当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织VEGF表达的影响

目的:以免疫组织化学法检测当归拈痛汤对佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠滑膜组织血管内皮生长因子的影响,探讨当归拈痛汤部分作用机制。方法:采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,观察当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠炎症关节滑膜组织中VEGF的蛋白表达。结果:当归拈痛汤全方组、拆方2组、拆方1组均能降低佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中VEGF的表达,以全方组疗效最佳。两拆方组疗效相当,具有协同作用。结论:VEGF参与了RA病理的形成和发展,而当归拈痛汤可能通过抑制VEGF表达而阻断滑膜血管新生、血管翳形成。     

当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠红细胞免疫功能的影响

1 实验材料药物:当归拈痛汤全方:羌活、茵陈、炙甘草各15g,猪苓、泽泻、防风、知母、苍术、当归各9g,葛根、苦参、人参各6g,升麻、黄芩、自术各3g.拆方1(蠲痹组):羌活、菌陈各15g,猪苓、泽泻、防风、知母、苍术各9g,葛根、苦参各6g,升麻、黄芩各3g.拆方2组(扶正组):白术3g、人参6g、当归9g、炙甘草15g.试剂:弗氏完全佐剂,Sigma公司产品.冻干酵母多糖和补体致敏酵母多糖试剂,由免疫室提供.雷公藤多甙片,上海医科大学红旗制药厂生产.动物:健康Wistarl大鼠60只,雄性,体重(180±20)g,由南方医科大学实验动物中心提供,分笼饲养,室温(18±2)℃,相对湿度45%～50%,空气新鲜,通风良好,自由摄食、饮水.     

当归拈痛汤及其拆方对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织MMP-3调节作用的实验研究

目的以免疫组织化学法检测当归拈痛汤对佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶的影响,探讨当归拈痛汤部分作用机制。方法采用弗氏完全佐剂造成AA大鼠模型,观察各组大鼠关节滑膜组织中MMP-3的蛋白表达。结果当归拈痛汤各组均能降低AA大鼠滑膜组织中MMP-3的表达。结论当归拈痛汤可以抑制MMP-3表达。     

当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸的影响

目的:探讨当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸的影响并观察大鼠肾脏脏器指数及关节滑膜的病理改变。方法:采用腺嘌呤和乙胺丁醇造成大鼠体内高尿酸血症模型,在大鼠高尿酸前提下,采用尿酸钠(MUS)诱导大鼠急性痛风性关节炎模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、全方组、茵陈组、羌活组、西药组,每组10只。正常组、模型组均予生理盐水治疗,全方组、茵陈组、羌活组、西药组分别予当归拈痛汤、当归拈痛汤拆方1、当归拈痛汤拆方2、秋水仙碱治疗。测定各组大鼠血尿酸值及肾脏脏器指数,并观察大鼠关节滑膜的病理改变。结果:与模型组比较,西药组、茵陈组、羌活组、全方组血尿酸值、肾脏脏器指数均下降(P<0.01或P<0.05);与西药组比较,全方组、茵陈组、羌活组血尿酸值、肾腺脏器指数升高(P<0.05);茵陈组血尿酸值下降较羌活组明显(P<0.05);茵陈组、羌活组间肾脏脏器指数差异无统计学意义(P>0.05);全方组及西药组可明显减少关节滑膜中炎性细胞浸润,减轻急性痛风性关节炎大鼠关节滑膜的充血及肿胀情况;茵陈组减轻滑膜组织肿胀作用较好,羌活组炎性细胞浸润较少。结论:当归拈痛汤全方改善急性痛风性关节炎大鼠血尿酸值、降低肾脏指数、减轻滑膜病理变化作用优于当归拈痛汤拆方1、当归拈痛汤拆方2。     

当归拈痛汤防治类风湿性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

目的 观察当归拈痛汤干预类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜病变的蛋白质改变,分析当归拈痛汤治疗RA可能的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、当归拈痛汤组3组,每组10只。双向电泳(2-DE)分离滑膜组织蛋白质,用PDQuest7.1.0软件包进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定蛋白质。选择2个差异蛋白用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和蛋白质印迹法(Western-blot)进行验证。结果 获得8个差异表达的蛋白:Myosin regulatory light chain 2,40S ribosomal protein SA,Mimecan,Heat shock protein beta-1,Vimentin,Peroxiredoxin-2,Interleukin-1 receptor antagonist protein,Lamin A。Q-PCR和Western-blot验证Hsp27 Peroxiredoxin-2表达水平变化与2-DE结果一致。结论 当归拈痛汤可能通过以下机制抑制RA滑膜组织的炎症反应:(1)抑制组织局部的炎症反应信号通路;(2)保护细胞结构;(3)抑制氧化应激反应。     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群CD4的影响

