液相色谱——质谱联用检测技术的应用

1引言色谱——质谱联机技术结合了色谱对复杂基体化合物的高分离能力与质谱独特的选择性、灵敏度、分子量及结构信息于一体,具有广泛的应用领域。2液相色谱仪与质谱仪的联用概述现色谱——质谱主要有气相色谱——质谱和液相色谱——质谱(HPLC-MS)。气相色谱——质谱的联用技术已趋于     

人体血浆华法林高效液相色谱-质谱联用测定方法的建立及其应用

目的：建立测定人体血浆华法林高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）测定方法,并用于华法林片的人体药动学研究;同时,考察CYP2C9和VKORC1基因多态性的可能影响。方法：人血浆经乙酸乙酯萃取,以Inertsil^® ODS-3色谱柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）为固定相,乙腈-0.5%甲酸水溶液（60∶40,v/v）为流动相,流速为0.8 mL·min^-1,进样量为5 μL,记录华法林经时血浓度,计算其主要药动学参数;采集肘静脉血,提取DNA,采用FISH法检测受试者CYP2C9和VKORC1基因多态性。结果：华法林在0.5~600 ng·mL^-1范围内呈良好线性关系（r>0.99）,最低定量限为5.0 ng·mL^-1,精密度和准确度RSD均小于15%,方法稳定性良好;24例受试者分别有2例CYP2C9和3例VKORC1基因突变个体检出。结论：建立了快速测定血浆华法林HPLC-MS法,方法灵敏、稳定、重现性好、选择性好、准确度高,可用于人血浆中华法林浓度测定及华法林药动学研究;CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林药动学行为有一定影响,为体内过程和效应差异的重要影响因素。     

液相色谱—电喷雾质谱联用测定人血浆中盐酸乙哌立松的浓度

目的:建立测定人血浆中盐酸乙哌立松的高效液相色谱-电喷雾质谱联用(HPLC/ESI-MS)方法。方法:血浆经碱化后,叔丁基甲醚提取,HPLC/ESI-MS选择离子检测。结果:本法线性范围为32～0.25μg·L~(-1),最低检测浓度为0.0μg·L~(-1)(S/N≥3)。血浆中乙哌立松的回收率为99.10～99.85％,日内RSD≤5.9％,日间RSD≥10.8％。结论:本法适用于盐酸乙哌立松的生物等效性研究和血药浓度监测。     

液相色谱-质谱-质谱联用法测定人血浆中氨氯地平

目的　建立测定人血浆中氨氯地平的液相色谱-质谱-质谱联用法。方法　血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-水-甲酸(75∶35∶1)为流动相,采用ZorbaxC₈柱分离,通过电喷雾离子化四极串联质谱,以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。用于定量分析的二级碎片离子分别为m/z238(氨氯地平)和m/z116(内标4′-羟基普罗帕酮)。结果　线性范围为0.4-16.0ng·mL^-1,最低定量浓度为0.4ng·mL^-1,每个样品测试时间仅3.7min。在氨氯地平临床药物动力学研究项目中,应用此法可在两周内测试1500多个血浆样品。结论　该法灵敏度高,操作简便,快速、准确,适用于临床药物动力学研究。     

超快速液相色谱-质谱/质谱联用法测定人血浆中兰索拉唑的浓度

目的 建立测定人血浆中兰索拉唑(抗胃及十二指肠溃疡药)含量的超快速液相色谱-质谱/质谱联用法(UFLC-MS/MS).方法 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以乙腈-0.1%甲酸(27:73)洗脱,用Ultimate XB-CN(5μm,2.1mm×150mm)色谱柱,通过电喷雾离子化三重四级杆串联质谱,经多反应监测模式检测,m/z370.4→m/z252.2(兰索拉唑),m/z 237.2→m/z 194.3(卡马西平,内标).结果 兰索拉唑在5.01～5007.90μg·L-1内线性关系良好(γ=0.998 5),最低定量浓度为5.01μg·L-1.方法 回收率(n=5)分别为90.21%,89.71%,92.27%,日内和日间精密度均<9%.结论 该法操作简单,灵敏,准确,重现性好,适用于该药的临床药代动力学研究.     

