阴道毛滴虫染色标本制作方法探讨

阴道毛滴虫染色标本制作经用实验室培养４８ｈ的滴虫，生理盐水洗涤２次，制成涂片，用复合染液（吉氏染液５ｍｌ＋瑞氏染液６ｍｌ，蒸馏水加至１００ｍｌ）在３６℃温度下，染色６０ｍｉｎ。这种方法可得到染色上的最佳效果。     

肝浸汤培养阴道毛滴虫的改进

肝浸汤培养基能提高阴道毛滴虫患者检出率,在教材与文献中经常提到,但培养基制备较为繁琐,且过程不尽详细。在门诊应用极少,本文将对肝浸汤培养基的制作进行改进和总结。     

阴道毛滴虫标本制作方法的改进

为了提供较理想的教学标本,经过多年的实践摸索,找到一种简便易行,既保证观察效果又能延长使用寿命的阴道毛滴虫标本制作方法,现介绍如下： 1材料与方法 1.1取材与培养 常规方法取滴虫性阴道炎患者阴道后穹窿分泌物接种于 pH5.5～ 6.0的肝浸汤培养基中, (36± 1)° C培养 24h后吸取培养基底部沉渣检查培养结果。 1.2离心 培养 48－ 72h后,用毛细吸管吸取近管底的清亮培养物数毫升 (勿将管底沉渣吸出 )于离心管内,加等量生理盐水摇匀后以 1000～ 1500rpm离心 15～ 20min,弃上清后再加生理盐水同法离心一次,留沉淀物备用。 1.3涂片 …     

肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫的应用体会

为了培养医学生在实验课上观察和掌握阴道毛滴虫滋养体活体的形态结构和运动方式 ,我们设计采用肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫 ,并根据每个教学班和实验课的时间不同 ,分别取不同量的阴道毛滴虫培养基原液 ,转种于 A、B、C三个盛同等量的培养基试管中 ,从而出现在不同时间段内产生同样效果 ,满足了实验课的要求。1　材料和方法1.1　培养基的配制　 15 %肝浸液 (取牛或兔的肝脏15 g,切碎如小米粒大小 ,浸入 10 0 ml蒸馏水中 ,放置在冰箱中 2 4 h,取出煮沸半小时 ,经 4层纱布过滤 ,失去的水分用蒸馏水补足至 10 0 ml,蛋白胨 2 g、麦芽糖0 .8g…     

介绍一种新的阴道毛滴虫染色涂片标本制作方法

滴虫性阴道炎是临床上常见的一种妇科疾病 ,在教学中 ,以往常用的阴道毛滴虫标本的制作方法有直接涂片法和培养法。直接涂片法虽然虫体和鞭毛的染色较好 ,但往往因阴道分泌物及脱落细胞等杂质较多而影响到标本的质量 ;培养法因转种时间不恰当及转种时易造成污染而直接影响到阴道毛滴虫的染色效果。本方法采用人工消化法取得了较好的效果。1　制作方法1 1　消化液的配制　胰蛋白酶 30ｍｇ ,溶于 10 0ｍｌ生理盐水中 ,混匀。1 2　涂片的方法　将在患者处取得的阴道毛滴虫标本 ,加入 3ｍｌ生理盐水于离心管中混匀。 10 0 0转 /分离心 15分钟 ,…     

制作永久性阴道毛滴虫标本染色方法的改进

阴道毛滴虫永久性标本制作和染色方法的报道很多 ,染色效果众说纷坛。多年来 ,我们在制作教学标本的过程中 ,对阴道滴虫的制作和染色进行了一些改进 ,获得较满意的效果。现报道如下。1　材料与方法1.1　虫株来源　无菌操作下取患者含阴道毛滴虫的阴道分泌物 ,接种于 8ｍｌ肝浸汤培养基内 ,加灭活小牛血清 2ｍｌ及青、链霉素适量 ,置 37℃培养箱4 8ｈ ,转种一次。1.2　染色液的配制　 (1)吉氏染色液及瑞氏染色液配制按郑思民方法配制[1] ;(2 )混合染色液配制 :吉氏液 1ｍｌ,ｐＨ 7.0的磷酸缓冲液 5ｍｌ,瑞氏液 2ｍｌ。1.3　制片和染色　 (1)…     

不同转种密度对体外培养阴道毛滴虫效果的影响

阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)是人体泌尿生殖系统感染的常见病原体,主要引起滴虫性阴道炎或尿道炎,若不及时治疗,易造成交叉感染和反复感染,严重影响患者的身心健康[1].滴虫病是性传播疾病,有助于HIV的传播[2].近年来,该病有上升的趋势,有资料显示,阴道毛滴虫可以传染给婴儿[3-5].越来越多的医学工作者及科研人员致力于阴道毛滴虫的研究,体外培养阴道毛滴虫成为科研与教学中的一项重要基本工作.随着分子克隆技术的发展,阴道毛滴虫的科学研究达到新的领域,但其前提是需要分离培养出高质量的虫体.目前,体外培养阴道毛滴虫的研究报道颇多,但对其转种密度的研究国内未见报道[6-9].因此,为了节约资源以及达到最好的观察和研究效果,找到适合阴道毛滴虫的最适转种密度和最佳生长时间尤为重要.     

