微小RNA-130a-3p靶向硫氧还蛋白结合蛋白减轻缺氧/复氧心肌微血管内皮细胞的炎性反应

目的探讨微小RNA(miR)-130a-3p减轻缺氧/复氧心肌微血管内皮细胞(CMECs)炎症的调控机制。方法分离培养CMECs, 分别将miR-130a-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、硫氧还蛋白结合蛋白过表达载体(pc-TXNIP)及其对照(pcDNA3.1)转染细胞, 细胞共分为6组:对照组、缺氧/复氧(H/R)组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-TXNIP组(转染mimics和pc-TXNIP), 除对照组以外的其他细胞在转染后建立H/R模型(缺氧6 h后复氧4 h), 再培养24 h。观察miR-130a-3p表达水平以及对细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β和TXNIP、NLRP3表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-130a-3p和TXNIP之间的靶向关系。各组间差异比较采用方差分析。结果 H/R组及miR-NC组细胞活力均低于对照组(0.39±0.03、0.35±0.04比1.00±0.01, t=6.753、7.24...     

微小RNA-139-3p靶向调控性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4减轻心肌细胞氧化应激损伤

目的研究微小RNA(miR)-139-3p对H2O2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2细胞氧化应激的影响及其可能机制。方法分别将miR-139-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(Sox4)过表达载体(pc-Sox4)及其对照(pcDNA3.1)转染H9c2细胞, 细胞共分为6组:对照组、H2O2组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-Sox4组(转染mimics和pc-Sox4), 除对照组外的其他细胞均在转染后建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测H9c2细胞活力;比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测H9c2细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测Sox4表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-139-3p表达水平;生物信息学网站预测miR-139-3p与Sox4的互补结合位点, 双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶...     

miR-92a-3p靶向EZH2对IL-1β诱导软骨细胞合成基质降解酶的影响

目的研究miR-92a-3p靶向zeste基因增强子同源物2(EZH2)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞合成基质降解酶的影响。方法分离培养人软骨细胞,分成Normal、IL-1β(IL-1β处理)、miR-NC+IL-1β(mimics control转染后IL-1β处理)、miR-92a-3p+IL-1β(miR-92a-3p mimics转染后IL-1β处理)组,RT-PCR方法测定miR-92a-3p表达变化,Western blot检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达。靶基因预测软件发现EZH2可能为miR-92a-3p的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将p CDNA3.1-EZH2和miR-92a-3p mimics共同转染到软骨细胞中,检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达情况。结果与Normal比较,IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达减少,MMP-13、MMP-1表达增多,COLⅡ表达减少(P0.05)。与miR-NC+IL-1β比较,miR-92a-3p+IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达增多,MMP-13、MMP-1表达减少,COLⅡ表达增多(P0.05)。miR-92a-3p靶向负调控EZH2表达。p CDNA3.1-EZH2可以逆转miR-92a-3p mimics对IL-1β条件下软骨细胞中MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达影响。结论 miR-92a-3p靶向下调EZH2抑制IL-1β诱导的软骨细胞合成基质降解酶。     

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22靶向作用于微小RNA-27a-3p/胰岛素样生长因子-1信号轴对三阴性乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的观察三阴性乳腺癌细胞中长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22(SNHG22)靶向作用于微小RNA(miR)-27a-3p/胰岛素样生长因子-1对细胞侵袭能力的影响。方法选取2019年6月至2022年3月河北医科大学第二医院甲状腺乳腺外科收治30例三阴性乳腺癌及其癌旁组织标本作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌及癌旁组织中SNHG22和miR-27a-3p的表达变化;将SNHG22过表达质粒和miR-27a-3p模拟物(mimics)分别转染至三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中, 利用细胞侵袭实验观察两者对细胞侵袭能力的影响;利用生物信息学软件及双荧光素酶报告基因分析SNHG22和miR-27a-3p的关系及miR-27a-3p的下游靶基因。将miR-27a-3p mimics、miRNA阴性对照(miR-NC)分别与SNHG22共转染后, 观察上调miR-27a-3p表达对过表达SNHG22的MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。两组间比较采用t检验。结果荧光定量PCR实验结果显示, SNHG22在三阴性乳腺癌组织中的表达水平(3.184±1.800)明...     

微小RNA-30a-5p抑制胃癌增殖与侵袭的机制

目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型, 胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组, miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control, NC), 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮, 分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p i...     

微小RNA-1910-3p调控三方基序包含蛋白37影响非小细胞肺癌细胞生物学行为

目的探讨微小RNA-1910-3p(miR-1910-3p)调控三方基序包含蛋白37(TRIM37)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法评估人非小细胞肺癌细胞(A549细胞系)和人正常肺上皮细胞(BEAS-2B细胞系)中miR-1910-3p的表达水平。采用生物信息学分析、RT-qPCR、蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-1910-3p对TRIM37的靶向调控关系。A549细胞分别转染阴性对照模拟物(NC组)、miR-1910-3p模拟物(miRNA-mimic组)、miR-1910-3p抑制剂(miRNA-inhibitor组), 细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测各组细胞增殖能力、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)实验检测各组细胞凋亡率、Transwell小室和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭率和迁移率。两组间比较采用独立样本t检验。结果 RT-qPCR结果显示, A549细胞组中miR-1910-3p表达水平高于BEAS-2B细胞组(1.566±0.019比1...     

