突触蛋白-I磷酸化在herkinorin减轻新生小鼠皮层神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用及其与cPKCγ的关系

目的评价突触蛋白-Ⅰ(synapsin-Ⅰ)磷酸化在herkinorin减轻新生小鼠神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用及其与经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)的关系。方法原代培养新生cPKCγ+/+和cPKCγ-/- C57BL/6J小鼠皮层神经元,培养7 d,采用随机数字表法,将2种神经元各分为3组(n=5):对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)和herkinorin组(H组)。采用氧糖剥夺1 h、复氧复糖24 h的方法制备氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型。H组于氧糖剥夺即刻加入herkinorin 10 μmol/L,孵育1 h,氧糖剥夺结束时洗脱。复氧复糖24 h时收集神经元,采用MTT法检测神经元存活率,采用免疫荧光染色法测定神经突起数量及树突长度。采用Western blot法检测神经元synapsin-Ⅰ和磷酸化synapsin-Ⅰ(p-synapsin-Ⅰ)的表达水平。结果与C组比较,OGD/R组和H组cPKCγ+/+小鼠和cPKCγ-/-小鼠神经元存活率降低,神经突起数量减少,树突长度缩短,神经元p-synapsin-Ⅰ表达下调(P<0.05);与OGD...     

施万细胞在糖尿病周围神经病变中的作用研究进展

糖尿病周围神经病变(DPN)是糖尿病常见的慢性并发症之一, 常导致脊神经、颅神经以及植物神经病变, 其中以糖尿病远端对称性多发性神经病变最具代表性, 包括双侧肢体疼痛、麻木和感觉异常等症状, 是引起糖尿病足溃疡(DFU)的主要原因之一。施万细胞是外周神经系统中主要的神经胶质细胞, 在神经损伤后的修复中起着至关重要的作用。施万细胞作为慢性高糖损伤的靶点细胞, 其功能包括形成髓鞘、分泌神经营养因子、对轴突进行能量供应和引导轴突再生等在高糖作用下遭到破坏, 从而抑制受损神经的修复, 加速DPN的进展。因此, 如能有效减轻高糖对施万细胞的损伤, 将会为DPN和DFU的治疗及降低DFU的发病率提供新的途径。该文重点就施万细胞的功能及其与DPN的关系进行综述。     

血管紧张素1-7对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制

目的 研究血管紧张素1-7（Ang 1-7）对高糖诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响及其可能机制。 方法 培养HK-2细胞分组如下：对照组（N组）、高糖组（H组）、高糖+Ang 1-7组（A组）、高糖+Ang 1-7+A779组（D组）、高糖+吡格列酮组（P组）。Western印迹检测各组HK-2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达;实时定量PCR检测HK-2细胞PPAR-γ及α-SMA的mRNA表达;免疫荧光检测α-SMA表达。 结果 Ang 1-7可上调高糖刺激下HK-2细胞PPAR-γ蛋白及mRNA表达（P < 0.05）;抑制高糖刺激的α-SMA蛋白及mRNA表达（P < 0.05）。这种作用与PPAR-γ激动剂吡格列酮类似。给予Mas受体抑制剂A779后,Ang 1-7的上述作用可被部分抑制。 结论 Ang 1-7在体外可通过上调PPAR-γ表达,从而部分抑制高糖诱导的α-SMA表达,实现其抑制转分化的作用,而这种作用部分通过Mas受体所介导。     

胰岛素样生长因子-1对猪关节软骨细胞糖胺多糖的作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对软骨细胞分泌糖胺多糖的作用。方法:通过Ⅱ型胶原酶消化法获得高活性的软骨细胞,定量接种5×106个细胞于培养皿,在传代细胞培养皿中加入100μg/L的IGF-1,每周传代1次,连续4周,留取培养液,用阿利新蓝法(Alcian Blue)测定软骨细胞糖胺多糖(GAG)的变化;利用光镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况。结果:软骨细胞从传代后开始合成糖胺多糖,第二代传代细胞分泌GAG的能力最强;浓度为100μg/ml的IGF-1能明显促进传代软骨细胞合成糖胺多糖。结论:IGF-1能明显促进体外培养的传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖。     