高效液相色谱-质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法血浆样品中加入内标,用乙醚提取,浓缩后采用高效液相色谱-质谱联用进行测定。结果血浆样品中辛伐他汀线性范围为0.1～20ng·mL-1(r=0.9999);萃取回收率为94.3%。结论本方法灵敏度高、专属性强、重现性好、准确,可用于辛伐他汀片人体药动学及生物等效性研究。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆中多潘立酮

目的:建立测定人血浆中多潘立酮的液相色谱-电喷雾串联质谱(LC/ESI-MS/MS)法。方法:待测血浆0.1 mL 用甲醇沉淀蛋白,取离心后的上清液进样10μL在 Phenomenex Gimim-C_(18)柱(2.00 mm×50 mm,5 μm)上分离,流动相为甲醇-水(40:60,v/v,含0.3%醋酸),流速0.2 mL·min~(-1),LC/ESI-MS/MS 采用多离子反应监测,正离子模式,用于定量分析的离子反应分别为 m/z426→m/z175(多潘立酮)和 m/z 379→m/z 264(氨溴索,内标)。结果:血浆中的内源性物质不干扰测定,每个样品分析时间约2 min;本法线性范围为0.3～100 ng·mL~(-1),最低定量浓度为0.3 ng·mL~(-1);日内、日间 RSD 分别小于7.1%和13.3%,相对误差小于5.4%。结论:该法操作简便、快速、准确,灵敏度高,可用于多潘立酮临床治疗剂量的药物动力学研究。     

液相色谱-质谱／质谱联用法测定人血浆中加兰他敏

目的:建立测定人血浆中加兰他敏浓度的液相色谱-质谱/质谱联用法,用于其人体血药浓度测定。方法:血浆样品经液-液萃取后,以甲醇-水-甲酸(65:35:1)为流动相,Zorbax SB-C_8柱(150mm×4.6mm,5μm)分离,采用大气压化学电离源,以选择反应监测方式进行正离子检测。内标为双氢吗啡酮,用于定量分析的离子反应分别为 m/z 288→m/z 213(加兰他敏)和 m/z 286→m/z 185(内标)。结果:血浆中加兰他敏最低定量限为0.5ng·mL~(-1),其线性范围为0.5～100ng·mL~(-1)。其高、中、低3个浓度的平均提取回收率为80.9%,方法回收率为100.5%,日内及日间 RSD 均<8%。结论:方法选择性强,灵敏度高,快速准确,可作为加兰他敏人体内药动学研究的手段。     

高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中非那雄胺的浓度

目的:建立一种用高效液相色谱-电喷雾离子化质谱(HPLC-MS)联用技术测定非那雄胺血药浓度的方法.方法:以0.01 mol·L-1醋酸铵水溶液-甲醇(25:75)为流动相,烯酮二醇为内标.血浆样品经用醋酸乙酯萃取后上样,经C18柱分离后,以质谱为检测器,采用选择性离子检测(SIM)测定人体血浆中非那雄胺的浓度.结果:非那雄胺的线性范围0.491～98.2μg·L-1(r=0.9999),平均相对回收率在90%～110%之间,日内和日间RSD均＜5%,非那雄胺的最低定量限为0.49μg·L-1,提取回收率＞90%.结论:该方法快速、准确、灵敏,可用于非那雄胺的药动学研究.     

HPLC法测定拉呋替丁及其片剂的含量

目的　建立拉呋替丁及其片剂的高效液相色谱含量测定法。方法　以Shim packODSC18为色谱柱 ,甲醇 0 2mol·L 1醋酸胺溶液 三乙胺 (70∶30∶0 1)为流动相 ,检测波长为 2 75nm。结果　线性系数r =0 9998,平均回收率为 99 6 % (RSD =1 5 % ,n =9)。结论　本方法简便、快速、准确 ,可用于拉呋替丁及其片剂的质量控制。     

高效液相色谱法测定拉呋替丁中的有关物质

目的建立拉呋替丁原料中的有关物质的检测和控制方法。方法高效液相色谱法:Shim-pack色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-乙腈-0.02mol·L-1磷酸盐缓冲液(三乙胺调至pH6.0)(25∶15∶60),检测波长:220nm,流速:1.0mL·min-1。结果拉呋替丁与合成反应中的四个重要中间体,能够得到有效分离,拉呋替丁最低检出量为4ng,控制总杂质不超过1.0%。结论本方法准确、简便、专属,适用于拉呋替丁中的有关物质的检查。     

