重复经颅磁刺激对小鼠缺血性脑卒中急性期小胶质细胞极化的调控作用

目的:探究重复经颅磁刺激(Repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对缺血性脑卒中急性期小鼠小胶质细胞极化作用的影响.方法:取80只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、MCAO对照组、假刺激组及rTMS干预组.rTMS干预组给予高频(10 Hz)刺激,假刺激组给...     

核因子E2相关因子2-醌氧化还原酶1抑制ferroptosis缓解肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)-酯氧化还原酶1(NQO1)对肠缺血再灌注所致急性肺损伤保护作用的机制。方法将32只健康的8周龄野生型(WT)C57BL/6雄性小鼠(简称WT小鼠)随机分为4组,即假手术组、模型组、模型+铁剂组(铁剂组)、模型+ferroptosis抑制剂组(ferroptosis抑制剂组),每组8只。假手术组暴露肠系膜上动脉,但不阻断;模型组用无创血管夹阻断肠系膜上动脉45 min,开放再灌注180 min,制备肠缺血再灌注肺损伤模型;铁剂组和ferroptosis抑制剂组在阻断肠系膜上动脉前经尾静脉分别注射柠檬酸铁15 mg/kg或ferroptosis抑制剂ferrostatin-1 5 mg/kg。另取Nrf2基因敲除小鼠(Nrf2^-/-小鼠)32只,亦分为假手术组、模型组、铁剂组和ferroptosis抑制剂组,每组8只,各组处理方法与WT小鼠一致。各组于再灌注180 min后处死小鼠取其肺组织,称重后计算肺湿干比(W/D),分别采用Western印迹法和实时荧光定量PCR检测Nrf2、NQO1的蛋白质和mRNA表达。于光学显微镜...     

银松素治疗Nrf2-/-小鼠少弱精症作用机制研究

目的：探究银松素(pinosylvin)对Nrf2基因敲除小鼠少弱精症的治疗作用及机制。方法：将实验小鼠分为野生型(WT)组、Nrf2^-/-组和Nrf2^-/-+pinosylvin组,Nrf2^-/-+pinosylvin组小鼠给予100 mg/kg银松素灌胃,持续灌胃4周,处死小鼠取出睾丸及附睾组织。使用计算机辅助分析系统检测各组小鼠精子浓度与精子活力;苏木素伊红染色观察小鼠睾丸及附睾病理变化;酶联免疫吸附法检测各组小鼠睾丸组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测各组小鼠睾丸组织中铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和凋亡相关蛋白Bax、P53表达。结果：与WT组小鼠比较,Nrf2^-/-组小鼠精子浓度和精子活力明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),表明Nrf2^-/-小鼠出现少弱精症。病理切片染...     

前额叶皮质区小胶质细胞活化对卒中后抑郁小鼠远期空间记忆功能的影响

目的:探讨前额叶皮质区小胶质细胞活化对卒中后抑郁小鼠远期空间记忆功能的影响。方法:取48只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术组、卒中组、卒中后抑郁组和抑郁组,另取36只小鼠按照随机数字表法分为溶剂组、恩诺沙星组和米诺环素组,每组12只。采用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery oc...     

