毛蕊异黄酮对人诱导多能干细胞内皮分化的影响及机制

背景：内皮损伤是心血管疾病的诱因之一，人诱导多能干细胞易于获得、分化能力强、排异性较小，其内皮分化细胞可被用作心血管疾病研究的理想细胞。目的：探讨毛蕊异黄酮对人诱导多能干细胞定向内皮分化的作用及机制，为微血管再生提供技术支持。方法：将人诱导多能干细胞分为对照组与毛蕊异黄酮1.25,2.5μg/mL组，进行内皮定向诱导分化。诱导分化8 d后，采用流式细胞术检测各组细胞内皮细胞标志物CD144阳性率，免疫荧光技术检测CD144、CD31荧光表达。利用慢病毒RNAi-GFP puromycin沉默人诱导多能干细胞Piezo1 mRNA，再进行内皮定向诱导分化，诱导分化8 d后，采用流式细胞术检测分化细胞CD144阳性率，qPCR检测CD144、Piezo1、MEK的mRNA表达水平。结果与结论：(1)与对照组相比，毛蕊异黄酮1.25,2.5μg/mL组CD144阳性率显著升高(P <0.05)；毛蕊异黄酮2.5μg/mL组CD144、Piezo1、MEK mRNA表达水平提高(P <0.05)；毛蕊异黄酮2.5μg/mL组CD144(P <0.01)和CD31(P <...     

HJURP基因表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖凋亡作用的研究

目的研究HJURP基因的表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用CCK8法、Annexin V-EGFP/PI双染法、TUNEL法、Trans Well迁移侵袭实验等方法研究HJURP表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 HUJRP基因表达下调后,与对照组比较,明显抑制胚胎绒毛细胞的增殖及迁移侵袭能力。胚胎绒毛细胞的凋亡率为9.87±1.92%增加至,明显高于NS组3.92±1.12%(P0.01)。对细胞周期的影响表现为G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞从42.9±3.12%增加至62.4±1.92%。Trans Well侵袭实验结果显示,实验组穿过Trans Well膜的数目明显少于对照组。结论 HJURP基因的表达下调可以导致人胚胎绒毛细胞增殖抑制,诱导人胚胎绒毛细胞凋亡,使人胚胎绒毛细胞周期阻滞于G0/G1期,推测HJURP基因表达下调与人胚胎自然流产有相关性。     

光动力疗法对人乳腺癌MCF-7细胞增殖凋亡的影响

目的 研究光动力疗法（PDT）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响和诱导凋亡的作用.方法 癌光啉（PSD-007）与细胞共同孵育2h后,以不同能量635 nm激光照射,通过噻唑蓝（MTT）比色法测定PDT后不同时间（0.5、1、3、6、12、24h）细胞的光密度（0D）值及存活率.DAPI染色观察PDT后不同时间细胞凋亡中细胞核形态学的改变.Annexin-V/PI双染法结合流式细胞术分析细胞凋亡率的变化.结果 PDT对MCF-7细胞的增殖有抑制作用,且随着PDT光照能量的提高而增强,PDT作用后细胞存活率随时间延长而逐渐降低.细胞形态学观察结果表明,MCF-7细胞呈典型的凋亡形态特征.Annexin-V/PI双染也证实PDT可以诱导细胞凋亡,且凋亡率随PDT作用后时间的延长而升高.结论 PDT能显著抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡,且其诱导肿瘤细胞的凋亡是一渐进性的过程,具有光照剂量和时间效应关系.     

