ΔNp73的研究进展

ΔNp73是近年发现的p73基因（p53家族新成员）的一种亚型，由位于p73基因内含子3下游的P2启动子转录生成，缺乏p73基因的NH2末端反式激活区域，含7种变异体（ΔNp73α、β、γ、δ、ε、ζ、η）。ΔNp73对细胞生长和凋亡有双重调节作用，其与神经系统疾病、多种肿瘤及人类巨细胞病毒（HCMV）感染有关。ΔNp73在人类多种肿瘤组织中过表达，但在正常组织中不表达．其与肿瘤的关系可能为治疗一些肿瘤提供新的靶点。     

ΔNp73的研究进展

ΔNp73是近年发现的p73基因(p53家族新成员)的一种亚型,由位于p73基因内含子3下游的P2启动子转录生成,缺乏p73基因的NH2末端反式激活区域,含7种变异体(ΔNp73α、β、γ、δ、ε、ζ、η)。ΔNp73对细胞生长和凋亡有双重调节作用,其与神经系统疾病、多种肿瘤及人类巨细胞病毒(HCMV)感染有关。ΔNp73在人类多种肿瘤组织中过表达,但在正常组织中不表达,其与肿瘤的关系可能为治疗一些肿瘤提供新的靶点。     

X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测

目的：X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1能够诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3凋亡，其具体转录调控机制尚不十分清楚。克隆X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子，检测干扰素对其转录活性的影响。 方法：实验于2006—05／2007—07在香港大学分子生物学研究所和洛阳华美生物工程公司完成。①材料：结肠癌细胞株Lovo和Swl116来自美国American Type Culture Col-lection。pGL3 basic载体，内参照pRL-CMV载体和Dual-luciferase reporter Kit，T4DNA连接酶，限制性内切酶KpnI和XhoI均由Promega公司提供。②实验方法：采用PCR法扩增获得X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因的启动子片段，将之定向克隆到含荧光素酶报告基因的pGL3 basic载体上，获得的报告基因质粒命名为pLUC107，瞬时转染Lovo和Swl116细胞株，经α-干扰素刺激处理，启动子转录活性用荧光素酶相对表达活性表示。 结果：①PCR扩增结果：在预期的271bp处出现清晰DNA片段，无非特异扩增现象，证明其为X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的PCR扩增产物。②重组质粒的酶切鉴定及测序：重组质粒pLUC107双酶切后可见约为271bp的DNA片段，与理论值相一致。DNA测序证实含X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功。③干扰素对X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子转录活性的影响：与未经α-干扰素处理的含pLUC107的Lovo和Swl116细胞的荧光素酶相对活性值比较，经α-干扰素处理后两种细胞的荧光素酶相对活性值均明显升高（P均〈0．05），且升高幅度与α-干扰紊呈剂量依赖性。 结论：成功克隆出X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子片段，并利用荧光素酶报告基因证实α-干扰素可上调其转录活性。     

斑马鱼MIB1启动子及互作基因的功能富集分析

目的 分析斑马鱼E3泛素蛋白连接酶1(MIB1)基因启动子区转录因子结合位点(TFBS),MIB1互作基因和互作蛋白的种类及其在信号通路中的作用,探讨MIB1基因的调控方式及潜在功能。方法 利用国家基因组科学数据中心(NGDC)预测非编码RNA(ncRNA),利用Alggen与AnimalTFDB在线网站预测MIB1基因TFBS种类,使用GeneMANIA与STRING分析MIB1的互作基因与互作蛋白;通过DAVID网站获取相关数据,进行基因本体(GO)可视化分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路分析。结果 MIB1基因启动子区及5′非翻译区可转录出ncRNA;通过预测得到121种TFBS,并发现P53转录因子既可以结合到MIB1基因的启动子区又可与MIB1蛋白相互作用;在线预测出6种MIB1的共表达基因,筛选出20种互作基因;通过GO可视化分析发现,MIB1及其互作基因在生物过程方面具有调控细胞、组织、器官生长分化及调节NOTCH信号通路等功能,且主要在细胞质核周区、细胞膜和突触后密集区等部位被富集,具有结合NOTCH蛋白、PDZ结构域蛋白等分子功能;KEGG代谢通路分析...     

