miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的 探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法 转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果 HOXB13促进了A549细胞的增殖（P<0.05）;生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低（P<0.05）;而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高（P<0.05）;细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间（P<0.05）。结论 miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。     

p53蛋白在肺癌中的表达及其意义

应用免疫组织化学S～P法检测50例肺癌组织中p53蛋白表达情况，结果发现：50例肺癌中，p53总阳性率为46％（23／50），其中肺鳞癌为44％（11／25），肺腺癌为46．67％（9／21），未分化癌为75％（3／4），其阳性表达与患者局部淋巴结有无癌转移有显著相关性，与肺癌的组织学类型及鳞癌的分化程度无关。在肺腺癌中p53表达越高，预后越差。未分化癌中p53强阳性均伴有局部淋巴结的转移。     

外源性PUMA对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨外源性p53上调凋亡调制因子(PUMA)对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法将肺癌A549细胞分为Control组、空载体组、PUMA组(转染pCEP4-(HA)2-PUMA质粒),DDP组(10μg·mL-1)和PUMA+DDP组(转染pCEP4-(HA)2-PUMA质粒,加10μg·mL-1顺铂)5个组。细胞生存率和凋亡率分别用MTT法和流式细胞仪检测,细胞PUMA、Bax及Bcl-2蛋白表达水平采用Western blot方法检测。结果与Control组比较:PUMA组、DDP组及PUMA+DDP组A549细胞增殖均显著降低(P<0.01),且PUMA+DDP组降低程度最强(P<0.01);凋亡率均显著升高(P<0.01);Bax蛋白水平呈显著性升高(P<0.01),Bcl-2蛋白呈显著性下降(P<0.01)。结论外源性PUMA可抑制肺癌A549细胞增殖,促进凋亡,其机制与增加细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。 更多还原     

人肺癌细胞系A549中p53通过Egr1介导抑制stathmin基因的表达

stathmin基因是一个与恶性肿瘤发生发展密切相关的癌基因,该基因在大多数的恶性肿瘤中均呈过表达状态,阻断它的表达可有效地逆转恶性肿瘤的生物学表型。目前,关于stathmin基因过表达的机制尚未完全阐明。     

蚓激酶抗肺癌细胞A549增殖作用及其机制

目的 研究蚓激酶对肺癌细胞A549的增殖及细胞周期的影响,初步探讨蚓激酶抗肺癌的作用机制.方法 通过MTT法检测不同浓度的蚓激酶作用于A549细胞24 h后对细胞增殖的影响;通过显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测蚓激酶对A549的细胞周期阻滞情况;RT-PCR检测蚓激酶对P53基因表达影响.结果 蚓激酶对A549有明显抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为(54.35 ±2.112) U/mL;A549经蚓激酶作用后形态变化显著,细胞边缘皱缩,漂浮细胞的数目随着药物浓度的增高而增大;蚓激酶阻滞A549细胞周期于S期;RT-PCR检测表明,蚓激酶能明显上调P53基因的表达.结论 蚓激酶在体外能明显抑制肺癌细胞A549的增殖,并阻滞细胞周期于S期,其机制可能与上调P53基因表达有关.     

p16、p21、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法检测30例肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达情况。以上标本中有7例呼吸道合胞病毒(RSV)N基因片段扩增阳性。结果 30份肺癌标本中p16、p21、p53蛋白阳性表达率分别为36．7％(11／30)、43．3％(13／30)、53．3％(16／30)；各种蛋白阳性表达例数在鳞癌与腺癌组织间差异无显著性意义；不同临床分期的肺癌标本，其p16、p21阳性表达，差异具有显著性意义；晚期肿瘤组织较早期p53阳性表达增强。p16、p21在肿瘤Ⅲ Ⅳ期较Ⅱ期阳性表达率下降。p16、p21、p53蛋白在RSV N基因片段扩增阳性肺癌标本中的表达与扩增阴性的肺癌标本比较差异无显著性意义。结论 p16、p21可能作为判断肺癌分期及预后的参考指标。RSV感染对肺癌组织细胞癌基因无明显影响。     

