miR-103a-3p/RCAN1通路在铝致大鼠学习记忆损害的作用

目的 探究miR-103a-3p/钙调磷酸酶调节因子1(Regulator of calcineurin 1, RCAN1)通路在麦芽酚铝致大鼠记忆损伤中的作用。方法 将32只雄性SD大鼠按体重随机分为对照组（0μmol/kg）、低剂量染铝组（10μmol/kg）、中剂量染铝组（20μmol/kg）和高剂量染铝组（40μmol/kg），每组各8只，对照组大鼠腹腔注射0.9%的生理盐水，染铝剂量组腹腔注射相应浓度的麦芽酚铝溶液，隔天染毒，持续3个月。染毒结束后用水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力；实时荧光定量PCR法检测miR-103a-3p和RCAN1基因表达；Western blotting检测大鼠海马中RCAN1，糖原合成激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化tau蛋白的相对表达量。结果 染铝组大鼠前5 d逃避潜伏期均高于对照组，在第6 d空间探索期，染铝组在目标象限停留时间以及穿过平台的次数均低于对照组（P<0.05）；与对照组相比，染铝组大鼠海马miR-103a-3p基因表达水平下降（P<0.001），而RCAN1基因表达水平升高（P<0.001）；与对照组相比，染...     

MAPK信号通路在铝致SH-SY5Y细胞死亡中的作用

目的研究铝致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)死亡过程中MAPK信号通路的作用,探索铝致神经细胞死亡的机制。方法用4 mmol/L的Al Cl3·6H2O染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性阻断剂z VAD-fmk(20μmol/L)抑制凋亡发生,用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1,60μmol/L)抑制程序性坏死发生,用CCK-8检测不同组间细胞活力的变化,用流式细胞术检测凋亡率及坏死率的差异,用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白磷酸化水平的改变。结果与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降(P0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升(P0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升(P0.05);与染铝组相比,凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降(P0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组p38磷酸化水平升高,ERK磷酸化水平下降(P0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降,ERK磷酸化水平上升(P0.05)。结论 MAPK信号通路中的p38和ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞程序性坏死,ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞凋亡,而JNK信号通路未参与铝致SH-SYSY细胞死亡。     

麦芽酚铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞β-淀粉样蛋白42蛋白表达的影响及其作用机制

目的探讨铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)42表达的影响及其作用机制。方法将处于对数生长期的PC12细胞分别暴露于含麦芽酚铝终浓度为0(对照)、50、100、200和400μmol/L的完全培养基染毒12、24、48 h。采用CCK-8法测定细胞活性,采用酶联免疫吸附(ELISA)测定法测定PS1、Aβ42蛋白的含量。结果与对照组比较,200、400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及各浓度麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着麦芽酚铝染毒浓度的升高,不同染毒时间PC12细胞的存活率均呈逐渐降低的趋势。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞PS1蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h时以及100、200、400μmol/L麦芽酚铝染毒48 h时PC12细胞Aβ42蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论γ-分泌酶表达增加可能是铝致PC12细胞Aβ42蛋白含量增多的重要原因之一。     

miR-150-5p在卵巢癌中的表达及其生物学功能研究

目的探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在卵巢癌组织中的表达水平及其通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的影响。方法选取2016年4月—2018年12月于武警上海总队医院妇科就诊的82例卵巢癌患者作为研究对象,患者年龄22～65周岁,平均(43.5±6.8)岁。采用qRT-PCR检测病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。以人卵巢癌SKOV3细胞株作为空白对照组,转染miR-150-5p抑制剂的人卵巢癌SKOV3细胞株作为miR-150-5p抑制剂组,转染阴性对照质粒的人卵巢癌SKOV3细胞株作为阴性对照组,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase,p-Akt)p-Akt蛋白的表达。结果 82例卵巢癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为(1.64±0.10)和(0.99±0.08),差异有统计学意义;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达差异无统计学意义,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为(0.11±0.03),明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异分别为(9.61±1.32)%、(24.54±3.61)%和(33.78±3.72)%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组48 h细胞凋亡率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组的细胞凋亡率为(16.65±2.93)%,明显高于空白对照组[(0.74±0.10)%]和阴性对照组[(1.79±0.21)%],差异有统计学意义。荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义;Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组(P0.01);结论 miR-150-5p在卵巢癌中作促癌基因,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

