miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究

目的探究微小RNA-198(miR-198)过表达对视网膜母细胞瘤(RB) Y79细胞系生长、侵袭及裸鼠异体移植瘤的影响。方法培养RB Y79细胞系,随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组和过表达组,采用Lipofectamine~?2000分别转染miR-NC、miR-198模拟物至阴性对照组和过表达组Y79细胞。qRT-PCR检测转染后Y79细胞中miR-198的相对表达水平;利用干细胞成球试验和Transwell小室试验分别检测各组Y79细胞的增殖及侵袭能力; Western blot检测各组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平。将培养好的miR-NC和miR-198 mimic细胞分别进行裸鼠皮下注射,60只裸鼠分为阴性对照组和过表达组,各组每5 d随机处死3只裸鼠,检测RB质量及体积,qRT-PCR检测瘤体中miR-198的mRNA相对表达水平;免疫组化法检测Ki67、SOX2、VEGF阳性表达率。结果与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中miR-198的相对表达水平较高(P 0.05),并且干细胞成球直径、数量、细胞侵袭率均较低(P 0.05); Western blot结果显示,与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平均较低(P 0.05)。过表达组裸鼠的瘤体质量及体积均小于阴性对照组(P 0.05),并且过表达组裸鼠瘤体组织中miR-198的mRNA相对表达水平高于阴性对照组(P 0.05),过表达组Ki67、SOX2、VEGF的阳性表达率低于阴性对照组(P 0.05)。结论 miR-198可能在RB中作为抑癌基因发挥作用,过表达miR-198可明显抑制RB的增殖及侵袭能力,并抑制裸鼠瘤体生成。     

贝母素乙抑制结肠癌细胞生长及裸鼠成瘤

目的研究贝母素乙对结肠癌细胞生长以及裸鼠成瘤的影响.方法体外试验检测贝母素乙对结肠癌SW480细胞增殖和侵袭的影响,以及Ki67、PCNA、VEGF、E-cadherin、N-cadherin、HIF-1α、Akt/p-Akt表达水平;构建结肠癌移植瘤裸鼠模型,分析贝母素乙体内抗肿瘤活性及HIF-1α、VEGF、Akt/p-Akt表达影响.结果贝母素乙能够明显抑制SW480细胞克隆增殖和侵袭(P<0.05),降低Ki67、PCNA、N-cadherin、E-cadherin、HIF-1α、p-Akt/Akt表达量(P<0.05),升高Vimentin表达水平(P<0.05),还可以抑制肿瘤增长,抑制移植瘤组织Ki67、VEGF、HIF-1α、p-Akt/Akt表达(P<0.05).结论贝母素乙可能通过抑制Akt信号通路,抑制结肠癌SW480细胞克隆增殖、侵袭和裸鼠移植瘤的生长.     

柴胡皂苷D通过下调miR-517a调节胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长

目的探究柴胡皂苷D通过调控miR-517a对胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长的影响.方法采用MTT试剂盒检测U-87细胞和正常星形细胞的存活率;Q-PCR检测miR-517a表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白免疫印迹试剂盒检测cleaved caspase-3、Ki67、MMP-2、Cyclin D1蛋白水平.建立裸鼠移植瘤模型,检测各组肿瘤重量;免疫组化检测Ki67、VEGF表达.结果柴胡皂苷D对正常星形细胞存活率无影响,降低U-87细胞存活率,下调miR-517a表达,促进细胞凋亡,上调cleaved caspase-3蛋白表达,抑制细胞迁移、侵袭、增殖,下调MMP-2、Cyclin D1、Ki67蛋白表达;抑制体内移植瘤生长,降低Ki67、VEGF阳性表达率.结论柴胡皂苷D具有下调miR-517a调节胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长的作用.     

