基于NLRP3基因研究其调节非酒精性脂肪性肝病小鼠炎症反应的作用机制

目的 利用NLRP3基因敲除小鼠,研究NLRP3基因在调节高脂高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠炎症反应方面的作用机制。方法 利用雄性纯合子(NLRP3-/-)小鼠,以高脂高果糖饮食诱导NLRP3基因敲除(knock-out,KO)小鼠和野生型(wild-type,WT)小鼠建立NAFLD模型,分别设为KO高脂高果糖饮食组(KO-HFD组)和WT高脂高果糖饮食组(WT-HFD组),同时设WT组和KO组。通过观察各组小鼠体质量变化,血清和组织样本ALT、AST、TG、TC、MDA、SOD、脂质沉积、细胞凋亡率、IL-1β、IL-18、TNF-α、NF-κB、NLRP3、Caspase-1和ASC等的变化,初步研究NLRP3基因调节NAFLD小鼠炎症反应的作用机制。结果 随时间的推移,各组小鼠体质量逐步增加,但KO-HFD组相比WT-HFD组增加较少;各组血清ALT、AST、TG和TC水平逐步升高,但KO-HFD组相比WT-HFD组增幅较小;各组肝组织MDA水平逐步升高,SOD水平逐步降低,但KO-HFD组相比WT-HFD组变化幅度较小;油红O染色和Tunel切片结果显示,各组肝细胞内脂质沉积和细胞凋亡程度均逐渐增大,但KO-HFD组相比WT-HFD组变化较少;各组血清和肝组织炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、NF-κB水平升高,但KO-HFD组20周相比WT-HFD组20周变化较少,且差异具有统计学意义;WT-HFD组小鼠肝组织NLRP3炎性小体及相关炎症因子蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18的表达水平相较KO-HFD组升高;WT-HFD组的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA转录水平逐步升高,而KO-HFD组基本未出现变化。结论 NLRP3基因在NAFLD小鼠模型中可能被激活,导致NLRP3炎性小体相关蛋白表达的增加,促进下游炎症因子的合成和分泌,造成明显的炎症反应和肝脏损伤,进而推动NAFLD疾病的进展。     

NLRP3炎性小体介导曲妥珠单抗增强多柔比星所致心脏毒性的作用

目的研究NLRP3炎性小体是否介导曲妥珠单抗增强多柔比星所致心脏毒性的作用。方法对野生型小鼠和NLRP3基因敲除小鼠腹腔注射曲妥珠单抗和(或)多柔比星建立心脏毒性动物模型。小动物多普勒超声检测小鼠心功能(小鼠左室舒张末期内径LVDd、心脏射血分数EF和左室短轴缩短率FS);分离血清,生化分析仪检测血清中心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CKMB)水平;HE染色、WGA-FITC染色和TUNEL染色分别检测心肌组织病理改变、心肌细胞肥大和凋亡情况,NLRP3免疫组化检测心肌组织NLRP3的表达变化,Western印迹检测NLRP3炎性小体的活化水平(NLRP3、ASC和Caspase1-p20的蛋白表达)。结果野生型小鼠经腹腔注射多柔比星,M型超声心动图显示LVDd增加,EF和FS降低,血清中cTnT、CK和CK-MB水平显著升高,心肌组织肌纤维排列紊乱、心肌细胞肥大和凋亡增加,NLRP3在心肌组织的表达增高。多柔比星可上调心肌组织NLRP3、ASC和Caspase 1-p20的蛋白表达,表明炎性小体的活化。多柔比星联用曲妥珠单抗可进一步增强上述心脏毒性和心肌组织NLRP3的活化,表明NLRP3炎性小体可能介导曲妥珠单抗增强多柔比星所致心脏毒性的作用。相比野生型小鼠组,敲除NLRP3基因可减少曲妥珠单抗增强多柔比星所致心脏毒性的作用,进一步证实NLRP3炎性小体的介导作用。结论曲妥珠单抗通过活化NLRP3炎性小体增强多柔比星所致的心脏毒性。     