氯吡格雷在人血浆浓度的液质联用测定法

目的建立测定人血浆中氯吡格雷(抗心肌及抗脑梗死药)血药浓度的HPLC/MS/MS法。方法血浆样品用叔丁基甲醚提取,内标为噻氯匹定;色谱柱用X-Terra MS C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(含10 mmol·L~(-1)醋酸铵,调pH为4.0)为70:30,流量为0.3 mL·min~(-1);质谱用ESI离子源,定量分析的离子反应分别为m/z 322→z 212 (氯吡格雷),m/z 264→m/z 154(内标噻氯匹定)。结果氯吡格雷的线性范围为10×10~4～1.2×10~4pg·mL~(-1)(γ=0.9993),日内、日间RSD均小于10%,提取回收率约为80%。结论该方法快速、准确、灵敏度高,可用于氯吡格雷血药浓度测定。     

高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中瑞舒伐他汀的浓度

目的建立HPLC-MS/MS方法定量测定人血浆中瑞舒伐他汀浓度。方法用液液萃取法处理血浆,以瑞舒伐他汀-D6为内标,色谱柱:ThermoHypersI I GOLD柱(2.1 mm×100 mm,3.0μm),柱温:40℃,流动相:甲醇-0.1%甲酸+5 mmol·L^-1甲酸铵水溶液,等度洗脱,流速:0.35 mL·min^-1。用正离子扫描,多反应监测方式(MRM)测定样品中药物的质量浓度。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与准确度、回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中瑞舒伐他汀回归方程为y=3.29×10^-1x-3.46×10^-3(r=0.998 8),瑞舒伐他汀在0.05~25.00 ng·mL^-1内线性关系良好,定量下限为0.05 ng·mL^-1。日内、日间精密度的RSD均<15%,平均回收率>95%,稳定性较好。结论本方法简便快速、特异性强、灵敏准确,适用于人体血浆中瑞舒伐他汀浓度的测定。     

HPLC/MS/MS联用技术测定全血中的瑞芬太尼

目的:建立全血中瑞芬太尼的HPLC／MS／MS测定方法,并测定围麻醉期患者体内瑞芬太尼的血药浓度。方法:全血样品中加入枸橼酸芬太尼作内标,用1-氯丁烷进行提取。以乙腈与三氯甲烷(V乙腈:V三氧甲烷= 1:1)混合液加乙酸铵(2 mmol·L-1)为流动相,色谱柱为Intersil ODS-3(50 mm×2．1 mm,3μm),流速0．3 mL·min-1。三级四极杆质谱采用正离子模式,离子采集方式为多反应监测模式(MRM),离子源温度200℃,离子源电离电压为5 000 V,雾化气流速8 L·min-1。采集离子(母离子／子离子)为瑞芬太尼377／228,芬太尼337／188。结果:瑞芬太尼在0．5～50．0 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性(r=0．9994)。日内、日间精密度均在15％以内,提取回收率大于67．3％,方法回收率在95．0％～97．6％。结论:本方法灵敏、准确,适合瑞芬太尼的体内分析。     

高效液相-荧光色谱法测定人血清拉呋替丁浓度及临床药动学

目的:采用高效液相-荧光色谱法测定人血清中拉呋替丁药物浓度,研究临床推荐剂量下的健康人体药动学.方法:以左羟丙哌嗪为内标物,用HiQ Sil-C18(150 mm× 4.6 mm,5μm)不锈钢色谱柱常温下分离测定,流动相为甲醇-2%醋酸溶液(pH 2.5,20:80),荧光检测,Ex 285 nm,Em 313 nm;24名健康男性志愿者口服10 mg拉呋替丁胶囊剂,测定血清药物浓度,计算药动学参数.结果:标准血清药物线性浓度范围为0.98～294.0μg·L-1;方法回收率在95%～115%之间,萃取回收率大于50%;精密度,日内RSD＜4.5%,日间RSD＜5%.药动学主要参数结果分别为:Cmax(170.4±48.4)μg·L-1,Tmax(0.9±0.3)h,t1/2(2.4±0.7)h,Ke(0.3±0.1) h-1,Vd(53.5±20.2)L,CL(16.1±6.1)L·h-1,MRT0-t(3.4±0.5)h,AUC0-t(656.3±246.9)μg·L-1·h.结论:该法检测人血清拉呋替丁浓度可靠、实用;拉呋替丁胶囊剂在健康人体内的动力学结果具临床治疗指导意义.