miR-127-3p 靶向MAPK4 对肝癌HepG2 细胞株生物学特性的影响

目的:探究miR-127-3p与MAPK4的靶向关系及其对肝癌HepG2细胞生长转移能力的影响。方法:生物信息预测miR-127-3p与MAPK4间靶向关系,荧光素酶实验验证, qRT-PCR检测两者在肝细胞中的基因表达。miR-127-3p mimic及pcDNA-MAPK4(pc-MAPK4)分别或同时转染HepG2细胞,qRT-PCR检测miR-127-3p表达,BrdU及Hoechst检测细胞增殖及凋亡,Transwell及划痕实验检测侵袭及迁移,Western blot (WB)检测Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、MMP-9、VEGF、MAPK4、MAPKAPK5、HSPB1表达。miR-127-3p mimic转染HepG2细胞后,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录肿瘤体积,免疫组化及Tunel检测其增殖凋亡水平,WB检测MMP-9及MAPKAPK5表达。结果:与HL-7702比较,HepG2中miR-127-3p表达下调而MAPK4上调。HepG2中,miR-127-3p mimic上调miR-127-3p并下调MAPK4表达及MAPK4 wt荧光素酶活性,pc-MAPK4上调MAPK4并减弱miR-127-3p mimic的作用;miR-127-3p mimic减少BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,增加凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,pc-MAPK4增加BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,减少凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,减弱miR-127-3p mimic的抑增殖促凋亡作用;miR-127-3p mimic减少侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达,pc-MAPK4增加侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达并减弱miR-127-3p mimic的抗侵袭迁移作用;miR-127-3p mimic降低MAPKAPK5及HSPB1磷酸化比值,pc-MAPK4升高其比值并减弱miR-127-3p mimic的影响。miR-127-3p mimic减小HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤体积,减少组织中Ki67阳性细胞、MMP-9表达及MAPKAPK5磷酸化比值并增加凋亡细胞。结论:miR-127-3p靶向MAPK4可抑制肝癌HepG2细胞生长及转移。     

白桦脂醇通过抑制PI3K / AKT 途径抑制宫颈癌小鼠移植瘤增殖

目的:阐明白桦脂醇对宫颈癌细胞系c4-1移植瘤模型裸鼠的影响和机制。方法:皮下注射宫颈癌细胞系c4-1建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为3组:对照组(DMSO)、白桦脂醇低剂量组(Betulin 50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin 200),进行后续使用。白桦脂醇治疗后,检测移植瘤体积和裸鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平; TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况; Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT通路蛋白表达情况和磷酸化情况。结果:与对照组(DMSO)相比较,白桦脂醇低剂量组(Betulin 50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin 200)肿瘤体积明显减小(P0. 01),裸鼠存活率明显增加(P0. 01),Ki67和VEGF表达水平明显下降(P0. 01),且PI3K/AKT磷酸化水平明显被抑制(P0. 01)。结论:白桦脂醇能抑制c4-1移植瘤体积,增加移植瘤裸鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和PI3K/AKT磷酸化水平。白桦脂醇可能通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌细胞系c4-1移植瘤。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

miR-149-5p靶向CDK6对口腔鳞状细胞癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-149-5p靶向CDK6对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长、侵袭和迁移的影响。方法利用Lipofectamine2000将miR-149-5p mimic质粒、mimic-NC质粒、CDK6质粒分别或联合转染进入Tca8113细胞,运用基因预测软件预测miR-149-5p的靶基因,采用双荧光素酶实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-149-5p与CDK6 mRNA的表达,MTT法检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测CDK6、C-Myc、和Cyclin D1的表达,裸鼠右后肢腹侧皮下注射构建OSCC移植瘤模型,并测定移植瘤体积和重量,同时采用免疫组化检测Ki67和Vimentin的表达。结果 miR-149-5p在OSCC细胞中低表达,与CDK6在3'UTR区存在结合位点,miR-149-5p直接靶向抑制CDK6; miR-149-5p过表达能够明显降低Tca8113细胞活性和克隆数目,并增强G0/G1期细胞周期阻滞,增加凋亡率,减少侵袭数目,降低伤口愈合率,且下调C-Myc、CDK6、Cyclin D1蛋白表达,而加入CDK6后能够反转这些现象; miR-149-5p过表达会使体内移植瘤的重量和体积明显减少,并使移植瘤的Ki67和Vimentin的阳性细胞比率明显减少。结论miR-149-5p靶向CDK6对口腔鳞状细胞癌细胞生长、侵袭和迁移具有抑制作用。     