麝香保心丸对小鼠缺血性脑卒中的保护作用及机制

 目的 探究麝香保心丸（Shexiang Baoxin Pill,SBP）在小鼠缺血性脑卒中的保护作用及机制。方法 通过大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）构建脑缺血性卒中模型,将96只C57BL/6小鼠随机分成4组：假手术（Sham）组、模型（ischemia/reperfusion,I/R）组、低剂量麝香保心丸（LSBP,22.5 mg/kg）组和高剂量麝香保心丸组（HSBP,45 mg/kg）,每组24只。灌胃4周后制备小鼠MCAO模型。记录各组小鼠的大脑梗死体积及脑组织含水量,利用免疫荧光技术分析激活的小胶质细胞数量,采用qRT-PCR检测炎症因子的表达,通过Western blot法分析NF-κB信号通路相关蛋白质的表达情况。结果 与I/R组相比,LSBP组和HSBP组大脑梗死体积减少,脑组织含水量降低,激活的小胶质细胞数量减少,同时促进小胶质细胞由M1型向M2型极化,并抑制NF-κB信号通路的激活。结论 SBP可以减轻由缺血性脑卒中引起的小鼠脑组织损伤,其机制可能与改变小胶质细胞M1/M2的极化状态和抑制NF-κB信号通路的激活有关。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2在T细胞发育过程中的表达及其对哮喘发病的潜在作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)在T细胞发育过程中的表达及作用,分析其在哮喘发病中的潜在作用。方法 选择C57BL/6J雌性野生型(WT)小鼠、C57BL/6J雄性TIPE2基因敲除(Tipe2^-/-)小鼠、C57BL/6J雄性绿色荧光蛋白敲入(Tipe2^gfp/+)小鼠为研究对象。取WT和Tipe2^gfp/+小鼠结肠组织和胸腺组织,获取肠道固有层淋巴细胞(LPLs)和胸腺细胞,采用流式细胞术检测结肠组织CD45^-细胞、CD45⁺细胞及双阴性(DN)T细胞、双阳性(DP)T细胞、CD4⁺T细胞和CD8⁺ T细胞中TIPE2的表达。取WT和Tipe2^-/-小鼠外周血、脾脏和肠系膜淋巴结,采用流式细胞术检测外周血、脾脏和肠系膜淋巴结中CD4⁺和CD8⁺T细胞水平。将10只Tipe2^gfp/+小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。...     

C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠对脓毒症反应的差异

目的 探讨C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力.方法 C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立小鼠脓毒症模型.术后6h,每组随机选出5只,Bio-plex悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4,IL-5、IL-10、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的浓度.剩余小鼠用于1周存活率分析.结果 两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%.C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c小鼠脓毒症组存活率为50%.C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c小鼠脓毒症组(P＜0.05).与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高.而BALB/c小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加.结论 C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感.     

右美托咪定减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤的作用

目的 探索右美托咪定(Dex)后处理对脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤及转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和Dex组各10只.模型组和Dex组参照改良Longa法制备脑动脉缺血再灌注模型.Dex组于再灌注即刻腹腔注射100μg/kg的Dex(浓度为10 mg/L).再灌注24 h后,对各组大鼠进行神经功能缺失评分;TTC染色法检测大鼠脑梗死体积分数;ELISA法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的水平;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO-1)的表达水平;HE染色和TUNEL染色检测脑组织损伤.结果 与假手术组相比,模型组和Dex组大鼠神经功能缺失评分、细胞凋亡率、MDA和NO水平升高(P<0.05),脑组织SOD活性下降(P<0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1、cleaved caspase-3/Bcl-2、Bax/Bcl-2的表达上调(P<0.05);与模型组相比,Dex组大鼠神经功能缺失评分和脑梗死体积分数、细胞凋亡率、MDA和NO水平下降(P<0.05),脑组织SOD活性升高(P<0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1的表达上调(P<0.05),cleaved caspase-3/Bcl-2、Bax/Bcl-2的表达下调(P<0.05),HE染色显示脑组织病理变化减轻.结论 Dex后处理可以减轻CIRI大鼠的氧化应激损伤,其作用机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路有关.     