p53和c-myc基因产物在小细胞肺癌中的表达与临床意义

目的:研究p53,c-myc基因产物在小细胞肺癌(SCLC)中的表达,探讨与临床分期、淋巴结转移及预后的关系.方法:采用免疫组化S-P法对36例原发性小细胞肺癌进行检测.结果:p53、c-myc蛋白表达及其共表达阳性率分别为66.7%,61.1%,52.8%.p53蛋白表达在I期与Ⅲ期之间有显著性差异.c-myc蛋白表达率随分期增加而增高,但各期之间无显著性差异.共表达在各期之间无显著性差异.有无淋巴结转移两组相比p53蛋白表达有显著性差异,c-myc蛋白表达及共表达无显著性差异.术后生存时间≥18个月组与术后生存时间<18个月组相比p53蛋白、c-myc蛋白及共表达均有显著性差异.结论:p53蛋白和c-myc蛋白在小细胞肺癌组织中均有较高的表达;p53蛋白与小细胞肺癌分期、淋巴结转移、预后相关;c-myc蛋白表达越高预后越差,p53和c-myc蛋白共表达的小细胞肺癌患者预后不佳.     

p53基因蛋白在原发性肺癌的表达及意义

目的 检测原发性肺癌中ｐ５３基因蛋白表达与组织类型、分化程度以及淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组化ＩＤＰ法，用鼠抗人ｐ５３单克隆抗体检测ｐ５３蛋白的表达。结果４４例原发性肺癌中ｐ５３基因蛋白表达阳性率５６．８％。其中鳞癌１４例、腺癌３０例、阳性率分别５７．１％、４６．７％。高分化１０例，中分化２０例，低分化１４例，阳性率分别为４０％、５０％、５７．１％。肺癌有淋巴结转移的ｐ５３阳性率为６５．５％     

肺癌中p53蛋白的表达及其临床病理意义

目的：探讨肺癌中ｐ５３蛋白表达与临床病理的关系。方法：应用免疫组织化学ｓ－ｐ法对１２９例肺癌组织标本进行ｐ５３蛋白检测。结果：ｐ５３蛋白阳性表达率为５２．７％，其表达与组织学分型分级无关，仅在腺癌组内与淋巴结有无癌转移有关（Ｐ〈０．０５），半年以内死亡组与５年以上生存组之间有显著性差异Ｐ〈０．０５，结论，ｐ５３蛋白表达能够反映肿的生物学特性，并可作为评估肿瘤预后的有效指标。     

p53蛋白在肺癌支气管活检标本中的检测及意义

目的：探讨和评价ｐ５３蛋白在肺癌术前诊断、分期和预后方面的作用。方法：应用免疫组织化学技术，对９６例支气管活检标本中ｐ５３蛋白的异常表达进行研究。结果：８４例肺癌组织中阳性表达率为６１．９１％。１０例正常支气管粘膜未见阳性表达。在鳞癌和腺癌中Ｎ１、Ｎ２阳性表达率（７８．５％、７１．４３％）明显高于Ｎ０（４８．２１％）；Ⅲ～Ⅳ期阳性表达率（７２．４１％）明显高于Ⅰ～Ⅱ期（４９．０９％）。结论：术前进行纤支镜活检标本的ｐ５３蛋白检测对肺癌患者的诊断、分期和预后能够做客观的评价，并有助于选择有效的治疗手段。     

肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的测定

目的通过克隆形成及致瘤能力研究肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的比例。方法采用有限稀释法,检测细胞单克隆形成的数量及大小;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞,种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力;采用CD133磁珠分选A549细胞,测定CD133+、CD133-细胞的克隆形成能力,测定Hoechst33342染色对非SP细胞的增殖能力和单克隆形成能力的影响。结果45%以上的A549细胞能够形成大于100个细胞的大克隆,其传代后又能形成新的克隆,来源于1个大克隆的细胞种植到BALB/C裸鼠身上,10?d左右能形成肉眼可见的肿瘤;CD133+、CD133-细胞克隆形成能力相同;Hoechst33342染色能够明显干预细胞的克隆形成及增殖能力。结论45%以上的A549细胞是肿瘤始发细胞。     