mTOR在乳腺癌中的表达及其抑制剂对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用

目的：探讨mTOR在乳腺癌中的表达及其抑制剂CCI-779对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。方法采用免疫组化SP法检测mTOR蛋白在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达;MTT法检测mTOR抑制剂CCI-779对MDA-MB-231细胞增殖的影响;应用AnnexinV-FITC/PI法检测CCI-779对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。结果 mTOR蛋白在71例乳腺癌组织中的阳性率为54.9%,明显高于32例癌旁组织(阳性率为21.9%);MDA-MB-231细胞中亦存在mTOR蛋白的表达;mTOR抑制剂CCI-779对MDA-MB-231细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性;但CCI-779并不能诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡。结论 mTOR与乳腺癌关系密切,其抑制剂CCI-779具有较强的抗MDA-MB-231细胞活性,有望成为乳腺癌治疗的前景药物。     

苦参碱联合阿霉素对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨苦参碱(MA)对阿霉素(ADM)抗肿瘤作用的影响,以期为乳腺癌的治疗提供新的靶点.方法:MTT法分别检测不同浓度(0,0.125,0.25,0.5,1.0,2 g/L) MA、不同浓度(0,0.625,1.25,2.5,5,10 mg/L) ADM以及ADM(0.4 mg/L)与MA(0.5 g/L)合用对乳腺癌细胞株MCF -7的增殖抑制作用.溴化丙啶(PI)单染检测MA(0.5 g/L)联合ADM(0.4 mg/L)诱导MCF -7细胞凋亡的影响.结果:随着药物作用时间以及药物浓度的增加,MA、ADM以及两种合用对MCF -7细胞增殖的抑制作用逐渐增强.0.5 g,/LMA诱导MCF -7细胞凋亡率低,仅为12.58％,0.4 mg/LADM诱导MCF -7细胞凋亡率为35.12％;而0.5 g/LMA与0.4ng/LADM联合使用诱导MCF -7细胞凋亡率为68.11％,明显高于ADM或MA单独使用.结论:MA、ADM及二者联用对MCF -7细胞的增殖抑制作用具有时间依赖性和剂量依赖性.MA本身诱导MCF -7细胞凋亡率低,但它能增加ADM诱导MCF -7细胞的凋亡率.MA可作为抗癌药的化疗增敏剂.     

红景天甙对人胃癌细胞增殖及凋亡影响的研究

目的:探讨红景天甙对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响及其初步作用机制。方法:不同浓度的红景天甙干预处理胃癌细胞,CCK-8法检测红景天甙对胃癌细胞增殖的影响; Annexin-V/PI流式细胞术检测胃癌细胞凋亡的变化;荧光显微镜观察Hoechst染色后胃癌细胞凋亡形态及核染色质固缩变化情况;流式细胞仪检测红景天甙对胃癌细胞周期的影响; qRT-PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax凋亡基因表达; Transwell实验观察胃癌细胞体外侵袭能力的变化。结果:红景天甙显著抑制胃癌细胞增殖,并呈浓度依赖性;明显促进胃癌细胞凋亡发生,引起核染色质固缩,抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl表达下调,促进凋亡基因Bax表达;阻滞胃癌细胞于G2/M期;明显抑制胃癌细胞的迁徙。结论:红景天甙明显抑制胃癌细胞的增殖并通过Bcl/Bax信号通路诱导其凋亡,提示了中药红景天甙对临床胃癌患者的潜在治疗效应。     

HSP90在乳腺癌细胞增殖中的作用与机制研究

目的： 应用热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂格尔德霉素(GA)研究HSP90在乳腺癌细胞增殖中的作用，进而探讨相关机制。方法: 培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s，采用MTT法检测GA对MDA-MB-435s细胞的生长抑制作用，流式细胞术分析细胞周期，应用Western免疫印迹法检测细胞内Stat3磷酸化状态和突变型p53表达变化。结果: 不同浓度GA对乳腺癌MDA-MB-435s细胞有生长抑制作用，呈时效量效依赖关系，GA作用后细胞呈现G2/M期阻滞。400 nmol/L GA作用48h后，细胞内Stat3磷酸化水平明显低于对照组，同时突变型p53表达明显低于对照组。结论: 抑制HSP90功能可明显抑制乳腺癌MDA-MB-435s细胞的增殖，此与下调细胞内Stat3磷酸化水平和突变型p53表达有关。     

