miR-17-5p调控PTEN对大脑中动脉闭塞大鼠的神经保护作用

目的本文建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠,研究miR-17-5p(microRNA-17-5p)对模型大鼠的神经保护作用及其可能机制。方法大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)、MCAO+mimic组、MCAO+inhibitor组和MCAO+BPV组。采用线栓法建立MCAO大鼠模型。建模24 h后,检测大鼠脑含水量和神经功能;HE染色观察大鼠脑组织病理学改变;TUNEL染色检测大鼠脑组织神经元细胞凋亡情况;预测miR-17-5p和PTEN是否存在连续的结合位点,RT-PCR检测两者mRNA表达水平;Western blot检测脑组织中PTEN、AKT和哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)的磷酸化水平。结果 miR-17-5p和PTEN存在连续结合位点。与模型组比较,MCAO+mimic组和MCAO+BPV组大鼠神经功能评分、脑含水量、神经细胞凋亡率、PTEN的m RNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01),脑组织病理学损伤也明显改善,而miR-17-5p、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR表达水平显著增加(P0.01)。此外,MCAO+inhibitor组上述指标则正好相反(P0.05或P0.01)。结论 miR-17-5p表达上调对MCAO大鼠具有神经保护作用,其功能发挥可能与介导调控PTEN信号通路相关。     

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的 ：观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法 ：将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后，模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水，miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分，测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量，检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率，caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果 ：miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组，miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组；miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白...     

miR-218-5p下调SD大鼠成骨细胞骨硬化蛋白的表达

目的:探讨SD大鼠成骨细胞中微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨硬化蛋白(SOST)表达的影响及其作用机制。方法:用生物信息学数据库RNAhybrid和TargetScan预测miR-218-5p靶向SOST基因;构建携带靶基因野生型及突变型3’-非翻译区的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-218-5p模拟物(mimic)或抑制剂(inhibitor),共转染293T细胞,应用双萤光素酶报告基因检测试剂盒测定萤光素酶活性;分离并培养SD大鼠成骨细胞,茜素红染色鉴定,设miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组及空白和阴性对照组,转染SD大鼠成骨细胞,RT-PCR检测SOST的mRNA表达,Western blot法检测SOST的蛋白表达水平。结果:双萤光素酶报告基因实验验证SOST是miR-218-5p的潜在靶基因;RT-PCR和Western blot实验结果示,SD大鼠成骨细胞转染miR-218-5p mimic后,SOST mRNA及蛋白表达均明显下调,转染miR-218-5p inhibitor后均明显上调,与空白及阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:miR-218-5p靶向SOST基因,从而下调SD大鼠成骨细胞SOST蛋白的表达。     

miR-25-3p靶向调节PTEN对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的 探究miR-25-3p靶向调节10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因（PTEN）对子宫内膜癌（EC）细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法 qRT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞与人EC细胞株HEC-1-A、RL95-2、Ishikawa中miR-25-3p、PTEN表达。取Ishikawa细胞随机分为对照组、miR-25-3p inhibitor组、miR-25-3p inhibitor阴性对照+空载组、共转染组,分组转染后,检测各组Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、增殖蛋白（PCNA）和凋亡蛋白（caspase-9、Bax）、上皮间质转化标志蛋白（Vimentin、E-cadherin）表达、miR-25-3p和PTEN mRNA表达、miR-25-3p对PTEN的靶向调控作用。结果 与人子宫内膜上皮细胞相比,人EC细胞株Ishikawa、HEC-1-A、RL95-2中miR-25-3p表达升高（P<0.05）,PTEN mRNA表达降低（P<0.05）。与对照组相比,miR-25-3p inhibitor组细胞迁移距离、侵袭细胞数、细胞miR-25...     

