消癌平注射液下调MMP-9基因表达抑制卵巢癌细胞Caov-3迁移机制的研究

  目的  研究中药消癌平注射液下调MMP-9基因表达, 抑制卵巢癌细胞Caov-3迁移的机制。  方法  利用消癌平注射液干预体外培养的卵巢癌Caov-3细胞, 分别应用: 细胞划痕实验观察细胞的迁移水平; 肿瘤细胞侵袭实验(Transwell 小室法)观察细胞侵袭能力; RT-PCR实验检测卵巢癌细胞中金属蛋白酶MMP-9基因表达水平。以金属蛋白酶MMPs特异性抑制剂-Doxycyclin作为阳性对照, 同时应用PBS作空白对照。  结果  消癌平可有效抑制Caov-3细胞迁移, 与空白对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05), 但与Doxycyclin组差异无统计学意义(P > 0.05);消癌平还可部分抑制血清诱导的Caov-3细胞穿过Transwell小室, 其抑制效果与Doxycyclin相似; 此外, 消癌平还能够下调MMP-9基因表达水平。  结论  消癌平下调MMP-9基因表达, 抑制卵巢癌Caov-3细胞迁移。      

MMP-9和MMP-2基因多态性与原发性肝癌侵袭转移的关系

目的探讨原发性肝癌中MMP-9和MMP-2基因多态性表达与原发性肝癌侵袭转移的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术,检测MMP-2和MMP-9启动子基因型在28例原发性肝癌患者（其中8例有转移）和42例健康者中的频率。结果与携带MMP-9－1562CC和CT基因型相比,携带MMP-9－1562TT基因型者早期发生侵袭转移的风险增加1.25倍（95％CI：3.64~5.69）,且这种风险增高与研究对象的年龄和性别无关,同时携带MMP-9－1562TT和MMP-2 -1306CC或CT基因型的个体,患肝癌的风险性较单一携带的个体显著增高（P<0.5）。结论MMP-2 -1306T/C多态性单独与原发性肝癌风险无关,但与MMP-9－1562C/T多态性可能有基因-基因交互作用。MMP-2和MMP-9基因多态性与原发性肝癌侵袭转移可能相关。     

TACE对肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达及其预后的影响

目的 探讨TACE对肝癌MMP-2、MMP-9的表达及预后的影响.方法 选取肝癌患者80例,随机分为两组,分别为术前TACE组、直接手术组.采用酶联免疫吸附法检测两组患者术前静脉血中MMP-2、MMP-9的水平;采用免疫组织化学法检测两组患者术中所取肝癌及癌旁组织中MMP-2、MMP-9的表达;比较两组患者术后1、2、3年的生存情况,并分析其影响因素.结果 直接手术组患者血液中MMP-2、MMP-9水平明显高于术前TACE组患者,差异有统计学意义(P<0.05);两组肝癌组织中MMP-2、MMP-9表达阳性率均较癌旁组织高,且直接手术组肝癌组织中MMP-2、MMP-9的阳性率明显高于术前TACE组,差异有统计学意义(P<0.05);术前TACE组1、2、3年生存率及中位生存期明显优于直接手术组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9表达、门静脉癌栓、行TACE术均是影响患者生存期的因素(P<0.05);与患者性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肿瘤数目无关(P>0.05).结论 TACE术能够降低肝癌患者血液及组织中MMP-2、MMP-9的表达,延长患者术后生存期,且患者生存期的长短受Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、出现门静脉癌栓以及行TACE术的影响,MMP-2、MMP-9可能成为评价肝癌治疗效果及预后的新的指标.     

原发性肝癌组织中MMP-9、p53的表达

目的探讨原发性肝癌组织中基质金属蛋白酶-9(MMP_9)和p53蛋白的表达以及其与临床病理之间的关系。方法应用免疫组织化学法检测74例原发性肝癌组织中MMP_9、p53蛋白表达情况及微血管密度(MVD),并结合临床病理参数进行综合分析。结果MMP_9、p53的表达与原发性肝癌组织MVD、肿瘤大小、侵袭行为(血管侵犯情况和肿瘤包膜)等显著相关(P<0·05)。结论MMP_9、p53在原发性肝癌肿瘤血管形成、恶性进展和浸润、转移等方面起着重要作用。检测原发性肝癌组织中MMP_9、p53的表达对进一步了解原发性肝癌细胞的生物学行为、临床表现和判断预后具有重要价值。     

