脑胶质瘤组织中血管内皮生长因子的表达意义

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在脑胶质瘤组织中的表达及其意义.方法:采用免疫组化和核酸原位杂交的方法,检测68例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中VEGF的表达.结果:VEGF蛋白和mRNA在胶质瘤中的阳性表达率随着胶质瘤病理分级的增加而增加,差异均有显著性(P<0.01),而正常脑组织不表达.结论:VEGF高表达与胶质瘤的恶性进展有着密切关系.VEGF可能通过参与诱发胶质瘤血管的生成,对胶质瘤的演进过程起促进作用.     

p16在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的: 探讨p16在脑胶质瘤中的表达及其意义。方法: 采用免疫组织化学、核酸原位杂交和多重PCR的方法,检测68例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中p16的表达。结果: p16和mRNA在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的阳性表达,差异均有统计学意义(P<0.01～P<0.005),而多重PCR检测p16在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的阳性表达,差异无统计学意义(P>0.05)。结论: p16基因缺失可能与胶质瘤的发生有关;p16低表达在人脑胶质瘤的恶性进展中起重要作用,可作为预后评估指标之一。     

cDNA microarray in isolation of novel differentially expressed genes related to human glioma and clone of a novel full-length gene

Background This investigation was undertaken to obtain differentially expressed genes related to human glioma using cDNA microarray and the characterization of one novel full-length gene. Methods Total RNA was extracted from human glioma tissues and normal brain tissues, and mRNA was used to make probes. After hybridization and washing, the results were scanned using a computer system. The gene named 681F05 clone was an expressed gene to human glioma through four-time hybridization and scanning. Subsequently northern blot analysis was performed by northern blot, 5‘RACE and bioinformatics. Results Fifteen differentially expressed genes to human glioma were obtained through four-time hybridization and scanning. Northern blot analysis confirmed that 681F05 clone was low-expressed in human brain tissues and over-expressed in human glioma tissues. The analysis of BLASTn and BLASTx showed that 681F05 clone is two cDNA clones encoding two novel proteins that are highly identified to the cyclophilin isoform 10 of C. Elgans, respectively. Sequence analysis revealed the two cDNA clones are two different splicing variants of a novel cycophilin-like gene (PPIL3a and PPIL3b). Conclusions cDNA microarray technology can be successfully used to identify differentially expressed genes. The novel full-length gene of human PPIL3 may be correlated with the formation of human glioma.     

A novel full-length gene of human ribosomal protein L14.22 related to human glioma

Background This study was undertaken to obtain differentially expressed genes related to human glioma by cDNA microarray and the characterization of a novel full-length gene. Methods Total RNA was extracted from human glioma and normal brain tissues, and mRNA was used as a probe. The results of hybridization procedure were scanned with the computer system. The gene named 507E08 clone was subsequently analyzed by northern blot, bioinformatic approach, and protein expression. Results Fifteen differentially expressed genes were obtained from human glioma by hybridization and scanning for four times. Northern blot analysis confirmed that the 507E08 clone was low expressed in human brain tissue and over expressed in human glioma tissues. The analysis of BLASTn and BLASTx showed that the 507E08 clone was a novel full-length gene, which codes 203 amino acid of protein and is called human ribosomal protein 14.22 gene. The nucleotide sequence had been submitted to the GenBank?with the accession number of AF329277. After expression in E.coli., protein yielded a major band of apparent molecular mass 22 kDa on an SDS-PAGE gel. Conclusions cDNA microarray technology can be successfully used to identify differentially expressed genes. The novel full-length gene of human ribosomal protein 14.22 may be correlated with the development of human glioma.     

原位杂交方法检测人脑胶质瘤VEGF mRNA的表达

目的 :检测血管内皮细胞生长因子 ( VEGF)在胶质瘤及瘤周组织的基因表达 ,探讨其促进肿瘤血管生成及瘤周组织水肿的作用机制。方法 :采用原位杂交方法检测 2 3例人脑胶质瘤及瘤周组织和 7例正常脑组织中 VEGF的基因表达。结果 :VEGF在胶质瘤组织主要表达于毛细血管、血管内皮细胞及肿瘤细胞 ,瘤周组织表达于变异的星形胶质细胞 ,而正常脑组织几乎无表达。胶质瘤及瘤周组织的阳性细胞表达率显著高于正常脑组织 ( P<0 .0 0 1 ) ;胶质瘤组织中血管内皮细胞VEGF的阳性表达率高于瘤周组织 ( P<0 .0 1 ) ,而瘤周组织星形胶质细胞的阳性表达率高于肿瘤组织 ( P<0 .0 1 )。结论 :VEGF在脑胶质瘤及瘤周组织中的高表达与肿瘤血管生成及瘤周组织水肿的发生密切相关。     

