铁皮石斛快繁技术体系研究

目的 以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法 采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果 铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1% HgCl₂消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA＋2 g/L AC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.8 mg/L 2, 4-D＋2 g/L AC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS＋1.2 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L IBA＋2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS＋2.5 mg/L NAA＋15%土豆汁＋2 g/L AC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论 建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

莫邪菊的离体培养研究初报

目的 为建立莫邪菊的离体培养体系。方法 以成熟果实中的种子为外植体,探讨不同生长调节剂对离体培养中愈伤组织诱导;不定芽的分化和试管苗生根的影响。结果 培养基配方为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L时,种子破壳萌发率为70%,胚轴处愈伤组织诱导率为100%;MS+6-BA 2.0 mg/L为合适的丛生芽诱导和增殖培养基配方;培养基为MS0时生根率为95%,生根效果好且配方简单,移栽的试管苗成活率可达95%。结论 该试验建立的离体培养体系可用于莫邪菊的离体培养。     

萘乙酸浓度对铁皮石斛组培苗生长发育的影响

目的 研究培养基中添加不同浓度的萘乙酸(NAA)对诱导铁皮石斛组培苗的影响.方法 以铁皮石斛种子为材料,在4种培养基(Ⅰ ～Ⅳ)中诱导出原球茎,再以预实验优选出的1/2MS+活性炭1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L为基本培养基,配制成0～5.0 mg/L的6种不同NAA浓度的培养基(Ⅴ ～Ⅹ)进行原球茎增殖分化和继代培养,筛选促进组培苗根茎叶生长发育最佳的NAA浓度和培养基配方.结果种子在Ⅳ号培养基中的萌发率最高,达94.2％以上;在NAA添加量为4.0 mg/L的Ⅸ号培养基中,原球茎分化后根长、叶长、叶宽、株高、茎粗、单株鲜重分别为1.516 cm、0.943 cm、0.365em、2.991 cm、0.264 cm、0.102 g,各指标均显著优于其它NAA浓度的培养基.另外,在Ⅸ号培养基中添加100 g/L土豆和80g/L香蕉能够显著地促进生根壮苗阶段组培苗根茎叶的生长发育,各指标可增加1～3倍.结论培养基1/2MS+NAA0.2 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂7.0g/L最适宜铁皮石斛种子萌发,当NAA浓度为4.0 mg/L时更能促进组培苗根茎叶的生长发育.     

AgNO3在铁皮石斛组织培养中抗衰老作用

目的解决铁皮石斛在组织培养过程中的衰老问题。方法在原球茎增殖培养基、丛芽增殖培养基和生根培养基中分别加入AgNO30、1、2mg/L,测定乙烯的产生量,观察试管苗生长情况。结果AgNO3抑制乙烯的产生,提高了原球茎的增殖速度和丛芽的分化效率,明显促进种苗的生长,提高移栽成活率2倍,表现出抗衰老功能。结论1mg/LAgNO3可以作为铁皮石斛组织培养的抗衰老剂。     

三种内生真菌对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究

目的：研究开唇兰小菇，石斛小菇，兰小菇等3种小菇属内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛，金线莲生长的促进作用。方法：采用植物无菌原球茎及试管苗与真菌进行双重培养，观察原球茎增殖及苗的生长情况，结果：接种3种内生真菌后，铁皮石斛苗的生长量高于对照3－5倍，石斛小菇，兰小菇对铁皮石斛原球茎增殖也有明显促进作用（P＜0．05），接种3种真菌的金线莲苗，侧芽及侧根数均显著高于对照.。结论：3种小菇属内生真菌能够促进铁皮石斛幼苗生长，促进金线莲侧芽及侧根的萌发，对铁皮石斛，金线莲的成功栽培具有实际应用价值。     

生长调节物质对霍山石斛试管苗生根的影响

目的 研究不同生长调节物质和有机添加物对霍山石斛原球茎试管再生苗生根的影响。方法 将试管苗分别培养在添加不同浓度的NAA，IBA，BA，KT，香蕉泥或氨基酸的MS基本培养基中诱导生根，观察并统计试管苗生根状况。结果 不同NAA，IBA，BA，KT，香蕉泥或氨基酸添加浓度对试管苗生根率、根长、生根数及长势的影响有明显差异，它们的适合浓度分别为0．2，0．1，0．8，0．8mg／L，20％和0．1％。结论 NAA，IBA和香蕉泥对霍山石斛原球茎试管再生苗生根影响较大；氨基酸，BA和KT对生根作用不明显；KT有持绿作用。     