小鼠原代海马神经元培养方法优化及HT22-GRK2-/-细胞构建

目的 探究并优化新生小鼠海马神经元体外原代培养方法；构建小鼠海马神经元HT22细胞中G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因敲除细胞株(HT22-GRK2^-/-)。方法 为优化小鼠原代海马神经元的培养，取新生1～2 d C57BL6/J小鼠海马组织，经胰酶消化后吹打形成细胞悬液，于Neurobasal-A培养基中加细胞培养添加剂维持细胞生长。利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术构建HT22-GRK2^-/-细胞株，并通过免疫荧光染色和Western blot检测GRK2敲除效率。结果 以3×10⁷/孔密度接种的新生小鼠原代海马神经元以无血清培养方式接种于6孔板中，可获得纯度高、活性好的小鼠原代海马神经元细胞；HT22-GRK2^-/-细胞株构建成功。结论 成功建立并优化小鼠海马神经元体外原代培养方法，利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术成功构建HT22-GRK2^-/-细胞株。     

敲除TSP1通过氨基酸和糖代谢通路对阿霉素所致心肌损伤的作用

目的 利用代谢组学方法阐明敲除血小板反应蛋白1(TSP1)通过调节小分子化合物的代谢,减轻阿霉素(ADM)致心肌损伤。方法 以24只野生型C57BL/6小鼠和24只TSP1基因敲除(TSP1^-/-)小鼠为实验对象,分为4组：WM组(n=12)、TSP1^-/-组(n=12)和WM-ADM组(n=12)、TSP1^-/--ADM组(n=12)。WM组和TSP1^-/-组小鼠腹腔注射生理盐水,WM-ADM组和TSP1^-/--ADM组小鼠腹腔注射ADM以建立慢性心功能衰竭(CHF)模型。以血清生化[肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes, CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)]和心脏组织苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色为指标评价注射ADM后小鼠心肌损伤情况,以基于核磁共振(¹HNMR)的代谢组学技术来研究4组小鼠血...     

CD-1遗传背景小鼠EAE模型:遗传背景对临床表现的影响

目的:制作不同基因背景小鼠自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,比较不同遗传背景小鼠发病?神经功能评分和病理变化的差异?方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗原(MOG35-55)免疫C57BL/6和CD-1基因背景小鼠,用完全弗氏佐剂作为抗原载体,并在不同时间点用精制百日咳毒素增强免疫效果,建立自身免疫性脑脊髓炎模型;记录小鼠发病时间与表现,每天进行神经功能评分,并取其脑和脊髓组织进行病理学检查和以CD4?IL-17为靶标的免疫组化染色?结果:C57BL/6组小鼠发病高峰期出现于初次免疫后17~25 d,表现典型的拖尾?单侧或双侧后肢瘫痪等改变,神经功能评分在3分左右;CD-1组小鼠发病高峰期较C57BL/6组推迟,出现于免疫后35~40 d,可见相似的拖尾及偏瘫表现,神经功能评分在2.8分左右?病理检查可见C57BL/6模型小鼠脑?脊髓出现炎症性细胞浸润,而CD-1小鼠的炎性改变相对较轻?且主要出现于脊髓;罗克沙尔固蓝染色法鉴定显示,模型小鼠脑脊髓组织出现脱髓鞘病变,以C57BL/6小鼠更为严重?免疫组织化学法显示2种模型小鼠发病高峰期均存在不同程度的CD4+及IL-17+ 炎性细胞的浸润?结论:不同的遗传背景对EAE模型发病?临床表现和病理改变有明显影响;CD-1小鼠亦可运用于制作慢性迁延性EAE模型,更符合人类多发性硬化的特点?     

基于Nrf2信号通路研究丁苯酞对高危缺血性卒中的保护作用

目的:在急性脑梗死小鼠模型中,检测预使用丁苯酞(n-butylphthalide, NBP)是否可通过核因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)通路减轻缺血性脑损伤。方法:Nrf2^-/-纯合子和Nrf2^+/+野生型小鼠随机分为3组,分别为对照组(C)、低剂量给药组(20 mg/kg)和高剂量给药组(60 mg/kg),每组6只。将丁苯酞用植物油按30 mg/mL溶解,低剂量给药组以20 mg/kg每天一次灌胃,高剂量给药组以60 mg/kg每天一次灌胃,对照组小鼠给予同等剂量的植物油灌胃,1次/d,持续给药4周。4周末采用电凝法制备小鼠局灶性脑梗死模型(d MCAO)。在脑梗死模型3 d及10 d后,通过Longa评分评估小鼠的脑神经功能。通过氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色检测小鼠的脑梗死体积,并通过Western blot及免疫荧光技术检测小鼠脑组织中Nrf2及H奎尼酮氧化还原酶1(NADPH:qui...     