NLRP3基因敲除增强芹菜素对triton-WR 1339所致高脂血症的降血脂及抗炎作用研究

目的探讨NLRP3对芹菜素降血脂和抗炎作用的干预及调控机制。方法采用Triton-WR1339对野生型(widetype,WT)C57BL/6小鼠和NLRP3-/-小鼠致高脂血症,给药组连续5 d灌胃给予芹菜素6.25 mg·kg^-1,收集血样及肝脏,测定血清中TC、TG、HDL、LDL;肝脏进行HE染色分析;ELISA测定血清中IL^-1β、IL-6、MCP-1含量。RT-qPCR测定肝脏中NLRP3、IL-4、ASC、CD36、CYP7A1、FGF21的mRNA表达水平。结果与NLRP3-/-模型组相比较,芹菜素降低NLRP3-/-模型小鼠血清TC、TG、LDL-C、IL^-1B、IL-6、MCP-1含量,提高HDL-C含量(P<0.05),减少肝脏脂肪病变比例;芹菜素对WT模型小鼠未见此作用。芹菜素均能上调WT和NLRP3-/-模型小鼠CD36、vLDLR的表达,抑制ASC、IL-4表达(P<0.05)。芹菜素仅调控NLRP3-/-模型小鼠的FGF21、CYP7A1的表达(P<0.05),对WT模型小鼠无作用。结论NLRP3基因敲除增强低剂量芹菜素改善Triton-WR 1339所致的高脂血症及炎症等症状。NLRP3基因敲除增强芹菜素调控血脂作用的机制可能为:NLRP3炎症小体缺失,从而增强芹菜素对FGF21/CYP7A1信号通路的调控相关。     

NOD样受体蛋白 3炎症小体在多柔比星诱导心脏毒性中的意义

晚期肿瘤病人的生命周期因新药的出现不断延长,同时,抗肿瘤药物所致的毒副作用也受到重视。多柔比星( DOX)作为强大的广谱抗肿瘤药物虽极大地延长了肿瘤病人的生存周期,但其诱导的剂量相关性的心脏毒性限制了其临床应用。 NOD样受体蛋白 3(NLRP3)炎症小体在 DOX诱导的心脏毒性( DIC)的炎症过程发挥着重要作用,且一些炎症小体抑制剂还可减轻 DIC。该文根据近 5年的最新进展,围绕 NLRP3炎症小体参与 DIC的作用及机制等做一归纳、总结。     

NLRP3炎性小体与糖尿病心肌病的发生发展

糖尿病心肌病(DCM)是糖尿病特异性心脏并发症,可独立于冠状动脉疾病、高血压或瓣膜性心脏病发生。目前公认的发病机制包括高血糖、蛋白非酶糖基化、氧化应激、钙离子转运异常等,其中炎症是导致左心室舒张功能障碍的独立因素。NLRP3是最常见的炎性小体,可诱导分泌IL-1β、IL-18等促炎细胞因子以及介导细胞焦亡。DCM发生时NLRP3表达上调,加剧胰岛β细胞功能受损、心肌损伤、心肌纤维化进程。已有研究证实,中药可通过抑制NLRP3炎性小体的启动和活化,以及其下游基因的表达,改善DCM心脏功能。本文就NLRP3炎性小体参与DCM发生及中药干预作用进行综述。     