IGFBP7对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的: 探究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法: 将质粒pCMV6-IGFBP7转染MCF-7细胞,构建稳定表达IGFBP7的MCF-7细胞系;采用Western blotting检测IGFBP7在MCF-7细胞稳定转染子的表达;采用软琼脂培养克隆形成实验检测IGFBP7对MCF-7细胞克隆形成能力的影响;采用流式细胞术检测IGFBP7对MCF-7细胞周期的影响;采用Western blotting检测IGFBP7对MCF-7细胞细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)、cyclin E、CDK2、p21^CIP1/WAF1、p27^KIP1、p53、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)和p-Rb蛋白含量的影响。结果: (1)只有稳定转染质粒pCMV6-IGFBP7的MCF-7细胞表达IGFBP7。(2)IGFBP7能够显著降低MCF-7细胞的克隆形成率(P<0.01),阻止细胞从G₁期进入S 期,使其停滞于G₁期(P<0.01)。(3)IGFBP7能够显著抑制ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。(4)IGFBP7能够下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达(P<0.01),上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达(P<0.01),抑制Rb的磷酸化(P<0.01)。(5)MEK1/2阻断剂PD98059可部分模拟IGFBP7的肿瘤抑制效应。结论: (1) IGFBP7可通过下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达,上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达,以及抑制Rb磷酸化发挥抗肿瘤作用;(2) IGFBP7对cyclin D1和p27^KIP1的调节可能与其抑制ERK1/2信号通路有关。     

PKM2 影响鼻咽癌细胞增殖凋亡及机制研究

目的：探讨PKM2对鼻咽癌细胞增殖凋亡的影响。方法：鼻咽癌细胞CNE-1转染PKM2小干扰RNA（PKM2-siRNA1和PKM2-siRNA2）和阴性对照（siRNA control）,荧光定量PCR和Western blot检测细胞中PKM2水平,筛选干扰效果好的PKM2 siRNA2继续研究。噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,细胞克隆试验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧（ROS）水平,Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）、C-myc、β-连环蛋白（β-catenin）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白水平。结果：细胞转染PKM2 siRNA1和PKM2 siRNA2后PKM2 mRNA和蛋白水平与没有转染的细胞相比均明显下降,并且转染PKM2 siRNA2后细胞中PKM2水平下降更多,而转染siRNA control的细胞中PKM2水平与没有转染的细胞相比没有明显变化。下调PKM2表达后的细胞凋亡率由（9.36±1.04）%升高至（48.42±5.28）%,细胞克隆形成率从（75.48±8.25）%降低至（46.15±3.47）%,细胞OD值从（0.86±0.11）下降至（0.52±0.04）,细胞中ROS水平升高,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平也明显升高,细胞中C-myc、β-catenin水平明显下降。结论：PKM2表达下调抑制鼻咽癌细胞生长,促进鼻咽癌细胞凋亡,作用机制可能与p38MAPK和Wnt/β-catenin信号通路有关。     

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

 目的:探究沉默Jagged 1 (JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:
用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞, 采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G 0/G 1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。     

circFoxo3表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡和转移的作用机制研究

目的 研究环状RNA叉头盒O3(circFoxo3)对卵巢癌细胞增殖、凋亡和转移能力的影响,并探讨其发挥作用的可能机制.方法 常规培养卵巢癌细胞系CoC1、SKOV3、CAOV4和正常卵巢上皮细胞IOSE80,qRT-PCR检测circFoxo3在卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中的表达水平.选择高表达circFoxo3...     