miR-98-5p对STAT3诱导的人舌鳞癌细胞SCC-25凋亡、 增殖和成瘤性的影响*

目的：探讨miR-98-5p 对人舌鳞癌细胞SCC-25 凋亡和肿瘤干样特性及裸鼠成瘤的影响。方法：将SCC-25 细胞转染mimic mock、miR-98-5p mimic、inhibitor-NC、miR-98-5p inhibitor 后分为对照（ control）组、模拟物 对照（ mimic-mock）组、模拟物（ mimic）组、抑制剂阴性对照（ inhibitor-NC）组和抑制剂（ inhibitor）组。 逆转录- 聚合酶链反应（ RT-PCR）检测miR-98-5p 表达;克隆形成法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; RT-PCR 检测Ki67、增殖细胞核抗原（ PCNA）、Bax、Bcl-2 mRNA水平;细胞成球实验检测细胞成球体积、成 球数目;免疫印迹检测信号转导和转录活化因子3（ STAT3）磷酸化情况;建立移植瘤裸鼠模型,慢病毒转染 mimic,将裸鼠随机分为control 组和mimic 组,检测肿瘤质量和体积,免疫印迹检测STAT3 磷酸化情况,免疫组 织化学检测Ki67 阳性表达率。结果：与control 组相比较,mimic 组miR-98-5p 水平显著升高,克隆形成率显著降低, 凋亡率显著升高,Ki67、PCNA mRNA水平显著降低,Bax/Bcl-2 比值升高,成球体积、成球数目显著降低,p-STAT3/ STAT3 水平显著降低;inhibitor 组miR-98-5p 水平显著降低,克隆形成率显著升高,Ki67、PCNA mRNA水平显 著升高,Bax/Bcl-2 比值降低,成球体积、成球数目显著升高,p-STAT3/STAT3 水平显著升高;mimic 组肿瘤质 量显著降低,肿瘤体积显著降低,Ki67 阳性表达率显著降低,p-STAT3/STAT3 水平显著降低。结论：miR-98-5p mimic 可通过抑制STAT3 诱导人舌鳞癌细胞SCC-25 凋亡,抑制增殖和移植瘤生长。     

miR-194-5p通过靶向TLR4/NF-κB通路调控免疫因子IL-6/10对肾病综合征大鼠细胞凋亡的影响

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-194-5p通过靶向Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子(nuclear factor,NF)-κB通路调控免疫因子(interleukin,IL)-6/10对肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)大鼠肾细胞凋亡的影响。方法将通过嘌呤霉素氨基核苷构建的NS大鼠随机分为NS组、NS+miR-194-5p agomir组和NS+miR-194-5p antagomir组(n=15),通过腹腔内注射miR-194-5p agomir或antagomir(300μg)以提高或抑制miR-194-5p。检测各组大鼠肾功能指标、炎性因子、凋亡情况以及TLR4/NF-κB通路水平。通过双荧光素酶报告验证miR-194-5p和TLR4的靶向关系。将肾胚细胞293细胞分为miR-194-5p NC组和miR-194-5p mimic组,通过转染miR-194-5p mimic过表达miR-194-5p,通过RT-qPCR和Western blot检测各组TLR4 mRNA和蛋白水平。结果 NS组的...     

miR-138-5p 靶向缺氧诱导因子对人肾癌细胞GRC-1 生长、侵袭和迁移 的影响

目的:本研究旨在探索miR-138-5p对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:GRC-1细胞机分为5组:对照(GRC-1)组、mimic-scramble组、miR-138 mimic组、HIF-1α过表达(pc-HIF-1α)组和共转染(mimic+pc-HIF-1α)组。荧光素酶实验确定miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系。实时定量PCR检测miR-138-5p的表达及HIF-1α的mRNA水平。蛋白印迹检测HIF-1α的蛋白水平。CCK-8检测细胞增殖。流式细胞术分析细胞凋亡。Transwell检测细胞侵袭能力。划痕实验分析细胞迁移能力。结果:荧光素酶实验表明miR-138-5p可靶向HIF-1α。miR-138 mimic组miR-138表达高于对照组(P0. 01)。同时,miR-138 mimic组HIF-1α的mRNA水平低于对照组(P0. 01)。miR-138 mimic组HIF-1α的蛋白水平低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平上升(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平低于pc-HIF-1α组(P0. 01)。miR-138 mimic组细胞增殖倍数低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组细胞增殖倍数升高(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组细胞增殖倍数低于pc-HIF-1α组(P0. 01)。miR-138 mimic组细胞凋亡率高于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组细胞凋亡率下降(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组细胞凋亡率高于pc-HIF-1α组(P0. 01)。miR-138 mimic组细胞侵袭和迁移能力低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组细胞侵袭和迁移能力增加(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组细胞侵袭和迁移能力低于pc-HIF-1α组(P0. 01)。结论:miR-138-5p靶向HIF-1α可减弱人肾癌GRC-1细胞增殖、侵袭和迁移,增强细胞凋亡。     