吸入胰岛素通过NLRP3炎症小体改善散发性阿尔茨海默病小鼠的认知功能

目的 探究吸入胰岛素对散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease, sAD)小鼠认知功能的影响及机制。方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)侧脑室注射法构建散发性AD模型。C57BL/6 J小鼠随机分成3组：对照组(Con)、模型组(STZ-NS)和治疗组(STZ-INS),每组12只。治疗组经鼻吸入胰岛素0.87 U·d^-1,对照组和模型组吸入同体积生理盐水。4周后行水迷宫实验检测小鼠的认知功能；免疫荧光实验检测小鼠海马区Iba1表达；Western blot检测各组小鼠海马GFAP、CD11b及NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达。另以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激BV2细胞诱导其活化，不同浓度胰岛素预处理，Western blot检测NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达。结果 与对照组小鼠相比，模型组小鼠的学习和记忆能力明显下降，海马区Iba1阳性细胞数量明显增加，GFAP、CD11b和NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达明显升高；吸入胰岛素后，小鼠的学习和记忆功能明显改...     

补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及机制初探

目的基于小鼠骨髓巨噬细胞系,建立NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活化模型,探索补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及初步机制。方法采用LPS联合ATP、Nigericin、Salmonella和Poly(dA∶dT)等刺激因子,分别构建NLRP3、NLRC4和AIM2炎症小体活化模型;Caspase-Glo~® 1 Inflammasome Assay检测caspase-1活性;免疫印迹法检测细胞培养上清中mature IL-1βp17、caspase-1 p20的蛋白水平,以及细胞裂解液中pro-caspase-1、pro-IL-1β、ASC、NLRP3等蛋白表达。结果补骨脂异黄酮可抑制LPS联合ATP、Nigericin、Salmonella和Poly(dA∶dT)诱导的pro-caspase-1自我剪切,抑制caspase-1介导的IL-1β产生,表明补骨脂异黄酮可抑制NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活性。此外,研究发现补骨脂异黄酮对NLRP3炎症小体活性的抑制作用具有不可逆性,且不依赖于NF-κB通路。结论补骨脂异黄酮可通过抑制pro-caspase-1自我剪切活化,从而抑制NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体的激活,进一步抑制其介导的免疫炎症反应,本研究也在一定程度上为补骨脂异黄酮相关制剂治疗免疫炎症疾病提供依据。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...     

雷帕霉素通过调控NLRP3炎症小体抑制成纤维样滑膜细胞增殖

目的 探讨自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)通过调控含核苷酸寡聚化结构域样受体(NLR)家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)炎症小体对肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)诱导成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法 培养FLS并分为3组：对照组、TNF-α组、RAPA组。采用CCK-8法检测细胞活力。采用免疫荧光法和透射电镜(TEM)检测FLS细胞自噬情况。采用Western blotting法检测NLRP3炎症小体关键蛋白NLRP3、caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1、P62的表达。结果 与对照组比较,TNF-α组FLS细胞明显增殖(P<0.05),并激活NLRP3炎症小体(P<0.01)。与TNF-α组比较,RAPA组FLS增殖明显抑制(P<0.05),LC3-II和Beclin1表达水平明显上调(P<0.01),P62、NLRP3和caspase-1的表达水平均降低(P<0.05)。结论 RAPA可以抑制TNF-α诱导的FLS增殖,其机制可能与提高自噬、抑制NLRP3炎症小体的激活有关。     

NLRP3炎性小体与抗肿瘤免疫作用研究进展

越来越多的研究表明, NOD样受体蛋白3 (NOD-like receptor protein 3, NLRP3)炎性小体已成为炎症反应和保护性免疫的调节因子,其组装和激活与抗肿瘤免疫的效果密切相关。由于细胞类型和所受刺激的不同, NLRP3炎性小体的激活可诱导免疫细胞处于极化、过度活跃状态或发生焦亡,释放白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-18,导致级联免疫或炎症反应,其在肿瘤免疫中的作用受到了广泛关注。本综述汇总了NLRP3炎性小体通过诱导肿瘤细胞焦亡、树突状细胞(dendritic cells, DCs)发生焦亡或过度活跃状态,以及诱导巨噬细胞发生焦亡和极化,增强CD8⁺T细胞介导的抗肿瘤免疫作用的机制。NLRP3炎性小体的激活在肿瘤细胞和免疫细胞中的不同抗肿瘤免疫作用为未来研究提供了新方向,并且可能影响下一代免疫治疗的发展。     