铁皮石斛根尖诱导丛生芽研究

目的探索铁皮石斛根尖再生丛生芽的适宜条件及类原球茎的起源。方法切取0.3~0.5cm的根尖为外植体,以B5为基本培养基,附加不同种类和质量浓度的植物生长调节剂进行培养。结果诱导根尖形成了愈伤组织、类原球茎或直接转化成芽且获得再生植株。通过细胞学观察认为铁皮石斛的类原球茎是单细胞起源的体细胞胚。结论为铁皮石斛组织快繁建立新的体系。     

珍稀濒危药材铁皮石斛组培快繁关键技术研究

目的研究珍稀濒危药材铁皮石斛组织培养快速繁殖技术。方法以铁皮石斛茎段为试材,比较植物激素浓度配比、人工光源、炼苗驯化方法等对铁皮石斛组培快繁的影响,摸索出一套可进行组培快繁工厂化生产的技术体系,优选出铁皮石斛组培快繁的最适条件。结果 (1)组培各阶段最佳培养基:原球茎诱导:MS+BA 2.5 mg/L+IBA0.2 mg/L;原球茎分化:MS+BA1.5 mg/L+NAA1.2 mg/L+5%香蕉汁;壮苗生根:MS+NAA 0.15 mg/L+5%香蕉汁、MS+NAA 0.20 mg/L+7.5%香蕉汁、MS+NAA 0.25 mg/L+10%香蕉汁(分阶段补加);(2)人工光源:组培特定光谱节能灯;(3)炼苗方法:水培驯化炼苗。结论通过上述技术的应用,缩短了种苗组培育苗周期,解决了从组培苗到大量栽培的技术,该方法简便易用,且降低了生产成本。     

忍冬组织培养研究进展

目的：探讨忍冬组织培养的最佳外植体、愈伤组织诱导的最佳配方、试管苗增殖的最佳条件、试管苗生根的最佳配方。方法：收集、整理、归纳近20年来国内外有关忍冬组织培养的文献资料。结果：将文献中外植体的选取、灭菌和消毒等情况,愈伤组织诱导的情况,试管苗增殖的最佳条件的情况及试管苗生根的情况分别列表进行对照比较。结论：各种外植体都可诱导不定芽的分化,其中顶芽是较好的部位。忍冬愈伤组织的诱导多以MS作为基本培养基,并附有1.0-2.5mg/L细胞分裂素6-BA和0.01-1mg/L生长素NAA等植物生长物质。忍冬增殖培养主要以MS培养基为主,添加1.0-2.5mg/L6-BA和0.1-0.5mg/LNAA。忍冬生根培养基多采用1/2MS、1/4MS培养基,尤其多以1/2MS做为基本培养基,蔗糖浓度一般在1%-3%,附加NAA或IBA,浓度一般在0.5-1.0mg/L。     

真菌在罗河石斛和铁皮石斛种子萌发中的作用

本实验证明,从兰科植物原球茎中分离的3种真菌对促进石斛种子萌发有显著效果,采用种子伴菌播种方法,罗河石斛种子发芽率达20％,铁皮石斛种子发芽率达64％,而无菌播种则无1粒种子萌发。对铁皮石斛种子接菌萌发中细胞超微结构的变化进行观察,菌丝由胚柄侵入种胚,染菌的胚细胞器消失;菌丝被胚细胞质包围并加厚,菌丝逐渐被分解作为胚萌发的营养物质,邻近染菌细胞的未染菌胚细胞代谢功能旺盛。     

束花石斛快繁育苗技术的研究

目的 寻找束花石斛快繁育苗的有效途径。方法 采用组织培养和野生自然栖息的束花石斛诱导高位腋芽萌发等途径进行探索。结果 在组织培养中,改良1/2MS培养基的原球茎形成效果最好,调整不同浓度的N、P、K及外源激素对诱导束花石斛原球增殖、生根壮苗极为明显;外源激素对诱导束花石斛的高位腋芽萌发无明显效果,高位芽萌发与茎株生理年龄和营养状况有关。结论 人工种植束花石斛采用现代生物技术组培育苗和腋芽繁殖是目前快繁育苗的最有效途径,不仅育苗量大、周期短,且生长快、成活率高,两条途径对于束花石斛的产业化发展有重要意义。     