低频超声联合紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究低频超声和紫杉醇联合应用对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响以及其可能机制。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,随机分为4组:对照组、低频超声组、紫杉醇组和低频超声+紫杉醇组。低2频超声组为超声840k Hz,0.75W/cm×3min辐照;紫杉醇组为药物浓度为10nmol/L培养24h;联合组叠加处理因素。应用CCK-8检测细胞增殖,应用流式细胞仪和凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡,应用流式细胞仪和ROS试剂盒检测各组细胞ROS水平,应用Western Blot实验检测凋亡相关蛋白表达。结果单独应用低频超声或紫杉醇均能抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡,升高细胞内活性氧水平,增加凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、cleaved caspase-2、Bax)的表达水平,降低Bcl-2的表达水平。与单独应用组相比,低频超声和紫杉醇联合,显著增强了上述作用。结论低频超声和紫杉醇联合作用,极大增强了抑制MCF-7细胞增殖,诱发其凋亡的作用,其作用可能和线粒体凋亡途径相关。     

毛蕊花糖苷对内毒素性休克大鼠脑组织保护作用及对凋亡的影响

目的探讨毛蕊花糖苷对内毒素性休克大鼠的脑保护作用及其作用机制。方法将SPF级SD大鼠60只,体重200-250 g,随机分为假手术组、内毒素性休克组、毛蕊花糖苷低剂量组、毛蕊花糖苷中剂量组、毛蕊花糖苷高剂量组,每组12只。尾静脉注射5 mg/kg脂多糖(LPS)制备大鼠内毒素性休克模型,治疗组于造模前灌胃给药30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg,分别于感染性休克发生后12 h及24 h处死大鼠。HE染色观察大鼠脑组织病理变化;检测脑组织含水量变化;检测脑组织中IL-1β, IL-6, TNF-α及IL-10水平;TUNEL法检测大鼠脑内细胞凋亡情况;Western Blot法检测各组大鼠脑组织中Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达水平。结果与LPS组相比,毛蕊花糖苷中、高剂量组大鼠脑组织炎性细胞浸润及细胞排列结构明显改善;脑组织含水量明显降低;脑组织IL-10水平升高,IL-1β, IL-6及TNF-α水平降低;神经细胞凋亡数量明显减少;凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,且呈剂量依赖性。结论毛蕊花糖苷对内毒素性休克大鼠具有一定的脑保护作用,可能与其抗炎抗凋亡作用相关。     

芹菜素诱导人胃癌细胞凋亡作用及机制研究

目的：研究芹菜素（apigenin, API）致人胃癌细胞凋亡作用及其机制。方法：培养人胃癌BGC823细胞株，加入不同浓度的API，孵育48 h。PI染色流式细胞术（FCM）分析测定凋亡率；罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm)；Caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性；Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达，包括bax，bcl-2，caspase-9和caspase-3。结果： API（20，40和80 μg/mL）作用48 h能呈浓度依赖性地诱导BGC823细胞凋亡。而且，API也能降低BGC823细胞的Δψm，增加caspase-9活性，促进细胞色素c（Cyt c）释放，上调bax，caspase-9和caspase-3蛋白的表达，同时下调bcl-2蛋白表达，且呈剂量依赖性。结论：API通过活化线粒体信号转导途径诱导人胃癌细胞凋亡。     

CSN6对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察COP9信号复合体(COP9 signalosome,CSN)6号亚单位(CSN6)对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响。方法应用Western blot检测CSN6和PTEN蛋白表达,MTT法及划痕损伤实验检测转染CSN6及磷酸酶基因(PTEN)质粒的细胞增殖生长的情况。结果 MCF-7细胞转染shRNA-CSN6,在CSN6蛋白表达降低的同时,PTEN的表达增高。乳腺癌细胞MDA-MB-468细胞在转染PTEN后,其增殖受到抑制,而转染CSN6后,能够逆转PTEN的抑制作用,促进细胞生长。结论 CSN6有可能通过降解PTEN而引起乳腺癌细胞的增殖生长。     