七氟烷对乳腺癌BT549细胞侵袭、迁移及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:探讨七氟烷对乳腺癌BT549细胞侵袭、迁移及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法:乳腺癌BT549细胞用七氟烷处理后,细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭,Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:七氟烷处理后的BT549细胞迁移率由（36.45±3.21）%降低至（14.68±1.52）%,侵袭细胞数目由（136.58±13.36）个减少到（79.95±14.25）个,MMP-2水平由0.48±0.04减少为0.14±0.03,MMP-9水平由0.96±0.07减少为0.22±0.05,两组比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:七氟烷能够抑制乳腺癌BT549细胞迁移和侵袭,降低细胞中MMP-2、MMP-9表达水平。     

HOXA9基因抑制肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的实验研究

目的：探讨同源盒基因HOXA9对肝细胞肝癌细胞株HepG2迁移与侵袭能力的影响。方法：采用EndoFectinTM -Max转染试剂将HOXA9基因真核表达载体及其空载体转染至HepG2细胞,并应用脂质体法转染HOXA9 siRNA序列及阴性对照序列,采用实时荧光定量PCR（ Real-time PCR）及Western blot方法检测转染后HOXA9的mRNA和蛋白表达水平。以划痕实验和Transwell方法检测转染后细胞的迁移和侵袭能力。结果：在肝癌细胞HepG2中瞬时转染HOXA9真核表达载体后,其mRNA和蛋白表达明显增加,划痕实验检测发现48h细胞愈合率明显抑制,Transwell实验发现迁移和侵袭至下室的细胞数目明显减少;而转染HOXA9 siRNA序列后,HepG2细胞中HOXA9 mRNA及蛋白表达明显下调,划痕实验显示48h划痕愈合率增加,Tran-swell实验显示迁移和侵袭至下室的细胞数目明显增多。结论：HOXA9基因对肝癌细胞HepG2的迁移和侵袭能力有明显抑制作用,为进一步研究HOXA9在肝细胞肝癌发生和进展中的作用奠定了基础。     

TGF-β1可通过ERK信号通路调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）/丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）通路在调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达中的作用。方法 以MKN45和BGC823胃癌细胞系为研究对象。明胶酶谱法检测TGF-β1对各细胞MMP-2和MMP-9表达的影响,Western蛋白印迹检测在TGF-β1作用下各细胞中MAPK（P38、JNK、ERK）的活化情况。用相应MAPK通路的特异抑制剂对TGF-β1调节各细胞MMP-2和MMP-9的表达进行阻断研究。结果 TGF-β1可上调MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达;TGF-β1可诱导BGC823细胞P38、MKN45和BGC823细胞ERK及JNK的活化;ERK特异抑制剂PD98059可明显抑制TGF-β1诱导MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达,但P38特异抑制剂SB203580和JNK特异抑制剂SP600125对TGF-β1诱导这两种细胞MMP-2和MMP-9的表达无明显影响。结论 TGF-β1可通过活化ERK信号通路上调MKN45和BGC823胃癌细胞 MMP-2和MMP-9的表达。     

MMP-2和MMP-9在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的　观察非小细胞肺癌 (NSCLC)标本中基质金属蛋白酶MMP 2和MMP 9的表达 ,以探讨其在NSCLC中表达的意义 ,为临床的诊断、治疗和预后的判断提供参考。方法　用免疫组织化学方法 ,研究比较 40例NSCLC组织 ,3 2例癌旁组织和 10例正常或良性肺病组织中MMP 2和MMP 9的表达。结果　①NSCLC患者肿瘤组织中的MMP 2和MMP 9的阳性率 ( 90 %和 83 % )较癌旁组织 ( 2 2 %和 13 % )明显增高 (P<0 .0 1) ,而在癌旁组织和对照组织 (均为 0 )之间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;②肿瘤组织中MMP 2和MMP 9的阳性率在有淋巴结转移NSCLC患者中显著高于无淋巴转移者 (P <0 .0 1) ,腺癌组织显著高于鳞癌组织 (P<0 .0 5 ) ,低分化肿瘤显著高于中～高分化肿瘤 (P <0 .0 5 ) ,Ⅲ期肺癌显著高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌 (P <0 .0 5 )。结论　在NSCLC组织中MMP 2和MMP 9表达明显高于癌旁组织和良性肺病组织 ,检测肺癌组织中MMP 2和MMP 9表达有助于判断肺癌转移、病期 ,预测患者预后。     