过表达miR-5195-3p对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-5195-3p对Runx相关转录因子3(RUNX3)的靶向调节作用及对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 RT-qPCR和Western blot分别检测结直肠癌组织与癌旁组织中miR-5195-3p和RUNX3蛋白的表达。将人结肠癌细胞系SW480随机分为5组:对照组(control)、miR-5195-3p mimic组、mimic control组、miR-5195-3p inhibitor组、inhibitor control组。Wetsern blot检测RUNX3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。在SW480细胞中转染RUNX3过表达质粒后检测细胞凋亡。结果与癌旁组织中相比,miR-5195-3p在结直肠癌组织中的表达显著升高,RUNX3的蛋白表达明显降低(P0.05)。过表达miR-5195-3p显著下调了SW480细胞中RUNX3的表达,并降低细胞凋亡水平(P0.05);抑制miR-5195-3p明显上调RUNX3的表达,并上调细胞凋亡水平(P0.05)。此外与miR-5195-3p mimic组相比,RUNX3过表达质粒的共转染组显著降低细胞凋亡水平(P0.05)。结论 miR-5195-3p可能作为促癌基因在结直肠癌中发挥作用,其作用与靶向调节RUNX3相关。     

miR-17-5p通过靶向抑制MICB表达降低肝癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性

目的:探讨miR-17-5p在HCC细胞系HepG2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB基因3'UTR序列、突变型MICB基因3'UTR序列、miR-17-5p mimic序列、miR-17-5p-NC序列、anti-miR-17-5p序列的质粒载体分别或共转染HCC细胞系HepG2,使用丙戊酸钠处理转染或未转染细胞。应用荧光素酶活性测定检测miR-17-5p对MICB的调控作用。应用实时荧光定量PCR检测细胞或组织中miR-17-5p及MICB mRNA表达情况,利用蛋白免疫印迹法检测MICB蛋白表达情况。对比转染质粒后各组细胞中miR-17-5p和MICB mRNA及蛋白的表达情况,分析Target Scan预测和荧光素酶活性测定结果、miR-17-5p与MICB蛋白在HCC组织中的表达及与临床病理特征的关系、miR-17-5p与MICB蛋白在HCC组织中表达的相关性,并对比各组MICB蛋白表达和NK细胞介导的细胞毒性、丙戊酸钠各组NK细胞毒性。结果:①与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平较高,MICB mRNA和蛋白表达水平均较低(P 0. 05);与anti-miR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17-5p组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平均较低,MICB mRNA和蛋白表达水平均较高(P 0. 05);与miR-17-5p-NC+MICB 3'UTR-Wt组相比,miR-17-5p-mimic+MICB 3'-UTR-Wt组荧光素酶活性较低(P 0. 05)。miR-17-5p-NC+MICB 3'UTR-Mut组与miR-17-mimic+MICB 3'-UTR-Mut组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P 0. 05)。②与对应癌旁非肿瘤组织相比,miR-17-5p在HCC组织中的表达水平较高,而MICB蛋白表达水平较低(P 0. 05)。miR-17-5p和MICB蛋白的表达与肿瘤直径、远处转移、TNM分期、分化程度等临床病理特征有关(P 0. 05)。在HCC肿瘤组织中miR-17-5p与MICB蛋白表达水平呈明显负相关(P 0. 05)。③与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组NK细胞毒性、MICB蛋白表达水平均较低(P 0. 05);与miR-17-5p-mimic+MICB 3'UTR-Mut组相比,miR-17-5p-mimic+MICB-3'UTR-Wt共转染组中NK细胞毒性和MICB蛋白表达水平均较高(P 0. 05);与anti-miR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17-5p组NK细胞毒性和MIBC蛋白表达均较高(P 0. 05)。④与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic组细胞中MICB表达水平较低(P 0. 05)。在不同效靶比时,与Ctrl组相比,丙戊酸钠组NK细胞毒性较高(P 0. 05)。与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic组NK细胞毒性较低(P 0. 05)。结论:miR-17-5p通过靶向MICB降低Hep G2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性,从而抑制NK细胞对肝癌细胞的毒性。     