γ-干扰素与动脉粥样硬化的相关性研究进展

动脉粥样硬化是一种由于动脉内膜增厚、管腔狭窄或闭塞硬化而引起循环障碍的慢性疾病。近年来, 该病发病率呈逐年上升趋势。研究发现, 炎症反应参与动脉粥样硬化的不同病理过程。γ-干扰素(IFN-γ)作为重要的致炎因子, 其通过促进内皮细胞损伤、诱导泡沫细胞形成、促进斑块形成破裂等作用参与动脉粥样硬化的发生、发展。但有研究显示, γ-干扰素也可作用于脂质受体抑制泡沫细胞形成, 抑制平滑肌细胞增殖而对动脉粥样硬化起保护作用。本文就γ-干扰素在动脉粥样硬化发生、发展中的作用和研究进展进行综述。     

基于Wnt信号通路探讨七氟烷预处理对高糖培养心肌细胞损伤的影响

目的基于Wnt信号通路探讨七氟烷预处理对高糖培养心肌细胞损伤的影响。方法 H9c2大鼠心肌细胞随机分为对照组、贫氧组、七氟烷组、高糖+七氟烷组、高糖+七氟烷+XAV-939组, 对照组细胞采用正常糖浓度(5.56 mmol/L葡萄糖)培养基进行培养, 贫氧组细胞细胞采用在正常培养基中厌氧培养, 高糖组细胞贫氧处理后采用高糖(33 mmol/L)培养基进行培养, 高糖+七氟烷组细胞贫氧处理后采用含2.2%七氟烷的高糖培养基培养, 高糖+七氟烷+XAV-939组细胞贫氧处理后采用含2.2%七氟烷和1 μm XAV-939的高糖培养基培养。5组细胞处理12 h后, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒检测细胞活力;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析细胞凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞氧化应激指标;采用ROS试剂盒检测心肌细胞ROS水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路转录活性相关蛋白表达的影响。组间计量数据比较采用t检验。结果高糖+七氟烷组细胞活力(1.89±0.12)明显增加高糖组细胞(...     

几丁糖作为软骨细胞培养支架的实验研究

目的：探讨几丁糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。方法：采用几丁糖无纺网作为细胞培养支架,使用前首先用10%多聚赖氨酸包埋以增加其对软骨细胞的吸附性,然后把几丁糖支架与软骨细胞一起进行体外培养,在倒置显微镜下观察几丁糖对软骨细胞生长的影响。结果：包埋后的几丁糖支架与软骨细胞一起进行体外培养,在倒置显微镜下观察几丁糖对软骨细胞生长的影响。结果：包埋后的几丁糖支架与软骨细胞一起体外培养10d,软骨细胞数目增加约6倍,并且与几丁糖支架牢固结合不易丢失。结论：几个糖无纺网经10%多聚赖氨酸包埋后,对软骨细胞吸附性增强,并且几丁糖具有良好的生物学特性,因此几丁糖符合组织工程对细胞培养支架的要求。有可能成为组织工程中一种良好的细胞培养支架。     

不同培养条件下脂肪干细胞与软骨细胞共培养的研究

探讨病理状态下软骨细胞能否诱导脂肪干细胞(ADSC)向软骨细胞分化以及可能的最佳条件,以便为临床修复关节软骨损伤提供可能的新途径.[方法]分离共培养新西兰大白兔骨关节炎模型的ADSC和软骨细胞,根据不同血清浓度(10% FBS和2% FBS)和不同培养空间(纤维蛋白凝胶支架和无支架单层培养)分组,共培养14 d后,胰酶消化终止.倒置显微镜观察和透射电镜观察共培养后ADSC的形态变化.甲苯胺蓝染色法和免疫细胞化学检测共培养后ADSC的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达水平.RT-PCR检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录水平.[结果]共培养7 d后部分ADSC变圆,14d时ADSC形态高度分化与成熟软骨细胞相似,其蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录和蛋白表达均增高,尤以10%FBS支架共培养组最为明显.[结论]与病理状态下软骨细胞共培养后,ADSC可以被诱导成软骨样细胞.高浓度血清三维培养可以增强这种诱导作用.     