纳米二氧化钛颗粒体外对人肺腺癌A549细胞的毒性效应

目的探讨不同作用时间下粒径为25nm的锐钛矿型二氧化钛(TiO2)颗粒对人肺腺癌A549细胞的毒性效应。方法将100μg/ml的纳米TiO2颗粒悬液与A549细胞在37℃、5%CO2的细胞培养箱中分别孵育1h、4h、8h和24h后,收集细胞。通过乳酸脱氢酶(LDH)检测实验检测纳米TiO2颗粒对细胞膜的损伤情况;通过ATP检测实验检测纳米TiO2颗粒对线粒体产生的影响;通过超氧化物歧化酶(SOD)活性检测实验检测纳米TiO2颗粒对细胞的氧化损伤情况;采用透射电子显微镜观察纳米TiO2颗粒引起细胞超微结构的变化;利用CCK-8法检测纳米TiO2颗粒对细胞存活率的影响。结果随着纳米TiO2颗粒作用时间的延长,细胞外液中LDH活性增强,细胞内ATP浓度降低,SOD活性降低,细胞存活率呈现明显下降(P<0.05),且细胞线粒体和内质网出现不同程度的肿胀和扩张。结论纳米TiO2颗粒体外能够引起肺腺癌细胞氧化损伤,抑制细胞生长,且对细胞的毒性效应存在时间依赖性。     

巨噬细胞集落刺激因子对肺癌细胞株A549在体外的抑制作用

目的 观察巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor, M-CSF)对肺腺癌细胞株A549的作用.方法 观察肺腺癌A549细胞形态的变化.M-CSF对体外培养肺腺癌A549细胞的生长抑制作用采用MTT 检测法, 用流式细胞仪检测细胞DNA含量, 分析M-CSF对细胞周期的影响.采用RT-PCR检测M-CSF受体mRNA表达的变化.结果 M-CSF能显著抑制肺腺癌A549细胞的生长,并且呈浓度、时间依赖关系,在M-CSF浓度为10 ng/ml时有最大抑制效应.流式细胞仪检测分析显示M-CSF作用后G0/G1期细胞增加.RT-PCR显示经M-CSF作用后M-CSF受体的mRNA表达水平有所下降.结论 M-CSF对肺癌细胞株A549在体外有抑制作用.     

硼替佐米对A549细胞增殖及p21、p27表达的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人肺癌A549细胞增殖、细胞周期及在体成瘤的影响.方法 采用不同浓度的硼替佐米(0、100、200 nmol/L)作用于A549细胞4h,观察其对蛋白酶体活性的影响.用硼替佐米(0、100、200 nmol/L)处理A549细胞48 h,采用MTT法、3H-TdR掺入法检测细胞增殖;流式细胞术PI染色检测细胞周期;Westernblot检测p21、p27表达水平的变化;连续注射观察硼替佐米对裸鼠A549细胞移植瘤体积及质量的影响.结果 硼替佐米可显著抑制A549细胞的蛋白酶体活性.MTT法、3H-TdR法检测显示,100 nmol/L处理组细胞较对照组增殖率分别降低24.5％、29.5％,200 nmol/L处理组进一步显著下降(P＜0.05);细胞周期分析显示,100、200 nmol/L处理组G0/G1期较对照组明显增加(P＜0.05).Western blot检测显示,48 h时100、200 nmol/L处理组p21、p27蛋白表达较对照组明显增加,且呈浓度依赖(P＜0.05),48 h蛋白质水平高于24h.连续注射硼替佐米后裸鼠移植瘤的质量抑制率达(36.0±12.4)％.结论 硼替佐米可抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡及发生G0/G1期阻滞,在体注射可抑制裸鼠成瘤,其抗肿瘤活性可能与抑制细胞周期蛋白p21、p27的降解有关.     

雷帕霉素抑制人肺腺癌细胞A549增殖的实验研究

目的初步探讨雷帕霉素抑制A549细胞增殖及其可能机制。方法将20 nmol/L雷帕霉素作用A549细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达,western blot检测Survivin蛋白的表达。结果对照组和雷帕霉素作用A549细胞24、48、72 h后,生长抑制率分别为(1.61±0.09)%、(12.13±0.68)%、(20.82±1.02)%、(51.68±2.96)%,细胞凋亡率分别为(1.17±0.07)%、(10.01±0.34)%、(16.68±0.52)%、(38.23±1.04)%,Survivin mRNA和蛋白相对表达水平分别为(0.77±0.09)、(0.54±0.13)、(0.33±0.08)、(0.19±0.12)和(0.62±0.06)、(0.46±0.08)、(0.29±0.08)、(0.15±0.11)。雷帕霉素能够呈时间依赖性的抑制A549细胞的增殖及诱导A549细胞的凋亡(P0.05),并能够下调Survivin的表达(P0.05)。结论雷帕霉素能够抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应与下调Survivin的表达有关。     