铁皮石斛组培快繁技术研究

目的 通过研究铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和生根的适宜培养基,建立一套铁皮石斛组织培养的快速繁殖体系.方法 以铁皮石斛种子为外植体,研究激素（6-benzylaminopurine和1-naphthleetic acid）不同质量浓度配比、天然添加物（马铃薯汁和香蕉汁）对铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和壮苗生根的影响.结果 铁皮石斛种子萌发最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁＋25 g/L蔗糖汁,小苗增殖最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁（或香蕉汁）＋25g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭,壮苗与生根最适培养基为1/2MS＋ 0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L香蕉汁＋25 g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭.结论 建立了一套铁皮石斛组培快繁体系,可用于大规模生产铁皮石斛组培苗.     

采用种子直播技术快速繁殖石斛

目的:建立石斛种子自然繁殖技术体系,为石斛的繁殖提供一种新的途径.方法:以铁皮石斛种子为材料,研究不同萌发培养液、不同萌发时间和不同播种介质对石斛种子萌发率和成苗率的影响.结果:N6+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA是石斛最佳的萌发营养液,在该营养液萌发30d后播种到营养土:蛭石:珍珠岩=3:1:1的介质中,其成苗率最高,可达85％以上.结论:建立了石斛种子直播体系,该体系能高效快速繁殖石斛.     

鼓槌石斛快繁育苗技术的研究

目的 寻找鼓槌石斛快繁育苗的有效途径。方法 采用组织培养和野生自然栖息的鼓槌石斛诱导高位腋芽萌发等途径进行探索。结果 在组织培养中，改良1/2MS培养基对原球茎形成效果最好，调整不同浓度的N、P、K及外源激素对诱导鼓槌石斛原球增殖、生根壮苗极为明显；外源激素对诱导鼓槌石斛的高位腋芽萌发无明显效果，高位芽萌发与茎株生理年龄和营养状况有关。结论 人工种植鼓槌石斛采用现代生物技术组培和腋芽繁殖是目前快繁育苗的最有效途径，不仅育苗量大、周期短，且生长快、成活率高，两条途径对于鼓槌石斛的产业化发展有重要意义。     

铁皮石斛试管苗生长发育动态研究

目的对铁皮石斛试管苗进行生长发育规律研究,为试管苗各生长发育时期合理调控技术措施的确定提供科学依据。方法采用常规方法,测定不同生长时期试管苗的生长指标、多糖和蛋白质含量及光合特性指标。结果播种后5~8个月时铁皮石斛试管苗的苗高和茎粗增长最快,6、11个月时各有1次分蘖高峰,5、9、12个月时各有1次发根高峰;7~8个月、10~12个月时试管苗生物量积累速率最高。铁皮石斛试管苗根与茎叶之比(R/T)相对较小,平均单株茎叶干重占总干重的90.6%。11个月时试管苗的多糖含量最高(5.07%),以后开始下降;8个月时试管苗可溶性蛋白质含量最高(211.28 mg/g),以后逐渐减少,以12个月时的含量最低(119.55 mg/g)。6~11个月时的试管苗生长代谢旺盛。从干物质积累动态、多糖及蛋白质含量变化、试管苗活力和生产成本等方面综合考虑,10个月左右的铁皮石斛试管苗出瓶移栽较为合适。生长发育过程中,试管苗的叶绿素含量变化幅度较大,呈减小→增加→再减小的趋势,光合速率与叶绿素含量的变化趋势基本一致。10个月之后试管苗的叶绿素开始降解。试管苗光饱和点和最大电子传递速率的变化相对稳定,9、10个月时的电子传递速率最高,为26μmol/(m2.s),而12个月时的光饱和点和电子传递速率最低。结论铁皮石斛种子萌发率及试管苗质量受种子成熟度的影响较大;组培室光照强度为27μmol/(m2.s),光强不足可能是试管苗生长发育的主要限制因子之一;播种后生长10个月左右的铁皮石斛试管苗出瓶移栽较为合适;通过调节红蓝光的光质配比来调节叶绿素a/b的比值,将有利于促进试管苗的生长发育。     

铁皮石斛离体培养体细胞胚发生的组织细胞学研究

[目的]探索离体条件下铁皮石斛体细胞胚发生过程,为铁皮石斛的快速繁殖生产和种质资源保存提供技术依据.[方法]取继代培养30 d的铁皮石斛类原球茎作接种材料,以N6为基本培养基,加入植物激素,并以真菌提取物作诱导子,对类原球茎和愈伤组织进行诱导培养.[结果]显微观察结果表明铁皮石斛体细胞胚的形成可由愈伤组织的表皮细胞或内部细胞产生.[结论]铁皮石斛通过类原球茎和愈伤组织的诱导培养能获得大量的丛芽.     