CEBPA基因突变和表达异常在急性髓系白血病中的作用研究

CCAAT增强子结合蛋白A(CEBPA)基因及其编码的转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)通过促进造血干/祖细胞向粒系分化并抑制细胞增殖,在造血系统早期分化过程中起重要作用。CEBPA基因的突变及其在转录、翻译及翻译后水平受到的异常调控可引起C/EBPα蛋白结构或表达异常,导致粒系分化成熟障碍、不成熟粒系前体细胞异常增殖,是急性髓性白血病(AML)的重要发病机制。CEBPA基因突变和表达异常调节对AML患者的预后有重要影响,并可作为诱导分化治疗的靶点。本文就CEBPA基因突变与AML、C/EBPα蛋白表达调控异常与AML及C/EBPα蛋白与靶向治疗进行综述。     

X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测

目的:X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1能够诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3凋亡,其具体转录调控机制尚不十分清楚.克隆X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子,检测干扰素对其转录活性的影响.方法:实验于2006-05/2007-07在香港大学分子生物学研究所和洛阳华美生物工程公司完成.①材料:结肠癌细胞株Lovo和Sw1116来自美国 American Type Culture Col-lection.pGL3 basic载体,内参照pRL-CMV载体和Dual-luciferase reporter Kit,T4 DNA连接酶,限制性内切酶Kpn I和XhoI均由Promega公司提供.②实验方法:采用PCR法扩增获得X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因的启动子片段,将之定向克隆到含荧光素酶报告基因的pGL3 basic载体上,获得的报告基因质粒命名为pLUC107,瞬时转染Lovo和Sw1116细胞株,经α-干扰素刺激处理,启动子转录活性用荧光素酶相对表达活性表示.结果:①PCR扩增结果:在预期的271 bp处出现清晰DNA片段,无非特异扩增现象,证明其为X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的PCR扩增产物.②重组质粒的酶切鉴定及测序:重组质粒pLUC107双酶切后可见约为271 bp的DNA片段,与理论值相一致.DNA测序证实含X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功.③干扰素对X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子转录活性的影响:与未经α-干扰素处理的含pLUC107的Lovo和Sw1116细胞的荧光素酶相对活性值比较,经α-干扰素处理后两种细胞的荧光素酶相对活性值均明显升高(P均 < 0.05),且升高幅度与α-干扰素呈剂量依赖性.结论:成功克隆出X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子片段,并利用荧光素酶报告基因证实α-干扰素可上调其转录活性.     

RNA干扰介导的核转录因子-κB抑制蛋白激酶α和γ基因沉默对核转录因子-κB信号通路调节作用的影响

目的 观察RNA干扰介导的核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)激酶(IKK)α和γ基因沉默对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调节作用,进一步阐明其基因调控机制.方法 设计IKKα及IKKγ靶向的小分子干扰RNA(siRNA),合成互补的寡核苷酸链,转染到RAW264.7小鼠巨噬细胞.观察经脂多糖(LPS)刺激后NF-κB的活化、IKKα及IKKγ基因表达的变化、NF-κB p65及p50核移位的变化以及前体蛋白NF-κB p105的表达情况.结果 IKKα及IKKγ基因沉默后,可导致IKKα及IKKγ基因表达出现明显下调,同时NF-κB p65及p50的核移位受到抑制,胞质、胞核中NF-κB p65、p50及p105的表达显著下调,而且能抑制NF-κB p65、p50及p105蛋白的核移位.结论 IKKα及IKKγ两种蛋白激酶参与NF-κB信号通路的调节,不仅能分别在抑制蛋白的泛肽化、组蛋白磷酸化等环节发挥作用,而且还能够通过相互之间的协同作用,弥补其中某种蛋白受到过度抑制时所引起的炎症信号通路的功能障碍.     

MDM2与恶性肿瘤关系的研究进展

随着分子生物学的快速发展,人们发现恶性肿瘤的发生、发展与多种因素有关,其中重要因素之一是癌基因和抑癌基因的异常表达.鼠双微体2（murine double minute2,MDM2）是到现在为止发现的最强的凋亡抑制因子之一,是一种与恶性肿瘤密切相关的癌基因[1],会出现在大多数的肿瘤组织中[2].它是一种泛素-蛋白连接酶,在自发转化的成纤维细胞和正常人体组织器官中均有表达,其编码的蛋白质可以与p53蛋白结合,负性调节p53蛋白,进而导致抑癌基因p53的失活,使细胞发生转化、增殖和恶变的能力增强[3].目前发现它的过度表达能够促进肿瘤的形成[4-9],并且启动子区域的单核苷酸多态性（SNP）也与肿瘤的发生与发展相关.MDM2基因的309位SNP位点（rs2279744, T /G）主要是G基因型,该基因的启动子P2会增强MDM2的转录活性,进而降低了p53的正常功能[10].     