CpG-ODN对肺癌A549细胞化疗的协同作用

目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)对肺癌A549细胞化疗的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将肺癌A549细胞分为空白对照组、DDP组、CpG-ODN组、DDP+CpG-ODN组、CpG-ODN+DDP组。采用CCK-8比色法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测TLR9 mRNA的表达,Western印迹法检测TLR9信号通路中MyD88、AP-1的表达。结果 TLR9激活CpG ODN后,能显著提高细胞的增殖能力(P<0.05);CpG-ODN与CpG-ODN+DDP两组细胞生长无明显差异(P>0.05);CpG-ODN+DDP组细胞凋亡率较DDP组低(P<0.05),DDP+CpG-ODN组细胞凋亡率较DDP组明显升高(P<0.05);DDP+CpG-ODN组TLR9 mRNA较DDP组明显升高(P<0.05);DDP+CpG组AP-1蛋白表达上调(P<0.05)。结论 CpG-ODN激活TLR9信号通路后,可协同DDP促进细胞凋亡,提高顺铂化疗的敏感性。     

川陈皮素诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的研究

目的:探讨川陈皮素(5,6,7,8,3′4-′hexamethoxyflavone)促非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用。方法:以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞,分别用细胞生长曲线、集落形成抑制实验研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术观察细胞周期改变。结果:生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显的时效和量效关系;集落形成抑制实验表明:药物浓度10μg/mL~40μg/mL对A549集落形成抑制率为10%~50%。Hoechst 33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型DNA梯状条带。流式细胞仪检测到细胞周期阻滞于G2/M期,G0/G1期细胞明显减少;随着剂量的增加凋亡率明显增高。结论:川陈皮素可以诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡。     

汉黄芩素对肺癌细胞株A549的体外作用研究

目的:探讨体外汉黄芩素对肺癌细胞株A549增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:应用MTT(噻唑蓝)法检测汉黄芩素对于A549细胞增殖活性;用形态学方法观察汉黄芩素对A549细胞的促凋亡作用;应用Transwell法观察细胞侵袭能力。结果:汉黄芩素对A549细胞增殖和侵袭活性具有明显抑制作用,对肺癌细胞有明显促凋亡作用,镜下可见染色体聚集及细胞核碎裂。结论:汉黄芩素对肺癌A549细胞的增殖迁移均有明显抑制作用并可促进肿瘤细胞凋亡。     

丙戊酸钠抑制肺癌细胞株A549增殖的研究

目的研究丙戊酸钠（sodium valproate,VPA）对肺癌细胞株A549细胞增殖的影响。方法体外不同浓度VPA不同作用时间处理人肺癌细胞株A549,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期与细胞凋亡的改变。结果2.0 mmol/L VPA作用72 h细胞形态明显改变、细胞数明显减少。1.0mmol/L VPA作用72 h后,细胞增殖被抑制,抑制率为（15.8±2.8）%,与同期对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;提高处理浓度或延长作用时间,抑制作用有加强趋势。1.0 mmol/L VPA作用72 h后可改变细胞周期分布,G1期细胞比例为（72.2±3.4）%,与同期对照组相比差异显著;2.0 mmol/LVPA处理24～72 h后G1细胞比例由（64.5±3.7）%增加至（79.8±4.4）%,而S期细胞由（30.7±5.17）%降低至（14.2±3.37）%;提高处理浓度或延长作用时间均使G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少。2 mmol/L VPA作用24～72 h可提高细胞凋亡率,由（7.30±1.87）%增加到（19.85±2.40）%。结论VPA可抑制肺癌A549细胞生长,改变细胞周期分布、促进细胞凋亡。     

人肺癌细胞系A549中肿瘤干细胞样细胞的分离及鉴定

目的 从人肺癌细胞系A549中分离并鉴定肺癌干细胞.方法 将A549细胞置于无血清条件培养基中培养,形成细胞球,采用平皿克隆形成实验、MTT细胞增殖实验、RT-PCR、Western blot、免疫荧光技术,检测并比较A549细胞和A549细胞球的增殖能力及干细胞相关标记的表达水平,鉴定细胞球的肿瘤干细胞特性.结果 利用无血清条件培养基从A549细胞中分离出肿瘤干细胞样细胞;相比A549细胞,细胞球呈悬浮生长,增殖能力和克隆形成数目(104±7)高于贴壁细胞[(37±3)(P＜0.05)],且干细胞相关标记Sox2(2.68±0.39)和Oct4( 1.23 ±0.12)表达水平明显提高[贴壁细胞Sox2(0.05 ±0.02)、Oct4(0.10±0.02),P＜0.05].结论 运用无血清条件培养基可以从A549细胞系中有效富集肺癌干细胞样细胞.