miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平.通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系.结果 与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33'UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33'UTR的萤光素酶活性无影响.结论 下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡.     

miR-454-3p靶向TCF-4对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨miR-454-3p与TCF-4的靶向关系,以及对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法 miR-454-3p mimic和(或)pLV-TCF-4转染GRC-1细胞后,采用qRT-PCR法检测miR-454-3p和TCF-4 mRNA水平;Western blot法检测TCF-4蛋白的表达;双荧光素酶报告实验验证miR-454-3p与TCF-4的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-454-3p mimic抑制TCF-4 mRNA和蛋白的表达;pLV-TCF-4缓解miR-454-3p对TCF-4蛋白表达的抑制作用。miR-454-3p mimic与TCF-4野生型报告载体共转,荧光素酶活性降低;与TCF-4突变型报告载体共转后,荧光素酶活性无明显变化。与GRC-1组相比,miR-454-3p mimic转染到GRC-1细胞后,细胞增殖倍数明显降低(P0.01),细胞凋亡率由(5.08±1.21)%增加到(23.12±1.82)%,伤口愈合率由(58.43±6.32)%降低到(32.15±5.16)%,侵袭细胞数目由113.54±9.27减少至51.21±6.03;共转染miR-454-3p mimic和pLV-TCF-4后,能够逆转上述改变。结论 miR-454-3p可通过靶向TCF-4抑制人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

miR-143-3p 靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖，凋亡和侵袭的调节作用#br#

目的　研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。 方法　qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的mRNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。 结果　miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。 结论　miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。     

miR-98-5p对STAT3诱导的人舌鳞癌细胞SCC-25凋亡、 增殖和成瘤性的影响*

目的：探讨miR-98-5p 对人舌鳞癌细胞SCC-25 凋亡和肿瘤干样特性及裸鼠成瘤的影响。方法：将SCC-25 细胞转染mimic mock、miR-98-5p mimic、inhibitor-NC、miR-98-5p inhibitor 后分为对照（ control）组、模拟物 对照（ mimic-mock）组、模拟物（ mimic）组、抑制剂阴性对照（ inhibitor-NC）组和抑制剂（ inhibitor）组。 逆转录- 聚合酶链反应（ RT-PCR）检测miR-98-5p 表达;克隆形成法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; RT-PCR 检测Ki67、增殖细胞核抗原（ PCNA）、Bax、Bcl-2 mRNA水平;细胞成球实验检测细胞成球体积、成 球数目;免疫印迹检测信号转导和转录活化因子3（ STAT3）磷酸化情况;建立移植瘤裸鼠模型,慢病毒转染 mimic,将裸鼠随机分为control 组和mimic 组,检测肿瘤质量和体积,免疫印迹检测STAT3 磷酸化情况,免疫组 织化学检测Ki67 阳性表达率。结果：与control 组相比较,mimic 组miR-98-5p 水平显著升高,克隆形成率显著降低, 凋亡率显著升高,Ki67、PCNA mRNA水平显著降低,Bax/Bcl-2 比值升高,成球体积、成球数目显著降低,p-STAT3/ STAT3 水平显著降低;inhibitor 组miR-98-5p 水平显著降低,克隆形成率显著升高,Ki67、PCNA mRNA水平显 著升高,Bax/Bcl-2 比值降低,成球体积、成球数目显著升高,p-STAT3/STAT3 水平显著升高;mimic 组肿瘤质 量显著降低,肿瘤体积显著降低,Ki67 阳性表达率显著降低,p-STAT3/STAT3 水平显著降低。结论：miR-98-5p mimic 可通过抑制STAT3 诱导人舌鳞癌细胞SCC-25 凋亡,抑制增殖和移植瘤生长。     

miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞生物学行为和移植瘤生长的影响

目的 探究miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞和体内移植瘤生长的影响。方法 甲状腺癌SW579细胞分为对照组,miR-NC组,miR-133-3p mimic组,按分组转染miR-NC和miR-133-3p mimic。qRT-PCR检测甲状腺癌组织和癌旁组织及转染后细胞中miR-133-3p的表达,克隆形成;EDU染色检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化;Western blot检测Survivin,caspase-3蛋白表达;试剂盒检测细胞上清液中SOD和MDA含量。裸鼠皮下注射转染miR-133-3p mimic或miR-NC的SW579细胞,qRT-PCR检测瘤组织中miR-133-3p表达量,记录瘤组织体积,TUNEL检测瘤组织凋亡,免疫组化检测瘤组织中Survivin和caspase-3的表达。结果 甲状腺癌组织中miR-133-3p的表达降低。体外细胞实验结果显示,与对照组相比,miR-133-3p组miR-133-3p表达量增加,细胞克隆形成率、EDU阳性细胞率和Survivin蛋白表达降低,细胞凋亡率和caspase-3的蛋白表达升高,线粒体膜电位...     

miR-485-5p 在前列腺癌组织中表达的临床意义及对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究miR-485-5p在前列腺癌(PC)组织中表达的临床意义及对PC细胞生物学行为的影响。方法:实时定量PCR(RT-PCR)检测45例PC组织、癌旁组织及3种PC细胞系(LNCaP、22RV1、PC-3)中miR-485-5p相对表达量,分析PC组织miR-485-5p表达量与各病理参数间的关系。将PC细胞分为miR-485-5p mimic组(miR组)和阴性对照组(NC组),分别转染miR-485-5p mimic及对照质粒,采用MTT法检测两组细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭。结果:PC组织中miR-485-5p相对表达量明显低于癌旁组织(P0.05),3种细胞系中LNCaP细胞miR-485-5p表达量最低。PC组织中miR-485-5p表达与淋巴结转移、临床病理分级及TNM分期相关(P0.05)。转染后,miR组miR-485-5p表达量明显高于NC组(P0.05)。随着孵育时间延长,miR组细胞抑制率及凋亡率均明显升高,且高于NC组(P0.05);miR组细胞划痕愈合率及侵袭细胞数均低于NC组(P0.05)。结论:miR-485-5p在PC组织及细胞中低表达,且与病理参数相关,通过上调其表达水平可明显抑制PC细胞增殖、迁移及侵袭并诱导凋亡。     

甘草己烷-乙醇提取物通过miR-151a-5p/GABARAPL1轴调控前列腺癌细胞增殖、凋亡北大核心CSCD

目的:探讨甘草己烷-乙醇提取物(HEGU)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法:人前列腺癌细胞PC-3分为对照(NC)组、不同剂量HEGU组、anti-con组、anti-miR-151a-5p组、HEGU+miR-con组、HEGU+miR-151a-5p组。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达;RT-qPCR检测miR-151a-5p和GABA A型受体相关蛋白样1(GABARAPL1)mRNA表达;双荧光素酶报告实验检测miR-151a-5p与GABARAPL1的靶向关系。结果:与NC组相比,不同剂量HEGU组前列腺癌细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达降低,p21、Bax表达升高,miR-151a-5p表达降低,GABARAPL1 mRNA表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与anti-con组相比,anti-miR-151a-5p组细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达降低,p21、Bax表达升高(P<0.05)。miR-151a-5p靶向负调控GABARAPL1表达。过表达miR-151a-5p逆转了HEGU对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响。结论:HEGU可能通过调控miR-151a-5p/GABARAPL1抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

miR-143-3p靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖,凋亡和侵袭的调节作用

目的研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。方法qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的m RNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。结果 miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。结论 miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。     

miR-296-5p 靶向 PLK1 调控 PI3K/ AKT 通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化