消退素D1抑制NLRP3信号通路对DSS结肠炎小鼠的影响

目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)对实验性结肠炎小鼠肠道炎症的影响及可能机制。方法将C57BL/6小鼠分为4组,包括正常组、RvD1对照组、葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)模型组、RvD1治疗组。实验结束后,分离小鼠小肠及结肠组织。测量疾病活动指数(DAI),病理学评分(HI),检测髓过氧化物酶(MPO)活性水平,伊文思蓝检测肠黏膜通透性,电镜检测肠上皮细胞连接及细胞因子水平。分析NLRP3炎症小体相关基因表达水平。结果与正常组小鼠相比,模型组DAI评分、HI评分、MPO活性水平,以及结肠组织匀浆中促炎细胞因子的产生明显增加(P<0.05)。RvD1组小鼠上述实验指标明显减低(P<0.05)。模型组小鼠结肠组织NLRP3炎症小体表达水平增加(P<0.05);RvD1处理1周,小鼠结肠组织NLRP3通路相关蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 RvD1具有改善DSS结肠炎小鼠肠道炎症的作用,其机制可能与抑制NLRP3炎性体信号通路有关。     

NLRP3炎症小体在热应激损伤中的作用研究

目的：探讨NLRP3炎症小体在热应激损伤中的作用机制,并梳理NLRP3炎症小体和热应激损伤的相关性。方法：首先,选择2019年5月1日-2021年11月1日在南通大学附属医院就诊的90例6个月-6岁FS患儿作为热性惊厥组（FS组）,将同一时间段的25例到我院正常体检的25例儿童作为正常对照组。抽取外周血2.5ml后在2500r/min的情况下离心15min,按照ELISA说明测定样品的浓度。构建FS的动物模型,选择20只SPF级2周龄的正常SD大鼠作为研究对象,通过热水浴诱导惊厥动物模型进行建模,取脑组织RIPA裂解液进行蛋白裂解,温度为4℃,12000g离心15min,取上清液借助BCA法进行定量分析。将大鼠分为FS组和FS+NLRP3炎症小体抑制剂组,分析NLRP3炎症小体在热应激损伤的保护作用及相关性。结果：研究结果表明,热性惊厥组细胞上清的IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1mRNA明显升高,且在与正常对照组的数据对比中具有统计学差异（P <0.05）;复杂性热性惊厥患儿的IL-1β含量是最高的。在大鼠试验当中,经过PCR检测,FS组的ASC、NLRP3、C...     

DSG2F536C点突变基因敲入小鼠心脏表型的观察研究

目的 观察桥粒芯糖蛋白2(DSG2)点突变(DSG2F536C)基因敲入小鼠心脏结构、功能、病理学改变,并初步探讨其纤维化的发生机制.方法 构建DSG2F536C 突变基因敲入小鼠模型,分为纯合子突变组(DSG2mt/mt)、杂合子突变组(DSG2mt/wt)和野生型组(DSG2wt/wt).分别行超声心动图检查小鼠心脏结构和功能,Masson三色染色和HE染色观察心肌组织病理特点,并用Western blot法测定心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达.结果 与DSG2wt/wt组小鼠相比,DSG2mt/wt组小鼠左室射血分数和缩短分数显著降低,DSG2mt/mt组小鼠则较DSG2mt/wt组进一步降低,并伴有室壁明显变薄和心腔显著扩大.DSG2mt/mt组小鼠的右心室出现心肌排列紊乱、纤维化和炎性反应,约1/3的小鼠同时累及左心室,而DSG2mt/wt组小鼠仅见心肌排列紊乱.与DSG2wt/wt组小鼠相比,DSG2mt/wt组和DSG2mt/mt组小鼠心肌组织TGF-β1蛋白表达明显升高.结论 DSG2F536C小鼠表现出心室扩大、室壁变薄、心功能下降、炎性反应和心室纤维化浸润和TGF-β1升高等表征,类似于临床致心律失常性右室心肌病(ARVC)患者的表型,提示其为致病性突变.此外,DSG2F536C基因敲入小鼠为深入研究DSG2突变导致ARVC的发病机制提供了良好的动物模型.     