miR-17-5p 靶向MICB 减弱NK 细胞对肝癌细胞的毒性作用

目的:探讨miR-17-5p 在肝细胞癌(HCC)HepG2 细胞对NK 细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB 基因3忆UTR 序列、突变型MICB 基因3忆UTR 序列、miR-17-5p mimic 序列、miR-17-5p-NC 序列、anti-miR-17-5p 序列的质粒载体分别或共转染HCC HepG2 细胞,使用丙戊酸钠处理转染或未转染细胞。应用荧光素酶活性测定检测miR-17-5p 对MICB 的调控作用。应用实时荧光定量PCR 或蛋白免疫印迹检测细胞或组织中miR-17-5p 及MICB mRNA 和蛋白表达情况。结果:淤与miR-17-5p-NC 组相比,miR-17-5p-mimic 组HepG2 细胞中miR-17-5p 表达水平显著升高,MICB mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与anti-miR-17-5p-NC 组相比,anti-miR-17-5p 组HepG2 细胞中miR-17-5p 表达水平均显著降低,MICB mRNA 和蛋白表达水平均显著增加(P<0’05)。与miR-17-5p-NC+MICB 3’UTR-Wt 组相比,miR-17-5p-mimic+MICB 3’-UTR-Wt 组荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。miR-17-5p-NC+MICB 3’UTR-Mut 组与miR-17-mimic+MICB 3’-UTR-Mut组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。于与对应癌旁非肿瘤组织相比,miR-17-5p 在HCC 组织中的表达水平显著增加,而MICB 蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。miR-17-5p 和MICB 蛋白的表达与肿瘤直径、远处转移、TNM 分期、分化程度等临床病理特征有关(P<0.05)。在HCC 肿瘤组织中miR-17-5p 与MICB 蛋白表达水平呈明显负相关(P<0.05)。 与miR-17-5p-NC 组相比,miR-17-5p-mimic 组MICB 蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与miR-17-5p-mimic+MICB 3’UTR-Mut组相比,miR-17-5p-mimic+MICB-3’UTR-Wt 共转染组中NK 细胞毒性和MICB 蛋白表达水平均显著增加(P 均<0.05)。与anti-miR-17-5p-NC 组相比,anti-miR-17 组NK 细胞毒性和MICB 蛋白表达水平均显著增加(P 均<0.05)。 与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC 组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic 组细胞中MICB 表达水平显著降低(P<0.05)。在不同效靶比时,与Ctrl 组相比,丙戊酸钠组NK 细胞毒性显著增加(P<0.05)。与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC 组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic 组NK 细胞毒性显著降低(P<0.05)。结论:miR-17-5p 通过靶向MICB 降低HepG2 细胞对NK 细胞介导的细胞毒性敏感性,从而抑制NK 细胞对肝癌细胞的毒性。     

miR-377-5p靶向IRAK1通过抑制JNK信号通路改善脑缺血再灌注大鼠神经损伤和炎性反应

目的 探究miR-377-5p对脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠神经损伤和炎性反应的作用及机制.方法 通过生物信息学预测到miR-377-5p与白介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinases,IRAK1)靶向关系.SD大鼠随机...     