干扰 Netrin-1 对白血病 K562 细胞体内外增殖迁移的影响 #br#

【摘要】 目的 探究干扰 Netrin-1 对白血病 K562 细胞体内外增殖迁移的影响。 方法 将 shRNA Netrin-1载体和空质粒载体转染至 K562 细胞, 细胞随机分为 3 组: Control 组、 shRNA-NC 组和 shRNA2-Netrin-1 组。克隆形成实验检测克隆形成率; Western 印迹检测 Netrin-1、 Ki67、 Survivin 蛋白表达; Transwell 检测侵袭细胞数; 划痕实验检测划痕愈合率; 建立白血病 K562 细胞裸鼠移植瘤模型, 检测 30 d 肿瘤体积和肿瘤重量变化; 免疫组化检测 Ki67、 VEGF 阳性细胞数。 结果 体外实验中, 与 Control 组比较, shRNA2-Netrin-1 组K562 细胞克隆形成率、 Ki67 和 Survivin 蛋白表达、 侵袭细胞数及划痕愈合率均降低 ( P< 0. 05); 体内实验中, 与 Control 组比较, shRNA2-Netrin-1 组裸鼠肿瘤体积、 肿瘤重量、 Ki67 阳性细胞数和 VEGF 阳性细胞数均降低 (P< 0. 05)。 结论 敲低 Netrin-1 表达可抑制白血病 K562 细胞体内外增殖及迁移。     

黄芪多糖通过JAK/STAT3通路抑制口腔鳞癌SCC-25裸鼠移植瘤

目的　阐明黄芪多糖（AP）对口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma）细胞系SCC-25移植瘤模型小鼠的影响和机制。 方法　皮下注射口腔鳞癌细胞系SCC-25建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为4组：对照组（cTRL）、AP低剂量组（AP 10 mg）、AP中剂量组（AP 25 mg）和AP高剂量组（AP 50 mg）。AP治疗后,检测移植瘤体积和小鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达水平;TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况;Western blot 检测JAK2/STAT3通路蛋白表达情况和磷酸化情况。 结果　与对照组相比较,AP低、中、高剂量组肿瘤体积明显减小（P<0.01）,小鼠存活率明显增加（P<0.01）,Ki67和VEGF表达水平明显下降（P<0.01）,JAK2/STAT3/c-myc磷酸化水平明显被抑制（P<0.01）。 结论　AP以剂量依赖抑制SCC-25移植瘤体积,提高移植瘤小鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和JAK2/STAT3磷酸化水平。AP可能通过抑制JAK2/STAT3/c-myc信号通路抑制口腔鳞癌细胞SCC-25移植瘤生长。     

腺病毒介导的ING4对裸鼠人骨肉瘤移植瘤的生长抑制作用

目的:研究腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对MG-63人骨肉瘤细胞移植瘤的生长抑制作用及其机制.方法:将本室构建好的重组腺病毒表达载体Ad-ING4,经QBI-293A细胞感染多轮扩增后获得高效价重组病毒子以用于肿瘤基因治疗试验,首先建立MG-63人骨肉瘤细胞移植瘤裸鼠模型,然后将15只荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(PBS组)、空载体对照组(Ad-GFP组)、Ad-ING4实验组(Ad-ING4组),3组均使用瘤体内注射干预用药,隔日一次,共5次.分别于用药前和用药后测量皮下瘤的体积,治疗开始后的第15天将裸鼠脱颈处死,摘取瘤体称重,计算抑瘤率.HE染色观察移植瘤细胞形态,免疫组化法检测瘤体中Bcl-2、Bax、Caspase-3、VEGF、CD34细胞因子的表达.结果:获得了高滴度(10~9pfu/ml)的重组腺病毒Ad-ING4;经瘤体基因治疗后,Ad-ING4组与PBS组及Ad-GFP组相比,可以明显抑制裸鼠MG-63人骨肉瘤细胞移植瘤生长,瘤重抑制率可达59.3%,移植瘤组织中可出现典型的细胞凋亡、坏死现象,其分子机制可能与Ad-ING4明显上调瘤体中促进凋亡的细胞因子Bax、Caspase-3的表达,下调抑制凋亡因子Bcl-2及血管形成细胞因子VEGF、CD34的表达有关.结论:Ad-ING4可以显著抑制MG-63人骨肉瘤细胞荷瘤生长,其机制可能通过激活细胞凋亡和抑制血管形成等途径来发挥抑瘤作用.     

miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞生物学行为和移植瘤生长的影响

目的 探究miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞和体内移植瘤生长的影响。方法 甲状腺癌SW579细胞分为对照组,miR-NC组,miR-133-3p mimic组,按分组转染miR-NC和miR-133-3p mimic。qRT-PCR检测甲状腺癌组织和癌旁组织及转染后细胞中miR-133-3p的表达,克隆形成;EDU染色检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化;Western blot检测Survivin,caspase-3蛋白表达;试剂盒检测细胞上清液中SOD和MDA含量。裸鼠皮下注射转染miR-133-3p mimic或miR-NC的SW579细胞,qRT-PCR检测瘤组织中miR-133-3p表达量,记录瘤组织体积,TUNEL检测瘤组织凋亡,免疫组化检测瘤组织中Survivin和caspase-3的表达。结果 甲状腺癌组织中miR-133-3p的表达降低。体外细胞实验结果显示,与对照组相比,miR-133-3p组miR-133-3p表达量增加,细胞克隆形成率、EDU阳性细胞率和Survivin蛋白表达降低,细胞凋亡率和caspase-3的蛋白表达升高,线粒体膜电位...     

腺病毒介导的IL-24表达对PC-3人前列腺癌细胞体内外抑癌效应

目的:研究腺病毒介导的IL-24基因表达对前列腺癌细胞体内外的抑癌效应及分子机制。方法:将扩增的Ad-IL-24感染PC-3细胞,用RT-PCR和Western blot法检测IL-24基因在PC-3细胞中的表达;MTT法检测IL-24基因表达对PC-3细胞的生长影响;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡变化;RT-PCR法检测IL-24基因的表达对PC-3细胞中的Bcl-2、Bax、p53和Caspase3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-IL-24在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、CD34等与细胞凋亡和血管形成相关因子的表达。结果:IL-24基因在PC-3细胞中成功表达,对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,可上凋p53、Bax、Caspase-3基因和下凋Bcl-2基因表达,进而诱导细胞凋亡。Ad-IL-24能显著抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,瘤重的抑制率可达54%;免疫组化结果显示Ad-IL-24不仅能明显上调Bax和Caspase-3基因和下调Bcl-2基因表达,而且能引起与血管形成标记基因CD34表达水平下降。结论:腺病毒介导的IL-24基因表达在体内外可明显抑制PC-3细胞的生长,诱导其凋亡。其机制可能与上凋P53、Bax、Caspase-3基因和下凋Bcl-2和CD34基因表达水平有关。     

右美托咪啶对人宫颈癌细胞Hela生长和转移能力的影响

目的探究右美托咪啶(Dex)对人宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法将细胞分为Hela组、Dex(1μM)组、Dex(2μM)组和Dex(5μM)组,分别用0,1,2,5μM的Dex处理细胞,用CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ki67、Caspase-3、血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、Akt和p-Akt的表达。结果 Dex作用于细胞4 d后,Dex(1,2,5μM)组细胞增殖速度和Ki67表达水平与Hela组比较明显降低,细胞凋亡率和Caspase-3表达水平明显升高;同时,与Hela组比较,Dex(1,2,5μM)组侵袭细胞数明显减少,划痕闭合率及VEGF表达水平也明显降低;此外,Dex(1,2,5μM)还能显著降低p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比值。结论 Dex能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活抑制人宫颈癌Hela细胞存活和转移。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

shRNA 干扰长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头状癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:探究沉默长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头癌IHH-4 细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:慢病毒 转染PVT1 shRNA(sh-PVT1),RT鄄PCR 检测PVT1 的表达,CCK8 检测细胞增殖倍数,流式检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot 检测细胞Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达;复制裸鼠甲状腺乳头状癌肿瘤移植模型,记录肿瘤生长情况,Western blot 检 测肿瘤组织Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达。结果:sh-PVT1 转染细胞24 h 后,IHH-4 细胞PVT1 的表达水平明显降低(P< 0.01);转染细胞4 d 后,细胞增殖倍数显著降低,增殖标志蛋白Ki67 表达明显被抑制(P<0.05,P<0.01);同时,sh-PVT1 能显 著升高IHH-4 细胞凋亡率,诱导凋亡标志蛋白Caspase-3 表达(P<0.01);此外,sh-PVT1 还可诱导细胞G2/ M 期阻滞,抑制周期 蛋白Cyclin A 的表达(P<0.05,P<0.01)。干扰PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头瘤生长(P<0.01),下调肿瘤组织Ki67 和 Cyclin A 的表达水平(P<0.01),诱导Caspase-3 表达(P<0.01)。结论:沉默PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头癌IHH-4 细胞 增殖且诱导细胞凋亡和周期阻滞。     