包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用

目的：探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法：将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^-/-)的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^-/-对照组、TNFR2^-/-ITP模型组和TNFR2^-/-HA-B组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中M2巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素10 (IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素6 (IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Arg1、IL-10、iNOS和IL-6表达水平。分别将WT对照组和TNFR2^-/-对照组小鼠BMDM诱导为M2巨噬细胞(WT M2组和TNFR2^-/-M2组),加入HA-B...     

免疫抑制受体igsf 9基因敲除鼠的构建以及对肿瘤生长的影响

目的构建免疫抑制受体igsf 9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响。方法将Cas 9 mRNA和igsf 9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf 9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定。将2×10⁶个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf 9^+/+和C57BL/6-igsf 9^-/-小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm³时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤质量、流式细胞仪检测肿瘤组织各免疫细胞水平。结果 igsf 9基因4-9外显子区域出现了2 892 bp缺失,igsf 9基因发生移码突变,提前出现终止密码子,成功构建igsf 9基因敲除小鼠模型,而且该小鼠的体质量以及外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞的比例未见明显差异。与C57BL/6-igsf 9^+/+小鼠相比,C57BL/6-igsf 9^-/-小鼠...     

小鼠脑梗死后脑组织HDAC9的表达及其意义

目的 检测线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)后小鼠不同部位脑组织HDCA9的表达及胞内分布变化,探讨HDAC9与缺血性脑卒中的关系.方法 21只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(9只)与手术组(12只),将手术组术后Longa评分2~3分的小鼠纳入MCAO组(9只),术后3 d断头取脑,采用免疫荧光染色观察HDAC9脑组织内分布位置与胞内分布变化,采用Western免疫印迹法与实时荧光定量PCR法检测各组不同部位(梗死侧/对侧皮层/MCAO组小脑/假手术组皮层/假手术组小脑)HDAC9的表达变化.结果 (1)免疫荧光染色:脑梗死后,梗死灶周围脑组织HDAC9的荧光强度较其他部位明显增强.高倍镜下与假手术组对比,梗死灶周围HDAC9胞浆内表达增多,核内表达减少;(2)蛋白与mRNA表达检测:与各组对比,梗死侧脑组织HDAC9表达显著升高,具有统计学差异(均P<0.05),蛋白与mRNA表达情况相一致.结论 HDAC9与缺血性脑卒中密切相关,可能参与其病理生理过程.     

血脂异常对微塑料在机体内蓄积影响

目的 探讨微塑料蓄积与血脂异常间的关系。方法 将12只C57BL/6J小鼠分为空白组、正常组、高脂组、血脂康组,9只ApoE^-/-小鼠分为正常组、高脂组、血脂康组,其中,C57BL/6J小鼠和ApoE^-/-小鼠的高脂组、血脂康组给予高脂饲料,其他各组给予普通饲料。实验时,除空白组,其他各组小鼠灌胃含有绿色荧光的微塑料,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,小动物活体光学成像系统(in vivo imaging system,IVIS)检测组织器官中微塑料荧光量。结果 (1)微塑料灌胃2 h后,C57和ApoE^-/-小鼠均表现为高脂状态下微塑料的荧光强度增高,血脂康降脂治疗后荧光强度降低;(2)ApoE^-/-小鼠在正常和高脂状态下的各组织器官均表现为微塑料荧光强度高于C57小鼠;(3)C57和ApoE^-/-小鼠的血脂康组体内附睾、脑、内脏脂肪、皮下脂肪中的微塑料荧光明显降低,且ApoE<...     