麦芽酚铝对PC12细胞钙稳态和凋亡的影响

目的探讨麦芽酚铝[aluminum maltolate,Al(mal)_3]染毒对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rat pheochromocytoma cells,PC12)钙稳态及凋亡的影响。方法将PC12细胞随机分为0(对照组)、50、100、200、400μmol/L Al(mal)_3染毒组,分别培养12、24、48 h,采用CCK-8试剂盒检测PC12细胞活性,以流式细胞术检测PC12细胞内游离钙离子荧光强度[Ca(~2+)]i及细胞凋亡率。结果随着Al(mal)_3染毒时间和染毒剂量的增加,PC12细胞活性逐渐下降,细胞[Ca(~2+)]i与细胞总凋亡率逐渐升高。除50μmol/L Al(mal)_3染毒12、24 h及100μmol/L Al(mal)_3染毒12 h外,其他各剂量组染毒PC12细胞12、24、48 h后细胞活性均低于对照组,细胞[Ca(~2+)]i均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。400μmol/L Al(mal)_3染毒PC12细胞12 h,200、400μmol/L Al(mal)_3染毒24 h,100、200、400μmol/L Al(mal)_3染毒48 h后,PC12细胞总凋亡率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论钙超载可能是Al(mal)_3引起凋亡发生的主要机制。     

铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白β位点裂解酶-1蛋白及基因表达的影响

[目的]探讨铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白（APP）β位点裂解酶-1（beta-site amyloid precursor proteincleaving enzyme-1,BACE1）蛋白及基因表达的影响。[方法]采用PC12细胞进行培养及麦芽酚铝[Al（mal）3]染毒,将细胞分为6组,分别为：200μmol/L生理盐水组;0、50、100、200和400μmol/L Al（mal）3组。分别采用酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、荧光实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR）于染毒12、24和48 h后测定BACE1蛋白含量及基因表达。[结果]细胞计数试剂盒-8（CCK-8）细胞活力测定结果显示,不同浓度Al（mal）3染毒PC12细胞,可使其细胞活力呈现随染毒时间延长而逐渐下降的趋势。qRT-PCR结果显示,100μmol/L Al（mal）3组在染毒48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组、0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;200、400μmol/L Al（mal）3组染毒12、24、48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。ELISA测定结果显示,染毒12 h后400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒24 h后200、400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;染毒48h后400μmol/L Al（mal）3组的BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]Al（mal）3对PC12细胞具有明显毒性作用,该作用可能与麦芽酚铝致PC12细胞BACE1蛋白和基因表达增强有关。     

miR-138-5p在锰致SH-SY5Y细胞自噬中的作用

[目的]探讨miR-138-5p在氯化锰(MnCl_2)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的作用及其机制。[方法]以生理盐水处理组作为对照,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L MnCl_2染毒SH-SY5Y细胞6 h后,利用MTT法检测细胞活力;0.25和0.5 mmol/L MnCl_2处理细胞6 h后,采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达;MnCl_2染毒6 h后,使用反转录PCR和Western blot检测miR-138-5p和组蛋白脱乙酰酶SIRT1 mRNA以及蛋白表达的变化;使用miRNA模拟物转染细胞实现miR-138-5p过表达,然后0.25 mmol/L MnCl_2染毒6 h,检测SIRT1 mRNA和蛋白的表达以及自噬相关蛋白LC3和Beclin1的变化。[结果]MnCl_2可剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活力(趋势χ~2=12.42,P0.05)。与对照组相比,0.25、0.5 mmol/L MnCl_2染毒后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值和Beclin1表达水平明显增加(P0.05);miR-138-5p表达下调,SIRT1 mRNA及蛋白表达上调(均P0.05)。miR-138-5p过表达后,相比未过表达的MnCl_2染毒组,SIRT1 mRNA及蛋白表达均出现下调,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及Beclin1蛋白表达也相应下调(P0.05)。[结论]miR-138-5p过表达可通过调节SIRT1的表达抑制锰诱导的SH-SY5Y细胞自噬。     

miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白的调节作用

目的探讨miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白表达和细胞增殖、凋亡的影响。方法采用LipofectaminerTM2000脂质体将miR-183的特异性抑制剂反义寡核苷酸转染到Ishikawa细胞(实验组),不相关序列、脂质体和未转染组细胞分别为阴性对照组、脂质体对照组和空白对照组。采用CCK-8法和流式细胞仪分别检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和凋亡情况;采用RT-PCR检测miR-183和p53 mRNA在各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达水平;采用Western blot检测p53蛋白在各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达水平。结果 CCK-8检测结果显示:转染0~24 h,实验组、空白对照组、脂质体对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速相似,阴性对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速略快;转染24~48 h,实验组、空白对照组和脂质体对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速较快;转染48~72 h,实验组子宫内膜癌Ishikawa细胞较其余3组增长速度快;转染72~96 h,4组子宫内膜癌Ishikawa细胞继续保持增长状态,且达到对数生长期,实验组子宫内膜癌Ishikawa细胞较其余3组增速快。流式细胞学检测结果显示:转染3 d后,实验组较其余3组早期凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P0.05);阴性对照组较其余3组早期凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示:实验组miR-183表达水平明显低于其余3组,差异有统计学意义(P0.05);实验组p53 mRNA表达水平明显低于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot检测结果显示:实验组p53蛋白表达水平明显高于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中有表达,miR-183抑制剂能有效抑制miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p53蛋白表达。miR-183可能通过抑制p53蛋白表达而抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,从而影响子宫内膜癌的发生、发展及预后。     

miR - 107在铝引起学习记忆下降及Aβ1 - 42沉积中的作用

目的 探讨miR - 107在麦芽酚铝染毒致大鼠学习记忆下降及Aβ1 - 42表达升高中的作用机制。方法 细胞实验:麦芽酚铝染毒HEK293细胞,对照组、低剂量组（100 μmol/L）、中剂量组（200 μmol/L）、高剂量组（400 μmol/L）染毒24 h, RT - qPCR检测 miR - 107表达水平,ELISA检测 BACE1、Aβ1 - 42表达量。动物实验:健康2月龄雄性SD大鼠,按体重随机分为对照组（生理盐水）、低剂量组（10 mM/kg）、中剂量组（20 mM/kg）、高剂量组（40 mM/kg）,采用腹腔注射染毒45 d,Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力, RT - qPCR检测大鼠海马miR - 107的相对表达量。结果 不同剂量麦芽酚铝染毒HEK293细胞24 h后,与对照组相比,低、中、高剂量组miR - 107相对表达量降低（F = 11.385,P＜0.001）;中、高剂量组BACE1和Aβ1 - 42表达量均升高（P＜0.05）。Morris水迷宫实验结果:定位航行实验表明大鼠逃避潜伏期没有变化（F = 0.662, P＞0.05）;空间探索实验表明大鼠穿越平台次数（F = 0.069,P＞0.05）和目标象限停留时间(F = 0.779,P＞0.05)均没有变化。RT - qPCR结果:与对照组相比,中、高剂量组大鼠海马miR - 107相对表达量降低（F = 16.654,P＜0.01）。结论 麦芽酚铝染毒后,miR - 107相对表达量在染铝早期即出现降低:BACE1、Aβ1 - 42表达量升高,提示铝染毒致大鼠学习记忆能力下降及BACE1、Aβ1 - 42表达升高可能与早期miR - 107表达降低有关。     

miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及机制

目的探讨miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及具体机制。方法采用miR-155 NC和miR-155 inhibitor转染Hep2细胞,realtime-PCR法检测转染效果,细胞计数盒-8(CCK-8)法检测不同转染时间(12、24、36、48、60、72 h)细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot检测Hep2细胞中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、cyclin D1、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/叉形头转录因子(Foxo3a)信号通路相关蛋白表达量。结果 miR-155 inhibitor组中miR-155表达量(0.34±0.03)明显低于miR-155 NC组(1.25±0.10),且转染24、36、48、60、72 h后,miR-155 inhibitor组Hep2细胞活力明显低于miR-155 NC组;与miR-155 NC组比较,miR-155 inhibitor组Hep2细胞凋亡率明显提高,细胞周期阻滞于G1期,cyclin A1、cyclin D1、PI3K、p-AKT表达下调,Foxo3a表达上调,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论 miR-155表达下调可降低Hep2细胞活力、增加细胞凋亡率,其机制可能与miR-155调控PI3K/AKT/Foxo3a信号通路有关。     