大黄酚介导AMPK 依赖性信号通路抑制结肠癌SW480 细胞的增殖、侵袭和裸鼠体内肿瘤形成

目的:以体外培养SW480细胞和体内荷瘤裸鼠为研究对象,探讨大黄酚(Chr)对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭和裸鼠体内肿瘤形成的影响。方法:分别在结肠癌细胞SW480中加入25、50和100μmol/L大黄酚,Brdu染色法检测细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki67和PCNA表达水平;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot检测VEGF、E-cadherin和N-cadherin等上皮间充质转化相关蛋白表达,免疫荧光法检测波形蛋白表达情况;Western blot检测信号通路AMPK、mTOR和cyclin D1表达;建立移植瘤裸鼠模型,分别腹腔注射12.5、25和50 mg/kg大黄酚,检测荷瘤小鼠存活率、肿瘤重量,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki67和PCNA表达水平,Western blot检测信号通路AMPK、mTOR和cyclin D1活化情况。结果:体外实验表明,大黄酚能剂量依赖性地抑制人结肠癌SW480细胞增殖和Ki67、PCNA蛋白表达(P0.05或P0.01),降低细胞划痕闭合率和侵袭细胞数量(P0.05或P0.01),调节E-cadherin、VEGF、N-cadherin、Vimentin、AMPK、mTOR和cyclin D1在SW480细胞中的表达水平(P0.05或P0.01);体内实验表明,与对照组(0.45±0.09)g相比,大黄酚各剂量组肿瘤组织重量分别为(0.32±0.06)g、(0.24±0.07)g和(0.15±0.04)g,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01),且大黄酚剂量依赖性地抑制Ki67和PCNA表达(P0.05或P0.01),调控AMPK、p-mTOR和cyclin D1在肿瘤组织的表达(P0.05或P0.01)。结论:大黄酚通过AMPK信号通路抑制结肠癌SW480细胞的增殖、侵袭及荷瘤小鼠肿瘤形成。     

锌指蛋白12过表达促进甲状腺癌细胞的增殖并抑制其凋亡

目的探讨SMAD-相互作用锌指蛋白12(ZCCHC12)对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用Western blot检测30例甲状腺癌患者癌组织和癌旁组织中ZCCHC12的蛋白表达及细胞中cleaved caspase-3、caspase-9、BMP-2、p-SMAD1、SMAD1和ID3的蛋白表达。ZCCHC12过表达质粒pcDNA3.1-ZCCHC12或抑制质粒ZCCHC12 siRNA转染甲状腺癌细胞系CGTH W-3和FTC-133。MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 ZCCHC12的表达在甲状腺癌组织较癌旁组织中显著增加(P0.05)。ZCCHC12过表达显著增强了CGTH W-3和FTC-133的细胞增殖、降低了细胞凋亡、抑制了凋亡蛋白cleaved caspase-3和caspase-9的表达并升高了BMP-2、p-SMAD1和ID3的蛋白表达(P0.05)。ZCCHC12抑制质粒则与过表达质粒作用相反。结论 ZCCHC12通过调控BMPs/SMAD通路增强甲状腺癌细胞CGTH W-3和FTC-133的增殖并抑制其凋亡。     

五味子乙素通过激活Caspase-3影响三阴乳腺癌增殖和凋亡

目的观察中药五味子乙素对三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法利用MTT实验验证五味子乙素对三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231的毒性作用;利用流式细胞术检测不同浓度的五味子乙素对MDA-MB-231细胞凋亡的影响;利用裸鼠移植瘤模型分析五味子乙素对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响;利用蛋白免疫印迹方法检测各组移植瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果五味子乙素呈剂量依赖性显著抑制MDA-MB-231细胞的体外增殖能力,促进细胞的凋亡,较好地抑制乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长,明显缩小肿瘤体积。五味子乙素处理后肿瘤裸鼠模型的肿瘤组织中Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,说明五味子乙素促进移植瘤细胞凋亡。结论五味子乙素抑制MDA-MB-231细胞增殖并促进凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的生长。