不同浓度腐胺对人肝细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对体外培养人正常肝细胞增殖、凋亡的影响。方法将体外培养的人正常肝细胞株LO2分为腐胺组与对照组,不同浓度腐胺组以含腐胺浓度分别为0.25、0.50、1.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00、640.00μg/mL完全培养基培养细胞,对照组以不添加腐胺完全培养基培养细胞。对照组与不同浓度腐胺组处理的LO2细胞培养12 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS）、流式细胞技术（FCM）分别测定细胞的增殖活性（用吸光度值表示）与凋亡率,并对两组数据进行相关性分析。结果 MTS结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00μg/mL浓度腐胺组LO2细胞吸光度值均较对照组（0.474±0.022）升高,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且1.00μg/mL浓度时达到峰值（0.834±0.012）;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞吸光度值较对照组降低,差异有统计学意义（P均〈0.01）;40.00μg/mL腐胺组LO2细胞吸光度值（0.477±0.009）与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。流式细胞技术结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00μg/mL浓度腐胺组LO2细胞凋亡率均较对照组（15.23±1.82）%降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且1.00μg/mL腐胺组细胞凋亡率达到最低值（2.30±1.00）%;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞凋亡率较对照组升高,差异有统计学意义（P均〈0.01）;40.00μg/mL腐胺组LO2细胞凋亡率（16.10±1.45）%与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。相关性分析结果显示,各组浓度腐胺处理LO2细胞其细胞增殖与凋亡率呈负线性相关关系（r=-0.989,P=0.000）。结论低浓度（0.25-20.00μg/mL）腐胺对人正常肝LO2细胞增殖有促进作用,而较高浓度（80.00μg/mL及以上）的腐胺则出现明显的诱导凋亡作用,低浓度腐胺促进细胞增殖可能是通过抑制细胞凋亡而实现。     

CXCL1促进乳腺癌细胞增殖和迁移及其作用机制的研究

目的体外研究CXCL1对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取人乳腺癌细胞进行分组处理:空白对照组、CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体组,用CCK8、克隆形成实验、流式凋亡、细胞划痕及Transwell迁移实验分别对各组细胞增殖活性、凋亡率、迁移侵袭能力进行检测,并用ELISA法对各组细胞内MMP-9蛋白、磷酸化AKT及活化NF-κB水平进行检测。结果 CCK8与克隆形成实验结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞增殖活性提高,细胞克隆形成率增加(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞增殖活性降低,细胞克隆形成率降低(P0.05);流式凋亡检测结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞凋亡率降低(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞凋亡率增高(P0.05);细胞划痕、Transwell迁移实验及细胞内MMP-9蛋白表达水平表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞迁移侵袭能力增强(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞迁移侵袭能力减弱(P0.05);细胞内p AKT/NF-κB蛋白检测表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平升高(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平降低(P0.05)。结论 CXCL1通过与CXCR2结合促进乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭,其机制可能是激活了AKT/NF-κB信号转导通路。     

毛蕊异黄酮防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究

目的复制去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,观察不同剂量的毛蕊异黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用。方法 50只SD雌性大鼠,随机分成五组：设一假手术组;腹腔手术切除大鼠双侧卵巢,分为阴性对照组、毛蕊异黄酮低、高剂量组和雌激素对照组,分别给予标准饲料和不同剂量受试物,12周后进行骨密度、骨组织形态计量、生物力学测定,与雌激素对照,观察给与毛蕊异黄酮对绝经后骨质疏松的防治作用。结果大鼠去卵巢后骨密度显著下降,股骨的力学性能有较大变化,弯曲强度和弯曲弹性模量明显降低。给予毛蕊异黄酮后,可使骨密度显著提高（P〈0.01）,存在一定的剂量-效应关系,同时弯曲强度和弯曲弹性模量明显增加,但均低于雌激素对照组。结论通过去卵巢手术,成功建立绝经后骨质疏松动物模型;毛蕊异黄酮对去卵巢大鼠具有显著的骨保护效应,并存在一定的剂量效应关系,其作用弱于雌激素。