大鼠脂肪来源干细胞对紫外线造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用研究

目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式细胞仪检测其表面相关标记,行成骨及成脂诱导鉴定其多向分化潜能。另取SD大鼠关节软骨,利用酶消化法分离培养软骨细胞并传代,并行甲苯胺蓝染色鉴定。取第3代软骨细胞,采用40 J/m~2剂量紫外线照射;照射后细胞分别以正常培养基培养(照射组)、以含ADSCs培养上清的培养基培养(ADSCs上清组)或与ADSCs共培养(ADSCs组)24h。以不进行紫外线照射的正常第3代软骨细胞作为对照(对照组)。采用MTS法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色、Western blot法检测软骨细胞DNA损伤标志蛋白磷酸化组蛋白2A变异体(phosphorylatedhistone family 2A variant,γH2AX)的表达情况。结果经流式细胞仪检测及成骨、成脂诱导鉴定,所培养细胞为ADSCs。对照组、照射组及ADSCs上清组吸光度(A)值分别为2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06,照射组及ADSCs上清组显著低于对照组,照射组显著低于ADSCs上清组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫荧光染色示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显弱于照射组,ADSCs组和ADSCs上清组则无明显区别。Western blot法检测示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白相对表达量均明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组显著低于照射组,差异均有统计学意义(P0.05);ADSCs组和ADSCs上清组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠ADSCs有助于恢复紫外线照射后的软骨细胞的增殖,降低DNA损伤标志蛋白γH2AX的表达,对紫外线照射所致软骨细胞损伤具有修复作用。     

β淀粉样蛋白在缺氧/缺血性脑损伤中的作用研究

β淀粉样蛋白(Aβ)由β淀粉样前体蛋白在β-分泌酶和γ-分泌酶作用下产生。Aβ积累和聚集, 形成寡聚体和纤维, 并在大脑中沉积, 导致功能性神经元死亡、认知损伤。Aβ诱导炎性反应、氧化应激、自由基损伤、钙离子紊乱等造成神经细胞的坏死和凋亡。近期研究发现Aβ在缺氧/缺血性脑损伤中也发挥重要作用。本文综述Aβ在缺氧/缺血性脑损伤中的作用机制。     

自由基清除剂对氧自由基致人胚软骨细胞损伤的保护作用

本实验采用体外软骨细胞培养方法，观察了维生素Ｃ、维生素Ｅ、硒、超氧化物歧化酶等自由基清除剂对受黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶系自由基损伤人胚软骨细胞的保护作用。通过对软骨细胞合成ＤＮＡ，基质蛋白多糖及胶原能力的测量和超微结构改变的观察，作者认为上述自由基清除剂对黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶系自由基造成的人胚软骨细胞损伤无明显防御作用。     

关节软骨细胞力学特性研究近况

关节软骨细胞的力学特性是影响关节健康和功能的重要因素。对软骨细胞力学特性的深入研究将有助于了解软骨细胞在正常和病理条件下的调节情况,进一步为软骨损伤的修复提供新的方向。1简介关节软骨细胞通过生物学、力学及理化相互作用于软骨细胞外基质从而感知其力学环境。细胞外基质的成分包括胶原(主要是Ⅱ型胶原)和蛋白多糖。胶原纤维形成一个密集的交联网,提供主要的张力及剪切力。蛋白多糖含有硫酸角质素和硫酸软骨素糖胺多糖链,其富含带负电荷的羧基及硫酸基团。这些负电荷产生的互斥作用及渗透梯度导致组织内膨胀压的出现。这种膨胀压…     

软骨细胞在几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶中培养的实验研究

目的　探讨几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶体作为组织工程软骨细胞支架的可行性。方法　从一月龄兔关节表面削取软骨 ,经酶消化获得软骨细胞。按 0 .8× 10 6 / m L 细胞浓度分别接种于几丁糖凝胶 ,透明质酸钠凝胶 ,几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶。通过倒置显微镜观察细胞形态 ,描绘生长曲线 ,甲苯胺蓝染色 ,免疫组化 ,了解软骨细胞生长情况。结果　几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶能促进软骨细胞生长、增殖 ,维持软骨细胞表型表达 ,分泌 型胶原及葡萄糖胺上优于透明质酸钠及单纯几丁糖。结论　几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶能很好维持软骨细胞正常形态、功能和增殖能力。它可能是组织工程中一种良好的软骨细胞载体材料     