EMMPRIN、MMP-9在原发性肝癌组织中的表达

目的 研究原发性肝癌(PHC)及癌旁组织中EMMPRIN、MMP-9的表达,并探讨二者的相关性及临床病理意义.方法 采用免疫组化ABC法检测47例PHC及癌旁组织中两指标的表达.结果 PHC组织EMMPRIN和MMP-9阳性表达率及评分均高于癌旁组织(P＜0.01);高中分化、无转移及肿块最大直径＜5 cm PHC病例两者表达阳性率及评分均低于低分化、转移及肿块最大直径≥5 cm病例,均有显著差异(P＜0.05),二者在PHC中表达呈正相关(r=0.42,P＜0.01).结论 EMMPRIN和MMP-9均为反映PHC发生、进展及预后的重要指标,EMMPRIN能诱导PHC细胞MMP-9的生物合成.     

FLNA在鼻咽癌发生中的作用及其可能的分子机制

目的：探讨细丝蛋白A（filamin A,FLNA）在鼻咽癌中的表达水平及其过表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC)细胞生物表型的影响。 方法： 收集2008年1月至2008年12月唐山市人民医院病理科活检取得并经病理证实的新鲜NPC组织标本63例及21例距其癌组织边缘2 cm以上且镜下未见癌浸润的正常鼻咽组织（对照组）,采用免疫组织化学及Western blotting方法检测NPC组织及正常鼻咽组织中FLNA及MMP-9蛋白的表达。以慢病毒转染建立FLNA过量表达的NPC CNE2细胞株,采用RT-PCR及Western blotting检测转染后NPC CNE2细胞株中FLNA的表达变化;MTT法检测FLNA蛋白过量表达对NPC细胞增殖的影响,Transwell实验检测CNE2细胞的侵袭能力。 结果： FLNA蛋白在NPC组织中的阳性表达率明显低于正常鼻咽组织（36.5% vs 66.7%, P <0.05）,其在NPC组织的相对表达量较正常鼻咽组织的相对表达量明显降低\[（0.378±0031） vs （0.835±0.078）, P <0.05\],FLNA蛋白的表达水平与NPC T分期、有无淋巴结转移、临床分期以及组织分级有关（ P <0.05）。FLNA蛋白高表达的CNE2细胞其增殖能力明显减弱、侵袭转移能力明显降低、 MMP-9蛋白表达量明显下调。 结论： NPC组织中FLNA蛋白表达明显降低可能是鼻咽黏膜恶性转变的重要生物学标志,对预测NPC发生、浸润、转移有重要意义。     

Netrin-1 promotes cell migration and invasion by down-regulation of BVES expression in human hepatocellular carcinoma

The axon guidance cues netrin-1 has been reported to be associated with cancer progression in various types of human cancers. However, the underlying molecular mechanism of netrin-1-mediated metastasis remains obscure. In this study, we found that overexpression of netrin-1 promoted HCC cell migration and invasion as determined by transwell assay and 3D cell culture assay. However, netrin-1 knockdown inhibited these processes. Further investigation indicated that netrin-1 decreased the expression of Blood Vessel Epicardial Substance (BVES), which was down-regulated in HCC. Interestingly, {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"LY294002","term_id":"1257998346","term_text":"LY294002"}}LY294002, a special inhibitor to PI3K/AKT signaling which was determined as a downstream pathway of netrin-1, restored the reduction in BVES caused by netrin-1. In addition, BVES exhibited an opposite effect on HCC cell metastasis to that of netrin-1. Importantly, up-regulating BVES expression significantly attenuated netrin-1-enhanced migration and invasion, whereas silencing BVES expression rescued the metastatic phenotype in netrin-1 knockdown cells. Moreover, netrin-1 expression was negatively correlated with BVES in HCC tissues and cell lines with different metastatic potential. Taken together, these results reveal that netrin-1 promotes HCC cell metastasis by regulating BVES expression via AKT activation.     