目的：通过观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群CD4的影响。评价当归拈痛汤治疗类风湿性关节炎（RA）的疗效。方法：将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,采用弗氏完全佐剂造模,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等;在灌服当归拈痛汤18d后,用ELIASA法检测血清CD4的水平．结果：致炎后不同时间关节肿胀度、疼痛指数采用重复测量资料的方差分析（P〈0．01）;与模型组比较,各用药组的CIN水平显著减少（P〈0．05,P〈0．01）。结论：当归拈痛汤能抑制大鼠过高的CD4水平,当归拈痛汤能提高外周血T淋巴细胞免疫功能。     

当归拈痛汤及其拆方对实验性尿酸血症小鼠血尿酸的影响

目的观察当归拈痛汤中各药味对实验性尿酸血症小鼠血尿酸的影响。方法采用正交t值法对当归拈痛汤(对小鼠高尿酸血症模型)进行拆方研究。取小鼠注射氧嗪酸钾盐造成高尿酸血症,给药7天后,摘眼球取血,取血清测定血尿酸值。结果当归拈痛汤中当归、羌活、防风、苍术对氧嗪酸钾盐小鼠高尿酸血症模型血尿酸降低程度不显著,而方中茵陈、苦参、知母、黄芩、泽泻、猪苓、白术、党参对氧嗪酸钾盐小鼠高尿酸血症模型血尿酸降低程度较显著。结论当归拈痛汤中茵陈、苦参、知母、黄芩、泽泻、猪苓、白术、党参为降低尿酸酶抑制-氧嗪酸钾盐小鼠高尿酸血症模型血尿酸的有效药味。     

当归拈痛汤及拆方对类风湿性关节炎大鼠血清IL-6的影响

目的:研究当归拈痛汤及其拆方对类风湿性节炎大鼠血清IL-6的影响,进一步深入探讨该药物的作用机制。方法:建立大鼠类风湿性关节炎实验模型,检测血清中相关炎性细胞因子IL-6的水平。结果:当归拈痛汤及其各拆方组可显著抑制SD大鼠过高的炎性细胞因子IL-6分泌,其中全方组明显强于拆方组,拆方1组作用强于拆方两组。结论:当归拈痛汤及拆方在类风湿性关节炎大鼠中具有下调致炎因子IL-6的作用,提示这与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。     

当归拈痛汤对类风湿性关节炎大鼠滑膜MMP-9的影响

目的研究当归拈痛汤对类风湿性关节炎大鼠的滑膜组织中MMP-9的影响,进一步探讨该药物的作用机制。方法用Mtb诱导实验性类风湿性关节炎大鼠模型,并随机分为4组,空白对照组、当归拈痛汤组、模型组以及作为阳性对照的雷公藤组。经过实验阶段的干预后,检测各组大鼠关节滑膜组织的MMP-9水平。结果与阳性对照组和模型对照组相比,当归拈痛汤组显著降低模型大鼠关节滑膜中MMP-9水平(P0.05)。结论当归拈痛汤可以下调模型大鼠关节滑膜组织中的MMP-9水平,提示其作用机制可能与调控MMP-9水平相关。     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠血清中MMP-3表达的影响

目的 探讨当归拈痛汤高、中、低剂量对佐剂性关节炎大鼠血清中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响及其治疗作用.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模犁组、当归拈痛汤高剂量组、中剂量组和低剂量组,采用弗氏完全佐剂造模,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等.在灌服当归拈痛汤18d后.用ELISA法检测MMP-3在血清中的表达.结果 各组致炎后不同时间关节肿胀度、疼痛指数差异显著;与模型组比较,各用药组的MMP-3表达显著减少.结论 当归拈痛汤高、中剂量对大鼠佐剂性关节炎有较好的治疗作用,其降低血清MMP-3含量可能是治疗类风湿关节炎的机制之一.     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织内外凋亡途径关键因子的影响

目的:观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织内、外凋亡途径中关键调控因子表达水平的影响,进一步探讨该方防治类风湿关节炎的作用机制.方法:将40 只SPF 级SD 大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤组(11.34 g·kg-1)和雷公藤组(9.45 mg·kg1),除正常组外,其余各组采用灭活结核分支杆菌佐...     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群CD4的影响