miR-140通过下调Pin1抑制乳腺癌BT549细胞上皮细胞-间充质转化

目的用miR-140模拟物转染三阴型乳腺癌BT549细胞,检测Pin1在乳腺癌细胞系BT549中的表达情况,研究在BT549细胞中miR-140如何通过Pin1发挥对上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用。方法用miR-140模拟物(miR-140模拟物组)、miR-140阴性对照(阴性对照组)转染BT549细胞,同时设置未处理组为空白对照组。利用实时PCR法检测不同组BT549细胞中的Pin1 mRNA表达水平;利用Western Blot检测E-钙黏蛋白及Pin1蛋白的表达水平;利用划痕试验研究转染miR-140对BT549侵袭能力的影响。结果划痕后24 h,miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组划痕宽度相对0 h变化的比例分别为23.4%、41.4%和53.1%。与阴性对照组和空白对照组相比,miR-140模拟物组BT549细胞迁移能力明显降低(χ~2=5.550,P0.05;χ~2=6.995,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1 mRNA表达水平分别为(0.55±0.02)、(0.89±0.06)和(1.05±0.06)。miR-140模拟物组Pin1 mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.823,P0.05;t=11.480,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组E-钙黏蛋白表达水平分别为(0.98±0.11)、(0.68±0.07)和(0.38±0.04)。miR-140模拟物组E-钙黏蛋白表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(t=7.990,P0.05;t=21.348,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1蛋白表达水平分别为(0.57±0.12)、(0.78±0.08)和(1.08±0.21)。miR-140模拟物组Pin1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.921,P0.05;t=18.657,P0.05)。结论 miR-140可以抑制Pin1 mRNA转录,进而降低Pin1蛋白的表达水平,抑制EMT的发生。     

miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子的作用

目的 通过检测microRNA-146a-5p(miR-146a-5p)、microRNA-9-3p(miR-9-3p)对HepG2细胞白介素受体相关激酶-1(interleukin receptor-associated kinase-1,IRAK-1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding gassette transporter A1,ABCA1)蛋白水平表达的影响，探讨miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子作用。方法 以HepG2细胞为试验对象，分别进行miR-146a-5pmimics转染及miR-9-3pmimics转染，采用Westernblot检测miR-146a-5p对HepG2细胞IRAK-1蛋白表达的影响及miR-9-3p对HepG2细胞ABCA1蛋白水平表达的影响。结果 miR-146a-5p转染组IRAK-1蛋白水平显著低于对照组；miR-9-3p转染组ABCA1的蛋白水平显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P=0.001）。结论 miR-146a-5p能够显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白表达，miR-9-3p能...     

MicroRNA miR-34a-5p通过靶向MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的研究

目的 探究MicroRNA miR-34a-5p通过靶向MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的机制。方法 本研究内容为MicroRNA miR-34a-5p能通过MDM4抑制ox-ldl诱导的巨噬细胞凋亡和氧化应激,将其分为空白对照组(THP-1人单核细胞组)、AS对照组(ox-ldl),miR-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+oxldl,采取RT-qPCR检测microRNA miR-34a-5p和mRNA MDM4表达,采取TUNEL染色检测巨噬细胞的凋亡,采取western blot检测MDM4、ROS、MDA和SOD蛋白,采取红油O染色法评价巨噬细胞内脂质沉积,评价mi R-34a-5p是否靶向调控MDM4、MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤诱导的凋亡、ox-ldl诱导巨噬细胞内脂质沉积变化情况。结果 mi R-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+ox-ldl的microRNA miR-34a-5p表达、mRNA MDM4表达高于空白对照组、AS对照组(P<0.05);miR-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+ox-ldl下miR-34a-5p表达、ROS水平、MDM4水平、MDA水平、SOD水平高于空白对照组、AS对照组(P<0.05);油红O染色法检测中,5ug/mL LDL下细胞内红染脂滴轻度增加,200mg/mL LPS细胞内红染颗粒显著增多,加入10ng/mL RPMI-1640能明显减少脂质聚集。结论 MicroRNA miR-34a-5p能通过MDM4抑制ox-ldl诱导的巨噬细胞凋亡和氧化应激,为调控AS的发生发展提供基础研究证据,为AS诱发的心脑血管疾病诊断和治疗方面提供依据。     

miR-515-5p靶向ITLN2对子宫内膜基质细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-515-5p(miR-515-5p)是否可靶向内凝集素2(lectin 2, ITLN2)影响子宫内膜异位症(endometriosis, EMT)子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells, ESCs)的增殖、迁移和侵袭。方法收集2020年12月至2021年12月期间在济宁医学院附属医院生殖医学科就诊治疗的24例EMT患者的在位内膜和异位内膜组织及18例行腹腔镜手术的非EMT患者的正常内膜组织。RT-qPCR检测内膜组织miR-515-5p、ITLN2 mRNA相对表达量;Western blotting法检测内膜组织中ITLN2蛋白表达量。原代分离、培养EMT患者的ESCs, 利用Lipofectamine 2000试剂转染ESCs, 并将其分为空白组、miR-515-5p抑制剂组、miR-515-5p抑制剂阴性对照(negative control, NC)组, CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕愈合和Transwell实验分别评估细胞迁移、侵袭能力;双荧光素酶报告基因检测miR-515-5p和ITLN2的靶向关系;RT-qPCR技术...     