p53结合蛋白对细胞周期阻滞与细胞凋亡调控的研究进展

p53基因是人体内重要的肿瘤抑制基因,位于人类染色体17p13．1,含有11个外显子,编码的野生型p53蛋白由393个氨基酸残基组成,包含N．末端的转录激活结构域、生长抑制结构域、序列特异的DNA结合结构域（DNAbindingdomain,DBD）、核定位信号（nuclearlocalizationsignal,NLS）、四聚体化结构域和c．末端非专一DNA调节结构域。p53在监视细胞基因组损伤及维持基因组的稳定性中发挥重要作用。当紫外线、电离辐射、氧化应激及癌基因表达等刺激因素引起细胞内DNA损伤时,p53蛋白迅速聚集活化,并作为序列特异性转录因子对一系列靶基因进行调控。     

C3H10T 1/2小鼠胚胎成纤维细胞Dlxin 1基因表达及骨形态发生蛋白2的调控机制

背景:Dlxin 1可与成骨相关转录因子Dlx、Msx家族成员相互作用调节其转录活性,骨形态发生蛋白2可诱导小鼠胚胎成纤维细胞(C3H10T 1/2)向成骨细胞分化.目的:对C3H10T 1/2小鼠胚胎成纤维细胞中Dlxin 1基因的表达及骨形态发生蛋白2调控机制进行初探.设计、时间及地点:细胞分子水平实验,于2007-03/10在暨南大学生物工程研究所实验室完成.材料:C3H10T 1/2细胞为ATCC产品,骨形态发生蛋白2为自产,DH5α为自备.方法:用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测骨形态发生蛋白2对基因表达的影响,用双荧光报告载体系统搜寻Dlxin 1的上游启动子元件,用凝胶迁移实验(EMSA)对其精确定位.主要观察指标:①细胞中Dlxin 1基因mRNA的表达情况.②pGL3-Dlxin 1系列缺失突变报告载体荧光活性及启动子片段与C3H10T 1/2细胞核蛋白的结合能力检测.结果:在转录水平上骨形态发生蛋白2可以诱导Dlxin 1基因表达上调;Dlxin 1启动子基础活性和骨形态发生蛋白2诱导活性调控区域均位于转录起始位点上游-943～-728 bp之间;EMSA证实,-758～-748 bp这一片段是调控核心区域.结论:转录因子通过与Dlxin 1启动子上游TATA box结合来调控Dlxin 1基因的转录.     

免疫组化染色法检测Ki67、P16和P63在不同宫颈病变组织中的表达

Ki-67是一种核增殖性基因,其表达蛋白属于非组蛋白抗原,可作用于除G0期以外所有的细胞周期阶段[1]。P16属于抑癌基因CDKN2A家族一员,通过阻断癌细胞由G1期进入S期从而抑制癌细胞的增殖。P63是抑癌基因P53家族一员,其转录产物主要为TAp63和△Np63,其中TAp63具有抑癌作用,而△Np63可调节细胞周期、细胞凋亡、增殖及细胞迁移[2]。研究表明[3],Ki67、P16和P63蛋白与宫颈病变的进展过程密切相关。本研究采用免疫组化染色法检测     

环状RNA与肿瘤关系研究进展

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种广泛存在于真核生物的非编码RNA,具有丰度高、结构稳定、高度保守及组织特异表达等性质。circRNA可作为微小RNA海绵、基因转录和表达的调控因子、RNA结合蛋白等,可能通过基因调控等功能与肿瘤发生、发展密切相关。本文就circRNA的起源、性质、功能及其与肿瘤关系的研究进展作一综述。     

CASP8AP2基因表达调控、功能与临床价值研究进展

我们系统总结了有关CASP8AP2基因的表达调控、生物学功能及其临床预后价值的研究报告。现有研究显示,CASP8AP2基因的表达受到同源盒蛋白和DNA甲基化的调控,miRNA-210能够使其表达沉默。CASP8AP2的生物学功能包括:参与FAS和TNFα介导的细胞凋亡、TNFα介导的NF-κB活化、糖皮质激素和盐皮质激素受体介导的基因转录调控、组成Cajal体和组蛋白位点体、复制依赖性组蛋白的转录和前体mRNA的3'端加工成熟、调控细胞周期S期进展,还能作为转录因子c-Myb、p73的辅助激活因子参与调控多种基因的转录。同时,CASP8AP2基因低表达与儿童ALL的复发相关;在儿童T-ALL和T淋巴母细胞淋巴瘤中,CASP8AP2基因的缺失较为常见,与患儿的较差预后相关。另外,在CASP8AP2基因序列中的3个单核苷酸多态性位点可能与弥漫性大B细胞淋巴瘤和白血病的发生有关。结论:CASP8AP2是一个多功能蛋白,具有调控细胞增殖、凋亡、基因表达等多种生物学功能,在儿童血液系统恶性肿瘤中,CASP8AP2基因还是一个有价值的预后标志物,部分单核苷酸多态性可能与白血病、淋巴瘤的发病相关。     