miR-150-5p抑制TLR-5/NF-κB p65信号通路对大脑中动脉阻塞模型大鼠的神经保护效应

文题释义： 缺血性脑梗死：临床常见的一种中枢神经系统疾病,是由于脑组织局部供血动脉血流的减少或停止,造成脑组织缺血、缺氧导致脑组织坏死,具有较高的死亡率和致残率,严重威胁人类的健康和生存质量。 微小RNA：是一类长度为18-25 nt的非编码单链小分子RNA,广泛存在于从病毒到人类的各种生物中,能够与mRNA互补结合调控蛋白编码基因的表达,与细胞的生物学行为密切相关。 背景：缺血性脑梗死的病变组织中发生炎症反应,且miR-150-5p表达明显下降,miR-150-5p是否经Toll样受体5/核因子κB途径抑制炎症因子释放并减轻缺血性脑梗死组织损伤尚不清楚。 目的：探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在大鼠缺血性脑梗死中的作用及初步机制。 方法：①构建大脑中动脉阻塞模型大鼠,建模后将大鼠分为5组：对照组、miR-150-5p agomir 组、agomir control、miR-150-5p antagomir组和antagomir control组;②对照组大鼠给予生理盐水脑室注射,后4组大鼠脑室分别给予miR150-5p agomir(miR150-5p激动剂)、agomir阴性对照、miR150-5p antagomir (miR150-5p抑制剂)和antagomir阴性对照;③干预7 d后进行神经功能缺损程度(mNNS)评分,磁共振检测法测量脑梗死体积,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化,qRT-qPCR法、ELISA法和免疫印迹法检测分别检测脑组织中miR-150-5p、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体5和核因子κB p65表达情况,通过检索生物信息学网站Targetscan预测miR-150-5p与Toll样受体5的结合位点,荧光素酶试验验证二者的靶向关系。 结果与结论：①与对照组比较,miR-150-5p agomir组大鼠神经功能损伤评分、脑组织中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平及Toll样受体5、核因子κB p65蛋白表达明显降低(P < 0.05);miR-150-5p antagomir组生理评分及生化指标均明显升高(P < 0.05);②苏木精-伊红染色显示,对照组神经细胞排列紊乱、轮廓模糊不清,神经细胞明显变性坏死;上述病理变化在miR-150-5p agomir组明显减轻,而在miR-150-5p antagomir组中明显加重。而agomir control 组和antagomir control组与对照组各指标比较差异均无显著差异(P > 0.05);③TargerScan网站预测结果和荧光素酶报告基因分析显示,miR-150-5p与Toll样受体5存在靶向结合位点;④结果证实,miR-150-5p可抑制缺血所致脑损伤过程中Toll样受体5/核因子κB p65炎性信号通路,降低炎性反应,从而减轻神经功能损害,发挥保护作用。 ORCID: 0000-0003-4635-0842(谢媛媛) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

miR-9-5p attenuates ischemic stroke through targeting ERMP1-mediated endoplasmic reticulum stress

Ischemic stroke (IS) is a cerebrovascular disease with serious neurological function impairment, which may activate endoplasmic reticulum (ER) stress. However, the underlying regulatory mechanism of ER stress under IS remains unclear. miR-9-5p is enriched in the brain tissues and plays a role in the pathological process of IS. Therefore, the purpose of this study is to explore the effect of miR-9 on ER stress and underlying mechanism in IS. Here, a middle cerebral artery occlusion (MCAO) rat model was utilized to examine the alteration of brain pathology, and the expressions of miR-9 and ER stress-related proteins. Then SH-SY5Y cells with oxygen-glucose deprivation (OGD) were performed to further evaluate the functional role of miR-9 and preliminary mechanism. The results showed that miR-9 levels were decreased in the ischemic region of rats after MCAO. MCAO significantly increased the brain infract volume, reduced Nissl bodies and cell apoptosis, and increased ER stress-related proteins (ERMP1, GRP78, p-PERK, p-eIF2α and CHOP). Furthermore, overexpression of miR-9 by miR-9 mimics increased cell viability, inhibited LDH activity and cell apoptosis, and inactivated ER stress in OGD-neurons. Luciferase activity results showed that miR-9 negatively regulated ERMP1 expression by directly targeting ERMP1 3′ UTR. Subsequently, we found that ERMP1 overexpression reversed the inhibition of miR-9 on GRP78-PERK−CHOP pathway in OGD neurons. In summary, our results suggest that the attenuation of miR-9 on ischemic injury may be involved in targeting ERMP1-mediated ER stress, which provides an available target for IS treatment.     