微小核糖核酸-24-3p抑制肝细胞癌增殖、迁移及侵袭机制

目的探讨微小核糖核酸-24-3p(miR-24-3p)对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法收集2019年6月至2021年8月长江大学附属荆州医院诊治的肝癌患者肝癌组织及癌旁组织。分别将miR-NC组、miR-24-3p inhibitor组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-WNK2组、miR-24-3p inhibitor+pcDNA3.1-NC组、miR-24-3p inhibitor+pcDNA3.1-WNK2组、miR-24-3p inhibitor+shRNA-NC组、miR-24-3p inhibitor+sh-WNK2组转染至HepG2细胞。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-24-3p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测WNK赖氨酸缺陷型蛋白激酶2(WNK2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、金属基质蛋白2(MMP-2)蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞侵袭、迁移情况;荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与WNK2的靶向关系;体内成瘤实验检测肿瘤体积及重量。两组间均数比较采用...     

微小RNA-30a-5p激活Wnt/β-连环蛋白信号通路对胃癌细胞增殖与侵袭的作用机制

目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型, 胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组, miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC), 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮, 分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组及miR-30a-5p Inhibit...     

miR-27a-3p调控Ras/Raf/MEK/ERK信号通路抑制肾透明细胞癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-27a-3 p对肾透明细胞癌细胞Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的作用,观察其对肾透明细胞癌细胞增殖的影响.方法 使用脂质体试剂lipofectamine 2000将miR-27a-3p模拟物或miR-NC转染至肾透明细胞癌细胞株Caki-1和A-498;qRT-PCR和Western blot检测miR-27a-3p的靶基因KRAS及下游通路蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖能力.结果 KRAS基因和下游通路蛋白的表达降低;转染miR-27a-3p后的肾透明细胞癌细胞周期明显被抑制,G0/G1期的细胞比例上升(P<0.01);肾透明细胞癌细胞活力和增殖能力降低(P<0.05).结论 过表达miR-27a-3p在体外可以显著降低肾透明细胞癌细胞Ras/Raf/MEK/ERK蛋白的表达,进而显著抑制其增殖能力.     

微小RNA-148a-3p对肝癌树突状细胞活化的影响及其机制

目的探讨微小RNA(miR)-148a-3p对肝癌树突状细胞活化的影响及其机制。方法分离肝癌患者外周血树突状细胞, 通过双荧光素酶报告验证miR-148a-3p和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)的靶向关系。树突状细胞分为4组:对照组、miR-148a-3p组、SOCS1组和miR-148a-3p+SOCS1组。通过转染miR-148a-3p类似物和/或SOCS1质粒来实现过表达。检测各组细胞中miR-148a-3p和SOCS1蛋白、抗原呈递蛋白(CD11c和CD86)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-α(IFN-α)的表达水平和树突细胞迁移能力。多组间的差异采用单因素方差分析(ANOVA), 组间两两比较采用SNK-q检验。结果 miR-148a-3p组的miR-148a-3p水平高于对照组(4.21±0.38比1.00±0.07, t=66.461, P<0.05), SOCS1组的SOCS1蛋白表达水平显著高于对照组(2.91±0.25比1.00±0.08, t=58.212, P<0.05)。miR-148a-3p+SOCS1组的SOCS1蛋白水平显著高于...     

细胞骨架调节剂对脊索瘤细胞生物学行为及放射敏感性的影响

目的通过实验研究探讨细胞骨架调节剂(lncRNA cytoskeleton regulator,CYTOR)对脊索瘤CM-319和U-CH1细胞生物学行为,包括增殖、迁移和侵袭,及放射敏感性的影响及潜在的分子机制。方法脊索瘤组织和髓核组织中CYTOR和miR-24-3p的表达采用qRT-PCR检测。将人脊索瘤细胞株CM-319和U-CH1分为si-NC组(转染si-NC)、si-CYTOR组(转染si-CYTOR)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-24-3p组(转染miR-24-3p)、si-CYTOR+anti-miR-NC组(共转染si-CY-TOR和anti-miR-NC)、si-CYTOR+anti-miR-24-3p组(共转染si-CYTOR和anti-miR-24-3p)。Western blot检测增殖、迁移侵袭蛋白表达水平,MTT法测定CM-319和U-CH1细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,克隆形成实验检测不同剂量放射处理后细胞存活分数,双荧光素酶报告系统验证CYTOR和miR-24-3p的调控关系。结果检测20个脊索瘤组织和20...     