目的 探讨 miR-296-5p 靶向 PLK1 对骨肉瘤 (osteosarcoma, OS) 细胞自噬及抑制上皮-间质转化 (EMT) 的作用机制。 方法 qRT-PCR 检测 miR-296-5p 在 OS 细胞中的表达。 采用生物信息学分析预测 miR-296-5p 的靶基因, 验证 miR-296-5p 对靶基因 PLK1 的直接靶向调控; 细胞转染构建 miR-296-5p 过表达 和干扰细胞, CCK-8、 克隆形成、 Transwell 小室、 流式、 蛋白免疫印迹实验检测 miR-296-5p 的不同表达对 U2OS 细胞中 PTBP1 表达水平及细胞增殖、 侵袭、 凋亡、 自噬及 EMT 的影响。 结果 与对照组比较, miR-296-5p 在 OS 中表达降低, 而 PLK1 则升高 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, mimic 组的克隆形成率、 侵袭 细胞数目及 PTBP1、 p62、 N-cadherin、 Vimentin、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 水平降低, 细胞凋亡率、 Beclin-1、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 E-cadherin 水平升高 (P< 0. 05); 与 PLK1 组比较, PLK1 + mimic 组的克隆形成率、 侵袭 细胞数目及 PTBP1、 p62、 N-cadherin、 Vimentin、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 水平降低, 细胞凋亡率、 Beclin-1、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 E-cadherin 水平升高 (P< 0. 05)。 结论 miR-296-5p 可能能够靶向 PLK1 调控 PI3K/ AKT 通路诱导 OS 细胞中的自噬并抑制 EMT。     

miR-24-3p靶向HIF-1α体外调节AngiotensinⅡ诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移

目的:探讨miR-24-3p靶向HIF-1α对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ)体外诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:分离C57BL/6小鼠原代动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)体外培养,分为对照组和诱导组,诱导组用10~(-8)mol/L AngiotensinⅡ诱导VSMCs,采用qRT-PCR法检测miR-24-3p和HIF-1α表达,运用生物信息学预测和荧光素酶实验验证miR-24-3p和HIF-1α的靶向关系;体外原代培养VSMCs分为对照组,诱导组,诱导组+mimic,诱导组+pc-HIF-1α,采用Western blot法检测各组的HIF-1α蛋白表达水平,Colony forming法检测细胞增殖,Hoechest法检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell小室迁移实验检测细胞迁移侵袭。结果:诱导组miR-24-3p mRNA的表达极显著低于对照组,HIF-1α的表达极显著高于对照组(P0.01);HIF-1α是miR-24-3p的预测靶点;与对照组相比,诱导组和诱导组+pc-HIF-1α组HIF-1α的表达极显著增加,诱导组+mimic组HIF-1α的表达极显著下降(P0.01);与对照组相比,诱导组和诱导组+pc-HIF-1α组细胞的集落率和迁移率显著上调、凋亡率显著下调,诱导组+mimic组细胞的集落率和迁移率显著下调、凋亡率显著上调。结论:miR-24-3p通过抑制HIF-1α的表达,抑制AngiotensinⅡ诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移,促进其凋亡。     

miR-155-5p在宫颈癌血清中的表达及其对宫颈癌细胞的影响

 目的：检测miR-155-5p在不同宫颈疾病患者血清中的表达差异,并分析其对宫颈癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-155-5p在宫颈癌发生、发展中的可能作用机制。方法：采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,检测并分析比较miR-155-5p在不同宫颈疾病患者血清中的表达差异。利用miR-155-5p mimic或inhibitor提高或降低宫颈癌细胞中miR-155-5p的表达。CCK-8法和流式细胞术检测宫颈癌细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果：宫颈癌组血清中miR-155-5p的表达高于宫颈炎组和健康对照组（P<0.05）,宫颈上皮内瘤样病变组和宫颈癌组血清中miR-155-5p的表达差异无统计学意义（P>0.05）。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染100 nmol/L和200 nmol/L miR-155-5p mimic的SiHa细胞中,S期细胞比例升高,凋亡细胞比例降低（P<005）。转染100 nmol/L和200 nmol/L miR-155-5p inhibitor的SiHa细胞中,G2/M期细胞比例明显增多（P<005）。结论：(1)宫颈癌患者血清中miR-155-5p表达较健康对照人群上调,可能作为宫颈癌早期诊断的肿瘤分子标志物。(2)miR-155-5p对宫颈癌HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡无明显影响。(3)miR-155-5p可促进宫颈癌SiHa细胞进入S期,并抑制SiHa细胞凋亡,提示miR-155-5p可能在宫颈鳞癌发生、发展中起作用。     