微小RNA-181b通过调节热休克蛋白A5在缺血性脑卒中小鼠中的作用

目的 探讨微小RNA-181b（miR-181b）在缺血性脑卒中小鼠脑损伤中的作用及机制。 方法 采用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟缺血性脑损伤;Real-time PCR检测miR-181b mRNA表达情况;蛋白印迹观察miR-181b靶蛋白热休克蛋白A5 (HSP A5)蛋白水平变化情况;Nissl方法检测皮层缺血神经元的缺失情况;行为学方法评估小鼠的神经行为学功能损伤程度。 结果 侧脑室注射miR-181b拮抗剂可使脑内miR-181b表达水平明显降低(P<0.05,n=3);MCAO后小鼠的神经行为学功能受到严重损伤,miR-181b拮抗剂可明显缓解这些行为学改变(P<0.05,n=6);下调miR-181b可以提高HSPA5蛋白水平(P<0.05, n=3); MCAO后小鼠皮层有一定程度的神经细胞缺失,预先给予miR-181b拮抗剂发挥保护作用,神经细胞缺失减少(P<0.05,n=3)。 结论 miR-181b可能通过调节HSPA5蛋白的表达在缺血性脑卒中小鼠脑损伤中发挥重要作用。     

跑步运动对脑卒中大鼠的海马可塑性的保护作用

目的 探索跑步运动对脑卒中大鼠的海马可塑性的保护作用及其生物学机制。 方法 成年雄性 大鼠大脑中动脉闭塞 (middle cerebral artery occlusion, MCAO) 90 min, 24 h 后随机分为运动组和非运动 组。 两周后, 对大鼠的神经功能缺损情况进行评分; 水迷宫法检测大鼠的学习和记忆功能; 2, 3, 5 三苯 四氮唑氯化物染色和 HE 染色评估大鼠大脑梗塞水平和组织学损伤; NeuN 染色观察神经元损伤水平; 蛋白 质免疫印迹法检测 COX-2、 IL-1β 和 TNF-α 的蛋白表达水平。 结果 MCAO 后, 运动组的神经功能缺损、 学习和记忆功能、 脑梗死体积指标均优于非运动组。 与这些结果一致, 运动组的大鼠脑组织中的神经元损 伤数目也显著减少, 脑内炎性反应得到了抑制。 结论 运动可以改善 MCAO 后神经功能评分、 减少梗死体 积, 其潜在机制与炎性反应的抑制对神经元的保护有关。     

miR-138-5p靶向HIF-1α影响人白血病K562细胞增殖和侵袭转移

目的探索miR-138-5p与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人白血病K562细胞增殖和侵袭转移的影响。方法以体外培养的人白血病K562细胞为研究对象,将其分为K562组、miR-138 mimic组、pc-HIF-1α组和mimic+pc-HIF-1α组。荧光素酶报告实验确认miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系;qRT-PCR法检测miR-138-5p和HIF-1α的mRNA水平;Western blot检测HIF-1α的蛋白水平;CCK-8检测细胞存活率;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测增殖和上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果miR-138-5p能靶向HIF-1α,与K562组相比,miR-138 mimic组HIF-1α的mRNA和蛋白水平均显著较低(P<0.01),而pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平则显著较高(P<0.01);同时,与pc-HIF-1α组相比,mimic+pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白表达显著较低(P<0.01)。与K562组相比,miR-138 mimic组细胞增殖倍数、细胞迁移和侵袭能力均显著较低(P<0.01),pc-HIF-1α组则显著较高(P<0.01);与pc-HIF-1α组相比,mimic+pc-HIF-1α组细胞增殖倍数、细胞迁移和侵袭能力均显著较低(P<0.01)。同时,mimic+pc-HIF-1α能部分逆转pc-HIF-1α对肿瘤细胞增殖和EMT能力的上调作用(P<0.01)。结论miR-138-5p可通过靶向HIF-1α,进而降低人白血病K652细胞增殖和侵袭转移能力。     

