膜上约80 kDa处, 肿瘤组织蛋白条带较正常相邻组织颜色更深(P<0.01)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析结果显示, 肿瘤组织中STAT3/DNAJB6 mRNA与GAPDH mRNA的比值高于正常相邻组织(1.184±0.168比0.378±0.136)差异有统计学意义(P<0.01)。CCK-8实验结果, 在24、48、72、96 h时, STAT3组的NSCLC细胞系A549增殖率比相应对照组高[(1.000±0.01...     

紫杉醇通过自噬相关蛋白7介导的自噬抑制人主动脉平滑肌细胞增殖及迁移

目的探究自噬在紫杉醇(PTX)抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及机制。方法使用紫杉醇作用人主动脉平滑肌细胞(HASMCs), 采用细胞计数盒(CCK-8)法和5-乙炔-2’-脱氧尿苷(EdU)掺入法检测紫杉醇对HASMCs的增殖能力的影响, 采用划痕实验检测紫杉醇对HASMCs迁移能力的影响, 蛋白质印迹法(Western blot)及利用GFP-RFP-LC3Ⅱ-HASMCs观察PTX对自噬关键蛋白LC3Ⅱ表达水平的影响;利用自噬相关蛋白7(ATG7)小干扰RNA转染HASMCs, 抑制自噬水平, 检测PTX对HASMCs增殖及迁移能力的作用。两组间比较采用t检验。结果在紫杉醇作用下, 其细胞活性在2.5 nmol/L组(0.669 ±0.010, t=17.620, P<0.01)及5 nmol/L组(0.535±0.012, t=22.300, P<0.01)时明显低于对照组(1.008±0.018);Edu阳性细胞率在2.5 nmol/L组(0.356±0.016, t=14.380, P<0.005)与5 nmol/L组(0.293±0.018, t=1...     

Rab蛋白22A在骨肉瘤组织中表达及其对肿瘤细胞增殖和转移的影响

目的探讨Rab蛋白22A(Rab22A)在骨肉瘤组织中得表达及对肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化的影响。方法选取2019年1月至2021年1月河南省人民医院收治的77例骨肉瘤组织和癌旁组织作为研究对象, 采用蛋白质免疫印迹分析肿瘤组织和癌旁组织中Rab22A蛋白表达水平。采用对照慢病毒和Rab22A短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染人骨肉瘤细胞U2OS, 分别为对照组和Rab22A KD组, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力;采用划痕实验、Transwell和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析对照组和Rab22A KD组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力。组间数据比较采用t检验。结果骨肉瘤组织中Rab22A表达水平(2.09±0.22)明显高于癌旁组织(1.01±0.18), 差异有统计学意义(t=32.910, P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值(2.09±0.11)明显高于Rab22A KD组(1.53±0.11), 差异有统计学意义(t=8.795, P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)表达水平(1...     

SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检...