目的:通过观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群CD4的影响.评价当归拈痛汤治疗类风湿性关节炎(RA)的疗效.方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、高剂量组、中剂量组和低刑量组,采用弗氏完全佐剂造模,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等;在灌服当归拈痛汤18d后,用ELIASA法检测血清CD4的水平.结果:致炎后不同时间关节肿胀度、疼痛指数采用重复测量资料的方差分析(P＜0.01);与模型组比较,各用药组的CD4水平显著减少(P＜0.05,P＜0.01).结论:当归拈痛汤能抑制大鼠过高的CD4水平,当归拈痛汤能提高外周血T淋巴细胞免疫功能.     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠肿瘤坏死因子α的影响

目的通过观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响,评价当归拈痛汤治疗类风湿关节炎(RA)的疗效。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,采用弗氏完全佐剂造模,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等;在灌服当归拈痛汤18 d后,用ELIASA法检测血清TNF-α的水平。结果致炎后不同时间点各组关节肿胀度、疼痛指数比较均有显著性差异;与模型组比较,各用药组的TNF-α水平显著降低(P0.05和0.01)。结论当归拈痛汤可抑制RA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-α分泌,能明显抑制大鼠佐剂性关节炎病变。     

当归拈痛汤及拆方对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β和TNF-β的影响

目的:研究当归拈痛汤及拆方对类风湿性节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响,进一步探讨该药物的作用机制.方法:建立佐剂性关节炎大鼠诱导大鼠类风湿性关节炎模型,观察当归拈痛汤及拆方对实验性大鼠足肿胀的抑制作用,检测血清相关炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的水平.结果:当归拈痛汤及各拆方组可显著抑制从大鼠足跖肿胀及多发性关节炎,抑制AA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-α、IL-1分泌,其中拆方1组作用强于拆方2组.结论:当归拈痛汤及拆方在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平.提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关.     

当归拈痛汤及拆方对类风湿性关节炎大鼠血清IL—1β和TNF-α的影响

目的：研究当归拈痛汤及拆方对类风湿性节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响，进一步探讨该药物的作用机制。方法：建立佐剂性关节炎大鼠诱导大鼠类风湿性关节炎模型，观察当归拈痛汤及拆方对实验性大鼠足肿胀的抑制作用，检测血清相关炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的水平。结果：当归拈痛汤及各拆方组可显著抑制AA大鼠足跖肿胀及多发性关节炎，抑制AA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-α、IL-1分泌，其中拆方1组作用强于拆方2组。结论：当归拈痛汤及拆方在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平，提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。     

当归拈痛汤对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞凋亡通路的影响

目的:观察当归拈痛汤对类风湿关节炎大鼠足趾关节的改变情况及探讨其对滑膜细胞凋亡通路的影响。方法:选取50只Wistar雄性大鼠,并随机分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组;除对照组外其余均建立胶原诱导的关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)模型,在类风湿关节炎模型制备成功后开始给药:对照组和模型组予以6.5 g/kg生理盐水,低剂量组、中剂量组和高剂量组均为当归拈痛汤灌胃给药,分别给予生药6.5 g/kg,13.0 g/kg,19.5 g/kg。干预时间28d。采用容积法测量双后肢的足趾关节肿胀度;采用足趾关节苏木精-伊红(HE)染色计算细胞凋亡数;采用免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测Bcl-2、PI3K、Bax的蛋白表达情况。结果:对照组未见足趾肿胀情况,给药1 d模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组间比较,差异无统计学意义(P0.05),给药7~28 d各剂量给药组肿胀度均低于模型组(P0.05),至14~28 d中、高剂量组的肿胀度显著低于低剂量组(P0.05),而28 d高剂量组的肿胀度又明显低于中剂量组(P0.05)。足趾关节HE染色中,对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组中的细胞凋亡数呈逐渐上升的趋势(P0.05)。PI3K和Bcl-2蛋白在模型组中表达上调,经过给药治疗,随着剂量的逐渐升高而下调(P0.05);而Bax蛋白的表达情况则与PI3K相反,随着剂量的增加而上调(P0.05)。结论:当归拈痛汤能有效改善类风湿关节炎大鼠足趾关节肿胀度,促进滑膜细胞的细胞凋亡数进而抑制滑膜细胞增殖的进程,而PI3K通路对细胞凋亡的调控起到关键的作用。     