DAPT对慢性社会挫败应激诱导小鼠抑郁样行为的作用及机制北大核心CSCD

目的探究DAPT对慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为的作用及机制。方法C57BL/6J小鼠给予慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress,CSDS)处理10 d以建立抑郁模型,药物处理组小鼠每天腹腔注射DAPT 5 mg·kg^(-1)。通过社会接触、糖水偏爱、旷场、强迫游泳和悬尾实验来评价小鼠的抑郁样行为;采用Western blot检测小鼠海马NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、p62、Atg7、Atg5和Beclin1蛋白的表达,运用ELISA检测小鼠海马IL-1β和IL-18的表达水平。结果CSDS诱导小鼠出现明显的抑郁样行为,同时增加了小鼠海马NLRP3、ASC、caspase-1的表达和炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-18的水平,另外,CSDS处理小鼠海马自噬相关蛋白Atg7、Atg5和Beclin1表达明显减少,而p62的表达则明显增加。DAPT处理能明显改善CSDS诱导的小鼠抑郁样行为,并能抑制NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18以及p62蛋白表达的增加和Atg7、Atg5和Beclin1蛋白表达的减少。结论DAPT能够改善慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为,其机制可能与其抑制NLRP3炎症小体激活和上调自噬功能有关。     

星形胶质细胞多巴胺D2受体通过β-arrestin 2偏爱型通路调控神经炎症

目的帕金森病(Parkinson disease,PD)的主要病理特征为黑质致密部多巴胺(DA)能神经元进行性丢失,并伴有α-突触核蛋白(α-syn)沉积和神经炎症反应。前期研究发现星形胶质细胞多巴胺D_2受体(D_2R)具有抑制神经炎症作用,近年来又发现D_2R可以通过激活接头蛋白β-arrestin2(arrb2)相关的,而非cAMP依赖的非经典通路调控细胞功能。因此,揭示D_2R对α-syn诱导的神经炎症的影响并阐明arrb2在星形胶质细胞D_2R抗炎效应中的作用,具有重要的科学意义。结果本课题应用Drd2敲除(Drd2~(-/-))、arrb2敲除(arrb2~(-/-))和突变型α-syn转基因(A53T~(tg/tg))小鼠,研究发现不同D_2R激动剂(Quinpirole,Quinelorane,Bromocriptine)均可浓度依赖性地抑制LPS+ATP,LPS+MSU,LPS+Nigericin等方式诱导的星形胶质细胞NLRP3炎症小体激活,但对α-syn诱导的炎症无效。进一步研究发现D_2R激动剂促进arrb2与NLRP3分子直接结合,减少ASC与NLRP3的结合,抑制NLRP3炎症小体激活;Arrb2敲除则取消了D_2R激动剂抑制NLRP3炎症小体活化和保护DA神经元的作用。α-Syn通过干扰星形胶质细胞arrb2与炎性分子的相互作用,从而取消了D_2R激动剂的抑炎效应。结论上述结果从全新的角度阐明了α-syn干扰β-arrestin 2分子的抑炎功能、阻断D_2R激动剂的作用通路,为诠释晚期PD患者应用D_2R激动剂无效提供了直接的理论依据。此外,本研究揭示了选择性激活arrb2偏爱的信号转导在PD抗炎治疗和神经保护中的重要意义,为PD临床治疗学的突破提供了新的思路。     