HDAC3在原代大鼠心肌细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用：与自噬的关系

目的评价组蛋白去乙酰化酶3 (HDAC3)在原代大鼠心肌细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用及其与自噬的关系。方法将1～3 d左右的新生SD乳鼠提取原代心肌细胞, 铺板。按随机数字表法分为5组(n=24):对照组(C组, 糖浓度5.5 mmol/L)、缺氧复氧组(H/R组)、高糖组(H组, 糖浓度30 mmol/L)、高糖缺氧复氧组(HH/R组)和高糖缺氧复氧+HDAC3抑制剂RGFP966组(HH/R+RG组)。采用50%葡萄糖注射液制备高糖培养基(终浓度为30 mmol/L)。H/R组细胞置于低氧环境(5%CO2-0.9%O2-94.1%N2)中培养6 h, 再置于常氧环境中复氧2 h制备心肌细胞缺氧复氧模型。HH/R+RG组于缺氧复氧前24 h加入RGFP966, 终浓度10 μmol/L。于细胞复氧2 h时, 采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清LDH活性;自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染下共聚焦显微镜检测细胞自噬水平;Western blot法检测心肌细胞HDAC3、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达, 计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与C组比较, H/...     

软骨细胞周基质对软骨细胞作用的研究进展

软骨细胞周基质(pericellular matrix,PCM)是软骨细胞周围的狭窄基质条带, 与其包绕的软骨细胞共同组成软骨单位。大量研究表明PCM富含蛋白多糖、胶原蛋白和纤维蛋白, 且在调节软骨细胞代谢微环境方面发挥着重要作用。用微管吮吸技术直接检测软骨单位发现, PCM与软骨细胞和软骨细胞外基质的力学特性明显不同。然而, 关于PCM的功能还不是十分明确, 仍需进一步研究。     

电针对骨关节炎软骨细胞外基质调节机制探讨

软骨细胞外基质主要包括胶原、蛋白多糖、水,软骨细胞外基质成分的过度丢失对骨关节炎的病理进展有着重要的作用,调控软骨细胞外基质的过度丢失可以起到保护软骨、促进软骨修复、维护正常的关节生物学特性的作用。通过查阅国内外相关文献,综合、分析、归纳电针治疗骨关节炎的作用机制,发现电针通过调节基质金属蛋白酶、炎症因子、碱性成纤维生长因子抑制软骨细胞外基质过度丢失,从而延缓软骨衰变。     

褪黑素调控足细胞昼夜节律介导的自噬在糖尿病肾病中的作用

目的探讨体外高糖环境和糖尿病肾病小鼠模型足细胞昼夜节律的变化, 以及褪黑素改善糖尿病肾病足细胞损伤的作用机制。方法体外培养原代足细胞并将其分为对照组、高糖(30 mmol/L)组和高糖(30 mmol/L)+褪黑素(0.1 mmol/L或0.5 mmol/L)组。地塞米松(100 nmol/L)作用足细胞2 h, 记为授时因子时间0点, 每4 h收获细胞, 持续24 h。6～8周龄体重20 g左右雄性C57BL/6J小鼠被随机(区组随机分组)分为对照组、糖尿病肾病(高脂饮食+尾静脉注射120 mg/kg链脲菌素)组和糖尿病肾病(高脂饮食+尾静脉注射120 mg/kg链脲菌素)+褪黑素(20 mg/kg灌胃)治疗组(褪黑素组)。采用实时荧光定量PCR法检测足细胞生物钟基因的mRNA表达量。Western印迹法检测生物钟基因蛋白Clock、Bmal1, 足细胞标志蛋白Nephrin、Synaptopodin、WT1、Desmin, 以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达量;免疫荧光染色法检测小鼠肾组织WT1蛋白表达;免疫组化法检测小鼠肾组织P62和Cleaved-c...     

