乙型肝炎病毒X蛋白单克隆抗体的制备及肝癌组织中相应抗原…

应用基因工程技术制备的１７０００乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ蛋白（ＨＢｘＡｇ）免疫动，成功地备了抗－ＨＢｘ单克隆抗体，以此抗体对原发性肝癌（ＨＣＣ）组织，慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）肝组织行相应抗原检测，并同时进行乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）的检测。在ＨＣＣ标本中ＨＢｘＡｇ在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为５６％及４８％，ＨＢｓＡｇ为１６％及７４％。ＨＢｃＡｇ仅见于癌     

^131I标记抗肝癌单克隆抗体HAb18生物动力学及器官吸收剂量

考察＾１３１Ｉ－ＨＡｂ１８在正常人体内的生物学分布和器官辐射吸收剂量、为临床用提供必需的依据。一健康志愿者静脉给药后没时间用γ相机行全身及局部并采取血样本及留全尿，按医学内照射剂量纲要计算器官吸收剂量。     

乙型肝炎病毒X蛋白单克隆抗体的制备及肝癌组织中相应抗原的检测

应用基因工程技术制备的１７０００乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ蛋白（ＨＢｘＡｇ）免疫动物，成功地制备了抗－ＨＢｘ单克降抗体，以此抗体对原发性肝癌（ＨＣＣ）组织、慢性活动性肝炎（ＣＡＮ）肝组织行相应抗原检测，并同时进行乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）的检测。在ＨＣＣ标本中ＨＢｘＡｇ在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为５６％及４８％，ＨＢｓＡｇ为１６％及７４％。ＨＢｃＡｇ仅见于癌周，阳性率为１８％。在ＣＡＨ标本中，ＨＢｘＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ阳性率分别为６．６％、７３．３％及０。血清ＨＢｓＡｇ阳性ＨＣＣ标本中，ＨＢｘＡｇ的检出率为８２．３％、明显高于血清ＨＢｓＡｇ阴性标本（５４．５％）。结果显示。ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的表达是ＨＢＶ标志物中最活跃的。ＨＢｘＡｇ的表达不依赖于ＨＢＶ的复制，可能是ＨＢＶＸ基因同宿主细胞基因整合后的产物，ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的活跃表达为抗－ＨＢｘ抗体作为ＨＣＣ导向治疗载体提供了依据。     

胃癌单克隆抗体MG7相应抗原在不同型肠化组织中的表达

应用抗人胃癌单克隆抗体MG7及ABC免疫酶标技术,检测了胃癌相关抗原在110例手术切除胃癌标本及343例胃粘膜活检肠化标本的表达。应用粘液组化方法将肠化分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。110例胃癌中,有92例(83.6％)MG7染色阳性。在不同类型肠化中,Ⅲ型肠化中MG7相应抗原的阳性率(46.7％)显著高于Ⅱ型(25.6％)和Ⅰ型肠化(18.6％)(P<0.01)。结果表明,Ⅲ型肠化与胃癌的发生有密切关系,应作为癌前病变对待;单克隆抗体MG7对筛选肠化患者中胃癌高危病例可能有重要价值。     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

近年来有关肝癌单克隆抗体(McAb)的研究国内外均有报告,其免疫原皆为体外建立的人肝癌细胞株,作者应用手术切除的新鲜肝癌标本制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓     

抗人肝癌单克隆抗体在裸鼠移植瘤中的免疫定位

以＾１３１Ｉ标记抗人肝癌单克隆抗体及正常小鼠ＩｇＧ进行裸鼠人原发性肝癌移植瘤的肿瘤定位显像研究。每鼠从尾静注射１．１１×１０＾７Ｂｑ，注入后２４，４８，９６，１６８ｈ行全身ｒ照相，观察肿瘤摄取标记抗体的能力，并计算生物半衰期，同时定期测定肿瘤与各器官组织的放射性比值（Ｔ／ＮＴ）。     

抗结肠癌细胞单克隆抗体的制备及相应抗原免疫组化鉴定

离子显微镜是一种类似断层扫描的原理进行原子水平研究的先进设备。用微细离子束轰击组织表面,使特定的原子溅射出来成次级离子。每个离子都带有分析象素,经影象处理在荧光屏或底片上显示出来。     