脑胶质瘤患者全长新基因的获得及初步研究

目的 探讨基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中一条基因进行初步研究。方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对507E08克隆子进行了Northern印迹、原位杂交、生物信息学分析和染色体定位。结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northern印迹证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。原位杂交得到相同的结果。BLASTn和BLASTx分析显示,507E08基因为全长新基因,长度为2002bp,共编码203个氨基酸。本基因命名为人核糖体蛋白L14．22。该基因定位于14号染色体上D14S1066和D14S265Marker之间。结论 用基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因,具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

地高辛标记探针原位杂交法检测人脑胶质瘤组织猴病毒40的表达

目的 :检测猴病毒 40 (SV40 )DNA在人脑胶质瘤中的定位表达 ,探讨其在脑胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法 :采用地高辛标记探针原位杂交技术 ,检测 2 5 6例人脑胶质瘤和 11例正常脑组织标本。结果 :SV40DNA定位于胶质瘤细胞核 ,阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布 ;SV40DNA阳性率 40 .6 % (10 4/2 5 6 ) ,正常脑组织均未检测出SV40DNA ;SV40DNA阳性率与病理分级无关 (P >0 .0 5 )。结论 :SV40感染与人脑胶质瘤病因学密切相关 ;地高辛标记探针原位杂交技术 ,是探讨SV40病毒核酸在组织中定位、分布和感染机制的一种新的特异性方法。     

人PTN基因在脑胶质瘤、肝细胞癌、喉鳞癌中的表达研究

目的：运用基因表达谱芯片和原位杂交技术观察人PTN（pleiotrophin) 基因在某些恶性肿瘤中的表达,并探讨其在肿瘤发生发展中的作用。方法：用BioDoor 4096型cDNA基因表达谱芯片和原位杂交技术检测PTN基因在5例脑胶质瘤、10例喉鳞癌、6例肝细胞癌及正常对照组织中的表达水平。结果：在上述肿瘤的基因表达谱芯片检测中,PTN基因表达均显著增高,与脑胶质瘤、喉鳞癌、肝细胞癌的原位杂交检测结果相吻合。结论：cDNA基因表达谱芯片能够为恶性肿瘤的相关基因功能分析提供特异和可靠的数据。PTN基因在恶性肿瘤的发生机制中可能起重要作用。     

外源性p16基因稳定转染对胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的：研究外源性ｐ１６基因对胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４的抑制作用,探索胶质瘤基因治疗的新途径。方法：利用携带４９０ｂｐ的人ｐ１６全长ｃＤＮＡ真核表达载体,采用脂质体介导法将其导入人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４中,用Ｇ４１８筛选阳性克隆,以原位杂交,免疫组化方法检测ｐ１６基因在细胞转染前后的表达情况。,应用流式细胞仪,电子显微镜,生长曲线测定等方法研究ｐ１６基因对胶质瘤细胞周期,形态,生长等的影响.     

鼻咽癌抑瘤基因NOR1第2外显子选择性剪切异构体在组织和细胞中的分布规律

目的:研究NOR1基因全长及第2外显子选择性剪切异构体在人细胞系和组织中的分布规律以及NOR1蛋白全长及剪切异构体的亚细胞定位模式.方法:以人胎脑cDNA文库质粒为模板,PCR扩增NOR1基因开放阅读框(open reading frame,ORF),酶切后连接pCMV/myc载体.以pCMV/myc-NOR1(iso...     

胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

①目的　制备胆囊收缩素（ Ｃ Ｃ Ｋ）ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达。②方法　将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 的质粒 Ｐ Ｕ Ｃ１３ 扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（ Ｄｉｇ）标记 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针。用原位杂交技术,对癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达进行研究。③结果　 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针标记效率为５０ｍ ｇ／ Ｌ;遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达显著增加。④结论　本实验制备的 Ｄｉｇ Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,具有较好的特异性和灵敏度;原位杂交实验证实, Ｃ Ｃ Ｋ 参与了癫痫发作过程。     