替米沙坦对高糖刺激下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体的影响及其机制探讨

目的观察替米沙坦对高糖刺激下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体1/2(AdipoR1/2)表达的影响并探讨其机制。方法体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E),同步化后分为6组:正常对照组(5. 5 mmol/L葡萄糖培养基培养,24h),高渗对照组(5. 5 mmol/L葡萄糖培养基+19. 5 mmol/L甘露醇处理,24h),高糖组(25 mmol/L葡萄糖培养基培养,分别作用12、24、48、72h),高糖+替米沙坦组[25 mmol/L葡萄糖+(1、10、100 nmol/L)替米沙坦处理,刺激24h],高糖+替米沙坦+GW9662组(预先用5 000 nmol/L PPARγ阻断剂GW9662处理30 min,再加入25 mmol/L葡萄糖和100 nmol/L替米沙坦刺激24h),高糖+GW9662组(预先用5 000nmol/L PPARγ阻断剂GW9662处理30 min,再用25 mmol/L葡萄糖刺激24h)。采用RT-PCR分别检测AdipoR1/2和PPAR-γmRNA的表达,采用Western blot法检测AdipoR1/2和PPAR-γ蛋白表达。结果在高糖刺激情况下,随着刺激时间的延长,AdipoR1/2和PPAR-γmRNA的表达均有先增高后降低的趋势,高糖刺激24h时升高达到最高点,和正常对照组相比有统计学意义(P 0. 05);替米沙坦可明显提高AdipoR1/2和PPAR-γ的mRNA和蛋白表达(P 0. 05),其增强作用均在替米沙坦浓度为100 nmol/L时达到最大值(P 0. 05),在替米沙坦处理的同时加入选择性不可逆性PPAR-γ阻断剂GW9662可显著降低AdipoR1/2和PPAR-γ的mRNA和蛋白表达(P 0. 05)。结论高糖环境下,替米沙坦可促进大鼠近端肾小管上皮细胞AdipoR1/2的表达,其作用可能是通过激活PPAR-γ途径来介导的。     

SIRT3过表达对高糖小鼠海马神经元缺氧复氧损伤的影响：与SOD2的关系

目的评价沉默信息调节因子3(SIRT3)过表达对高糖小鼠海马神经元缺氧复氧损伤的影响及其与超氧化物歧化酶2(SOD2)的关系。方法将正常培养的对数期HT22小鼠海马神经元, 采用随机数字表法分为3组(n=12):高糖常氧组(HG组)、高糖+缺氧复氧组(HHR组)、高糖+缺氧复氧+SIRT3过表达组(HHR+SIRT3组)。3组神经元均在高糖培养基(葡萄糖浓度为50 mmol/L)中培养8 h建立高糖模型。HHR组和HHR+SIRT3组置于无糖缺氧环境中培养6 h后换高糖常氧培养24 h制备高糖缺氧复氧模型, HHR+SIRT3组转染SIRT3过表达慢病毒。采用CCK-8法检测神经元活力, 流式细胞仪检测活性氧(ROS)含量, 比色法测定线粒体MDA含量、SOD、过氧化氢酶(CAT)活性和ATP含量, JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP), Western blot法检测核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)、SIRT3、SOD2以及乙酰化SOD2(ac-SOD2)的表达。结果与HG组比较, HHR组和HHR+SIRT3组神经元活力、SOD、CAT活性、ATP含量、MM...     

细胞因子与软骨损伤及修复研究进展

骨性关节炎(OA)发病中存在软骨细胞数量减少和软骨基质破坏,软骨损伤和修复贯穿于OA全过程,各种细胞因子起着重要的作用.白介素、肿瘤坏死因子-α、白血病抑制因子、趋化因子等细胞因子对软骨细胞的作用多呈损伤性,骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子和生长分化因子-5等生长因子对软骨细胞的作用多呈修复性.细胞因子的作用并非单一作用,而是存在于一个复杂的调节网络之中.目前对这些细胞因子在软骨损伤与修复中的作用研究已取得一定的进展.