miR-152-3p 靶向TCF4 对人胃癌SGC-7901 细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探究miR-152-3p 对人胃癌SGC鄄7901 细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:用miR鄄152 类似物(miR-152 mimic) 转染细胞,RT鄄PCR 检测miR-152 及转录因子4(TCF4) 的表达;荧光素酶报告实验证明miR1523p 与TCF4 的靶 向关系;miR-152 mimic 和TCF pcDNA 重组质粒(pc鄄TCF4) 分别或同时转染细胞,Western blot 检测TCF4 的表达,CCK8 检测细 胞增殖情况;流式检测细胞凋亡情况。结果:miR152 mimic 能显著升高SGC鄄7901 细胞miR-1523p 的表达水平,降低TCF4 的 mRNA 水平;同时,miR152 mimic 还能显著降低TCF4 野生型荧光素酶活性;此外,miR-152 mimic 能显著降低SGC-7901 细胞 的增殖倍数,升高细胞凋亡率;pc-TCF4 能显著减弱miR-152 mimic 抑制SGC7901 细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。结论: miR-1523p 能抑制人胃癌SGC7901 细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与靶向调控TCF4 表达有关。     

p16和p27表达对前列腺癌细胞系的作用

目的 探讨p16和p27Kip1 基因蛋白对抑制前列腺癌细胞增殖和调控其凋亡的作用.方法 构建携带人P16和p27基因的腺病毒载体,转染体外培养的前列腺癌细胞系PC-3,采用RT-PCR、Western blot检测目的 基因的表达.通过细胞生长试验、流式细胞仪检测PC-3转染前后细胞增殖和凋亡的变化.结果 病毒滴度Ad-p16为115×10^8 pfuPml 、Ad-p27为112×10^9 pfuPml ,RT-PCR 检测可见p16-mRNA（520bp）和p27Kip12mRNA （320bp）表达,Western blot检测有p16 蛋白（65KD）和P27蛋白（27KD） 特异表达,并可明显抑制PC-3细胞的增殖,诱导其凋亡,联合基因治疗组与单基因组相比差异显著（P＜0.01）.结论 p16和p27可明显抑制前列腺癌细胞株PC-3的增殖,增加细胞的凋亡,转染携带p16和p27的重组腺病毒载体有望成为治疗前列腺癌的有效方法.     

Tumor suppressive microRNA-375 regulates oncogene AEG-1/MTDH in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC)

Our microRNA (miRNA) expression signatures of hypopharyngeal squamous cell carcinoma, maxillary sinus squamous cell carcinoma and esophageal squamous cell carcinoma revealed that miR-375 was significantly reduced in cancer tissues compared with normal epithelium. In this study, we focused on the functional significance of miR-375 in cancer cells and identification of miR-375-regulated novel cancer networks in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Restoration of miR-375 showed significant inhibition of cell proliferation and induction of cell apoptosis in SAS and FaDu cell lines, suggesting that miR-375 functions as a tumor suppressor. We adopted genome-wide gene expression analysis to search for miR-375-regulated molecular targets. Gene expression data and luciferase reporter assays revealed that AEG-1/MTDH was directly regulated by miR-375. Cancer cell proliferation was significantly inhibited in HNSCC cells transfected with si-AEG-1/MTDH. In addition, expression levels of AEG-1/MTDH were significantly upregulated in cancer tissues. Therefore, AEG-1/MTDH may function as an oncogene in HNSCC. The identification of novel tumor suppressive miRNA and its regulated cancer pathways could provide new insights into potential molecular mechanisms of HNSCC oncogenesis.     