星形胶质细胞Drd2受体通过β-arrestin2抑制NLRP3炎症小体活化

帕金森病(PD)的主要病理特征为黑质致密部多巴胺(DA)能神经元进行性丢失,并伴有α-突触核蛋白(α-syn)沉积和神经炎症。前期研究发现,星形胶质细胞多巴胺D_2受体(D_2R)具有抑制神经炎症作用,近年来又发现D_2R可以通过激活接头蛋白β-arrestin2(arrb2)相关而非cAMP依赖的非经典通路调控细胞功能。因此,揭示D_2R对α-syn诱导的神经炎症的影响及其arrb2在星形胶质细胞D_2R抗炎效应中的作用具有重要的科学意义。应用Drd2敲除(Drd2~(-/-))、arrb2敲除(arrb2b2~(-/-))和突变型α-syn转基因(A53Ttg/tg)小鼠的研究发现,不同D_2R激动剂(quinpirole,quinelorane,bromocriptine)均可浓度依赖性地抑制LPS+ATP,LPS+MSU和LPS+Nigericin等方式诱导的星形胶质细胞NLRP3炎症小体的激活,但对α-syn诱导的炎症则无效。进一步研究发现,D_2R激动剂促进arrb2与NLRP3分子直接结合,减少ASC与NLRP3的结合,进而抑制NLRP3炎症小体激活;arrb2敲除则取消了D_2R激动剂抑制NLRP3炎症小体活化和保护DA神经元的作用。研究表明,α-Syn通过干扰星形胶质细胞arrb2与炎性分子的相互作用,从而取消了D_2R激动剂的抑炎效应。上述结果从全新的角度阐明了α-syn干扰β-arrestin 2分子的抑炎功能、阻断D_2R激动剂的作用通路,为诠释晚期PD患者应用D_2R激动剂无效提供了直接的理论依据。此外,本研究揭示了选择性激活arrb2偏爱的信号转导在PD抗炎治疗和神经保护中的重要意义,为PD临床治疗学的突破提供了新的思路。     

穿心莲酸对高脂饲料喂养C57BL/6及NLRP3基因敲除小鼠脂质及炎症水平的影响

目的研究穿心莲酸对高脂饲料喂养C57BL/6及NLRP3基因敲除小鼠脂质及炎症水平及其相关蛋白的影响。方法将18只C57BL/6小鼠和18只NLRP3基因敲除小鼠分别随机分为3组,每组6只,雌雄各半。分别为对照组(Control)、模型组(HFD)、穿心莲酸(ANDA,12.5 mg·kg-1)组。对照组小鼠给予维持饲料,其余小鼠每笼每天给予20 g高脂饲料喂养(high fat diet,HFD),连续8周。第5周起,ANDA组连续灌胃给药4周,其他组小鼠灌胃给予蒸馏水,每天1次。收集血样及肝脏,测定血清中TC、TG、HDL-c、LDL-c及IL-1β水平;Western Blot测定肝脏中caspase-1、IL-1β、CYP7A1及LXRα的蛋白表达水平。结果给予高脂饲料喂养后,WT小鼠和NLRP3-/-小鼠血清TC、TG、LDL-c水平均较对照组显著升高、HDL-c水平显著下降(P<0.01);与对应模型组相比较,穿心莲酸均能降低高脂饲料喂养的WT小鼠和NLRP3-/-模型小鼠血清TC、TG、LDL-C含量,提高HDL-c含量(P<0.01或P<0.05)。穿...     