牛蒡无性系建立研究

为保存野生资源,满足栽培对种苗的需要,以牛蒡嫩茎为材料,应用组织培养的方法,进行了嫩茎愈伤组织诱导与分化、分化芽生根、试管苗的生根继代及移栽和定植的研究。结果表明:MS+6-BA0.3mg.L-1+2,4-D2.0mg.L-1是嫩茎愈伤组织诱导培养和继代增殖培养的理想培养基;MS+6-BA1.5mg.L-1+NAA0.1mg.L-1+AgNO31.2mg.L-1是愈伤组织分化培养的理想培养基;White+NAA0.1mg.L-1+IAA0.2mg.L-1是不定芽生根培养、试管苗生根继代培养及快速繁殖的理想培养基。试管苗易移栽和定植易成活,且定植的试管苗保持了野生牛蒡的所有生物性状。     

铁皮石斛人工种子制作及影响因素研究

目的 建立铁皮石斛人工种子制作方法,并考察相关影响因素,为铁皮石斛的繁育提供一条新途径。方法 以铁皮石斛原球茎为包埋体制作人工种子,考察胚乳、种皮组分对人工种子萌发和成苗的影响。结果 以MS＋0.5 mg/L BA＋0.5 mg/L NAA＋3 g/L AC＋30 g/L海藻酸钠＋3 g/L百菌清为基本胚乳,在2% CaCl₂中反应15 min是铁皮石斛人工种子制作的较佳条件,胚乳中分别添加15 g/L木薯淀粉和10 g/L保水剂能明显提高人工种子的萌发率和成苗率,种皮中添加10 g/L纳米SiO₂和10 g/L纳米TiO₂均能明显提高萌发率,但添加10 g/L纳米SiO₂成苗率最高。结论 建立了铁皮石斛人工种子制作方法,获得了较高的萌发率和成苗率。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响

目的 研究固体培养条件下2种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响.方法 筛选获得铁皮石斛原球茎的继代培养基及其生长曲线.根据生长曲线,在原球茎生长的不同时期加入真菌诱导子,考察诱导子对原球茎鲜质量和干质量的影响.结果 铁皮石斛原球茎继代培养基:1/2MS 20%土豆 3%蔗糖 0.8%琼脂.与对照相比,第11周和第13周加入MF23诱导子使原球茎鲜质量分别提高了16.4%(P<0.01)和23.4%(0.01),干质量分别提高了6.7%A(P<0.05)和17.9%(P<0.01),继代培养基中加入MF23诱导子使原球茎干质量降低了9.9%(P<0.01).与对照相比,第11周和第13周加入MF24诱导子使原球茎鲜质量分别提高了17.7%(P<0.01)和12.0%(P<0.05),第11周加入MF24诱导子使原球茎干质量提高了9.2%(P<0.05),继代培养基中加入MF24诱导子使原球茎干质量降低了13.9%(P<0.01).结论 在原球茎培养的早期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有一定抑制作用;在原球茎培养的后期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有促进作用.     

知母组织培养的初步研究

目的 以知母种子为试验材料,对知母的组织培养进行了初步研究,以期建立知母的再生体系。方法 采用植物组织培养和单因子试验的方法对知母无菌体系的建立、分蘖芽的增殖、分蘖愈伤组织的诱导和再分化以及再生苗的移栽进行研究。结果 知母种子最佳的消毒方式是75%酒精处理30 s后用0.1%HgCl₂处理15 min;知母分蘖芽增殖的最佳培养基是MS+KT 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L;知母分蘖愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L;知母愈伤组织再分化的最佳培养基是MS+KT 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L;知母愈伤组织再生芽最佳的生根培养基是1/2MS+NAA 0.5 mg/L;知母试管苗最佳的移栽基质是腐殖土。结论 本实验建立了知母的再生体系,为知母试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。