circ_ 0061140 靶向 miR-6838-5p 促进非小细胞肺癌细胞的增殖、 阻滞细胞周期、 诱导细胞凋亡

目的 通过实验研究确认环状 RNA (circRNA) circ_ 0061140 是否能靶向 miR-6838-5p 调控非小 细胞肺癌细胞的增殖、 细胞周期和凋亡。 方法 采用逆转录-定量聚合酶链反应 (RT-qPCR) 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 在非小细胞肺癌细胞中的表达情况。 将非小细胞肺癌 NCI-H1299 细胞分为 si-circ_ 0061140 组 (转染 si-circ_ 0061140; 低表达 circ_ 0061140)、 si-NC 组 (转染 si-NC; 阴性对照)、 NC 组 (未 转染; 空白对照)、 miR-6838-5p 组 (转染 miR-6838-5p 模拟物; 高表达 miR-6838-5p)、 miR-NC 组 (转染 miR-NC; 高表达 miR-6838-5p 的阴性对照)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-NC 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-NC)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-6838-5p 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-6838-5p)。 采用 Western 印迹检测细胞周期蛋白 D1 ( cyclinD1)、 活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 ( cleaved caspase-3) 蛋白表达, MTT 法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。 双荧光素酶活性 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 的靶向结合。 结果 非小细胞肺癌组织、 细胞 NCI-H1299、 NCI-H2170、 NCI-H1975 中的 circ_ 0061140 表达量均比癌旁组织或正常肺上皮细胞 BEAS-2B 高, miR-6838-5p 表达量比 癌旁组织或 BEAS-2B 细胞低 (P均 < 0. 05)。 si-circ_ 0061140 组或 miR-6838-5p 组 NCI-H1299 细胞的 CyclinD1 蛋白表达量、 增殖能力、 S 期细胞比例比 NC 组减少, Cleaved-caspase-3 蛋白表达量、 G0 / G1期细胞比 例、 凋亡率比 si-NC 组或 miR-NC 组增加 (P均 < 0. 05)。 circ_ 0061140 靶向调控 miR-6838-5p 的表达。 共转 染 si-circ_ 0061140、 anti-miR-6838-5p 可减弱转染 si-circ_ 0061140 对细胞生物学行为的作用。 结论 低表达 circ_ 0061140 通过靶向非小细胞肺癌细胞的 miR-6838-5p, 抑制细胞增殖、 阻滞 G0 / G1期细胞周期, 并加速 凋亡。     

miR-26-p 在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p 在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR 检测35 例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p 表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic 及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 法和流式细胞术检测, Transwell 小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35 例癌组织中miR-126-3p 相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.28 vs 0.981±0.039,t =10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1 细胞中miR-126-3p 相对表达量最低;与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 增殖受到显著的抑制,第3 天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 凋亡显著增加[(15.32±3.20)% vs (8.12±1.17)%,t = 4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t =8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p 表达降低,上调miR-126-3p 表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR- 126-3p 可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。     

微小RNA活性分析法筛选前列腺癌去势抵抗转化相关微小RNA的实验研究

目的 探讨微小RNA(miRNA)活性分析法筛选前列腺癌去势抵抗转化相关miRNA的效率。方法 应用miRNA活性分析法筛选出在前列腺癌去势抵抗过程中潜在的发挥活性作用的miRNAs。培养人激素敏感型前列腺癌LNCAP细胞(对照组)及人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞(C4-2组)、PC-3细胞(PC-3组)、DU-145细胞(DU-145组),提取各组细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miRNAs,比较各组细胞miRNAs的表达情况。结果 应用miRNA活性分析法,依据筛选流程,共选出9个差异表达的miRNAs,分别为miR-1、miR-122、miR-218、miR-145、miR-155、miR-210、miR-197、 miR-346、let-7b。采用qPCR检测这9个miRNAs,结果显示,7个miRNAs在两种不同状态下的前列腺癌细胞中存在差异表达;在不同去势抵抗型前列腺癌细胞中,miR-210、miR-197、miR-346、miR-218均明显高表达,而miR-122、miR-145、let-7b均明显低表达。结论 采用miRNA活性分析法筛选前列腺癌去势抵抗转化相关miRNA,有着较高的准确性与可信度;其具体转化过程还需进一步证实。