氧化苦参碱对局灶性脑缺血小鼠脑保护机制的研究

目的观察氧化苦参碱对局灶性脑缺血(focal cerebral ischemic,FCI)小鼠脑保护作用及核转录因子Nrf2的表达变化。方法参照线栓法制备C57小鼠局灶性大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将36只C57雄性小鼠随机分为假手术组、局灶性大脑中动脉缺血/再灌注模型组、氧化苦参碱组,分别采用行为学评分、TTC染色法观察氧化苦参碱的脑保护作用,采用激光共聚焦显微镜(Confocal)及Western blot方法探讨Nrf2在氧化苦参碱脑保护作用中的重要地位。结果与模型组相比氧化苦参碱组神经功能缺失明显减轻(P<0.05),梗死体积明显缩小(P<0.05);与模型组相比,氧化苦参组在形态学上Nrf2核转位明显增加,Nrf2的核蛋白表达上调(P<0.05)。结论模型组小鼠局灶性脑缺血后,神经功能缺失严重,脑梗死体积较大,Nrf2的核转位相对增加,而氧化苦参碱治疗组可降低局灶性脑缺血后小鼠的神经功能缺失程度,减小梗死体积,促进Nrf2的核转位,这可能是氧化苦参碱脑保护机制之一。     

水通道蛋白4低表达通过抑制类淋巴系统功能对AD模型小鼠脑组织磷酸化Tau蛋白表达的影响

目的:探究水通道蛋白4(AQP4)低表达通过抑制类淋巴系统功能促进AD样模型中磷酸化Tau(pTau)蛋白形成和聚集的发生机制。方法:采用EB示踪C57小鼠和AQP4^+/-小鼠(各5只)的类淋巴系统引流清除功能。将C57小鼠和AQP4^+/-小鼠各25只分为C57 PBS组和AQP4^+/- PBS组(大脑前额叶皮层注射2.5μL PBS),每组10只,C57 Tau组和AQP4^+/-Tau组(大脑前额叶皮层注射1 g/L的Tau蛋白纤维体2.5μL),每组15只。采用免疫组化染色检测4组小鼠大脑内pTau蛋白的表达,采用免疫荧光法检测C57 Tau组和AQP4^+/-Tau组小鼠大脑皮层星形胶质细胞标志物GFAP、AQP4和pTau蛋白的表达。结果:与C57小鼠相比,AQP4^+/-小鼠EB残余荧光面积减少(P<0.001)。外源性Tau蛋白和敲除部分AQP4基因(AQP4^+/-)均可增加C57小鼠大脑皮层和纹状体中pTau蛋白聚集;...     

不同剂量MOG抗原免疫诱导小鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的比较

目的 比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG_(35-55))免疫诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为正常组和三组不同剂量MOG_(35-55)诱导的EAE模型组,共4组.模型组分别以每只200、100、50μg的MOG_(35-55)与完全弗氏佐剂(complete Freund''s adjuvant,CFA)混合的乳化抗原皮下注射免疫诱导EAE模型,正常组以生理盐水替代.观察不同剂量MOG_(35-55)对C57BL/6小鼠体重、发病率以及神经功能评分等影响,同时取小鼠脑和脊髓,利用光镜和透射电镜观察小鼠病理组织学改变.结果 三组不同剂量MOG_(35-55)均能诱导EAE模型,发病率为100%,呈慢性单相病程,病理学观察发现小鼠脑和脊髓有炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等改变.但小剂量组在体重减轻、临床症状评分及病理学改变等方面均较中、大剂量组明显.结论 用MOG_(35-55)50μg剂量免疫诱导的C57BL/6小鼠EAE模型稳定,可在今后的研究中应用.     

破骨细胞敲除PDK1基因对PMMA颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解抑制作用的实验研究

目的:研究破骨细胞敲除3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)基因对聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解的抑制作用.方法:取12只C57BL/6小鼠及6只破骨细胞敲除PDK1基因鼠,构建骨吸收模型,随机分为3组,每组6只,分别为假手术(Sham)组、PMMA+C57BL/6组、PMMA+基因敲除(...