NLRP3炎症小体抑制剂N14对小鼠痛风性关节炎的治疗作用

探讨Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体抑制剂N14对尿酸钠(mono sodium urate, MSU)晶体诱导的痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)小鼠的治疗作用。首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8, CCK-8)法检测N14对小鼠单核巨噬细胞J774A.1活力的影响;利用免疫印迹法(Western blot)检测N14对细胞上清中成熟的白介素1β (interleukin 1β, IL-1β)、胱天蛋白酶-1 (cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)活化物caspase-1 p20及细胞裂解液中NLRP3、pro-caspase-1和pro-IL-1β表达的影响。通过MSU诱导的小鼠痛风性关节炎模型,检测痛风性关节炎小鼠的红、肿、热、痛反应;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, H&E)染色进行小鼠足部病理学检测;应用免疫印迹法检测小鼠足部组织中NLRP3、pro-caspase-1和...     

白藜芦醇抑制大肠埃希菌O104∶H4诱导的结肠上皮细胞NLRP3炎症小体活化

目的:研究白藜芦醇(RES)对大肠埃希菌O104∶H4感染的结肠上皮Caco-2细胞线粒体和氧化应激损伤及NLRP3炎症小体活化的影响。方法:RES(200μmol/L)预处理Caco-2细胞12 h,然后107 CFU/mL的大肠埃希菌O104∶H4(MOI 10∶1)感染细胞4 h。CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR法分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、细胞色素氧化酶4(COX-4)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子1(TFAM)、超氧化物歧化酶1(SOD1)和血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达水平,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1活化亚基p20(CASP1 p20)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1活化亚基p10(CASP1 p10)、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平,并对Caco-2细胞线粒体膜电位、氧耗量和活性氧(ROS)水平进行检测。结果:大肠埃希菌O104∶H4感染可明显诱导NLRP3、CASP1 p20、CASP1 p10、IL-1β蛋白和PGC1α、COX-4和NRF1 mRNA表达,促使氧消耗量和ROS水平增高,而细胞活力、TFAM mRNA表达和线粒体膜电位降低(P<0.05);RES处理后能明显抑制NLRP3、CASP1 p20、CASP1 p10、IL-1β蛋白和PGC1α、COX-4和NRF1 mRNA表达,降低氧消耗量和ROS水平,而细胞活力、TFAM mRNA表达和线粒体膜电位增高(P<0.05);另外,ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)也能显著抑制NLRP3炎症小体和IL-1β表达水平。结论:大肠埃希菌O104∶H4感染诱导Caco-2细胞线粒体释放ROS和NLRP3炎症小体活化,而RES可部分改善Caco-2细胞损伤,降低NLRP3炎症小体和ROS水平。     

牛磺酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及其作用机制的研究

目的观察牛磺酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用,并对其保护机制进行初步探讨。方法采用慢性乙醇灌胃法诱导小鼠酒精性肝损伤模型。将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组:对照组、模型组、牛磺酸给药组和牛磺酸单独处理组,每组小鼠10只。运用H&E染色及Masson染色观察各组小鼠肝组织形态改变情况及纤维化情况,检测各组小鼠肝组织中丙二醛(MDA)的水平,Western blot检测各组小鼠肝脏中炎症小体(NLRP3)及相关炎性因子IL-1β蛋白表达情况。利用Hep G2细胞构造肝细胞酒精性损伤模型,分为4组,对照组、模型组、牛磺酸给药组和牛磺酸单独处理组,利用DCFH-DA染色检测肝细胞活性氧(ROS)水平,利用Western blot检测各组细胞中NLRP3及IL-1β蛋白表达情况。结果与模型组相比,牛磺酸给药组小鼠肝脏组织炎症及纤维化情况明显减轻,肝组织中MDA的含量明显减少(P<0.05),肝组织中NLRP3及IL-1β蛋白表达明显降低(P <0.01)。体外实验结果显示,牛磺酸给药组细胞中ROS水平较模型组明显降低(P <0.05);Western blot结果显示,牛磺酸给药组NLRP3及IL-1β蛋白表达较模型组相比表达明显降低(P <0.01)。结论牛磺酸在一定程度上抑制小鼠酒精性肝损伤的发生及发展,其保护机制主要可能与其抑制ROS的生成及抑制NLRP3和IL-1β炎症因子的表达相关。