虫草素对大脑中动脉局灶性脑缺血模型大鼠氧化应激和脑损伤的影响

目的　研究虫草素对大脑中动脉局灶性脑缺血模型大鼠氧化应激指标和脑组织Caspase-3和p53表达的影响。 方法　首先，给药组大鼠每天分别腹腔注射虫草素5、10、20 mg/kg，连续10 d；然后，采用改良Zea Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型；造模24 h后，盲法进行神经功能评分，称重法检测脑含水量，HE染色观察脑组织病理损伤，Tunnel染色检测脑细胞凋亡，RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53 mRNA表达，Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53蛋白表达，试剂盒检测SOD，MDA，GSH水平。 结果　给药组与MCAO组相比，神经功能评分显著降低，脑含水量显著减少，细胞损伤减轻，细胞凋亡率显著减少，Bax mRNA及蛋白表达显著下调，Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著上调，MDA含量显著下降，SOD和GSH含量显著上升，Caspase-3和p53 mRNA及蛋白表达显著下调，且这些效果随着虫草素给药量的增加更加显著。 结论　虫草素能够缓解大脑中动脉局灶性脑缺血引起的神经功能障碍和降低脑缺血引起的脑含水量升高，并能抑制大脑中动脉局灶性脑缺血模型大鼠氧化应激和细胞凋亡，从而减缓大脑中动脉局灶性脑缺血造成的损伤。     

绿茶多酚通过抑制TLR4通路减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤

目的 探讨绿茶多酚通过抑制TLR4通路对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的影响.方法 建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,随机分为模型组、绿茶多酚组、TAK-242(TLR4抑制剂)组、绿茶多酚+TAK-242组,每组12只;另取12只大鼠设为假手术组.药物处理后,对所有大鼠进行神经功能缺损评分,检测各组大鼠脑组织含水量,采用Ev...     

Anti‐Inflammatory and Neuroprotective Effects of Triptolide via the NF‐κB Signaling Pathway in a Rat MCAO Model

Stroke is the leading cause of neurological disability in humans. Middle cerebral artery occlusion (MCAO) followed by reperfusion is widely accepted to mimic stroke in basic medical research. Triptolide is one of the major active components of the traditional Chinese herb Tripterygium wilfordii Hook F, and has been reported to have potent anti‐inflammatory and immunosuppressive properties. Since its preclinical effects on stroke were still unclear, we decided to study the effects of Triptolide on focal cerebral ischemia/reperfusion injury in this study. The results showed that Triptolide treatment significantly attenuates brain infarction volume, water content, neurological deficits, and neuronal cell death rate, which were increased in the MCAO model rats. Immunohistochemistry was used to analyze the expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP), Cyclooxygenase‐2 (COX‐2), inducible nitric oxide (iNOS), and NF‐κB in the ischemic brains. The administration of Triptolide showed down‐regulation of the iNOS, COX‐2, GFAP, and NF‐κB expression in MCAO rats. It also increased the expression of bcl‐2, and suppressed levels of bax and caspase‐3 compared with the MCAO group. Our findings revealed that Triptolide exerts its neuroprotective effects against inflammation with the involvement of inhibition of NF‐κB activation. Anat Rec, 299:256–266, 2016. © 2015 Wiley Periodicals, Inc.     

全反式维甲酸通过作用于JNK/P38 MAPK信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注引起的血脑屏障损伤

目的:观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对脑缺血再灌注(cerebral ischemia-reperfusion,CIR)损伤大鼠血脑屏障的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将SD雄性大鼠随机分组为假手术(sham)组、模型(CIR)组及CIR+ATRA(10、30和90 mg/kg)组。采用MCAO线栓法建立大鼠CIR损伤模型,缺血1. 5 h,再灌注24 h后,进行神经功能行为学评分及脑梗死体积、脑含水量和伊文思蓝含量的测定;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性; Western blot法检测脑组织中紧密连接蛋白(claudin-5、occludin和ZO-1)、JNK、p-JNK、P38、p-P38和MMP-9的蛋白水平。结果:与CIR模型组相比,ATRA(30 mg/kg)可明显改善大鼠神经功能,减少脑梗死体积,降低脑含水量和伊文思蓝含量,降低缺血区紧密连接蛋白的降解(P 0. 01),降低缺血脑组织中MMP-9的活性及蛋白的表达(P 0. 01),抑制JNK/P38 MAPK通路中JNK和P38的磷酸化并减少p-JNK和p-P38的蛋白水平(P 0. 01)。结论:ATRA能够减轻CIR对大鼠脑组织的损伤和血脑屏障的破坏,其保护作用可能与抑制JNK/P38 MAPK信号通路和MMP-9的激活有关。