NF-κB在泌尿系肿瘤中的研究进展

核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)又称核转录因子,具有和某些基因上启动子区的固定核苷酸序列结合而启动基因转录的功能.在非激活条件下,NF-κB在大多数细胞类型的细胞浆内与其抑制蛋白IκB家族紧密结合而呈无活性状态.NF-κB在激活后,从细胞质进入细胞核参与调控多种基因的转录.大量研究表明,它可以被多种刺激剂,如TNF-α、IL-1、蛋白激酶C激活剂、脂多糖(LPS)等激活[1-2].NF-κB广泛存在于各种细胞中,通过调控细胞激酶、趋化因子、生长因子、细胞黏附因子及早期反应的蛋白质分子基因的转录而参与炎症和免疫反应、细胞凋亡、细胞增殖分化和迁移等病理生理过程[3].其持续活化可作为多种实体肿瘤的标志,现就其与泌尿系肿瘤关系的研究进展作一综述.     

P27kip1在恶性肿瘤中的调控及其作用

P27kip1蛋白属于细胞周期调控蛋白Cip/Kip家族,是细胞周期负性调控因子,在人体多种恶性肿瘤细胞增值、分化及细胞凋亡中起着非常重要的作用,因此与p27kip1蛋白相关的研究成为近年研究热点,目前认为,p27kip1基因是一种抑癌基因,细胞内的许多蛋白及因子可以在各种水平参与p27kip1基因表达的调控.现就p27kip1的生物学功能及在恶性肿瘤中的调控及其作用研究进展进行综述.     

运用染色质免疫沉淀技术分析基因表达转录调控方法的建立及初步应用

目的 建立一种染色质免疫沉淀技术（ChIP）分析肝细胞基因表达的转录调控方法.方法 以肝脏特异性基因磷酸烯醇式丙酮酸激酶（PEPCK）为待测基因,以IgG和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）及髓磷脂基础蛋白（MBP）作为内参基因,采用ChIP验证不同代谢状态下cAMP应答元件结合蛋白（CREB）对PEPCK基因启动子区的结合情况.结果 在抗CREB抗体免疫沉淀的DNA模板中含有一明显增强的DNA片段,即禁食状态下PEPCK基因启动子区域CREB的结合增加4倍,证明DNA片段中含有与PEPCK基因启动子区结合的CREB序列.结论 研究证实,CREB蛋白在体内可结合于PEPCK基因的启动子区域,并参与该基因表达的转录调控.     

AML1-ETO对p21 WAF1/CIP1启动子转录活性作用的研究

目的观察AML1-ETO融合基因对p21WAF1／CIP1基因启动子转录活性的影响，探讨AML1-ETO促进白血病发生的机制。方法构建p21WAF1／CIP1基因启动子的报告质粒，与AML1-ETO、AML1b和AML1a的表达质粒共转染非洲绿猴肾细胞系CV—1细胞，测定荧光素酶的活性，分析AML1-ETO、AML1b和AML1a对p21WAF1／CIP1基因启动子转录活性的影响。结果在CV—1细胞中，AML1-ETO对p21WAF1／CIP1基因启动子的转录具有明显的抑制作用，在pCMV5-AML1-ETO的剂量为1000ng时，p21WAF1／CIP1启动子的转录活性下降为对照组的（19±4）％，这种作用具有序列特异性和剂量依赖性；AML1b和AML1a对p21WAF1／CIP1基因启动子转录活性的抑制作用不明显，在剂量为1000ng时，p21WAF1／CIP1启动子的转录活性分别下降为对照组的（61±16）％和（594-16）％。结论AML1在与ETO形成融合基因后，其产物由于ETO蛋白能够更有效地募集转录共抑制复合物，其转录抑制活性要比AML1a和AML1b更强；外源的AML1-ETO对p21WAF1／CIP1的作用可能也与细胞系有关。