Galectin-3及整合素ανβ3 mRNA在脑胶质瘤细胞中的表达及其意义

目的：探讨半乳糖凝集素-3（Galectin-3）及整合素ανβ3 mRNA在胶质瘤细胞中的表达及二者在胶质瘤的发生及恶性进展中的作用。方法：采用原位杂交法检测5例正常脑组织及40例不同级别胶质瘤中Galectin-3 mRNA、整合素ανβ3 mRNA的表达情况,并分析二者之间的关系。结果：正常脑组织中Galectin-3 mRNA、整合素ανβ3 mRNA的表达均为阴性。Galectin-3 mRNA主要表达于脑胶质瘤细胞的胞浆中,在23例Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤标本中阳性2例、弱阳性4例、阴性17例,阳性表达率为29.09%(6/23),阳性指数(LI)值为(4.80±3.22)%;在17例Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤标本中强阳性4例、阳性6例、弱阳性1例、阴性6例,阳性表达率为64.71%(11/17),LI值为(27.30±22.72)%,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤Galectin-3 mRNA阳性表达率低于Ⅲ-Ⅳ级（P<0.05）。整合素ανβ3 mRNA主要表达于脑胶质瘤细胞的胞浆中,在23例Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤标本中阳性3例、弱阳性4例、阴性16例,阳性表达率为34.43%(7/23),LI值为(5.35±3.79)%;在17例Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤标本中强阳性4例、阳性6例、弱阳性3例、阴性4例,阳性表达率为76.47%(13/17),LI值为(29.24±21.10)%,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤整合素ανβ3 mRNA 阳性表达率低于Ⅲ-Ⅳ级（P<0.05）。直线相关分析结果显示,Galectin-3 mRNA与整合素ανβ3 mRNA的阳性细胞表达率呈正相关（r=0.718,P<0.05）。结论：Galectin-3 mRNA、整合素ανβ3 mRNA的表达在Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤组明显低于Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组,提示Galectin-3及整合素ανβ3 mRNA检测可作为从分子水平判定人脑胶质瘤恶性生物学行为的指标。     

IL-6基因在儿童髓母细胞瘤中的表达

目的:研究髓母细胞瘤中IL-6基因表达与肿瘤发生和发展关系。方法:用地高辛标记IL-6cDNA探针原位杂交法检测IL-6mRNA在16例髓母细胞瘤和10例正常脑组织中的表达。结果:髓母细胞瘤表达率明显高于对照组,差异非常显著(P<0.01)。结论:IL-6可能是促进髓母细胞瘤发生发展的重要因子之一。     

脑胶质瘤相关新基因PKIβ的表达与蛋白质性质的研究

目的 运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中1条基因进行了克隆和表达.方法 抽提正常成人脑组织与脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察二者表达谱的差异情况,对436F11克隆子进行Northern印迹,生物信息学分析和蛋白质的表达.结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northern印迹证实436F11基因在人正常脑组织中高表达,而在人脑胶质瘤中低表达.BLASTn和BLASTx分析显示,436F11基因为全长新基因,共编码78个氨基酸,其理论相对分子质量为8468等电点为4.69,与鼠PKIβ69%同源,命名为人PKIβ.并在大肠杆菌中得到了PKIβ较高的表达蛋白,经纯化,在SDS-PAGE胶上获得了1条清晰的条带.氨基酸测序和分子量测定与生物信息学结果完全一致.结论 基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性.人PKIβ可能是与人脑胶质瘤形成有关的1条全长新基因,这为脑胶质瘤的基因治疗提供了一条新思路.     

星形细胞瘤中环氧化酶-2 mRNA及蛋白表达的意义

目的 :探讨星形细胞瘤组织中环氧化酶 2 (COX2 )蛋白、mRNA的表达及其与病理级别的相关性。方法 :用原位杂交的方法检测星形细胞瘤组织中COX2mRNA的表达情况 ;用免疫组化SP法检测同等标本中COX2蛋白的表达情况 ;并将表达情况与星形细胞瘤病理级别作相关性分析。结果 :COX2蛋白在星形细胞瘤表达的染色积分为 4 .5 6± 2 .32 ,正常脑组织染色积分为 1.2 1± 1.18,二者相比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ;低度恶性组(Ⅰ ,Ⅱ级 )染色积分为 1.84± 1.4 6 ,高度恶性组 (Ⅲ ,Ⅳ级 )染色积分为 6 .37± 3.6 2 ,二者相比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。COX2mRNA在星形细胞瘤表达率为 6 2 .6 9% ,在正常脑组织中呈阴性表达 ,二者比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ;COX2mRNA在低度恶性组和高度恶性组中表达率分别为 37.14 % ,87.5 % ,二者比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :COX2蛋白、mRNA在星形细胞瘤组织中高度表达 ,且表达率与病理级别密切相关 ;从基因水平和蛋白水平说明COX2基因在星形细胞瘤的生长和病理进程中发挥着重要作用。     

反义GFAP对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5增殖及分化的影响

目的观察抑制内源性胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)基因表达对恶性胶质瘤细胞生物学特性的影响,为进一步深入研究GFAP基因在胶质瘤恶性转化及诱导分化治疗中的作用提供实验基础.方法构建反义GFAP 逆转录病毒表达载体,经包装后以病毒上清感染人恶性胶质瘤细胞系CHG-5;采用RT-PCR、原位杂交以及免疫细胞化学方法检测GFAP基因及其蛋白的表达;并通过形态学、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成及流式细胞分析等观察抑制GFAP基因表达后CHG-5细胞形态、增殖和细胞周期进程的变化.结果反义逆病毒感染后CHG-5细胞GFAP mRNA及其蛋白表达显著减弱甚至缺失,瘤细胞异型性增加,细胞增殖速度加快,体外成瘤能力增强,S期、G2/M期细胞比例升高.结论抑制内源性GFAP基因表达可使CHG-5细胞呈现更为恶性的表型,提示GFAP基因在调控胶质瘤细胞分化程度及恶性生物学行为方面具有重要作用.     