阴道毛滴虫标本传统染色方法的改良

阴道毛滴虫染色方法的改进报道甚少。由于其鞭毛着色难以获得理想的效果,因此染色方法的改良仍是制作实验教学标本中值得探讨的问题。我室于1998年底在制作教学标本过程中采用传统吉氏、瑞氏混合液配制各种不同比例的混合染液对经培养后的阴道毛滴虫标本涂片染色,摸索出一种合适的比例浓度,改进了阴道毛滴虫着色效果。     

阴道毛滴虫标本传统染色方法的改良

阴道毛滴虫染色方法的改进报道甚少。由于其鞭毛着色难以获得理想的效果 ,因此染色方法的改良仍是制作实验教学标本中值得探讨的问题。我室于 1998年底在制作教学标本过程中采用传统吉氏、瑞氏混合液配制各种不同比例的混合染液对经培养后的阴道毛滴虫标本涂片染色 ,摸索出一种合适的比例浓度 ,改进了阴道毛滴虫着色效果。1　材料与方法1 1　标本来源及培养　无菌操作下取阴道分泌物 ,经镜检查获阴道毛滴虫后 ,接种于 8ｍｌ肝浸汤培养基内 ,并加灭活小牛血清 2ｍｌ及青霉素、链霉素适量 ,置 37℃培养箱 48～ 72ｈ转种一次。1 2　染液的配制　吉氏原液 1ｍｌ,瑞氏原液 0 5ｍｌ,ｐＨ7.0磷酸缓冲     

适应教学中阴道毛滴虫快速染色方法探讨

目的探讨快速有效的阴道毛滴虫染色方法,以满足实验教学需求。方法将pH 6.4～6.8肝浸汤培养基转种2～3次的无菌阴道毛滴虫,在春秋季25℃和冬季10℃室温条件下,用体积分数为2%、5%、8%的Giemsa染液分别染色15、20、25、30、35、40 min,观察染色情况。结果体积分数5%的Giemsa染液在春秋季室温25℃染色20 min、冬季室温10℃染色25 min时,阴道毛滴虫外形清晰呈梨形,细胞核呈紫红色,细胞质呈浅蓝色,波动膜、鞭毛和轴柱均可以观察到。结论采用体积分数5%、pH 6.4～6.8的Giemsa染液,在室温25℃时染色20 min或室温10℃染色25 min染出的阴道毛滴虫标本比较理想,符合教学需求。     

阴道毛滴虫新乡株的体外培养

目的观察阴道毛滴虫新乡株在不同的pH值培养基中和不同转种量的培养效果。方法阴道毛滴虫在pH5．8、6．2、6．6、7．0四组不同培养基中37℃恒温培养,每隔24h观察虫数、活率并计算活虫数。培养基pH6．6时,设置不同的转种量,观察虫数、存活率并计算活虫数。结果pH7．0组培养第2．4天虫数、活虫数、存活率均明显低于其它三组,且在培养过程中无明显活虫数及存活率高峰,第1．4天,pH6．6组活虫数、存活率均高于其它三组。转种100万／管和转种10万／管培养24h和48h的阴道毛滴虫存活率和培养48h的阴道毛滴虫活虫数均较高,转种1万／管培养效果较差。结论pH7．0不适宜阴道毛滴虫体外培养,pH6．6时,培养各项指标均较好,可能更适合阴道毛滴虫体外培养。阴道毛滴虫的体外培养转种宜在培养后48h进行．每次接种量以10万／ml为宜。     

阴道毛滴虫cDNA文库的构建和鉴定

目的 :构建阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)全长cDNA表达文库 ,筛选全长目的基因 ,研究与其细胞周期相关基因的结构和功能。方法 :从Tv中提取总RNA ,用ClonTech公司的SMARTTMcDNA文库试剂盒构建其全长cDNA表达文库。结果 :所建文库的初始滴度为6 78× 10 6 pfu mL ,经一次扩增后的滴度为 1 6 8× 10 9pfu mL ,重组率 >98%。结论 :成功构建Tv全长cDNA文库 ,并从该文库中筛选出了与细胞周期相关的基因     

阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达

目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能。方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45000u。结论成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致。     

阴道毛滴虫衰老相关基因Tv-Sir2-like克隆与序列分析

目的：克隆单细胞模式生物阴道毛滴虫(Tv)Sir2基因，以便探讨其功能。方法：构建Tv cDNA表达文库，筛选出Tv-Sir2-like基因，并对该基因进行序列分析。结果：成功克隆Tv-Sir2-1ike基因。测序及序列分析显示，Tv-Sir2-1ike如基因开放读码框长1116bp，编码371个氨基酸残基的蛋白质。该氨基酸序列与SIR2的同源性最高，并具有SIR2 3个特征性的高度保守结构域。结论：推测Tv-Sir2-like是Sir2的同源基因，其表达产物可能参与Tv转录沉默，并调节Tv的细胞周期。     

阴道毛滴虫长寿保障基因Tv-LAG1的克隆和表达

目的克隆原生动物阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)长寿保障基因[longevityassurancegene1(LAG1)]的同源基因Tv-LAG1。构建Tv-LAG1原核表达重组体及表达其融合蛋白。方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中筛选LAG1的同源基因,用pET41表达载体与Tv-LAG1cDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物用SDS-PAGE法鉴定。用纯化的融合蛋白免疫家兔,获得抗血清,采用Western-blot法对抗体特异性进行分析鉴定。结果成功构建pET41/Tv-LAG1原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白。用融合蛋白免疫家兔获得的抗体能特异性识别Tv-Lag1p/GST融合蛋白。结论Tv-Lag1p/GST融合蛋白获得高效表达,并成功纯化,初步实验证明具有一定的免疫原性,为研究Tv-Lag1p在模式生物阴道毛滴虫的细胞定位以及其功能奠定了基础。     

影响体外培养阴道毛滴虫因素的探讨

作者报道了影响体外培养阴道毛滴虫的重要因素是ｐＨ５．２～５．４，培养温度３６．５±０．５℃，培养基用前须加抗菌素和小牛血清，以及转种时掌握好培养基中的取虫位置等均系十分关键的因素     

阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析

目的获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换. 方法提取阴道毛滴虫的总RNA,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库,阳性质粒cDNA克隆进行测序,并用生物软件RPS-Blast,NCBI Blast和ClustalW等对6个读码框架进行序列分析. 结果获得一株开放阅读框为588对碱基的cDNA克隆,推测肽链有196个氨基酸.序列分析表明,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶(Prx1蛋白)及人的自然杀伤增强因子B分别有56%和61%的同源性;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序,N-豆蔻酰化作用位点,脂质运载蛋白信号位点等. 结论该蛋白有＞56%的可能性位于胞浆,和典型2-Cys Prx亚家族有很高(56%～62%)的同源性,很可能是其中的一个新成员.     

阴道毛滴虫与人型支原体共生关系及其临床研究

目的：探讨阴道毛滴虫与人型支原体的共生关系以及共生关系的临床耐药性,以选择更合适的治疗药物。方法：随机对262例诊断为滴虫阴道炎患者及73例生殖道人型支原体感染患者给予常规药物治疗,并对滴虫阴道炎患者进行人型支原体检测。结果：滴虫阴道炎合并人型支原体感染者238例（90.8%）。经药物治疗后,筛选出可能存在阴道毛滴虫与人型支原体共生关系的难治性阴道炎68例患者。结论：阴道毛滴虫与人型支原体存在共生关系,且临床治疗效果较单纯感染治疗效果差。如何更好地治疗难治性滴虫阴道炎,有待进一步研究。     

妇科阴道毛滴虫感染分析及预防措施研究

目的:分析妇科阴道毛滴虫感染的原因,总结预防措施。方法:选取收治的40例妇科阴道毛滴虫感染患者的相关资料,对各年龄段的感染率和各季节的感染率进行比较,对预防措施进行总结。结果:年龄段在30～40岁的感染率明显高于20～30岁和40～50岁的感染率,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),有统计学意义。20～30岁和40～50岁的感染率比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。春季感染率明显高于夏、秋、冬季感染率,差异有统计学意义(P<0.05)。夏、秋、冬季感染率比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。结论:妇科阴道毛滴虫感染患者多为年龄段在30～40岁的女性,且春季的感染率较高。预防措施主要是对传播源进行控制、对传播途径进行切断、提高自我保护意识、积极进行卫生保健。