HECA通过Wnt通路抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:拟在通过影响肝细胞癌HepG2细胞株中HECA基因表达变化,观察与HECA基因相关联的Wnt通路上重要调节分子的变化,讨论此通路影响肝癌细胞增殖能力状况及其相关作用机理。方法:HECA慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,细胞株中稳定上调HECA,用HECA siRNA转染HepG2细胞株下调HECA,在HECA表达上调的细胞株中用qPCR检测Wnt通路中β-catenin、TCF4、CDK2、CDK9、Cyclin A和Cyclin K的mRNA表达水平的变化,用Western blot检测qPCR结果中差异明显的β-catenin、TCF4蛋白表达水平的变化,应用FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,进一步验证HECA基因与Wnt通路的关系,利用Western blot检测HECA的表达水平,用MTT、划痕、克隆形成以及Transwell实验检测对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响。结果:qPCR法以及Western blot法对其相关基因表达水平进行测定,结果显示在HepG2细胞株内HECA过表达后,与HECA相关联的Wnt通路重要调节分子中β-catenin、TCF4的表达水平显著降低;FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,Western blot实验结果显示FH535处理过的过表达组HECA水平更高,细胞功能实验也表明FH535处理过的过表达HECA组,其细胞增殖及侵袭能力下降最明显。结论:HECA基因抑制肝细胞癌增殖及侵袭的分子机制可能为:HECA通过Wnt/β-catenin这一经典通路内β-catenin与TCF4的结合活性降低而发挥作用。     

Radiation-enhanced hepatocellular carcinoma cell invasion with MMP-9 expression through PI3K/Akt/NF-kappaB signal transduction pathway

This study is to investigate the molecular mechanism of radiation-enhanced cell invasiveness of hepatocellular carcinoma (HCC) correlating with clinical patients undergoing radiotherapy and subsequently developing metastasis. Three HCC cell lines (HepG2, Hep3B and Huh7) and normal hepatocyte cell line (CL-48) were irradiated with different doses. The effect of radiation on cell invasiveness was determined using the Boyden chamber assay. Radiation-enhanced invasion capability was evident in HCC cells but not in normal hepatocytes. Invasion was observed in gelatin-coated but not fibronectin-coated or type I collagen-coated membranes. Radiation upregulated matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) mRNA level, MMP-9 protein level and MMP-9 activity. MMP-9 antisense oligonucleotides inhibited radiation-induced MMP-9 expression and thereby significantly inhibited radiation-induced HCC invasion. Furthermore, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt chemical inhibitors LY294002 and wortmannin suppressed radiation-induced MMP-9 mRNA expression. Transient transfection with dominant-negative Akt plasmid also showed that the PI3K/Akt-signaling pathway was involved in this radiation-induced MMP-9 expression. Moreover, nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) decoy oligodeoxynucleotide suppressed radiation enhanced MMP-9 promoter activity completely. PI3K/Akt chemical inhibitors inhibited radiation-induced NF-kappaB-driven luciferase promoter activity. Taken together, our results indicated that sublethal dose of radiation could enhance HCC cell invasiveness by MMP-9 expression through the PI3K/Akt/NF-kappaB signal transduction pathway.     

Heme oxygenase-1: a molecular brake on hepatocellular carcinoma cell migration

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a fatal disease with great public health impact worldwide. Heme oxygenase (HO)-1 has recently been reported as an important player in tumor angiogenesis and metastasis. However, the role of HO-1 in liver cancer metastasis is unclear. In this study, we explored genetic differences and downstream signal transduction pathways of HO-1 in liver cancer cell lines. HO-1 wild-type and mutant cell lines were generated from human liver cancer cell line HepG2. The overexpression of wild-type HO-1 decreased the migration of HepG2 cells. In contrast, the overexpression of mutant HO-1G143H increased the migration of the cancer cells. Interleukin (IL)-6 is one of the major downstream molecules that mediated this process because IL-6 expression and migration are suppressed by HO-1 and increased when HO-1 is knocked down by shRNA. In addition, we demonstrated carbon monoxide (CO) and p38MAPK are the cofactors in this signal pathway. In vivo animal model demonstrated HO-1 inhibited the tumor growth. In conclusion, in vitro and in vivo data show HO-1 inhibits the human HCC cells migration and tumor growth by suppressing the expression of IL-6. The heme degradation product CO is a cofactor in this process and inhibits p38MAPK phosphorylation.