环状RNA ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移机制

目的探讨环状RNA(circRNA)ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白(ASAP1)调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖及迁移机制。方法提取RA及关节外伤患者SFs行后续实验。分别用Lipofectamine 3000将si-NC、si-circASAP1、miR-NC、miR-144-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-circASAP1、抗miR-NC与si-circASAP1、抗miR-144-3p与si-circASAP1分别转染RA-SFs(记为si-NC组、si-circASAP1组、miR-NC组、miR-144-3p组、pcDNA-NC组、pcDNA-circASAP1组、抗miR-NC+si-circASAP1组、抗miR-144-3p+si-circASAP1组)。未转染RA-SFs记为对照组(NC组)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测circASAP1和微小核糖核酸144-3p(miR-144-3p)表达;蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(M...     

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-214对胃癌细胞SGC7901侵袭和转移能力的影响

目的:探讨miR-214对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法:应用miRanda,TarBase v.5c靶基因预测网站分析miR-214与PTEN mRNA的可能结合位点,分别将miR-214模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到SGC7901细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞PTEN蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果:Western blot结果显示,miR-214 mimics转染组的SGC7901细胞中PTEN蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-214 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论:miR-214能促进胃癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制PTEN的表达有关。摘要     

环状RNA CDR1as靶向抑制微小RNA-135a-5p调控人肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(circCDR1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法体外培养HPASMC, 缺氧诱导后干扰circCDR1as表达、抑制或过表达微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janus激酶2(JAK2)。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中circCDR1as、miR-135a-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。组间差异比较采用t检验。结果缺氧组circCDR1as表达水平和磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值高于常氧组(1.98±0.07比1.01±0.05、0.62±0.06比0.18±0.04、0.56±0.05比0.15±0.03), miR-135a-5p表达水平低于常氧组(0.52±0.05比1.00±0.04), 差异有统计学意义(t=27.620、14.946、17.223、18.362, P<0.05)。...     

微小RNA-125a-5p负性调控基质金属蛋白酶11对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的检测微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)在骨肉瘤细胞及正常成骨细胞(NHOst)中的表达特征,并探讨其通过负性调控基质金属蛋白酶11(MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用荧光定量PCR分析骨肉瘤细胞及正常成骨细胞中miR-125a-5p的表达情况。体外转染miR-125a-5p模拟物(mimics)至骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2),并观察其对细胞增殖及凋亡的影响。通过双荧光素酶报告基因试验及Western blot验证miR-125a-5p对MMP-11的负性调控作用。结果 miR-125a-5p在HOS和Saos-2细胞中的表达均显著低于NHOst细胞(P 0. 05)。HOS和Saos-2细胞中转染miR-125a-5p mimics可显著升高细胞内源性miR-125a-5p表达水平(P 0. 05)。过表达miR-125a-5p抑制HOS和Saos-2细胞的增殖,并促进细胞凋亡(P 0. 05)。miR-125a-5p与MMP-11信使RNA(mRNA) 3'-非编码区(3'-UTR)存在互补结合位点,其通过与MMP-11结合而抑制骨肉瘤细胞中MMP-11蛋白的表达(P 0. 05)。结论 miR-125a-5p在骨肉瘤细胞中呈现低表达,过表达miR-125a-5p可通过负性调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示miR-125a-5p可作为骨肉瘤新的分子治疗靶点。     

miR-18a-5p通过靶向调控PTEN影响膀胱癌增殖迁移能力的研究

目的探索miR-18a-5p影响膀胱癌(BC)增殖迁移能力的分子调控机制。方法选取本院2019年至2021年行全膀胱切除手术的30例膀胱癌患者, 收集癌组织和癌旁组织样本。根据转染不同的小分子物质, 将T24和EJ细胞分为对照组、miR-18a-5p过表达组、miR-18a-5p干扰组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-18a-5p和PTEN基因的表达。采用Western blot检测PTEN蛋白水平的表达。采用EdU实验检测细胞增殖。采用Transwell实验检测细胞迁移。采用双荧光素酶实验验证miR-18a-5p与PTEN靶向关系。通过裸鼠皮下移植瘤实验验证miR-18a-5p对BC细胞增殖能力的影响。结果 miR-18a-5p在癌组织与T24和EJ细胞中均高表达(均P<0.05)。在PTEN-WT和miR-18a-5p模拟物共同转染后, 双荧光素酶表达明显下降(P<0.05)。miR-18a-5p过表达会导致PTEN表达水平下调(P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示, 与对照组比较, miR-18a-5p过表达组的肿瘤体积和重量明显增加(均P&...     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的 观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法 荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组：空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果 miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升...     

LINC00052靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及EMT的分子机制

目的探讨LINC00052通过靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法将肾小管上皮细胞HK-2分为对照组(NC组)、高糖组(HG组)、pcDNA-LINC00052+HG组、pcDNA-NC+HG组、anti-miR-148b-3p+HG组、anti-miR-NC+HG组、miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG组、miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00052和miR-148b-3p的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测E钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;CCK-8检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验分为:miR-NC+LINC00052-WT组、miR-148b-3p+LINC00052-WT组、miR-NC+LINC00052-MUT组、miR-148b-3p+LINC00052-MUT组;将LINC00052过表达...