人类细胞和组织Ki-67基因exon 13的转录和表达

研究Ki 67基因在人类正常和异常细胞的mRNA转录和翻译 ,了解其在肿瘤细胞增殖中的作用。方法　以PCR扩增Ki 67基因的exon 13、codon 2的cDNA片断 ( 4 35bp) ,地高辛标计转录合成mRNA探针 ,原位杂交结合MIB 1免疫组化分析Ki 67基因的第 13外显子 (exon 13)在Hela细胞、结肠癌细胞、扁桃体和胰腺癌石蜡切片中的转录及翻译。结果　应用地高辛标记的mRNA原位杂交技术可成功地在Hela细胞、结肠癌细胞、扁桃体和胰腺癌的石腊切片检测到Ki 67mRNA信号 ,结肠癌和胰腺癌细胞均存在Ki 67基因的exon 13mRNA的过度转录 ,并且exon 13的转录与MIB 1所测Ki 67蛋白相一致。结论　本研究首次在人类组织和细胞中 ,应用原位杂交和免疫组化研究Ki 67基因外旋子 13的转录和翻译 ,研究发现结肠癌和胰腺癌Ki 67基因的exon 13的过度转录 ,并与其蛋白水平高度相关 ,提示该此基因表达异常 ,尤其是exon 13,在恶性肿瘤的发生和发展可能起一定作用。     

CD133+ 胶质瘤干细胞化疗耐受机制分析

目的:探讨ABC超家族转运体蛋白在CD133 胶质瘤干细胞多药耐药性中的作用机制.方法:选取30例人脑胶质瘤标本,利用免疫磁珠法分选标本中的CD133 胶质瘤干细胞(悬浮细胞)和CD133-肿瘤细胞(黏附细胞),并进行分选细胞的体外扩增培养、传代与鉴定,应用免疫组化和RT-PCR法分别检测细胞中 MDR1和MRP1的蛋白及其活性表达情况.结果:3例胶质母细胞瘤来源的CD133 细胞能在含血清培养基中形成肿瘤干细胞球,并进行1～3次传代;MDR1与MRP1耐药蛋白在CD133 细胞中高度表达,阳性细胞比例范围分别为18%～67%和23%～73%;MDR1与MRP1在CD133 细胞中的表达活性分别为在CD133-细胞中的16.1倍和19.6倍;多药耐药蛋白的阳性细胞比例和其表达活性与肿瘤的恶性程度呈正相关,而表达阳性率与肿瘤的病理级别无关;MDR1与MRP1在CD133 细胞中的表达有明显的相关性.结论:神经上皮肿瘤中仅有小部分细胞亚型(CD133 胶质瘤干细胞)具有内在耐药性(天然耐药性),而ABC超家族转运体蛋白MDR1与MRP1在CD133 胶质瘤干细胞中的共同过度表达是胶质瘤多药耐药的主要原因之一;CD133 细胞是胶质瘤化疗的关键性治疗标靶.     

mdm2和P53在人脑胶质瘤中的相关性分析

目的　通过对人脑胶质瘤标本中 p5 3、mdm2蛋白表达关系的研究 ,探讨人脑胶质瘤的发病机理。 方法　应用免疫组化 (链霉素菌抗生物素蛋白 -过氧化酶法Streptavidin peroxidase ,S -P法 )标记检测 10 0例人脑胶质瘤标本 p5 3和mdm2 ,同时标记DNA原位杂交探针 p5 3。结果 10 0例脑胶质瘤标本 p5 3和mdm2免疫组化标记阳性率分别为 35 %、32 %;p5 3DNA探针原位杂交标记 ,阳性率为 90 %,其中 2 8例免疫组化标记mdm2阳性 ,而 p5 3阴性标本的原位杂交 p5 3阳性率为 89.2 8%(2 5例 )。统计学显示p5 3基因表达和mdm2基因表达有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　mdm2和 p5 3呈明显负相关 ,mdm2在人脑胶质瘤的发病过程中起重要的作用 ;p5 3的缺失不是人脑胶质瘤的主要发病机理 ,mdm2和 p5 3协同作用在脑胶质瘤的发生和发展中起重要作用。