当归拈痛汤对急性痛风性关节炎患者血浆炎症细胞因子的影响

目的探讨当归拈痛汤对急性痛风性关节炎患者血浆炎症细胞因子的影响。方法将70例急性痛风性关节炎患者随机分为治疗组和对照组。2组均予以低嘌呤膳食、多饮水,停用利尿剂和糖皮质激素等药物治疗．并口服秋水仙碱0．5mg．每2h服1次,24h后改为0．5nlg,每日3次,,治疗组在此基础上加用当归拈痛汤加减,每天煎取200mL,分2次口服,每次100mL,疗程2周。结果治疗2周后,治疗组的临床疗效显著高于对照组（P〈0．01）;同时治疗2周后,2组血浆hs—CAP、1L-6和IL-8水平均明显下降（P〈0．01或P〈0．05）,且治疗组下降的幅度显著优于对照组（P〈0．05）。结论当归拈痛汤能明显改善急性痛风性关节炎患者的临床症状．疗效确切．作用机制与降低血浆hs-CiKP、IL-6和IL-8水平有关。     

当归拈痛汤对急性痛风性关节炎模型大鼠步态和关节肿胀度的影响

目的:观察当归拈痛汤对急性痛风性关节炎大鼠步态和关节肿胀度的影响。方法:采用向大鼠踝关节腔注射微晶型尿酸钠(MSU)混悬液方法建立急性痛风性关节炎模型,将当归拈痛汤用于模型的治疗,并与秋水仙碱做组间对照,观察造模24h后大鼠步态并进行行为学评分,并用足爪容积测量仪测定造模后不同时间大鼠的踝关节肿胀度。结果:当归拈痛汤能明显改善急性痛风性关节炎大鼠的步态异常,并能显著降低其踝关节肿胀度。结论:当归拈痛汤对急性痛风性关节炎大鼠有显著的治疗作用。     

当归拈痛汤加味膏剂对佐剂性关节炎大鼠促炎因子分泌及关节滑膜细胞凋亡的调节作用

目的观察当归拈痛汤加味制成膏剂对佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis,AA）大鼠滑膜细胞凋亡及血清细胞因子的影响。方法建立AA大鼠模型,将wistar大鼠随机分成空白组、模型组、治疗组（甲氨蝶呤＋当归拈痛汤加味膏剂）、对照组（甲氨蝶呤＋双氯芬酸二乙胺乳）。检测各组大鼠足跖肿胀程度及疼痛指数,滑膜细胞凋亡及血清细胞因子浓度。结果治疗组能显著抑制注射足跖肿胀程度,显著提高滑膜细胞的凋亡率,并降低大鼠血清中IL-17、TNF-α的水平,与对照组效果相当。结论当归拈痛汤加味膏剂可能通过促进AA大鼠滑膜细胞的凋亡,抑制某些炎性因子的释放,达到治疗的作用。     

基于定量蛋白质组学研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎大鼠的作用机制

目的 应用定量蛋白质组学研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎（AA）大鼠的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤低、中、高剂量组及甲氨蝶呤（MTX）组,每组10只,大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂（Mtb）进行AA的造模,人工气候箱干预16 d建立风湿热痹证模型,造模当天开始给药干预,持续干预28 d。提取大鼠滑膜组织蛋白质,使用4D非标记定量（4D-LFQ）蛋白质组学研究当归拈痛汤中剂量组与风湿热痹证模型组之间的差异蛋白情况,采用免疫组化及蛋白免疫印迹法（Western blot）验证与线粒体途径细胞凋亡相关的差异蛋白。结果 从滑膜组织中检测出4 756个蛋白质,其中4 234个蛋白质包含定量信息。当归拈痛汤与模型组差异蛋白为814个。基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示,当归拈痛汤对风湿热痹证AA大鼠的滑膜蛋白质组确有影响,且差异蛋白集中在对免疫系统的调控、急性炎症的反应和凋亡水平的调节。免疫组织化学与蛋白免疫印迹法验证发现,与模型组比较,当归拈痛汤各剂量组及MTX组滑膜组织中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）及细胞色素Ｃ（Cyt C）蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2的表达水平明显下降（P<0.05,P<0.01）,剪切型胱天蛋白酶-9（cleaved Caspase-9）/胱天蛋白酶-9（Caspase-9）显著升高（P<0.01）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）/蛋白激酶B（Akt）明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 当归拈痛汤对风湿热痹证类风湿关节炎的治疗涉及多靶点,其可能通过调节Akt/Bax/Bcl-2通路,促进线粒体途径细胞凋亡,从而发挥其对风湿热痹证类风湿关节炎的防治作用。