抗人肝癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察

目的 制备抗人肝癌免疫毫微球,观察其活性及抗癌效果.方法 抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过异型双功能交联剂SPDP与载阿霉素(ADR)人血清白蛋白毫微球[HSA(ADR)-NS]偶联,制成抗人肝癌免疫毫微球HAb18-HSA(ADR)-NS,使用凝集试验及免疫荧光检测其活性,光镜和电镜下观察其与人肝癌细胞株SMMC-7721特异性结合.MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性.于人肝癌裸鼠模型上分别使用HAbl8-HSA(ADM)-NS、HSA(ADM)-NS及ADM,检测3者的肿瘤抑制率.结果 HAb18-HSA(ADM)-NS具有单抗活性,能与肝癌细胞特异结合;其体外杀伤SMMC-7721细胞IC50值为44.6μg/ml,与HSA(ADM)-NS(345.5μg/ml)及ADM(365.5μg/ml)相比,明显降低;体内肿瘤抑制率比HSA(ADM)-NS及ADM明显增强(P＜0.001).结论 HAb18-HSA(ADM)-NS具有免疫活性,对肝癌细胞有主动靶向性,体内外均具有比HSA(ADM)-NS及ADM更强的抗癌效果.     

疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18 F(ab')2片段

制备符合人用标准的肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２片段,方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,胃蛋白酶与抗体在ＰＨ３．５０．１ｍｏｌ．Ｌ＾－１柠檬酸条件下,经不同反应时间,收集样品,上ＦＰＬＣ（快速蛋白液相色谱）Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化并进行质检。结果按上述条件消化２ｈ,９５％ｃ ｈ ｒ ＩｇＧ裂解为Ｆ（ａｂ’）２片段,经Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化后Ｆ     

Establishment and application of immunofluorescence using monoclonal antibody in diagnosis of gastric cancer

Monoclonal antibodies against gastric cancer(MG)were purified by ion-exchangechromatography on DEAE-cellulose(DE-52)column and coupled with CNBr-activated Sepharose4B.The Sepharose 4B linked with MG monoclonal antibodies was then incubated with serum andascitic fluid of patients with gastric cancer and benign diseases for 2h.After being blocked by nor-mal mouse serum,the MG-Sepharose was mack to react with the MG-labeled with fluoresceinisothiocyanate for 30min.According to immunoaffinity chromatography principle,the MG-labeledwith fluorescein isothiocyanate was separated from the MG-Sepharose with 0.01 mol/L of PBS-3mol/L of KCNS solution and then detected with a fluorospectrometer.The amount of fluorescencein the solution of separation represented the amount of the antigens defined by MG monoclonalantibodies.The mean value plus 2 standard deviations of the benign disease group was arbitrarilyset as their positive threshold.The positivity rates were 61.1%(22/36)in serum and 75%(18/24)inascitic fluid of patients with gastric cancer.It suggests that the determination of MG-Ags in the se-rum and ascitic fluid of patients may be helpful for the diagnosis of gastric cancer.     

肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达与免疫学活性分析

目的：利用大肠杆菌高效表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段，并分析其与相应抗体的结合活性，进而明确表达产物用于筛选基因工程抗体的可行性．方法：用PCR技术扩增出HAb18G胞外区基因片段，克隆入原核表达载体pGEX-4T-3中，筛选及鉴定阳性重组子，IPTGv诱导表达后对表达产物进行纯化及复性等处理，同时利用SDS-PAGE，Western-Blot以及ELISA等方法检测蛋白表达情况及其免疫学特性。结果：成功构建了肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达载体pGEX-4T-3／HAb18GE，并在大肠杆菌中成功实现高效融合表达，表达蛋白Mr46000，表达量约占菌体总蛋白量的43％，表达产物主要以包涵体形式为主。另外，表达蛋白在变性和非变性的条件下均可以与HAb18G mAb特异性结合。结论：原核融合表达的HAb18G胞外区片段可以替代天然的HAb18G蛋白，以用做抗原来筛选新型的基因工程抗体。     

抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原及疗效考核价值的初步研究

目的探讨抗重组日本血吸虫14-3-3(rSj14-3-3)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值.方法制备纯化的抗日本血吸虫14-3-3的单克隆抗体,以纯化的兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶联免疫吸附试验(P-M-ELISA)法,分别对同批治疗前及治疗后2、4、6、12个月的血吸虫病患者和感染兔血清进行检测,并与常规检测抗体的可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA)法比较.结果 P-M-ELISA法对治疗前血吸虫病患者检测阳性率为98.2%,而检测抗体的SEA-ELISA为95.5%.P-M-ELISA法对治愈后2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为17.7%、41.9%、55%、85%,而检测抗体的SEA-ELISA法分别为3.2%、6.5%、12.5%、15%.结论该法既有较好的诊断价值,又有较好的疗效考核价值.     

噬菌体抗体库的构建及抗肝癌抗体的筛选

目的　构建噬菌体抗体库及筛选抗人肝癌特异性噬菌体抗体。　方法　以ＲＴ－ＰＣＲ法从经Ｂｅｌ７４０４细胞免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾淋巴细胞扩增免疫球蛋白的Ｆｄ 段及к链基因,克隆到表达载体ｐＣＯＭＢ３Ｈ－ＳＳ中并将抗体Ｆａｂ 段表达于单链噬菌体表面,构建噬菌体抗体库;以Ｂｅｌ７４０４细胞为抗原对噬菌体抗体库进行４轮“吸附－洗脱－扩增”的亲和筛选,挑取部分克隆检测与抗原的结合活性。　结果　建成容量为２×１０６ＣＦＵ 的噬菌体抗体库,在亲和筛选过程中,噬菌体收获率逐轮得到提高,第４轮为第一轮的２４５ 倍,含Ｆａｂ 基因的克隆比率也由２６％ 增到８３％ ,挑取的１０ 个克隆中有８ 个与Ｂｅｌ７４０４细胞有结合活性。　结论　噬菌体抗体库技术系高效筛选体系,为肿瘤单克隆抗体的制备提供了有效的途径     

抗人肝癌单克隆抗体嵌合轻链在巴氏毕赤酵母的高效分泌表达

目的: 通过整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌mAb HAb18的cFab的嵌合轻链.方法: 将抗人肝癌mAb cFab/HAb18原核表达载体pET32a/cFab中的cL亚克隆到酵母表达载体pPIC9K,构建成重组质粒pPIC9K/cL测序鉴定.重组质粒pPIC9K/cL整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418筛选得到高拷贝转化子及Mut表型鉴定后,用含5 mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果: 该系统成功表达了抗人肝癌mAb HAb18cFab的嵌合轻链,表达水平为22 mg/L;Western Blotting证实,表达产物具有良好的HAb18GE结合活性和特异性.结论: 嵌合轻链/HAb18在巴氏毕赤酵母获得成功表达,为高效分泌表达cFab抗体奠定了基础.     

抗人GPC3单克隆抗体在肝脏肿瘤组织学检测中的应用

目的应用抗人GPC3单克隆抗体检测肝脏良、恶性肿瘤组织中GPC3蛋白的表达。方法采用自制鼠抗人GPC3单克隆抗体及免疫组织化学技术检测19例正常肝组织、94例肝细胞癌(HCC)组织、20例胆管细胞癌组织、42例肝脏良性肿瘤组织中GPC3蛋白的表达,并分析GPC3蛋白表达水平与HCC患者临床病理参数的关系。结果 GPC3蛋白在肝细胞癌组织中阳性率达到79.8%,而血管瘤旁正常肝组织、胆管细胞癌组织和肝脏良性肿瘤组织中均不表达,差异具有统计学意义(P<0.001)。HCC组织中GPC3蛋白的表达与血清AFP水平(P=0.020)、是否伴有门静脉癌栓(P=0.050)、有无包膜等因素相关(P=0.043)。结论抗人GPC3单克隆抗体可特异性检出肝细胞癌组织GPC3蛋白的表达,值得进一步研究以应用于临床诊治。