JNK通路在MPP~+诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞的毒性作用及其机制。方法 PC12细胞体外培养,以100、300、500μmol/L MPP+进行染毒。Western blot法检测JNK1/2磷酸化水平;使用JNK通路阻断剂SP60012预处理细胞,TUNEL法观察其对MPP+诱导的细胞凋亡的影响。结果 MPP+染毒可以引起细胞JNK1/2的磷酸化水平增高,使用JNK通路阻断剂SP600125可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡。结论激活JNK通路可能是MPP+诱导PC12细胞凋亡、产生多巴胺能神经毒性的重要分子机制。     

沉默lncRNA MAFG-AS1对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨沉默lncRNA MAFG-AS1对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞HOSE和3种卵巢癌细胞(SKOV3、HO8910、OVCAR3)中MAFG-AS1和miR-143-3p的表达。荧光素酶报告基因检测和qRT-PCR验证MAFG-AS1与miR-143-3p的靶向调控关系。以SKOV3细胞为研究对象,分别构建沉默MAFG-AS1或过表达miR-143-3p的卵巢癌细胞株。应用MTT法检测细胞活力,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,应用Western Blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1和p21及凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果与HOSE组比较,3种卵巢癌细胞中MAFG-AS1的表达显著上调,miR-143-3p的表达显著下调。pc DNA组、pc DNA-MAFG-AS1组、si-NC组、si-MAFG-AS1组miR-143-3p表达水平比较差异有统计学意义(P0.05)。miR-143-3p是MAFG-AS1的靶基因,MAFG-AS1可负性调控miR-143-3p的表达。沉默MAFG-AS1或过表达miR-143-3p均可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达,促进p21和Bax蛋白表达。抑制miR-143-3p表达可逆转沉默MAFG-AS1对卵巢癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论沉默MAFGAS1通过上调miR-143-3p表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

MPP+对PC12细胞增殖及外信号调节激酶影响

目的 研究1-甲基-4苯基-吡啶离子(MPP+)对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞增殖的抑制作用及其分子机制.方法 PC12细胞体外培养,分别以100,300,500 μmol/L MPP+进行染毒.四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)观察MPP+对细胞的抑制作用;免疫印迹法检测细胞ERK1/2表达及磷酸化水平.结果 不同剂量以及不同作用时间的MPP+对PC12细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率为18.86%～58.06%.MPP+可以抑制细胞外调节信号激酶(ERK)的磷酸化水平,其中300 μmol/L MPP+染毒3 d时,ERK磷酸化水平约为对照组的4.7%.ERK通路阻断剂PD98059与300 μmol/L MPP+共同作用时,对细胞增殖的抑制率增高至78.9%.结论 MPP+可以明显抑制PC12细胞的增殖,降低ERK的磷酸化水平可能是其重要分子机制之一.     

microRNA-23a对氟暴露大鼠成骨肉瘤细胞成骨活性的影响及靶基因验证

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23a、Ⅰ型胶原(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞(293T),利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23a可能的靶基因。结果与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高(P0.05);与激动剂对照组比较,过表达组miR-23a mRNA表达水平明显上升、COL1 mRNA表达明显降低(P0.05),Runx2、OPN mRNA表达变化不显著(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低(P0.05)。与激动剂对照组比较,过表达组Runx2、OPN蛋白表达水平明显升高(P0.05),COL1蛋白表达水平变化不显著(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与过表达组比较,过表达+NaF组OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05),COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。过表达miR-23a后的293T细胞中双特异性磷酸酶5(DUSP5 mRNA)和蛋白表达水平均明显降低(P0.05),抑制mi R-23a后DUSP5表达水平均明显升高(P0.05);双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23a的靶基因。结论miR-23a能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达;DUSP5是miR-23a的靶基因。